甲型肝炎疫苗的免疫原性

甲型肝炎病毒(HAV)HFS/GBM株在人胚肾细胞中传10代,正常人成纤维细胞(HFS)上传25代,经终末稀释传5代纯化后,经黑猩猩和人体试验证明已减毒。培养液中的HAV,经硫酸铵沉淀浓缩,0.05%β丙内酯灭活,再经氯化铯(CsCl)密度梯度离心纯化后作免疫接种试验。灭活后残余感染性检测:灭活的HAV接种在HFS上37℃吸附4小时,洗     

用葡聚糖和明胶溶液制备稳定的冻干乙型脑炎疫苗

制备稳定的冻干乙型脑炎病毒及疫苗包括用葡聚糖和明胶溶液处理冻干灭活的乙型脑炎病毒疫苗的过程。温度敏感的原料经这种处理后,可转变为稳定的冻干制剂,但不降低免疫效力。葡聚糖的浓度约为0.1～4.0重量/体积(w/v)%,尤以约0.2～2.0w/v%为好,     

研制抗罗斯河病毒感染的候选疫苗

罗斯河病毒(Ross River Virus)是能引起流行性多关节炎的a病毒.本文作者用二氮丙啶(BEI)破坏罗斯河病毒的传染性制成灭活疫苗,在小鼠中评价其免疫效果.作者从急性病人血清中分离出罗斯河病毒,通过在Vero细胞中培养获得大量病毒.离心除去细胞,在上清液中加入2-溴乙胺,37℃水浴,然后加入NaOH提高pH值至8.5～9.0,形成BEI,灭活病毒.最后加入终浓度为10%V/V(0.1M)的硫代硫酸钠终止BEI活性.离心、回收病毒.用无菌盐水重新悬浮病毒颗粒制成BEI灭活疫苗.佐剂灭活疫苗为每ml无菌盐水中含2～300μg灭活病毒和1mg氢氧化铝佐剂.     

药物制剂中磷酸地塞米松的酶催化测定法

本文提出了测定磷酸地塞米松(磷酸氟美松)含量的酶催化-比色测定法。样品经磷酸酶裂解后,应用钼蓝反应于pH6.5条件下进行比色测定。方法:取试管三支,第一管中加入新鲜配制的样品溶液(取样品用pH9.2碳酸盐缓冲液稀释至含PO_450微克/毫升)2毫升、水1毫升及新鲜配制的磷酸酶溶液(1单位/毫克磷酸酶溶于0.0035克分子硫酸镁溶液中使成1.0毫克/毫升)0.5毫升。第二管中加入标准磷酸盐溶液(含PO_4100微克/毫升)0.5毫升、样品溶液2毫升、水0.5毫升,20%三氯醋酸溶液1毫升及酶溶液0.5毫升(标准管)。第三管中加入样品溶液2毫升、水1毫升,20%三氯醋酸溶液1毫升及酶溶液0.5     

检测唾液中疫苗和疾病诱导的HAV特异性IgG的新酶免疫法

这种新的捕获酶免疫法采用的是三重抗体识别系统,先用驴抗人IgG F(ab)2片段包被96孔板。每份受检样本设4个孔。培育后,2孔加入用含0.5％牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲盐水-吐温20稀释成432 ELISA单位/ml的甲型肝炎病毒(HAV)抗原,另2孔加入缓冲液作为非特异性结合的阴性对照,继续培育过夜。为测定捕获的HAV特异性IgG复合物,每孔加入HAV特异性单克隆     

紫外线灭活后甲型肝炎病毒的抗原性

作者在用紫外线(UV)照射增殖于人胚胎成纤维细胞(HFS)的纯化的甲型肝炎病毒(HAV)后,对其抗原性、感染性、基因组滴度作了评估,并与现行的福马林(FM)灭活法进行了比较。 毒株HAV/HFS/GBM在HFS传30代后,用胰蛋白酶消化细胞单层。离心收集细胞,用1％NP40复悬,反复冻融3次。再于冰浴中声波处理5分钟,离心除去细胞碎片,用聚乙二醇浓缩上清,对生理盐水透析,抽提两次,CsCl梯度离心22小时,从1.23～1.33g/cm~3处收集HAV,对生理盐水透析,用0.2μm滤膜过滤。纯化的HAV用0.9％NaCl溶液稀释100倍。用最大强度接近254nm的低压     

一种检测狂犬病抗体的狂犬病凝集试验

目前用于检测狂犬病抗体水平的几种方法都费时、费钱,本文介绍一种快速、价廉的狂犬病凝集试验(RAT),其原理是狂犬病抗体能特异性地凝集狂犬病病毒致敏的胶乳珠。病毒包被胶乳珠(Estapor K109,直经为0.8μm的白色或红色珠)的方法是:用0.05M碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液稀释纯化的灭活病毒,至蛋白浓度为1000μg/ml,pH9.6。用包被碳酸盐缓冲液彻底清洗1ml10%的胶乳珠,然后经2500g离心30分钟,沉淀悬浮于3ml碳酸     

具有缓慢释放特性的多聚血清白蛋白珠在疫苗中的应用

本文报告了用病毒颗粒和病毒亚单位(核壳蛋白)与兔血清白蛋白(RSA)微珠共聚制成实验性疫苗免疫家兔以研究RSA作为佐剂的可能性。试验用疫苗:(1)实验性微珠疫苗:用Newman等方法提纯野田村病毒及酚水法提取核壳蛋白。将100μg纯化病毒或80μg核壳蛋白加入200mg RSA(溶于0.8ml含1%十二烷基硫酸钠、pH7.5的1mM磷酸缓冲液)中,然后加入0.2ml适当稀释的戊二醛(GA),立即在涡旋混匀器中分散,10秒后用注射器迅速注入100ml葵花子油和石油醚(1∶4体积)     

具有延长低血钙活性的鲑降钙素高分子量衍生物

已研究出—种具有高特异活性的制备鲑降钙素(Salmon calcitonin)长效处方的新方法。该方法包括两个过程:1)鲑降钙素高分子量衍生物的制备;b)含锌衍生物混悬剂的制备。衍生物制备是在0.1M 磷酸盐缓冲液中(pH 8.2),用二硫苏糖醇还原鲑降钙素,并用氯胺T 方法进行碘标记。已还原的鲑降钙素经葡聚糖凝胶层析柱分离后冻干。用0.1M 醋酸洗脱。然后,将已还原的鲑降钙素用含1%牛血清白蛋白的0.1M 磷酸盐缓冲液(pH8.2)溶解,置60C 保温10min     

用HPLC测定新生儿口服液中的咖啡因和山梨酸钾

临床常用咖啡因作为早产新生儿的呼吸兴奋剂。一种医院自制的口服制剂含咖啡因10mg/ml及1 mg/ml的山梨酸钾防腐剂。使用100 mm×4.5 mm Spherisorb 5.μm己基反相柱。流动相为12％乙腈在0.1mol/L乙酸钠缓冲液(pH 4.5)中,流速2ml/min,注射体积为20μl,UV检测波长258 nm。咖啡因口服液(1.0 g)用水稀释至25ml。取该溶液5 ml,加入5 ml含3 mg/ml苔黑酚单水合物(内标)的水溶液,该混合物     

胰岛素栓在兔直肠内的吸收

为了在较低剂量下研究胰岛素栓的降血糖作用,本文应用各种表面活性剂制备栓剂,研究了这些表面活性剂对胰岛素直肠吸收的影响。所用表面活性剂有阴离子型、阳离子型、非离子型与两性离子型,还有胆酸与卵磷脂。将胰岛素溶解或混悬于0.1M枸橼酸盐缓冲液或0.1M磷酸盐缓冲液中制成pH_3～8的各种溶液;用日本玉米油作基质,混入备种浓度的各种表面活性剂制备胰岛素检;将200U胰岛素锌制成100ml注射液,溶媒为1.4%W/V甘油、苯酚0.1%W/V与0.01M盐酸。用雄兔(2.0～2.4kg)作试验动物,实验前24小时禁食使直肠内的粪便完全排空。用玻璃注射管(长7.5cm、     

头孢菌素类的分析研究Ⅱ:头孢三嗪、头孢呋新、头孢噻肟及头孢唑肟的极谱行为及其制剂分析

电化学技术最适合于分析带有可还原或可氧化作用的化合物,头孢三嗪(Ceftriaxone)(Ⅰ)、头孢呋新(Cefuyoxime)(Ⅱ)、头孢噻肟(Cefotaxime)(Ⅲ)、头孢唑肟(Ceftizoxime)(Ⅳ)的样品可用DMF 或DMF-MeOH 制盛0.001M 溶液,测定时用适当的缓冲液稀释至一定浓度。0.5,1及2g 的制剂先用注射用水稀释到一定体积,吸取0.1ml 到量瓶中,分别用     

血液制品中的痘苗病毒对S/D法灭活的抵抗力

考虑到血液制品及细胞制备的生物制品具有传播病毒〔如乙型肝炎病毒 ( HBV)、丙型肝炎病毒 ( HCV)和人类免疫缺陷病毒( HIV)〕的危险性 ,因此在制备过程运用了去除病毒和灭活病毒的工艺。常用的灭活病毒方法为溶剂 /去污剂 ( S/D)法 ,此法是应用磷酸丁酯 ( TNBP)及非离子型去污剂 (如Tween80或 Triton X- 1 0 0 )处理中间产物 ,然后在后续步骤中将这些化学试剂去除。S/D法能有效灭活各种血液制品中的许多有包膜病毒 ,但对无包膜的病毒则无效。　　作者将 S/D与两种高纯度凝血因子因子 ( Replenate)和因子 ( Replenine)一起培育…     

结合应用溶剂去污剂和100℃(煮沸)干热处理因子Ⅷ浓制剂以确保病毒灭活效果

已知溶剂去污剂(S-D)仅能灭活脂质包膜病毒,而细小病毒和非脂质包膜的非甲非乙型肝炎病毒则不能灭活。为确保病毒灭活效果,S-D因子Ⅷ浓制剂于冻干状态在沸水(100℃)中作用30分钟,因子Ⅷ:C仅丧失7%,而溶解度并不改变。厂商用S-D处理的以单克隆抗体纯化的因子Ⅷ于冻干状态置100℃水浴作用5分钟并未丧失该因子。并且von-Willebrand相关抗原、电泳图潜及溶解度等均无变化。将冻干瓶浸入热水浴而非烤箱进行干热处理的方法相当重要,如此可使置于水浴     

盐类在冻干及干热灭活病毒过程中的影响

本文对用于血液制品中的某些盐类在冻干及干热过程中对病毒的稳定性的影响进行了研究。作者用大肠杆菌嗜菌体MS2作为病毒模型,滴度以蚀斑形成单位/ml(PFU/ml)表示。血浆蛋白部分(PPF)先在-35℃以下冻干,然后升至20～22℃干燥处理。首先测定了不同温度对病毒灭活率的影响。将MS2接种在加0.007M构橼酸钠和0.12M氯化钠(pH7.0)的PPF溶液(15mg蛋白/ml)中,MS2的最终浓度为3×10~9PFU/ml,分装成4ml,迅速浸泡在液氮中冷冻并冻干。在此过程中,病毒活性大约下降了0.5log值。冻干后分别在60、80和90℃加热不同时间,随后测剩余病毒活性。结果表明,在上述温度下,MS2灭活4log值     

不同包被缓冲液对单克隆抗体在ELISA中灵敏度和区别的影响

本文应用不同pH和离子强度的包被缓冲液测定抗原在微孔板中的吸附情况,并用单克隆和多克隆抗体分别测定了牛瘟病毒(RPV)和口蹄疫病毒(FMDV)在ELISA中的包被率。作者测定了pH5.0～8.0的0.01M磷酸缓冲液和不同离子强度(0～3M)时的包被情况。当用多克隆抗体测定包被RPV抗原时,最大OD值依赖于包被缓冲液的离子强度,当增     

吸附法纯化青霉素酰化酶

目的纯化发酵液中的青霉素酰化酶。方法采用吸附纯化法。结果按 1 2 % (W /V)的比例将皂土加到含青霉素酰化酶的发酵上清液中 ,可将 98%的酶吸附 ,而同时吸附的杂蛋白质仅占发酵上清液总蛋白质的 14 5 %左右。吸附过程受pH影响较大 ,在 pH 6 5～ 7 5时 ,吸附效果最佳。使用不同种类的缓冲液洗涤酶 -皂土复合物 ,发现缓冲液的种类对酶的洗涤影响不大。使用含5 0 %以上的PEG和 8 0 %的NaCl的磷酸缓冲液可以将酶全部洗脱。结论此法可在常温下操作 ,酶活力收率较高 ,具有潜在的工业应用价值     

一种新的甲型肝炎侯选疫苗的高度免疫原性及良好耐受性

作者在52名甲型肝炎病毒(HAV)抗体阴性的健康志愿者中评估了一种新的福马林灭活、以明矾为佐剂的甲型肝炎全病毒疫苗(VAQTA)的免疫原性及耐受性.疫苗病毒从1例感染HAV CR326F株的病人粪便中分离获得,经恒河猴肾细胞(FRhK6)及人二倍体成纤维细胞(MRC-S)连续传代得到足够量的减毒HAV,由化学方法裂解细胞培养液获取病毒,再经聚乙二醇浓缩,高压液相层析纯化至纯度达90%,福马林37℃灭活5天,期间除菌过滤两次.受试者初免剂量为1ml,经三角肌注射,6个月后加强免疫1次.初免后两周,受试者除1人外(98%),抗HAV抗体浓度均超过设定的最低保护水平10IU/L,抗体几何平均浓度(GMC)为165IU/L.4周后受试者100%抗体阳转,抗体GMC增加4倍,达728IU/L.初免后6个月,50名加强免疫的志愿者除1人外(98%),抗HAV抗体均维     

海藻酸钙凝胶小球的含量测定及溶出考察

目的　建立一种方法测定海藻酸钙凝胶小球中醋酸地塞米松的含量 ,考察小球在不同介质中的溶出性能。 方法 　以磷酸缓冲液——无水乙醇 (2∶ 1V/V)为溶剂 ,采用系数倍率法测定制剂含量 ,测定和比较小球在纯化水、盐酸缓冲液 (p H=1.3 )和磷酸缓冲液 (p H=6.8)中的累积溶出率。结果 　在 4.78μg· ml- 1 ～ 2 5 .5 6μg· ml- 1 的浓度范围内 ,方法线性关系良好 ,平均回收率为 10 0 .2 5 % ,RSD为 0 .3 8% (n=6) ;该制剂在纯化水和盐酸缓冲液中溶出量极少 ,而在磷酸缓冲液中溶出行为符合 Higuchi方程。 结论 　测定方法可靠、简便、重现性好 ;海藻酸钙凝胶小球可作为不耐酸药物的载体     

单剂病毒体甲型肝炎疫苗对泰国人的安全性、免疫原性和免疫应答动力学研究

作者破碎MRC-5细胞,收集甲型肝炎病毒(HAV)RG-SB株后,超速离心纯化,福马林灭活,然后与磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺和来自甲型流感病毒类A/新加坡/6/86(H1N1)株中纯化的血凝素(HA)结合制成病毒体(virosome)悬液,吸附后,适当稀释成无菌、无热原的疫苗悬液(每剂0.5ml,含500放射免疫测定单位的HAV抗原、10μgHA和约300μg总磷脂)。 受试对象为79名年龄在17～35岁的泰国成年志愿者,无肝炎史且肝功能正常。于三角肌肌肉注射0.5ml疫苗,并在免疫前及免疫后30、90、180和360天分别采集静脉血,用ELISA检测抗-HAV。免疫后连续三天记录不良反应,30天后复测肝功能。