转移潜能不同人肝癌细胞系差异蛋白S100A4的再验证及功能分析

目的解析比较蛋白质组学筛出的差异蛋白S100A4的生物学功能,验证其是否在肝癌转移复发中发挥作用。方法用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)、蛋白免疫印迹(WB)及细胞免疫化学法分别对差异蛋白S100A4在转移潜能不同人肝癌细胞系中的表达情况进行再验证;然后,用构建S100A4反义表达质粒,转染高转移潜能人肝癌细胞系MHCC97H,通过系列与侵袭转移有关的检测,观察S100A4表达降低对MHCC97H细胞生物学行为的影响。结果验证结果均证实,S100A4在有转移潜能人肝癌细胞系MHCC97L、MHCC97H中呈高表达。转染S100A4反义重组表达质粒后的侵袭试验显示,穿过人工基底膜细胞数分别是:5.0±1.4[MHCC97H/pcDNA3.1(+)ASS100A4],16.4±1.6[MHCC97H/pcDNA3.1(+)],16.9±1.5(MHCC97H);运动试验穿过上室底膜的细胞数为:11.1±3.3[MHCC97H/pcDNA3.1(+)ASS100A4],18.9±2.0[MHCC97H/pcDNA3.1(+)],21.9±3.4(MHCC97H);细胞培养上清液中MMP9的定量结果依次为18.2[MHCC97H/pcDNA3.1(+)ASS100A4]、28.0[MHCC97H/pcDNA3.1(+)]、31.9ng/ml(MHCC97H);MMP2定量结果依次为29.8[MHCC97H/pcDNA3.1(+)ASS100A4]、26.4[MHCC97H/pcDNA3.1(+)]、26.5ng/ml(MHCC97H)。明胶酶谱分析细胞培养上清液基质金属蛋白酶(MMP)显示,S100A4表达降低的MHCC97H细胞分泌的MMP9活性明显弱于对照组。结论pcDNA3.1(+)ASS100A4转染MHCC97H细胞后,细胞的运动与侵袭潜能均明显降低。细胞MMP9分泌量也显著降低。而细胞分泌MMP2的量则变化不明显。提示差异蛋白S100A4通过增强肝癌细胞的运动侵袭能力和上调MMP的分泌参与肝癌细胞的侵袭转移过程。     

KiSS-1基因对膀胱癌细胞系T24生物学行为影响的研究

目的 探讨肿瘤转移抑制基因KiSS-1对膀胱癌细胞T24的生物学影响.方法 将构建好的含771 bp大小的基因片段的真核表达质粒pcDNA3.1(+)/KiSS-1及空载体pcDNA3.1(+)用阳离子脂质体介导采用基因转染技术转染膀胱癌细胞T24,观察KiSS-1mRNA的表达、细胞生长能力、增殖情况及细胞侵袭力的变化.结果 pcDNA3.1(+)/KiSS-1 成功转染T24细胞,KiSS-1 mRNA 表达阳性,而正常细胞和空载体组为阴性;转染目的基因后细胞生长曲线、平板克隆形成率与正常细胞及转染空质粒细胞组无显著性差异( P＞0.05);转染目的基因后的细胞组穿透Millicell-PCF膜的细胞数较转染空质粒组及正常细胞组明显减少( P＜0.05),细胞侵袭能力明显下降(P＜0.05).结论 KiSS-1基因对膀胱癌细胞T24的生长、增殖无影响,但可抑制其侵袭力.     

超声靶向微泡破坏技术介导基因JNK1在小鼠肝癌细胞株中表达及对细胞迁移和侵袭作用的研究

目的探讨应用超声靶向微泡破坏(UTMD)技术介导小鼠肝癌细胞株Hca-P JNK1基因的表达以及肝癌细胞迁移和侵袭。方法构建并鉴定pCDNA3.1-JNK1载体。将小鼠肝癌细胞株Hca-P分组如下:A组(空白对照组),B组(质粒组),C组(脂质体+质粒组),D组(超声微泡+质粒+超声辐照组),E组(脂质体+超声微泡+质粒+超声辐照组)。采用倒置荧光显微镜观察各组细胞的转染率,荧光定量PCR和Western Blot法检测JNK1的基因和蛋白质表达水平,以CCK-8法检测5组细胞的细胞活性,应用Transwell实验检测各组细胞的体外迁移和侵袭能力。结果成功构建了pCDNA3.1-JNK1载体。各组转染率比较:E组均大于B、C、D组(P均0.05),C、D组转染率均高于B组(P均0.05),C、D组之间差异无统计学意义(P0.05)。E组JNK1 mRNA和蛋白表达水平均高于其他各组(P均0.05);E组细胞活性、迁移和侵袭能力均高于其他各组(P均0.05)结论 UTMD技术结合脂质体转染法可以提高pCDNA3.1-JNK1载体转染小鼠肝癌细胞株Hca-P的效率,加大基因JNK1表达的上调幅度,增强细胞活性、迁移和侵袭能力。     

反义Snail转录因子对骨肉瘤细胞增殖和转移能力的影响

目的:探讨反义Snail转录因子对人骨肉瘤细胞株MG-63增殖和转移的影响.方法:用脂质体转染法将高转移性骨肉瘤细胞株MG-63分别转染反义Snail质(pGenesil-snail AS)和空载体质粒(pGenesil).G418筛选阳性细胞,获得稳定转染的阳性克隆.采用免疫组化、Western blot及半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测不同组MG-63骨肉瘤细胞中Snail表达;体外细胞运动实验及重组细胞基底膜(Matrigel)侵袭实验了解细胞转移潜能的改变;以噻唑蓝(MTT)比色法和克隆形成实验观察细胞增殖.结果:MG-63细胞内Snail表达明显,转染反义Snail质粒后,Snail表达明显被抑制.Snail表达下降的同时伴随着体外细胞增殖、黏附和侵袭力的抑制.结论:骨肉瘤细胞中存在Snail蛋白及mRNA的高表达,抑制Snail mRNA的表达对骨肉瘤细胞的侵袭、运动和增殖有抑制作用,可能为骨肉瘤的基因治疗提供新的靶点.     

lncRNA TTN-AS1调控miR-134-5p/MBTD1信号轴促进骨肉瘤的生长和转移

目的 探究长链非编码RNA(lncRNA) TTN-AS1对骨肉瘤生长和转移的影响及机制。方法 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测TTN-AS1在hFoB1.19、U2-OS、MG-63、SOSP-9607、SAOS2细胞中的表达水平,将其中TTN-AS1表达水平最高的SAOS2细胞分为Control组(未转染)、si-NC组[转染TTN-AS1小干扰RNA(siRNA)阴性对照]、si-TTN-AS1组(转染TTN-AS1 siRNA)、si-TTN-AS1+微小RNA(miR)-134-5p inhibitor组(共转染TTN-AS1 siRNA和miR-134-5p inhibitor)、si-TTN-AS1+含MBT结构域蛋白1(MBTD1)组(共转染TTN-AS1 siRNA和MBTD1质粒)。采用CCK8法检测细胞的增殖能力,Transwell小室法检测细胞的迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告基因实验验证TTN-AS1与miR-134-5p的靶向关系以及miR-134-5p与MBTD1的靶向关系。结果 TTN-AS1在U2-OS、MG-63、SOSP-9607、SAO...     

SIRT3过表达抑制肝癌细胞的迁移与侵袭

目的探讨沉默信息调节因子(SIRT)3对肝癌细胞迁移与侵袭能力的影响。方法用对照pcDNA3.1质粒转染Huh-7细胞(对照组),用SIRT3质粒转染Huh-7细胞(实验组)。用实时荧光定量PCR检测两组SIRT3mRNA表达水平,用蛋白质印迹法检测两组SIRT3蛋白表达水平。SIRT3过表达成功后,用细胞划痕实验和细胞侵袭实验检测SIRT3过表达Huh-7细胞的迁移和侵袭能力。结果与对照组相比,实验组SIRT3mRNA、蛋白表达水平明显升高,差异有统计学意义(P0.05)。细胞划痕实验结果显示,划痕48h时,实验组两侧细胞间的距离明显宽于对照组,迁移距离较短。细胞侵袭实验结果显示,两组细胞接种于上室10h后收集,显微镜下计数,对照组每个视野为(45±5)个细胞,实验组每个视野为(25±2)个细胞,差异有统计学意义(P0.05)。结论 SIRT3过表达抑制肝癌细胞的迁移与侵袭,其有望作为肝癌治疗新的分子生物学靶点。     

Hugl-1基因在人大肠癌组织中的表达及其对LS174细胞增殖和迁移能力的影响

目的研究Hugl-1基因在人大肠癌组织中的表达及其与临床病理的相关性,探讨外源Hugl-1基因转染对大肠癌LS174细胞增殖和迁移能力的影响。方法采用RT-PCR及Western-blot法检测人大肠癌组织及相应癌旁正常组织中mRNA和蛋白质的表达水平。以成功构建的分别能稳定表达外源pcDNA3.0-Hugl-1、空载体pcDNA3.0的大肠癌细胞系和未转染的LS174细胞为研究对象,通过软琼脂集落形成、划痕修复、细胞黏附和Transwell细胞侵袭等一系列细胞学功能实验,观察稳定转染细胞株Hugl-1的表达差异对肿瘤细胞增殖、黏附、运动和侵袭的影响。结果 Hugl-1基因在大肠癌组织中表达下调或缺失,表达水平低于癌旁正常组织。Hugl-1表达降低与肿瘤分期及淋巴结转移相关。RT-PCR、Western-blot显示重组体pcDNA3.0-Hugl-1转染细胞株中目的基因Hugl-1在mRNA和蛋白质水平上表达均较空载体转染细胞株和未转染细胞株增强（P〈0.05）;对转染前后的细胞观察表明,重组体转染组细胞增殖能力无明显改变,但是其迁移运动和侵袭能力降低,细胞黏附能力增加。结论研究表明,Hugl-1表达下调与大肠癌的发生发展有关,Hugl-1基因表达下调可能使肿瘤细胞的结构稳定性丧失,促使肿瘤细胞扩散。     

基质金属蛋白酶-26促进乳腺癌细胞的黏附、迁移和侵袭

目的获得稳定表达MMP-26蛋白的乳腺癌细胞株,明确MMP-26蛋白在乳腺癌细胞黏附、迁移和侵袭中的作用。方法将含有MMP-26基因全长序列的pcDNA3.1质粒稳定转染人乳腺癌MCF-7细胞株,筛选阳性表达克隆扩大培养,对比其转染前后在Matrigel上的黏附和铺展能力以及在Boyden小室中的迁移和侵袭能力的差异。结果RT-PCR和细胞免疫荧光结果显示转染组MMP-26 mRNA及蛋白均稳定高表达;MMP-26转染细胞在Matrigel的黏附和铺展速度大于对照组,其黏附率与对照组比较差异有显著性,P〈0.01;MMP-26转染组细胞在Boyden小室中的迁移速度和侵袭能力明显增强,与对照组比较差异有显著性（P〈0.05）。而MMP-26抗体对其有明显的抑制作用。结论MMP-26能有效的促进乳腺癌细胞在Matrigel上的粘附、迁移和侵袭能力,其可能在乳腺癌的早期侵袭中发挥重要作用。     

乙型肝炎病毒X基因对HepG2肝癌细胞生物学行为的影响及其机制

目的:研究乙型肝炎病毒X基因(HBX)对HepG2细胞生物学行为的影响及机制.方法:HepG2瞬时转染HBX真核表达载体pcDNA3.1-HBX(HepG2/HBX),转染pcDNA3.1的HepG2细胞和未转染任何质粒的HepG2细胞分别作为空白对照组和阴性对照组.转染后48 h收集细胞,流式细胞仪分析细胞凋亡率的变化;transwell检测细胞侵袭能力;RT-PCR检测PEG10 mRNA表达量的变化.结果:实验组细胞凋亡率为(4.8±1.8)％,空白和阴性对照组细胞凋亡率分别为(12.9±1.4)％和(11.7±2.2)％,P＜ 0.05.实验组细胞体外侵袭力增强(P＜0.05),PEG10基因的表达水平明显上调(P＜0.05).结论:HBX通过上调PEG10的表达,抑制HepG2细胞凋亡并增强其体外侵袭能力.     

转化生长因子β1基因突变对细胞生物学行为改变的可能意义

背景通过测序进行序列分析是发现基因突变的直接手段,转化生长因子β1(TGF-β1)作为细胞最主要的生长调控因子,参与多项生理和病理过程.该基因的突变对于所在细胞的生物学行为改变可能具有重要意义.目的分析人成骨肉瘤细胞系中TGF-β1成熟肽基因序列,探讨TGF-β1基因突变存在的可能性及其机制,为肿瘤及骨软骨损伤的基因治疗提供新思路.设计非随机非对照实验研究.地点和对象实验在第四军医大学唐都医院解放军骨科中心骨肿瘤研究所完成,对象为人成骨肉瘤细胞系SOSP-9607(本室建立).干预提取人成骨肉瘤细胞系SOSP-9607中的总RNA,参照Genebank数据库中的已知序列设计合成引物,采用RT-PCR法扩增TGF-β1成熟肽基因,克隆入质粒pcDNA 3.0进行序列测定和分析.主要观察指标将多次测序所得的TGF-β1成熟肽基因序列与Genebank数据库中的已知序列进行比较,分析恒定差异.结果发现人成骨肉瘤细胞系SOSP-9607中TGF-β1基因存在两处点突变,其中第1 788位突变引起相应多肽的结构改变.结论人成骨肉瘤细胞系SOSP-9607中存在TGF-β1基因突变,其可能在病理机制中起重要作用,具有强功能活性突变子的获得对于骨软骨损伤的修复有重要意义.     

韶关市农村留守儿童孤独感状况调查

目的了解广东省韶关市农村地区留守儿童孤独感现状及其影响因素。方法对韶关市某地区两所农村小学3～6年级学生中的489名留守儿童采用儿童孤独量表和自编调查表进行问卷调查。结果17．6％留守儿童存在孤独感，不同性别孤独感发生率无差异性，不同年龄及不同年级间孤独感发生率差异均有极显著性（P〈0.01）；随年级增加，孤独感发生率呈下降趋势（X^2趋势=5．970，P〈0.05）。留守儿童孤独感与健康状况、学习成绩、学习困难程度、父母教育方式、父母间关系和老师教育方式等因素显著相关（P〈0.01～0．05）。结论农村地区留守儿童中存在一定程度的孤独感问题，老师和家长应以正确的态度和方法对待留守儿童，以减少其孤独感的发生。     

产科新生儿不同部位经皮测黄报警预值的可靠性观察

目的对比观察产科新生儿不同部位经皮胆红素（TCB）报警预值的可靠性。方法132例产科新生儿采取随机数字分组法分为正常产组和剖宫产组各66例,新生儿均于产后第4天同一时间点应用KJ8000经皮测黄仪分别测量额、胸、腹、额胸、额胸腹TCB值,TCB〉12．9mg／dl者,取得亲属同意抽取静脉血检测血清胆红素（SB）,对比分析不同部位TCB及其与sB值的差异。结果两组分别有17例或21例达到TCB报警预值。两组TCB或sB相同方法及相同部位比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;两组TCB不同部位对比,额部值最低、胸部值最高,且与其他部位同组对比差异均有统计学意义（P〈0．01）;两组sB值对比差异无统计学意义（t=1．53,P〉0．05）,与不同部位TCB对比均以胸部数值差异无统计学意义（P〉0．05）,而与其他部位TCB两组差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论正常产与剖宫产新生儿术后sB对比差异无意义;TCB动态监测以胸部结果更接近SB。     

Determination of loss of quality of life

Physiatrists are a valuable resource in legal settings, where assessment of functional capacity to perform work and of future medical needs must be determined. Physiatrists help determine what future medical care is needed to restore and maintain an individual at the maximum level of life function. This article focuses on the use of a quality of life (QOL) rehabilitation model, rather than a medical model, for enhancing functional performance, modifying environments, and facilitating patient coping. We discuss use of the QOL model to describe and influence a patient's physical, psychological, cognitive, vocational/economic, and social/leisure domains.     

护士选择性应用静脉留置针现状分析

[目的]了解护士选择性应用留置针的现状以及主要影响因素,为指导临床留置针合理应用提供理论依据。[方法]采用自设问卷对138名护士留置针选择性使用情况及其影响因素进行调查。[结果]约1／4的护士并不知道应选择性使用留置针,近60％的护士在实际工作中选择留置针的意识较差;护士选择性应用留置针的决策受多因素影响;不同科室、职称及是否具有带教资格选择性应用留置针的影响因素不尽相同;绝大部分护士希望参加选择性应用留置针相关内容的培训。[结论]临床护士操作前考虑留置针选择的意识有待加强。建议实施有针对性的培训以提高护士选择性应用留置针的能力。     

血液透析患者家庭护理提供者的生活质量调查

目的:了解江汉油田血液透析(血液透析)患者家庭护理提供者(护理者)的生活质量。方法:对60例血液透析患者的家庭护理提供者进行一般情况和生活质量综合评定问卷(QOLI-74)调查,并进行相关性和多因素回归分析。结果:家庭护理提供者各维度的主观生活满意度与其客观指标相关,但也与其需求、年龄、文化程度、与患者的关系有关。结论:客观状态是影响主观生活满意度的重要因素,同时应考虑护理者的需求、年龄、文化程度、与患者的关系对护理者主观生活满意度的影响。