斑驳病的一种新的KIT基因突变

目的 研究1个斑驳病家系先证者及其母亲的基因突变情况。方法 经组织病理、电镜检查结合典型的临床特征确立斑驳病的诊断。采用聚合酶链反应及DNA直接测序的方法对1个斑驳病家系进行基因突变检测。结果 家系中先证者存在KIT基因第1833位G〉A，导致V6041。100名健康对照者及其它家庭成员不存在此突变。结论 V6041是引起该家系临床表型的原因。     

两个斑驳病家系KIT基因突变研究

目的 对2个斑驳病家系进行致病基因突变分析,为患者及其家系成员提供遗传咨询和生育指导.方法 分别采集家系1两例患者(先证者及其父亲)、家系2先证者及3名表型正常家系成员的外周血,提取外周血DNA和RNA.应用PCR、逆转录PCR及测序等技术,从基因组水平和表达水平对此两家系先证者和患者进行KIT基因诊断,并初步探讨检测到的突变对KIT基因功能的影响.结果 家系l中两例患者KIT基因均存在IVS12+ 2_+7delinsACATCTTTA的杂合突变,该突变在cDNA水平导致KIT基因c.1765-1779del突变,在氨基酸水平导致p.Gly592Ala/del:E12突变,使得KIT基因剪切位点发生改变,即其中一条cDNA第12外显子被跨越、未转录.家系2中先证者KIT基因存在c.2401A＞C突变,3位表型正常的家系成员未见该突变.结论 确诊了两个斑驳病家系的致病原因.家系1患者KIT基因均存在IVS12+ 2_+ 7delinsACATCTTTA的杂合突变,该突变为人类基因突变数据库未记载的、新的剪切突变;家系2先证者KIT基因存在c.2401A＞C突变,结合3位表型正常的家系成员KIT基因未见c.2401A＞C突变,推测该突变为先证者患斑驳病的致病突变可能性大.为此两家系进行遗传咨询和产前诊断提供了理论依据.     

斑驳病1家系临床及致病基因检测研究

目的 研究中国汉族1斑驳病家系临床表现及其致病基因突变。方法 收集1斑驳病家系2代3个体的临床信息和外周血,提取样本外周血基因组DNA。对家系其中1个患者的基因组DNA进行全外显子组捕获并进行高通量测序,对候选变异位点在家系样本DNA中进行Sanger测序验证。结果 先证者自出生起额头出现一白斑,横跨发际线,白斑处头发为白发。左小腿少量白斑,右小腿多处白斑。全外显子组测序和Sanger测序验证发现IV2患者KIT c.2424T>G (p.Ile808Met)突变。此为一新突变位点,目前文献及数据库未见报道。结论 1个KIT基因新突变位点导致斑驳病家系。     

人类斑驳病分子机制

人类斑驳病是一种黑色素细胞发育障碍的常染色体显性遗传病 ,其特征是皮肤、毛发的先天性色素减少性斑块 ,主要发生于发部、前额、胸腹和四肢 ,斑块内黑素细胞缺失。斑驳病是由原癌 c- kit基因的突变引起 ,此基因编码一种胚胎时期生长因子 (steel factor)的细胞表面跨膜受体 ,这种受体具有酪氨酸激酶的作用。已经识别出引起斑驳病的 c- kit基因的多种突变 ,这些突变和临床表型之间具有阶梯状的联系 ,对这些联系的研究反过来又加深了对斑驳病发病机制的了解     

中国人大肠癌K-ras基因突变的研究

目的：检测K－ras基因在国人散发性大肠癌中的突变情况,探讨K-ras基因突变在中国人大肠癌中的特点以及与临床病理参数的关系。方法：微解剖取正常粘膜组织15例、癌组织35例、PCR扩增、DNA测序、检测K－ras第12、13和61密码子的突变情况。结果：癌组织K－ras突变率为14．3％（5／35）,均发生在第12密码子（GGT→GAT）。第13和61密码子无突变,正常粘组织无K－ras突变。伴有12密码子突变的大肠癌患者年龄较大,大体以隆起型为主,均分布在C和D期,有较强的侵袭性。结论：中国人大肠癌K-ras突变率为14．3％,低于欧美国家且仅发生在第一外显子的12密码子的第二碱基。大肠正常粘膜无K－ras突变。K-ras突变与患者的年龄、肿瘤的大体形态和Dukes分期等临床病理参数有关。     

中国人中的一种新的G6PD基因突变：外显子ⅥcDNA592…

一对Ｇ６ＰＤ缺乏的孪生子作了生化变异型鉴定后，对其中一例进行了基因分析。生化变异型鉴定的所有参数都极为相近，且未见文献报告过，定名Ｇｄ（一）Ｓｈｕｎｄｅ（顺德）。基因顺序分析发现ｃＤＮＡ第５９２位核苷酸由Ｃ变为Ｔ，在中国中未见报告，其为在中国人中发现的第七种突变，故蜇命名为Ｇｈ７突变。     

表皮松解性掌跖角化症一家系KRT9基因突变研究

目的研究表皮松解性掌跖角化症一家系角蛋白9(keratin 9,KRT9)基因突变情况。方法用聚合酶链反应技术扩增家系成员及家系外5O名正常人KRT9基因外显子1,DNA序列分析寻找突变位点。结果家系中患者KRT9基因外显子1第488位碱基C→T,导致162位的精氨酸被谷氨酸取代(R162Q),家系内正常成员及家系外5O名正常人均不存在此突变。结论 KRT9基因外显子1第488位密码子发生C→T突变导致该家系患者发生表皮松解性掌跖角化症。     

成骨不全一家系的COL1A1基因突变分析

目的探讨一个成骨不全家系的COL1A1基因的突变位点及其与临床特征的关系。方法收集一个成骨不全家系的临床资料，采用聚合酶链反应以及直接测序法对家系内成员进行COL1A1基因突变位点检测，同时对50名无血缘关系健康对照者的该位点进行限制性内切酶分析。结果该家系中成骨不全患者均存在COL1A1基因的第2461位点G→A突变（17．821S），但其临床特征不一致。而在家系内非患者及正常对照者中均未发现该突变。结论COL1A1基因突变是中国人群中成骨不全致病原因之一。成骨不全的表型不仅与基因型有关，还与遗传背景有关。     

甲基丙二酸尿症一家系MMACHC基因突变分析

目的 研究甲基丙二酸尿症(methymalonic aciduria,MMA)MMACHC基冈的突变.方法 应用聚合酶链反应及DNA直接测序技术对甲基丙二酸尿症一家系进行MMACHC基因突变位点检测,并与50名健康人的MMACHC基冈进行对照.结果 患者及其父亲的MMACHC基因中检测到一个新的整码突变,MMACHC基因第2外显子146_154缺失CCTTCCTGG,导致P.49_51位缺失丙氨酸苯丙氨酸亮氨酸(AFL),50名对照者的等位基因无此突变.结论 MMACHC基因的146_154缺失CCTTCCTGG也可能是该家系引起甲基丙二酸尿症的病因.     

Deletion of the KIT and PDGFRA genes in a patient with piebaldism

We have previously shown that human piebaldism results from mutations of the KIT gene, which encodes the receptor for the mast/stem cell growth factor and is located in chromosome segment 4q12. Using DNA of a patient with piebaldism, mental retardation, and multiple congenital anomalies associated with a 46,XY,del(4) (q12q21.1) karyotype, we carried out quantitative Southern blot hybridization analyses of the KIT gene and the adjacent PDGFRA (platelet-derived growth factor receptor α subunit) genes. The patient was hemizygous for both the KIT and PDGFRA genes, indicating that both of these genes are included within the deleted region. Therefore, deletion of the KIT and PDGFRA genes may account for the piebald phenotype in this patient.© Wiley-Liss, Inc.     

一个近亲婚配家系中的一种P基因新突变

目的在DNA水平上对1个有2例患者的姨表兄妹近亲婚配家系中的眼皮肤白化病患者进行分型诊断。方法用PCR扩增先证者P基因及TYR基因各外显子、外显子-内含子交界区及3＇端和5＇端非翻译区，以DNA序列测定技术检测基因突变，以DNA测序技术和限制性内切酶酶切法检测该家系其他成员及群体中正常人的相应基因位点。结果先证者和其白化病妹妹为P基因A787T突变纯合子，其父母和表型正常的弟弟均为A787T突变杂合子。先证者TYR基因未见突变。群体中102名表型正常者中无A787T突变等位基因。结论在基因水平确定我国存在眼皮肤白化病Ⅱ型，同时发现了一种P基因病理性新突变。     

一个X-连锁视网膜色素变性中国家系的RPGR基因的新突变

目的 对中国人X-连锁视网膜色素变性一家系进行分子遗传学检测，报告RPGR基因突变。方法 首先对该家系X染色体进行致病基因的连锁分析，然后用单链构象多态性技术和直接DNA测序方法进行基因突变分析。结果 连锁分析在多态性微卫星遗传标记DXSS012和DXS8025产生正的Lod值分别为2．41（Zmax=2．40，θ=0）和1．26。进一步单倍型分析确定该家系致病基因位于Xp21．1，与RP3连锁。用RPGR基因突变分析，在外显子ORF15＋483－484发现GA缺失，引起阅读框架的改变，该基因缺失突变在家系中共分离。结论 报告了中国人X-连锁视网膜色素变性RPGR基因外显子ORF15＋483-484的GA缺失突变，丰富了中国人RPGR基闪突变谱，为今后研究X-连锁视网膜色素变性的基因奠定基础。     

原发性开角型青光眼家系一新的myocilin基因突变

目的探讨一个中国人原发性开角型青光眼(primary open angle glaucoma,POAG)家系的my-ocilin基因缺陷。方法对一个5代POAG大家系进行全面的临床检查后,用聚合酶链反应扩增家系成员myocilin基因的所有外显子以及相邻部分内含子,对其产物直接测序。结果家系的遗传方式符合常染色体显性遗传。确诊年龄在26～59岁之间。在所有青光眼患者,可疑者以及4例尚未出现明显青光眼体征的家系成员发现携带myocilin基因T455K突变。无该突变的家系成员中无POAG患者及可疑者。突变位于myocilin蛋白C-末端非常保守的氨基酸残基。结论T455K突变是中国人所特有的新的致病性myocilin基因突变。突变的临床表型为混合发病年龄型POAG且具有很高的外显率。这个新基因突变的发现证实中国人的致病性myocilin基因突变类型与其他种族不同。     

良性家族性新生儿惊厥 KCNQ2 基因新突变

目的 对一个中国良性家族性新生儿惊厥(benign familial neonatal convulsions，BFNC)家系进行基因诊断，并探讨其分子发病机理。方法 对该家系进行详细的临床检查及疾病基因的连锁分析。应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)-DNA直接测序，并用PCR-单链构象多态(single strand conformation polymorphism，SSCP)对先证者、家系内16人及家系外72名无血缘关系的正常入进行KCNQ2基因突变分析。结果 连锁分析提示该家系与KCNQ2基因连锁，并排除与KCNQ3基因连锁。PCR—DNA直接测序在先证者发现．KCNQ2基因突变193ldelG，PCR—SSCP发现家系内其他患者均出现与先证者相同的异常SSCP条带，而72名正常人未出现此异常条带。结论 KCNQ2基因突变是中国人BFNC的发病原因之一，193ldelG是国内外未曾报道过的新突变，连锁分析结合基因突变分析可对BFNC患者进行基因诊断。     

一种导致完全性雄激素不敏感综合征的AR基因移码突变的鉴定

目的 对1个男性假两性畸形完全性雄激素不敏感综合征的家系雄激素受体(androgen receptor,AR)基因进行突变检测,并分析其致病原因.方法 用PCR扩增及DNA测序等技术分析男性假两性畸形先证者候选基因AR的外显子及外显子内含子接头序列,根据检测到的突变位点情况,检测患者及其家系其他成员的相应DNA区段的碱基序列.结果 先证者及其家庭成员共3例患者均为AR基因1910delA的移码突变.其母亲为AR基因突变杂合子,是此疾病的携带者.该突变导致AR基因的N637I(AAU→AUC)、L638*(CTG→TGA)改变,导致AR蛋白283个氨基酸的截短.正常人群未发现该移码突变,该突变尚未见文献报道.结论 基因水平确定了该家系为AR基因突变引起的完全性雄激素不敏感综合征男性假两性畸形家系,同时发现了1种AR基因病理性新突变.     

Detection of a novel missense mutation in the mevalonate kinase gene in one Chinese family with DSAP

Disseminated superficial actinic porokeratosis (DSAP) is the most common form of porokeratosis and a severe chronic autosomal dominant cutaneous disorder with high genetic heterogeneity. Recently, the mevalonate kinase (MVK) gene has been identified as a candidate gene responsible for DSAP and multiple mutations have been reported. Here, we report identification of a novel missense mutation in the MVK gene in a Chinese family with DSAP. A 50-year-old male was diagnosed as proband of DSAP based on the clinical and histological findings, which show numerous hyperpigmented macules by physical examination and cornoid lamella by skin biopsy. Similar skin symptoms were also observed in his father, who died many years ago. We prepared genomic DNA from the proband, unaffected individuals from his family members, as well as 100 unrelated healthy controls. PCR was then conducted using the above genomic DNA as template and the MVK gene-specific primers. The PCR product was subjected to direct sequencing and the sequence was compared to that of MVK gene within the NCBI database. We detected a heterozygous C to G transition at nucleotide 643 in exon 7 of MVK gene of the proband. This will result in an amino acid change at codon 215 (P.Arg215Gly.), which is from an arginine codon (CGA) to a Glycine codon (GGA). We did not detect any mutation in the unaffected family members or the 100 unrelated healthy controls, demonstrating that this is a novel missense mutation in MVK gene and therefore, contributes to the molecular diagnosis of DSAP.