对药酸枣仁-合欢花对抑郁模型大鼠学习记忆能力及BDNF-MEK-ERK-CREB细胞信号转导通路的影响

目的:观察对药酸枣仁-合欢花对抑郁模型大鼠学习记忆能力及脑源性神经营养因子(BDNF)-丝裂原细胞外激酶(MEK)-细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)-环磷腺苷反应元件结合蛋白(CREB)信号转导通路的影响,探讨对药酸枣仁(SZS)-合欢花(AJF)抗抑郁作用的机制。方法:将雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常组(control)、模型组(CUMS)、对药酸枣仁-合欢花组(SZS+AJF)、盐酸文拉法辛组(Venlafaxine)、PD184161组(PD),采用孤养加慢性不可预知性温和应激(CUMS)复制抑郁症大鼠模型,并用Morris水迷宫实验评价各组大鼠不同时间学习记忆能力的改变。应用ELISA法测定血清BDNF水平,应用real time RT-PCR法测海马CREB、BDNF mRNA表达,应用Western Blot法测定海马ERK、p-ERK、p-RSK及p-CREB蛋白表达。结果:与Control组比较,CUMS组大鼠学习记忆能力下降(从第14 d开始有统计学意义,P 0. 05或P 0. 01),血清BDNF含量减少(P 0. 01),海马CREB、BDNF mRNA和ERK、p-ERK、p-RSK、p-CREB蛋白表达量减少(P 0. 05或P 0. 01)。与CUMS组比较,SZS+AJF组、Venlafaxine组、PD组大鼠学习记忆能力提高(从第14 d开始有统计学意义,P 0. 05或0. 01),血清BDNF含量增加(P 0. 05),海马CREB、BDNF mRNA和ERK、p-ERK、p-RSK、p-CREB蛋白表达量增加(P 0. 05或P 0. 01)。与SZS+AJF组比较,PD组大鼠学习记忆能力减少(第21 d有统计学意义,P 0. 05),血清BDNF含量减少(P 0. 05),海马CREB、BDNF mRNA和ERK、p-ERK、p-RSK、p-CREB蛋白表达降低(P 0. 05)。结论:对药酸枣仁-合欢花能够提高抑郁模型大鼠的学习记忆能力,具有抗抑郁效应,其作用机制可能与提高抑郁模型大鼠BDNF-MEK-ERK-CREB信号转导通路的关键因子表达有关。     

头孢曲松对脑损伤后海马谷氨酸及谷氨酸转运体-1的影响

目的:观察β-内酰胺抗生素头孢曲松对创伤性脑损伤大鼠海马谷氨酸(Glutamate,Glu)及谷氨酸转运体-1(Glutamate transporter subtype-1,GLT-1)的影响。方法:将60只健康成年SD大鼠随机分三组:假手术组(Sham组)、脑创伤模型组(TBI组)、头孢曲松组(CTX组),采用改良Feeney法制备大鼠创伤性脑损伤模型,致伤后立即腹腔注射头孢曲松(200mg/kg)。伤后6 h、12 h、24 h及48 h取材,采用干湿比重法测定脑组织含水量;高效液相色谱法检测大鼠海马兴奋性氨基酸Glu水平;免疫组织化学法及Western blot法检测大鼠海马组织GLT-1的分布及表达情况。结果:模型组大鼠较Sham组相比,脑组织含水量明显增加(P0.05),海马区Glu水平显著升高(P0.05),大鼠海马GLT-1的蛋白表达量明显下调(P0.05)。与模型组大鼠比较,头孢曲松治疗组大鼠脑水肿减轻(P0.05),大鼠海马Glu水平明显下降(P0.05),GLT-1的蛋白表达量上调(P0.05)。结论:β-内酰胺抗生素头孢曲松可以阻断兴奋性神经毒性,减轻脑水肿程度。     

TPX2通过p38 MAPK信号通路诱导直肠癌HR-8348细胞凋亡

目的:研究下调非洲爪蟾驱动蛋白样蛋白2靶蛋白(TPX2)对直肠癌细胞凋亡的影响及机制。方法:用TPX2小干扰RNA(si RNA)转染直肠癌HR-8348细胞,记为TPX2 si RNA组;以不做转染的细胞作为正常对照(control)组;以转染si RNA阴性对照(si RNA-NC)的细胞作为si RNA-NC组;用p38 MAPK抑制剂处理敲减TPX2表达后的直肠癌HR-8348细胞记为TPX2 si RNA+SB203580组。RT-qPCR和Western blot测定TPX2的表达水平,MTT法测定细胞存活率,流式细胞术测定细胞凋亡,Western blot测定细胞中p38 MAPK、p-p38 MAPK、cleaved caspase-3和Bcl-2的蛋白水平。结果:TPX2 si RNA转染后HR-8348细胞中TPX2的m RNA和蛋白表达水平显著下降(P 0. 05),而转染si RNA-NC对HR-8348细胞中TPX2的m RNA和蛋白水平没有影响。敲减TPX2表达后的直肠癌HR-8348细胞存活率降低,凋亡率升高,细胞中的cleaved caspase-3、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白水平明显升高,Bcl-2水平水平降低,与control组比较,差异有统计学意义(P 0. 05)。与TPX2 si RNA组相比,TPX2 si RNA+SB203580组的HR-8348细胞凋亡率、cleaved caspase-3水平和p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白水平明显降低,存活率明显升高(P 0. 05)。结论:TPX2表达下调可以通过激活p38 MAPK促进直肠癌HR-8348细胞凋亡。     

银杏叶提取物预处理对VD模型大鼠海马CA1区P-GP和GLT-1表达的影响

目的:探讨银杏叶提取物(EGB761)预处理对血管性痴呆(VD)模型大鼠海马CA1区P-糖蛋白(P-GP)及谷氨酸转运体1(GLT-1)的影响。方法:大鼠分为假手术组、模型组和EGB761预处理组。EGB761预处理组在造模前7 d给予EGB761生理盐水混悬液灌胃,假手术组和模型组给予等体积的生理盐水灌胃。采用重复夹闭双侧颈总动脉(CCA)同时腹腔注射硝普钠溶液方法复制VD大鼠模型。Morris水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力,用神经颗粒素(Ng)/P-GP和胶质细胞酸性蛋白(GFAP)/GLT-1免疫荧光双标法,观察海马CA1区神经元P-GP和胶质细胞GLT-1表达水平的变化,Western Blot技术检测VD大鼠海马区P-GP和GLT-1蛋白的表达量。结果:(1)Morris水迷宫检测显示,与假手术组相比,模型组大鼠的逃逸潜伏期(Escape latency,EL)明显延长(P0.01),而EGB761预处理组大鼠EL明显缩短(P0.01)。(2)阳性细胞计数观察到,与假手术组相比,模型组海马CA1区Ng/P-GP的阳性细胞数明显减少,GFAP/GLT-1的阳性细胞数则显著增多(P0.01),EGB761预处理组海马CA1区Ng/P-GP和GFAP/GLT-1的阳性细胞数较模型组均明显增多(P0.01)。(3)积分光密度值测定观察到,模型组和EGB761预处理组的Ng/P-GP和GFAP/GLT-1阳性细胞的IOD值较假手术组均明显增大(P0.01);EGB761预处理组的Ng/P-GP和GFAP/GLT-1阳性细胞IOD值均显著高于模型组(P0.01)。(4)Western Blot分析结果显示,模型组和EGB761预处理组大鼠海马CA1区P-GP和GLT-1蛋白表达的灰度值均比假手术组增大(P0.01),EGB761预处理组大鼠海马CA1区P-GP和GLT-1蛋白表达的灰度值均显著大于模型组(P0.01)。结论:EGB761预处理可能通过上调VD模型大鼠海马CA1区P-GP和GLT-1的表达来预防VD的发生。     

米诺环素对CCI大鼠抑郁样行为的影响及机制研究

目的:观察海马CA1区注射米诺环素对坐骨神经慢性缩窄性损伤(CCI)大鼠的抑郁样行为、海马和前额叶皮层小胶质细胞激活的影响并分析其机制。方法:成年SD雄性大鼠随机分为:对照组、假手术组、CCI模型组、CCI+米诺环素组。糖水偏好及旷场实验检测大鼠抑郁样行为;免疫组化观察海马以及前额叶皮层Iba-1表达;取海马以及前额叶皮层组织,real-time PCR观察Iba-1、NLRP3和caspase1 mRNA表达,ELISA测定IL-1β和IL-18含量。结果:与假手术组相比,CCI大鼠7、10 d和14 d的糖水偏好明显降低(P 0. 05),旷场中央活动距离和中央活动时间明显减少(P 0. 05);与CCI组相比,CA1区注射米诺环素后CCI大鼠7 d和14 d的糖水偏好明显升高(P 0. 05),旷场中央活动距离和中央活动时间明显增加(P 0. 05)。与假手术组相比,CCI组大鼠海马CA1、CA3及DG区和前额叶皮层Iba-1阳性细胞数目显著增多(P 0. 05),Iba-1、NLRP3和caspase1 mRNA表达明显上调; IL-1β和IL-18含量也明显升高(P 0. 05)。与CCI组相比,注射米诺环素后,CCI大鼠海马CA1、CA3及DG区和前额叶皮层Iba-1阳性细胞数目减少(P 0. 05),Iba-1、NLRP3和caspase1 mRNA表达降低(P 0. 05),IL-1β和IL-18含量降低(P 0. 05)。结论:海马CA1区注射米诺环素明显抑制CCI大鼠的抑郁样行为;其机制可能是抑制海马和前额叶皮层小胶质细胞激活,下调NLRP3和caspase1表达,从而使IL-1β和IL-18产生减少。     

基于Nrf2/HO-1信号通路研究迷迭香酸对抑郁模型大鼠的保护作用

目的:探讨核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)信号通路在迷迭香酸(RA)保护抑郁模型大鼠中的作用。方法:采用孤养结合慢性不可预知性轻度应激(CUMS)法复制抑郁症大鼠模型,将60只SPF级6周龄雄性SD大鼠随机分为对照(Cont)组、CUMS组、CUMS+RA(10 mg/kg)组和CUMS+RA(10 mg/kg)+Nrf2抑制剂(Nrf2-IN-1,1 mg/kg)组(n=15)。CUMS造模3周后开始给药,连续3周。采用糖水偏好实验、强迫游泳实验和悬尾实验观察大鼠的抑郁样行为,采用HE染色和免疫荧光实验观察海马神经元损伤和小胶质细胞浸润情况,Western blot检测Nrf2/HO-1信号通路相关蛋白的表达,试剂盒检测活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、白细胞介素6(IL-6)、IL-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平。结果:与Cont组相比,CUMS组表现出神经元排列疏松紊乱、胞核皱缩、小胶质细胞活化等损伤,强迫游泳和悬尾静止时间延长(P0.05),IL-6、IL-1β、TNF-α、ROS和MDA水平升高(P0.05),糖水偏爱指数、SOD活性及HO-1、NAD(P)H:醌氧化还原酶1(NQO1)、脑源性神经营养因子(BDNF)和核/质Nrf2蛋白表达降低(P0.05)。RA治疗可明显减轻上述损伤,缩短强迫游泳和悬尾静止时间(P0.05),降低IL-6、IL-1β、TNF-α、ROS和MDA水平(P0.05),上调糖水偏爱指数、SOD活性及HO-1、NQO1、BDNF和核/质Nrf2蛋白表达(P0.05)。与CUMS+RA组相比,CUMS+RA+Nrf2-IN-1组上述指标均显著逆转(P0.05)。结论:RA可通过活化Nrf2/HO-1通路,减轻海马组织氧化应激和炎症损伤,减少CUMS所致大鼠抑郁样行为。     

红景天苷对缺氧缺血性脑损伤大鼠海马神经元自噬的影响

目的:探讨红景天苷(Sal)对缺氧-缺血(H/I)大鼠海马神经元自噬的影响。方法:36只成年雄性SD大鼠分为假手术组(Sham)、H/I组(H/I)、H/I联合Sal治疗组(H/I+Sal),利用双侧颈总动脉结扎及低氧处理制备H/I模型,通过腹腔注射给予大鼠Sal治疗3 d,Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力,TUNEL染色检测海马神经元凋亡,Western Blot检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达。结果:与sham组相比,H/I大鼠学习记忆能力受损明显(P 0. 05),海马细胞凋亡增加明显(P 0. 05),LC3-II/LC3-I比值增加(P 0. 05);经过Sal治疗后,与H/I大鼠相比,Sal治疗组大鼠学习记忆功能得到明显改善(P 0. 05),凋亡细胞减少(P 0. 05),LC3-II/LC3-I比值降低(P 0. 05)。结论:Sal能够通过抑制H/I模型大鼠海马神经元自噬减轻凋亡,发挥神经保护作用。     

Nrf2基因对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织氧化应激和JAK2/STAT3信号通路的影响

目的 探究过表达Nrf2基因对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织氧化应激和JAK2/STAT3信号通路的影响。方法 选取90只新生7日龄SD大鼠,采用随机分组法分为健康对照组、模型组、空质粒组、过表达组、白细胞介素6(IL-6)组和过表达+IL-6组。空质粒组将空白慢病毒质粒注射到大鼠尾静脉中,过表达组将过表达Nrf2的慢病毒质粒注射到大鼠体内,IL-6组尾静脉注射100 mg/kg的IL-6,过表达+IL-6组将含有Nrf2的慢病毒质粒和IL-6分别注入大鼠体内,健康对照组和模型组注射等量的生理盐水。使用Longa法评价大鼠神经功能损伤,使用Y迷宫实验检测大鼠脑部功能,使用RT-PCR和Western blot检测各组大鼠脑组织中Nrf2、JAK2、STAT3、Caspase-3和Caspase-9的表达,使用ELISA法检测大鼠脑组织中氧化因子(SOD、ROS、MDA)和炎症因子(TNF-α、ICAM-1、VCAM-1)含量,使用HE染色观察各组大鼠脑组织病理损伤。结果 与健康对照组相比,模型组和空质粒组大鼠Y迷宫实验错误次数、Longa法神经功能评分、Caspase-3和Caspase-9 m RNA和蛋白表达量、MAD、TNF-α、ICAM-1和VCAM-1含量水平、p-JAK2/JAK2和p-STAT3/STAT3显著较高(P 0. 05),Nrf2 m RNA及蛋白的表达、前爪受电刺激后收缩次数、SOD和ROS含量水平显著较低(P 0. 05)。与模型组比较,过表达组Y迷宫实验错误次数、Longa法评分、MAD、TNF-α、ICAM-1和VCAM-1含量水平及Caspase-3、Caspase-9 m RNA和蛋白表达量显著较低(P 0. 05),大鼠前爪受电刺激后收缩次数、SOD和ROS含量水平显著较高(P 0. 05)。与模型组相比,IL-6组Caspase-3蛋白表达水平显著较高,SOD含量水平显著较低(P 0. 05)。与IL-6组相比,过表达+IL-6组Caspase-3蛋白表达水平显著较低,SOD含量水平显著较高(P 0. 05)。结论 Nrf2基因的过表达可以通过降低大鼠氧化应激和炎症反应,同时抑制JAK2/STAT3信号通路,实现减轻缺氧缺血性脑损伤的目的。     

迷迭香酸抑制NLRP3炎性小体的活化对创伤性颅脑损伤大鼠脑组织损伤和海马区神经元凋亡的影响

目的探究迷迭香酸对NLRP3炎性小体活化的影响,从而进一步探究其对创伤性颅脑损伤大鼠脑组织损伤和海马神经元凋亡的影响。方法采用控制性皮层撞击损伤(CCI)模型法建立大鼠创伤性颅脑损伤模型,将小鼠随机分成5组,加药组分别腹腔注射5、10、20 mg/kg迷迭香酸,然后评估大鼠的神经功能缺陷评分;计算各组大鼠脑含水率及脑指数;苏木精-伊红染色观察各组大鼠脑组织海马区神经元病理学变化;TUNEL检测神经元凋亡情况;尼氏小体染色观察神经元损伤情况;蛋白印迹法检测各组大鼠脑前额叶脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)、神经生长因子(nerve growth factor,NGF)、NLRP3、凋亡相关微粒蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)、Caspase-3的蛋白表达水平;试剂盒检测活性氧(reactive oxygen species,ROS),超氧化物岐化酶(superoxide dismutase,SOD),乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的含量。结果与健康对照组比较,脑损伤模型组神经功能缺陷评分、脑含水率以及脑指数均显著升高(P0.05),神经元凋亡率,BDNF、NGF、NLRP3、ASC、Cleaved Caspase-3蛋白表达水平,ROS和LDH的含量均显著升高(P0.05),SOD活性显著降低(P0.05)。与脑损伤模型组比较,迷迭香酸中、高剂量组神经功能缺陷评分、脑含水率以及脑指数均显著降低(P0.05),海马区神经元病变范围及程度减轻,海马区神经元损伤程度减轻。与脑损伤模型组比较,迷迭香酸中、高剂量组神经元凋亡率,BDNF、NGF、NLRP3、ASC、Cleaved Caspase-3蛋白表达水平,ROS和LDH的含量均显著降低(P0.05);SOD含量显著升高(P0.05)。结论迷迭香酸可抑制NLRP3炎性小体的活化和海马区神经元凋亡并减轻创伤性颅脑损伤大鼠脑组织损伤。     

对药酸枣仁-合欢花对抑郁模型大鼠海马CA3区细胞凋亡及caspase-12表达的影响

目的:研究对药酸枣仁(SZS)-合欢花(AJF)对抑郁模型大鼠海马CA3区细胞凋亡及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-12(caspase-12)表达的影响,从内质网应激(ERS)角度探讨其抗抑郁作用机制。方法:将雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组(Control)、模型组(CUMS)、对药酸枣仁-合欢花组(SZS+AJF)、盐酸文拉法辛组(Venlafaxine),采用孤养加慢性不可预见性温和应激(CUMS)建立抑郁症大鼠模型,并用旷场实验评价各组大鼠行为学改变。应用DNA原位末端缺口标记(TUNEL)法检测海马CA3区神经元凋亡情况,应用免疫组化检测海马CA3区caspase-12表达。结果:与Control组比较,CUMS组大鼠旷场实验得分降低,海马CA3区细胞凋亡率及caspase-12表达显著增加。与CUMS组比较,SZS+AJF组、Venlafaxine组大鼠旷场实验得分显著增加,海马CA3区细胞凋亡率及caspase-12表达显著减少。结论:对药酸枣仁-合欢花能显著改善抑郁模型大鼠的抑郁症状,降低海马CA3区caspase-12表达,抑制海马CA3区细胞凋亡。     

血管性痴呆大鼠海马神经元P-GP和胶质细胞GLT-1的表达变化

目的:探讨血管性痴呆(VD)模型大鼠海马CA1区P精蛋白(P-GP)及谷氨酸转运体1(GLT-1)长时间表达变化及其神经元保护机制。方法:采用反复脑缺血再灌注复制VD大鼠模型在15 d和1月两个时间点采用Morris水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力,用神经颗粒素(Ng)/P-GP和GFAP/GLT-1免疫荧光双标法,观察海马区神经元P-GP和胶质细胞GLT-1的表达变化。结果:(1)模型组大鼠各时间点的Morris水迷宫逃逸潜伏期比假手术组均明显延长(P0.01)。(2)与假手术组相比,模型组大鼠海马CA1区Ng/P-GP阳性神经元的数量明显降低(P0.01)而GFAP/GLT-1阳性胶质细胞数以及海马区神经元上P-GP和胶质细胞上GLT-1表达均明显升高(P0.01);与模型组15 d时间点比较,模型组1月时间点的海马CA1区Ng/P-GP阳性神经元的数量明显降低而GFAP/GLT-1阳性胶质细胞数以及P-GP和GLT-1的表达均明显升高(P0.01)。(3)积分光密度值测定显示:模型15 d时间点Ng/P-GP和GFAP/GLT-1阳性细胞的IOD值比假手术组各时间点均明显变大(P0.01);模型1月时间点Ng/P-GP和GFAP/GLT-1阳性细胞的IOD值较15 d时间点更大(P0.01)。结论:神经元的P-GP和胶质细胞的GLT-1可能参与VD大鼠海马神经元的保护。     

香叶木素降低NLRP3炎性小体活性缓解CCl_4诱导的肝损伤大鼠肝纤维化

目的:探索香叶木素(Diosmetin,DM)对CCl_4诱导的肝损伤大鼠肝纤维化的影响及其分子机制。方法:通过CCl_4处理建立肝损伤模型。大鼠随机分为4组:对照组; DM (20 mg/kg)组; CCl_4组; CCl_4+DM (20 mg/kg)组。苏木素-伊红(HE)染色观察肝脏组织病变。免疫组化染色检测细胞增殖核抗原-67(Ki-67)表达。脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)染色分析细胞凋亡。Masson三色染色观察肝纤维化。蛋白印迹检测含pyrin结构域NOD样受体家族3(NLRP3)和凋亡相关微粒蛋白(ASC),Caspase 1和白细胞介素(IL)-1β表达。结果:香叶木素可改善CCl_4诱导的肝损伤大鼠肝脏组织细胞排列不规则,充血,细胞质空泡化,肝细胞坏死等病理变化。与对照组相比,CCl_4组细胞增殖降低,细胞凋亡增加(P0. 05)。与CCl_4组相比,CCl_4+DM组细胞增殖上升,细胞凋亡下降(P0. 05)。而且,香叶木素可缓解CCl_4诱导的肝损伤大鼠肝纤维化。另外,CCl_4组NLRP3、ASC、Caspase 1和IL-1β的表达高于对照组(P0. 05)。CCl_4+DM组NLRP3、ASC、Caspase 1和IL-1β的表达低于CCl_4组(P0. 05)。结论:香叶木素可通过降低NLRP3炎性小体活性减轻CCl_4诱导的肝损伤大鼠肝纤维化。     

暴露丙烯酰胺对Wistar大鼠学习记忆及海马CA1区c-Fos表达的影响

目的:探讨丙烯酰胺(ACR)暴露对Wistar大鼠学习记忆能力、大脑海马CA1区c-Fos蛋白和c-fos mRNA表达的影响。方法:健康雄性Wistar大鼠40只,体重180～220 g,随机分为对照组、腹腔注射ACR 9 mg/kg组、18 mg/kg组和36 mg/kg组,每组各8只,对照组以同样方式腹腔注射等量生理盐水。1周后用Morris水迷宫法检测大鼠学习记忆功能,HE染色观察海马CA1区神经细胞形态,用免疫组化法检测海马CA1区c-Fos蛋白表达,RT-PCR法检测c-fos基因表达。结果:ACR组大鼠表现为海马CA1区神经纤维稀疏、神经细胞减少,可见空泡样变性等。与对照组比较,ACR作用后大鼠学习记忆功能明显降低(P 0. 05),且具有剂量依赖性(r=0. 820～0. 891,P均0. 05)。ACR中、高剂量组海马区c-Fos蛋白和c-fos mRNA表达水平明显低于对照组(P 0. 01),同时随ACR剂量增加,c-Fos蛋白和c-fos mRNA表达水平降低,与ACR剂量明显相关(r=-0. 824,0. 857,P均0. 05)。结论:模型大鼠暴露于ACR可以损害学习记忆功能,同时有海马区c-Fos蛋白和c-fos mRNA表达水平下降,其机制可能是ACR造成大鼠海马区神经细胞功能减弱所致。     

山奈酚对CUMS 抑郁模型大鼠海马神经元过度自噬和氧化应激损伤的保护作用

目的:探究山奈酚(Kaempferol,Kpf)对慢性轻度不可预见性应激(CUMS)抑郁模型大鼠海马神经元的作用及机制。方法:将60只大鼠随机分为对照(Ctrl)组、CUMS组、丙咪嗪(Imipramine,IMI)组、Kpf(10 mg/kg)组、Kpf(25 mg/kg)组和Kpf(50 mg/kg)组。除Ctrl组外,其余组大鼠采用CUMS法复制抑郁症模型,Kpf(10、25、50 mg/kg)组大鼠并分别给予相应浓度的Kpf,IMI组大鼠给予10 mg/kg的IMI。4周后处死大鼠并摘取脑组织,用HE染色检测脑海马区病理损伤,Tunel检测细胞凋亡,Western blot检测Bax、Bcl-2、Casapse-3、Beclin1、P62和LC3的表达,试剂盒检测SOD、MDA、GSH和炎症因子NO、IL-1β和TNF-α的浓度。结果:与Ctrl组比较,CUMS组大鼠海马区损伤明显加重,细胞凋亡率、Bax和Caspase-3表达水平明显升高,Bcl-2表达明显被抑制; IMI组和Kpf(10、25、50 mg/kg)组组织损伤情况与CUMS组比较明显减轻,细胞凋亡率、Bax和Caspase-3的表达水平显著低于CUMS,Bcl-2的表达水平也明显升高;同时,CUMS模型大鼠海马Beclin1表达水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著高于正常大鼠,P62表达水平明显降低; IMI和Kpf(10、25、50 mg/kg)能显著降低CUMS大鼠海马Beclin1表达水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值,并能诱导P62的表达;此外,CUMS组大鼠血清SOD、GSH明显低于Ctrl组大鼠,MDA和炎症因子NO、IL-1β和TNF-α浓度明显升高; IMI和Kpf(10、25、50 mg/kg)能明显升高模型大鼠血清SOD和GSH浓度,降低MDA、NO、IL-1β和TNF-α浓度。结论:Kpf能通过抑制自噬和氧化应激减轻CUMS抑郁症模型大鼠海马神经元的损伤。     

慢性应激致大鼠抑郁行为涉及海马形态变化和BDNF表达降低

目的 研究慢性不可预见轻度刺激(CUMS)致大鼠抑郁模型与海马病理形态改变和脑源性神经营养因子(BDNF)表达异常的关系.方法 大鼠分为对照组和模型组,应用CUMS建立大鼠抑郁模型;以开场(open-field)法、黄嘌呤氧化法和硫代巴比妥酸法、HE染色和免疫组化法分别检测大鼠行为、皮质MDA水平和SOD活力、海马病理形态和海马BDNF表达.结果 与对照大鼠相比,接受28 d CUMS大鼠开场实验得分明显降低,皮质SOD活力显著下降和MDA含量明显增高,海马神经元呈明显核固缩和BDNF表达显著降低(吸光度值803±422vs237±96,P<0.01).结论 CUMS致大鼠明显抑郁行为,其机制可能与神经元氧化-抗氧化系统失衡,自由基生成增加,由此致海马神经元受损和BDNF表达减少有关.     

腺苷A1受体激动剂减轻糖尿病并发抑郁症大鼠的认知功能障碍

目的观察腺苷A1受体(A1R)激动剂对糖尿病并发抑郁症大鼠学习记忆功能的影响。方法将大鼠分为对照组、模型组、二甲双胍(Met)组[Met组:灌胃给予二甲双胍(0.18 g/kg) 28 d]和二甲双胍联合腺苷A1受体激动剂(Met+CPA)干预组[Met+CPA组:灌胃给予二甲双胍28 d,于第22天开始腹腔注射CPA(1 mg/kg),注射给药7 d]。观察大鼠血糖水平和学习记忆功能;ELISA检测大鼠海马谷氨酸的含量;用免疫组化法和Western blot检测海马谷氨酸转运体GLT-1和脑源性神经营养因子(BDNF)的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠血糖含量显著升高(P0.01);学习和记忆功能明显下降(P0.01);海马中谷氨酸含量明显升高(P0.01);而GLT-1和BDNF表达显著下降(P0.01或P0.05)。与模型组比较,Met组大鼠仅血糖含量显著下降(P0.01),其余指标均未见显著变化;而Met+CPA组大鼠血糖含量显著下降(P0.01),认知功能得到明显的改善(P0.01),海马中谷氨酸含量显著减少(P0.01),且GLT-1和BDNF表达显著增加(P0.01或P0.05)。结论激活腺苷A1受体可有效改善糖尿病并发抑郁症大鼠的认知功能,这可能与其通过减少谷氨酸释放和增加神经营养作用双途径共同减轻神经元兴奋性毒性有关。     

靶向沉默IL-6对乳腺癌细胞侵袭和迁移能力的影响

目的:观察白细胞介素6(IL-6)与人乳腺癌MCF-7细胞生长、侵袭和迁移的关系及其作用机制。方法:合成IL-6小干扰RNA(si RNA),并转染至MCF-7细胞中。实验分为空白对照组、阴性对照组和IL-6 si RNA组。通过MTT实验观察沉默IL-6基因表达对细胞活力的影响,Transwell小室法检测细胞侵袭和迁移能力的变化,采用q PCR和Western blot法检测转染后IL-6表达水平的变化,同时采用Western blot法观察上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白、信号转导及转录激活因子3(STAT3)、磷酸化STAT3(p-STAT3)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的蛋白水平。结果:与对照组相比,转染IL-6 si RNA的MCF-7细胞中IL-6的表达量显著下降(P 0. 05)。沉默IL-6表达显著抑制MCF-7细胞的活力(P 0. 05),并降低其侵袭和迁移能力(P 0. 05),显著抑制N-cadherin和vimentin的表达(P 0. 05),细胞中STAT3无明显变化,p-STAT3、MMP-2和MMP-9的蛋白水平显著降低(P 0. 05)。结论:沉默IL-6表达可能通过抑制EMT,并降低STAT3的磷酸化水平进而抑制MMP-2和MMP-9的分泌,从而减弱乳腺癌MCF-7细胞的活力,并降低其侵袭和迁移能力。     

mBDNF/Akt/CREB和proBDNF/RhoA信号传导失衡在丙泊酚致新生鼠认知功能障碍的作用

目的探讨m BDNF/Akt/CREB和pro BDNF/Rho A信号传导失衡在丙泊酚致新生鼠认知功能障碍的作用。方法新生7 d大鼠随机分为6组(每组n=12):C组连续7 d腹腔注射0.9%氯化钠溶液;P1组注射0.9%氯化钠溶液6d后,第7天注射丙泊酚;P2组连续7 d注射丙泊酚;T、K及D组连续7 d注射丙泊酚后,第7天再分别注射TATPep5、K252a与DMSO。各组随机抽取6只大鼠进行血糖血气的监测,其余大鼠喂养至第25天进行Morris水迷宫实验,测试空间学习记忆能力。取海马组织,通过Western blot检测m BDNF/Akt/CREB及pro BDNF/Rho A信号通路的表达。结果与C组比较,P1组与P2组大鼠幼年期逃逸潜伏期延长,空间探索时间缩短(P0.05),且P2组改变更为显著。与D组比较,K组大鼠幼年期逃逸潜伏期延长,空间探索时间缩短(P0.05);T组大鼠幼年期逃逸潜伏期缩短,空间探索时间延长(P0.05)。与C组比较,P1组与P2组海马m BDNF/Akt/CREB表达下调(P0.05),且P2组下调更为显著;P1组与P2组海马pro BDNF/Rho A表达上调(P0.05),且P2组上调更为显著。与D组比较,K组海马Akt/CREB下调(P0.05),T组海马Rho A下调(P0.05)。结论丙泊酚导致新生大鼠幼年期学习记忆功能障碍与m BDNF/Akt/CREB抗凋亡信号通路抑制,pro BDNF/Rho A促凋亡信号通路增强有关。     

NOX1在TNF-α诱导的肺泡上皮细胞氧化损伤和炎症中的作用研究

目的:探索NADPH氧化酶1(NOX1)在肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的肺泡上皮细胞A549氧化损伤和炎症中的作用。方法:以real-time PCR和Western blot法测定TNF-α处理后肺泡上皮细胞中NOX1的m RNA和蛋白表达水平。在肺泡上皮细胞中转染NOX1 si RNA及其阴性对照,以TNF-α诱导以后,用real-time PCR和Western blot测定细胞中NOX1水平。硫代巴比妥酸法检测细胞中丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤氧化法检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性,ELISA法检测细胞培养液中的白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素1β(IL-1β)含量,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测凋亡蛋白cleaved caspase-3的水平。结果:TNF-α诱导处理后A549细胞中NOX1 m RNA和蛋白水平均升高(P 0. 05),NOX1 si RNA转染可以下调细胞中NOX1的m RNA和蛋白表达(P 0. 05),转染si RNA阴性对照对细胞中NOX1的m RNA和蛋白表达没有影响。TNF-α处理后细胞中MDA含量升高,SOD活性降低,细胞分泌的IL-4、IL-6和IL-1β增多,细胞凋亡率和凋亡蛋白cleaved caspase-3水平均升高,与没有经TNF-α处理的细胞比较,差异有统计学意义(P 0. 05)。下调NOX1的细胞经TNF-α诱导后,细胞中MDA含量降低,SOD活性升高,细胞分泌的IL-4、IL-6和IL-1β减少,凋亡率及凋亡蛋白cleaved caspase-3水平降低,与只经过TNF-α诱导处理的细胞比较,差异有统计学意义(P 0. 05)。结论:TNF-α诱导肺泡上皮细胞表达NOX1。下调NOX1表达可减少细胞氧化损伤和炎症因子分泌,减少细胞凋亡。     

芹黄素对缺血缺氧性脑损伤大鼠的神经保护作用

目的:探究芹黄素激活Nfr2-ARE通路对缺血缺氧性脑损伤的保护作用。方法:选取60只7日龄SD大鼠,采用随机分组法将SD大鼠分为:假手术组(Sham)、缺血缺氧模型组(HIBD)、低浓度芹黄素组(AP-L)、高浓度芹黄素组(AP-H)每组15只。利用颈总动脉结扎法HIBD模型,使用HE染色观察大鼠海马区病理学变化;使用Western Blot检测大鼠脑组织中Bax、Bcl-2、Caspase-9、Caspase-3、i NOS、Nrf2、HO-1、NQO-1蛋白表达情况;使用全自动生化分析仪检测大鼠血清SOD、MDA、TNF-α、IL-1β、MPO水平;使用免疫组化检测大鼠海马区ICAM-1的表达。结果:HE染色结果显示,使用芹黄素处理后大鼠海马区细胞分布较为均匀、坏死细胞显著减少。与假手术组相比,缺血缺氧模型组Bcl-2、SOD、Nrf2、HO-1、NQO-1水平显著降低(P 0. 05),Bax、Caspase-9、Caspase-3、MDA、TNF-α、IL-1β、MPO、i NOS水平显著升高(P 0. 05);相比缺血缺氧模型组,使用芹黄素处理的各组Bcl-2、SOD、Nrf2、HO-1、NQO-1水平显著升高(P 0. 05),Bax、Caspase-9、Caspase-3、MDA、TNF-α、IL-1β、MPO、i NOS水平显著降低(P 0. 05),且呈浓度依赖性。免疫组化结果显示,模型组大鼠大鼠海马区ICAM-1阳性表达显著升高,使用芹黄素处理的各组ICAM-1阳性表达显著降低。结论:芹黄素可以激活Nfr2-ARE通路降低大鼠体内氧化应激反应和炎症反应,同时抑制脑细胞的凋亡缓解缺血缺氧性脑损伤,且在一定浓度范围内呈浓度依赖性。