CircSMC3调节miR-582-5p/MCL1轴对胃癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的:探讨环状非编码RNA(CircRNA)SMC3通过调节微小RNA(miR)-582-5p/髓细胞白血病基因1(MCL1)轴对胃癌(GC)细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法:qRT-PCR检测4种GC细胞系及正常胃上皮细胞系GES-1中SMC3、miR-582-5p、MCL1mRNA的表达水平。将SGC-7901细胞分为对照组、si-NC组、si-SMC3组、mimics NC组、miR-582-5p组、si-SMC3+inhibitor NC组、si-SMC3+miR-582-5p inhibitor组、miR-582-5p+pcDNA3.1组、miR-582-5p+MCL1组。检测各细胞凋亡、增殖、迁移及相关蛋白表达的情况;验证miR-582-5p与SMC3、MCL1的靶向关系。结果:4种GC细胞系中SMC3、MCL1 mRNA表达均增加,miR-582-5p表达下降(P<0.05)。干扰SMC3、过表达miR-582-5p可以抑制SGC-7901细胞增殖、迁移及相关蛋白、表达(P<0.05);抑制miR-582-5p表达可逆转干扰SMC3对细胞的作用(P<0.05);上调MCL1可逆转过表达miR-582-5p细胞的作用(P<0.05)。结论:干扰SMC3可能通过调节miR-582-5p/MCL1轴,抑制SGC-7901细胞增殖、迁移,促进凋亡。     

miR-622在胃癌细胞中的表达及其功能的研究

目的 研究miR-622在胃癌细胞中的表达,探讨miR-622在胃癌中的生物学功能.方法 采用实时荧光定量PCR检测miR-622在胃癌细胞中的表达,以胃癌细胞SGC-7901和NCI-N87为模型瞬时转染miR-622寡核苷酸前体或抑制体,通过克隆形成、侵袭和划痕实验验证其在胃癌细胞中的功能.结果 荧光定量PCR实验结果表明:miR-622在胃癌细胞SGC-7901中相对表达量为1.29±0.58,而在NCI-N87细胞中相对表达量为10.96±1.02.在SGC-7901细胞中转染了miR-622 寡核苷酸前体,克隆形成率为76％.划痕试验中愈合能力为(11±7)μm,胃癌细胞侵袭能力为(732±3)个,与对照组相比差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 miR-622能够促进胃癌细胞克隆形成、迁移和侵袭.     

组织因子基因siRNA对胃癌侵袭力的影响

目的：探讨应用RNA 干扰技术抑制胃癌细胞组织因子(TF) 基因表达对胃癌侵袭能力的影响。 方法：构建pSUPER /TF-siRNA重组载体, 并将其转染入胃癌细胞SGC-7901中;RT-PCR和Western blot检测转染前后TF的表达水平;应用Boyden小室检测对胃癌细胞的侵袭能力。 结果：双酶切鉴定重组载体构建成功。RT-PCR和Western blot检测显示pSUPER /TF-siRNA1重组载体明显抑制SGC-7901细胞TF基因的表达(P<0.05)。Boyden小室体外侵袭实验证实, 转染pSUPER/TF-siRNA1 质粒的SGC-7901穿膜细胞均数较其他无干扰组的细胞均数明显减少(P<0.05)。 结论：以TF 基因作为靶点应用RNA 干扰技术抑制其表达可降低胃癌细胞体外侵袭移能力, 故其有望成为胃癌治疗的一个新靶点。     

骨髓来源间充质干细胞对胃癌细胞侵袭转移的影响及其机制探讨

目的 分析骨髓来源间充质干细胞(BM-MSCs)在胃癌细胞侵袭转移中的作用,并对其调控机制进行探讨.方法 首先将SGC7901和KATO-Ⅲ胃癌细胞分别与BM-MSCs共培养,Transwell实验检测其侵袭能力变化;其次从KATO-Ⅲ胃癌细胞中分选出CD133+和CD133-细胞,并分别与BM-MSCs共培养,比较其侵袭能力变化,并通过Western blotting检测共培养后胃癌细胞p-AKT和上皮间质转化(EMT)相关因子蛋白表达水平的变化及其与CD133表达间的关系;通过对SGC7901过表达CD133,进一步验证CD133在BM-MSCs影响胃癌细胞侵袭转移中的作用.采用SPSS 17.0统计软件进行分析,计数资料以均数±标准差((-x)±s)表示,行独立样本t检验.结果 SGC7901和KATO-Ⅲ细胞与BM-MSCs共培养后,胃癌细胞的侵袭能力均显著增强,与BM-MSCs共培养的KATO-ⅢCD133+细胞侵袭能力增加的趋势较共培养的CD133-细胞更加明显[(259.0±24.0)个比(58.0±5.6)个,P ＜0.001];CD133+细胞共培养后,p-AKT和Snail、N-cadherin的表达量均显著增高(P值分别为0.003 、0.003、0.002),E-cadherin的表达则低于单独培养组(P=0.021);CD133-细胞共培养后,E-cadherin的表达低于单独培养组(P =0.005),而p-AKT和Snail、N-cadherin的表达与单独培养组比较,差异无统计学意义(P值分别为0.744、0.277、0.275);SGC7901过表达CD133后与BM-MSCs共培养,其侵袭能力增加的趋势较共培养的空白载体对照组更加显著[(239.3±24.0)个比(103.3±15.5)个,P＜0.001],CD133过表达组细胞与BM-MSCs共培养后,p-AKT和Snail,N-cadherin表达水平均显著高于其单独培养组(P值均为0.01),E-cadherin的表达则显著降低(P=0.003);空白载体对照组细胞与BM-MSCs共培养后,Snail和N-cadherin的表达也显著增高(P =0.007,0.004),E-cadherin的表达显著降低(P =0.018),而p-AKT的表达未见明显变化(P=0.193).结论 BM-MSCs通过促进胃癌细胞的EMT进而增强其侵袭转移能力,CD133在该过程中可能是通过PI3 K/AKT信号通路参与对胃癌细胞EMT的调控.     

肿瘤相关巨噬细胞和Sema4D与胃癌浸润转移的关系

目的:研究肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)对人胃癌SGC-7901细胞系生物学功能的影响。方法 :采用佛波酯(PMA)、白细胞介素IL-4和IL-13体外诱导人M2型巨噬细胞,细胞免疫荧光鉴定TAMs。Transwell非接触式共培TAMs和胃癌SGC-7901细胞,侵袭实验、迁移实验检测肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)对胃癌SGC-7901细胞侵袭和迁移的影响,酶联免疫吸附法(ELISA)检测实验组和空白对照组胃癌SGC-7901细胞上清中分泌型Sema4D的变化。结果:细胞免疫荧光鉴定M2型巨噬细胞诱导成功;在Transwell共培养体系中,TAMs共培养的胃癌SGC-7901细胞形态学发生改变;Transwell侵袭实验、迁移实验表明,细胞侵袭转移力增强(P0.01)。与TAMs共培养的胃癌SGC-7901细胞的上清液分泌型Sema4D蛋白明显增多,较空白对照组差异有统计学意义(1224.13±29.43比637.15±33.84,P0.01)。结论 :TAMs可促进胃癌细胞的浸润转移,其原因可能与分泌型Se m a4D蛋白的表达上调有关。     

circ_0007841靶向miR-513a-5p对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的:探讨circ_0007841靶向miR-513a-5p对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:RT-qPCR检测胃癌组织、癌旁组织、胃癌细胞HGC-27以及人胃黏膜细胞GES-1中circ_0007841和miR-513a-5p表达。双荧光素酶报告实验确定circ_0007841和miR-513a-5p相互作用。将HGC-27细胞分为si-NC组、si-circ_0007841组、miR-NC组、miR-513a-5p mimic组、si-circ_0007841+miR-513a-5p Inhibitor组。CCK-8法检测HGC-27细胞存活率;平板克隆实验检测HGC-27细胞克隆形成数;划痕愈合实验和Transwell实验检测HGC-27细胞迁移能力;Transwell实验检测HGC-27细胞侵袭能力。结果:与癌旁组织比较,胃癌组织中circ_0007841相对水平显著升高(P<0.05),miR-513a-5p相对水平显著降低(P<0.05)。与GES-1细胞比较,HGC-27细胞中circ_0007841相对水平显著升高(P<0.05),miR-513a-5p相对水平显著降低(P<0.05)。circ_0007841和miR-513a-5p直接特异性结合。与si-NC组比较,si-circ_0007841组HGC-27细胞存活率、克隆形成数、划痕愈合率、迁移数、侵袭数显著降低(P<0.05),miR-513a-5p相对水平显著升高(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-513a-5p mimic组HGC-27细胞存活率、克隆形成数、划痕愈合率、迁移数、侵袭数显著降低(P<0.05)。与si-circ_0007841组比较,si-circ_0007841+miR-513a-5p Inhibitor组HGC-27细胞存活率、克隆形成数、划痕愈合率、迁移数、侵袭数显著升高(P<0.05)。结论:干扰circ_0007841通过靶向上调miR-513a-5p表达来抑制胃癌细胞增殖、侵袭和迁移。     

miR-105-5p在胃癌中的表达及其意义与生物学功能

目的:探讨miR-105-5p在胃癌(GC)中的表达情况、临床意义及生物学功能及其潜在的作用机制。方法:应用real-time PCR检测miR-105-5p在GC组织与癌旁组织以及不同GC细胞(MGC-803,MKN-1,SGC-7901,BGC-823和AGS)与正常胃黏膜细胞(GES-1)中的表达;分析miR-105-5p的表达与GC临床病理特征及患者预后的关系;采用Transwell迁移和侵袭实验以及MTT实验检测miR-105-5p对GC细胞迁移与侵袭能力以及增殖能力的影响;应用生物信息学工具预测miR-105-5p的下游靶点,并应用荧光素酶报告实验以及Western blot分析miR-105-5p对靶点的调节作用。结果:miR-105-5p在GC组织的表达明显高于癌旁组织,在各GC细胞中的表达均明显高于正常胃黏膜细胞(均P0.05)。miR-105-5p的表达水平与肿瘤大小(P=0.020)和远处转移(P=0.004)明显有关;miR-105-5p低表达GC患者的总体生存率明显高于miR-105-5p高表达组的患者(P=0.001 8)。选择miR-105-5p表达量相对较低的BGC-823细胞和相对较高的MKN-1细胞,分别转染miR-105-5p模拟物和miR-105-5p抑制物,转染后结果显示,BGC-823细胞的迁移、侵袭和增殖能力明显增强,而MKN-1细胞的迁移、侵袭和增殖能力明显抑制(均P0.05)。生物信息学分析发现,DIRAS家族GTP结合RAS样3(DIRAS3)可能是miR-105-5p的作用靶点;荧光素酶报告实验显示,miR-105-5p能够负向调节DIRAS3-3'UTR的荧光素酶活性;Western blot显示,转染miR-105-5p模拟物的BGC-823细胞中DIRAS3的表达明显下调,转染miR-105-5p抑制物的MKN-1细胞DIRAS3的表达明显上调(均P0.05)。结论:miR-105-5p在GC中表达升高,其可能通过靶向作用于DIRAS3增强GC细胞的迁移、侵袭及增殖,进而促进GC的发生发展。     

miR-3126-5p靶向 LASP1抑制结直肠癌细胞的增殖和迁移的机制探讨

目的探讨微小RNA(miRNA)-3126-5p抑制靶基因LIM和SH3蛋白1(LIM and SH3 protein 1.LASP1)对结直肠癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测结直肠癌细胞株(HT-29、HCT116、LoVo、SW480)和正常肠黏膜上皮细胞(HIEC)中miR-3126-5p的表达水平。选择表达水平最低的细胞株作为实验对象,实验分为2组:阴性对照组(转染miR-NC)和miR-3126-5p组(转染miR-3126-5p),转染48 h后收集各组细胞。qRT-PCR法检测各组细胞miR-3126-5p的表达水平。采用MTS法和划痕愈合实验分别检测各组细胞的增殖水平和迁移能力。采用生物信息学软件microRNA.org和双荧光素酶报告基因实验分别预测和验证miR-3126-5p的靶基因。采用qRT-PCR和Western blot检测各组细胞靶基因的表达水平。计量资料以均数土标准差(Mean±SO)表示,两两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析结果与正常肠黏膜上皮细胞(HIEC)相比,结直肠癌细胞株miR-3126-5p的表达水平显著降低(P<0.05),表达水平最低的细胞株是HCT116细胞(P<0.01)。阴性对照组和miR-3126-5P组HCT116细胞中miR-3126-5p的表达分别为(1.05±0.16)和(7.91±1.26),差异具有统计学意义(t=5.40,P<0.01)。与阴性对照组相比,miR-3126-5p组HCT116细胞的增殖能力显著降低(P<0.05),迁移能力显著下降(t=4.52,F<0.01)。microRNA.org显示miR-3126-5p与LIM和SH3蛋白1(LASP1)基因mRNA存在互补结合位点。miR-3126-5p和L4SP/mRNA能够靶向结合(P<0.01)。与阴性对照组相比,miR-3126-5p组H CT116细胞中L4SP/基因表达显著降低(t=4.56,P<0.01)。结论结直肠癌细胞株中miR-3126-5p呈低表达,miR-3126-5p能够通过抑制靶基因LASP1降低结直肠癌HCT116细胞的增殖和迁移能力。     

miR-7856-5p通过靶向作用3对结直肠癌细胞SW480迁移和增殖的影响

目的探索微小RNA(miRNA,miR)-7856-5p对EPH受体A3(EPHA3)基因表达的调控作用及对结直肠癌细胞SW480迁移和增殖的影响。方法实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测结直肠癌组织和细胞系中miR-7856-5p的表达。脂质体转染法分别将miR-7856-5p模拟物和miR-NC转入结直肠癌细胞SW480,分别定义为miR-7856-5p组和miR-NC组。Real-time PCR检测转染效果。Transwell实验和CCK-8实验检测转染后细胞迁移和增殖能力。生物信息学软件预测和双荧光素酶报告基因系统验证miR-7856-5p的靶基因。Real-time PCR和Western blot检测转染后细胞中EPHA3的表达。符合正态分布的计量资料以均数±标准差(Mean±SD)表示,组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果miR-7856-5p在结直肠癌组织的表达明显低于癌旁组织(P<0.01)。miR-7856-5p在结直肠癌细胞系的表达明显低于正常肠黏膜上皮细胞(P<0.05),在SW480细胞中表达最低(P<0.01)。miR-7856-5p组miR-7856-5p的表达明显高于miR-NC组,差异有统计学意义[(9.49±1.09)比(1.06±0.18),P<0.01]。miR-NC组和miR-7856-5p组迁移细胞数量分别为(125.70±14.05)个和(42.01±8.98)个,miR-7856-5p组细胞迁移能力明显下降(P<0.01)。与miR-NC组比较,miR-7856-5p组细胞增殖能力明显降低(P<0.05)。生物信息学软件显示miR-7856-5p的靶基因是EPHA3。双荧光素酶报告基因系统证实miR-7856-5p可靶向结合EPHA3基因(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-7856-5p组SW480细胞中EPHA3的表达明显降低(P<0.05)。结论miR-7856-5p可通过靶向调控EPHA3的表达,抑制结直肠癌细胞SW480的迁移和增殖能力。     

微囊化人胃癌细胞SGC-7901模型建立

目的 建立微囊化人胃癌细胞株SGC-7901培养模型.方法 微胶囊制备仪包裹SGC-7901细胞,培养至21 d,噻唑蓝(MTT)比色法观察隔日细胞的生长活性,生物传感分析仪检测隔日培养上清中葡萄糖和乳酸浓度;选取第7、14、21天的微囊化SGC-7901细胞,苏木素-伊红(HE)染色;免疫细胞化学法分别观察微囊前后SGC-7901细胞5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-BrdU)、细胞核抗原(PCNA)及血管内皮生长因子(VEGF)基因表达.结果 MTT结果示培养至第14天,细胞相对数不再增加,随后细胞相对数略下降;微囊化人胃癌细胞培养上清中葡萄糖含量逐渐降低,乳酸上升;至20d后分别为10、100 mmol/L.免疫细胞化学法检测SGC-7901细胞贴壁培养中表达PCNA和VEGF基因;第7和14天,微囊化人胃癌细胞可见PCNA、BrdU及VEGF基因表达;21 d,PCNA和BrdU主要在细胞团外层表达,内层细胞则表达少或不表达,而VEGF均见表达.结论 呈三维立体生长的微囊化胃癌细胞模型生长稳定,相关基因表达稳定.     

腺病毒介导的靶向蛋白激酶B1和环氧合酶2短发夹RNA抑制人胃腺癌细胞的侵袭和转移

目的 构建靶向性蛋白激酶B1(Aktl)和环氧合酶2(COX-2)短发夹RNA(shRNA)腺病毒载体,研究其对SGC-7901人胃腺癌细胞侵袭和转移的抑制效果.方法 构建腺病毒载体pGSadeno-Aktl+COX-2(rAd5-A+C)并体外转染SGC-7901人胃癌细胞株后,用实时定量PCR和蛋白印迹分别检测对照组SGC-7901、空载组rAd5-HK和治疗组rAd5-A+C中Aktl、COX-2 mRNA和蛋白质的表达,其中以对照组SGC-7901、空载组rAd5-HK作为阴性对照.用ELISA法分别检测它们的MMP-2和MMP-9含量;用Transwell法分析它们的侵袭和转移能力.结果 构建的rAd5-A+C重组腺病毒载体在转染SGC-7901细胞48 h后可显著抑制Aktl和COX-2 mRNA的表达,而治疗组rAd5-A+C的Aktl和COX-2蛋白表达量与对照组和空载组相比分别下调68.4%和60.2%(均P<0.01);rAd5-A+C组中MMP-2和MMP-9含量分别为(39.7±1.7)ng/ml(31.3±3.6)ng/ml,明显低于对照组SGC-7901(278.4±15.5)ng/ml(225.4±15.1)ng/ml和卒载组rAd5-HK(275.5±2.1)ng/ml、(226.0±23.3)ng/ml(P=0.01、P=0.021).结论 腺病毒介导的靶向性Aktl和COX-2shRNA可抑制人胃腺癌细胞的侵袭和转移.     

胃癌细胞中miR-455-3p的表达及其对增殖和凋亡的影响

目的:探讨mi R-455-3p在胃癌细胞中的表达及对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:用q RT-PCR检测mi R-455-3p在正常胃黏膜上皮细胞RGM-1及5种胃癌细胞系(AGS、Hs746T、MGC-803、SGC-7901及BSG-823)中的表达。将胃癌细胞mi R-455-3p模拟物后,分别用CCK8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞p27 kip1、p21的蛋白表达,分光光度法检测细胞caspase酶活性。结果:mi R-455-3p在5种胃癌细胞系中的表达水平明显低于RGM-1细胞系,其中在AGS细胞中降低最为明显(均P0.05)。AGS细胞转染mi R-455-3p模拟物后,增殖能力明显降低而胞凋亡率明显升高,p27 kip1蛋白表达量明显升高,caspase-3与caspase-9相对活性明显升高(均P0.05),但p21蛋白表达量与caspase-8相对活性无明显改变(均P0.05)。结论:mi R-455-3p在胃癌细胞表达下调,增加其表达可抑制胃癌细胞增殖并促进凋亡,其机制可能与其上调p27 kip1表达及增强caspase-3、caspase-9活性有关。     

Inverse Association between miR-194 Expression and Tumor Invasion in Gastric Cancer

Background

MiR-194 has been shown to be specifically expressed in the human gastrointestinal tract and may play an antimetastatic role in primary liver cancer cells. However, the role of miR-194 in gastric cancer is still unclear.

Methods

Total RNA was extracted from tissues of 119 patients with gastric cancer and three gastric cancer cell lines (SGC-7901, MGC-803, and BGC-823). Expression levels of miR-194 were determined by real-time polymerase chain reaction (PCR). Moreover, a MTT proliferation assay and transwell cell invasion assay were performed to study the effect of miR-194 on SGC-7901 cell proliferation and invasion. Finally, we used real-time PCR and western blot to verify which gene was the target of miR-194 in gastric cancer.

Results

Though there was no significant difference between cancerous and matching noncancerous tissues, we found patients with lower expression of miR-194 tended to have larger tumor size (P = 0.002) and more advanced pT stage (P = 0.028) in gastric cancer. Moreover, the expression of miR-194 was significantly lower in Borrmann IV type gastric cancer than in Borrmann I, II, and III types (P = 0.019). Furthermore, an in vitro invasion assay indicated that the penetrated cell intensity after miR-194 mimics transfection was significantly lower than the control. However, overexpression of miR-194 had little effect on the SGC-7901 cell cycle and proliferation. The results of real-time PCR and western blot highlighted that miR-194 interacted with N-cadherin and negatively regulated its expression at the translational level.

Conclusion

These findings imply that miR-194 might play an important role in gastric cancer invasion and progression.

     

长链非编码RNA RAB1A-2在胃癌中的表达及作用

背景与目的:长链非编码RNA(lncRNA)参与细胞增殖、凋亡、周期控制、细胞发育和分化等一系列生物学过程,其差异表达与肿瘤的发生,发展密切相关。lncRNA RAB1A-2(RAB1A-2)一种mTORC1激活剂,目前发现RAB1A-2与肺癌细胞DNA异常扩增、细胞增殖及侵袭有关。为进一步研究其生物学功能,本研究探讨RAB1A-2在胃癌中的表达及作用。方法:采用qRT-PCR法检测68例胃癌组织及癌旁组织﹑3种胃癌细胞系(MKN-45、BGC-823、SGC-7901)及正常胃黏膜细胞系(GES-1)中RAB1A-2的表达,分析RAB1A-2的表达与患者临床病理因素间的关系,Kaplan-Meier生存分析比较RAB1A-2的表达与预后的关系。将SGC-7901细胞系分别转染si-RAB1A-2(RAB1A-2干扰组)、RAB1A-2模拟物(RAB1A-2模拟物组)和阴性对照序列(阴性对照组),分别用MTT法、流式细胞术、Transwell实验检测细胞增殖、凋亡和细胞侵袭能力。结果:qRT-PCR结果显示,胃癌组织中RAB1A-2相对表达量高于癌旁组织,3种胃癌细胞系中RAB1A-2表达量均高于正常胃黏膜细胞系(均P0.05)。胃癌组织中RAB1A-2的表达与肿瘤大小、T分类、N分类和TNM分期均有关(均P0.05)。生存分析结果显示,RAB1A-2高表达患者3、5年总生存率均低于RAB1A-2低表达患者(均P0.05)。与阴性对照组SGC-7901细胞比较,转染后24、48、72 h,RAB1A-2模拟物组SGC-7901细胞的A_(450) nm值均明显升高,RAB1A-2干扰组SGC-7901细胞的A_(450) nm值均明显降低(均P0.05);RAB1A-2模拟物组SGC-7901细胞的凋亡率明显降低,RAB1A-2干扰组SGC-7901细胞的明显升高(均P0.05);RAB1A-2模拟物组SGC-7901细胞的侵袭细胞数明显增加,RAB1A-2干扰组SGC-7901细胞的侵袭细胞数明显减少(均P0.05)。结论:RAB1A-2在胃癌组织和细胞中表达上调,RAB1A-2可促进胃癌细胞增殖和侵袭,并抑制细胞凋亡,RAB1A-2高表达患者预后较差。     

硫酸化修饰酶PAPSS2的表达对胃癌侵袭和迁移的影响

目的探究3’-磷酸腺苷-5’-磷酸硫酸盐合酶2（PAPSS2）在胃癌组织和细胞中的表达情况及其对胃癌细胞侵袭和迁移的影响。 方法利用GEPIA数据库分析PAPSS2在胃癌组织中的表达情况。收集陕西省人民医院2016年10月至2018年6月40例胃癌手术患者的癌组织及癌旁正常组织标本,进一步通过免疫组织化学染色进行验证。分析PAPSS2表达与胃癌患者临床病理资料和预后的关系。利用qPCR和免疫印迹法分别检测PAPSS2在胃癌细胞（HGC-27、SNU-1、AGS、SGC-7901）和正常胃黏膜细胞系（GES-1）的mRNA和蛋白水平表达差异。利用shRNA敲低胃癌细胞PAPSS2的表达,MTT检测其对细胞活性的影响,Transwell检测其对侵袭和迁移能力的影响。 结果（1）利用GEPIA数据库分析发现,PAPSS2在胃癌组织中高表达（P<0.05）,且高表达PAPSS2的胃癌患者总体生存率（HR=1.5,P=0.017）和无病生存率（HR=1.6,P=0.014）显著降低。（2）PAPSS2在40例胃癌组织的免疫组织化学染色评分显著高于对应的癌旁组织（7.100±3.169 vs 3.425±2.263,P<0.001）。高表达PAPSS2的胃癌患者肿瘤浸润深度（P=0.015）和淋巴转移率更高（P=0.005）。（3）qPCR显示PAPSS2在胃癌细胞（AGS、HGC-27、SNU-1、SGC-7901）的mRNA表达水平明显高于GES-1细胞（F=15.45,P<0.001）,免疫印迹法也得出了类似的结果。（4）MTT实验发现敲低PAPSS2对AGS和SGC-7901细胞的活性没有明显影响。（5）敲低PAPSS2后AGS细胞（386.9±73.75 vs 602.7±79.23,t=4.457,P=0.002）和SGC-7901细胞（237.8±77.60 vs 461.8±86.55,t=4.309,P=0.003）的迁移能力显著降低,AGS细胞（106.0±38.07 vs 201.3±48.79,t=3.446,P=0.009）和SGC-7901细胞（55.0±18.27 vs 93.6±21.07,t=3.093,P=0.015）的侵袭能力也明显降低。 结论PAPSS2在胃癌组织和细胞中呈高表达,其高表达促进了胃癌细胞的侵袭和转移,这可能是胃癌预后较差的重要原因之一。     

miR-150-5p抑制肝癌细胞的迁移和侵袭及其机制

目的:探讨mi R-150-5p在肝细胞癌(HCC)细胞迁移与侵袭中的作用及其调控机制。方法:用荧光定量PCR测定mi R-150-5p在正常肝细胞系L02及HCC细胞系Hep G2中的表达;将Hep G2细胞分成两组,分别转染mi R-150-5p(mi R-150-5p组)与随机序列(对照组),转染后,分别用细胞划痕实验、Transwell小室基质渗透实验检测细胞的迁移和侵袭能力,用Western blot检测细胞基质金属蛋白酶2(MMP2)和基质金属蛋白酶9(MMP9)的蛋白表达。结果:mi R-150-5p的表达量在Hep G2细胞系中明显降低,为L02细胞系的0.26倍(P0.01)。转染后,mi R-150-5p组的mi R-150-5p水平明显升高,为对照组的9.53倍(P0.001);mi R-150-5p组的细胞划痕愈合率明显低于对照组(54.63%vs.87.51%,P0.01),细胞侵袭数明显少于对照组(138个vs.452个,P0.01);MMP2与MMP9蛋白表达量均明显低于对照组(0.78 vs.1.75;0.82 vs.1.85,均P0.05)。结论:mi R-150-5p在HCC细胞中表达降低,升高mi R-150-5p的表达可抑制HCC细胞的迁移和侵袭,机制可能与其下调MMP2和MMP9表达有关。     

miR-214对胃癌细胞SGC7901侵袭和转移能力的影响

目的:探讨miR-214对胃癌细胞侵袭和转移能力的影响及其可能作用机制。方法:应用miRanda,TarBase v.5c靶基因预测网站分析miR-214与PTEN mRNA的可能结合位点,分别将miR-214模拟物(mimics),拮抗物(inhibitors)和无关序列转染到SGC7901细胞株,以空白转染组为阴性对照,用Western blot的方法比较各组细胞PTEN蛋白的表达,用Transwell侵袭小室检测各组细胞侵袭能力的变化。结果:Western blot结果显示,miR-214 mimics转染组的SGC7901细胞中PTEN蛋白表达较其余各组显著降低(均P<0.05),Transwell侵袭小室检测结果表明,miR-214 mimics转染组的细胞侵袭细胞数明显多于其余各组(均P<0.05)。结论:miR-214能促进胃癌细胞侵袭和转移,其机制可能与抑制PTEN的表达有关。摘要     

微小RNA-138-5p在前列腺癌细胞中的表达及对其侵袭能力的影响

目的:探讨微小RNA(miR)-138-5p在前列腺癌(PCa)中的表达及对前列腺癌侵袭、迁移、凋亡等能力的影响。方法:miR-138-5p模拟物转染正常前列腺上皮细胞(RWPE)-1、DU145细胞,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)用于检测转染前后细胞miR-138-5p的表达。细胞计数试剂盒(CCK-8...     

长链非编码RNA X染色体失活特异转录物调控微小RNA-335对胃癌的增殖和迁移的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)X染色体失活特异转录物(XIST)对胃癌细胞增殖、迁移的影响及其作用机制。方法收集2018年1月至2019年12月来自宜昌市中心人民医院的胃癌患者42例,采用定量聚合酶链反应(qPCR)检测XIST在胃癌患者肿瘤组织和癌旁正常组织中表达,分析XIST表达与患者临床病理参数的相关性。采用qPCR检测XIST在胃癌细胞系中的表达,通过转染小干扰RNA(si-XIST)敲低XIST在胃癌细胞SGC-7901和AGS中的表达,分别将胃癌细胞分为si-XIST组和si-NC组,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测各组细胞的增殖活性,细胞划痕实验和Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力,双荧光素酶验证XIST与微小RNA(miR)-335的靶向关系。组间比较采用t检验。结果XIST在胃癌组织中相对表达量为1.86±0.24,显著高于癌旁正常组织的0.98±0.11,差异有统计学意义(P<0.05),同样,胃癌细胞系中XIST的相对表达显著上调(P<0.05),差异有统计学意义。组织样本中XIST的表达与患者的TNM分期和淋巴结转移明显相关(P<0.05),差异有统计学意义,敲低XIST表达可显著降低胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,XIST可负向调控miR-335的表达。结论lncRNA XIST可负向调控miR-335的表达,从而抑制胃癌的增殖、迁移和侵袭能力。