食管癌组织中人乳头瘤病毒的检测

用人乳头瘤病毒保守基因的通信引物和１６、１８型特异性引物，通过聚合酶链反应，检测２０例正常新鲜活检食管粘膜，４０例新鲜食管癌组织昨５１例石蜡包埋的食管癌组织标本的ＨＰＶＤＮＡ，在２０例正常人食管粘膜组织中ＨＰＶＤＮＡ检出率９．１％，癌组织中为３６．２％，磷癌和腺癌分别为３４．７％、４７．１％，鳞癌以１６型感染为主，腺癌以１８型为主，但肿瘤分化程度与ＨＰＶ感染无关，结果提示：ＨＰＶ感染与食砭 癌的发     

多重PCR技术检测女性尖锐湿疣的HPV基因

对３９例女性生殖道尖锐湿疣及假性湿疣进行ＨＰＶ基因的多重ＰＣＲ技术检测及组织切片的病理学观察。结果表明，病理诊断尖锐湿疣１８例，均检出ＨＰＶ１１／６，其中有１例合并ＨＰＶ１６的感染。不典型尖锐湿疣（不具备典型挖空细胞）１４例，均检出ＨＰＶ１１／６。假性湿疣１７例，２例检出ＨＰＶ１１／６。ＨＰＶ１８均未检出。因此，临床中对于不典型尖锐湿疣及假性湿疣需用ＰＣＲ技术来确诊。     

喉组织中HPV11,16 E6基因DNA及HPV16 E6 mRNA的定量检测

①目的探讨人乳头瘤病毒11,16型(HPV11,16)转化基因E6 DNA及HPV16 E6 mRNA与喉疾病严重程度的关系.②方法分别用竞争性聚合酶链反应(CPCR)和半定量RT-PCR技术检测喉乳头状瘤、喉鳞癌组织中HPV11,16 E6 DNA和HPV16 E6 mRNA的含量.③结果喉鳞癌组织中HPV11,16 E6 DNA和HPV16 E6 mRNA的含量均高于喉乳头状瘤组织,差异有显著性(t=3.745,2.776,2.759, P<0.01,0.05);高、中、低分化喉鳞癌组织中HPV11,16 E6 DNA含量无显著性差异(F=0.335, 0.234, P>0.05),但低分化喉鳞癌组织中HPV16 E6 mRNA的表达水平显著高于高分化喉鳞癌(F=4.219,q=4.107, P<0.05).④结论 HPV11,16 E6 DNA和HPV16 E6 mRNA的含量有随病理程度加重而增高的趋势,从分子水平探讨转化基因E6的致癌性, 有助于阐明HPV与喉癌发生发展的关系.     

用PCR技术检测皮肤表皮肿瘤组织HPV DNA

应用多对引物ＰＣＲ方法检测５８例皮肤人表皮肿瘤（Ｂｏｗｅｎ‘ｓ病１７例，Ｑｕｅｙｒａｔ增殖性红斑５例，鲍温样丘疹病１６例，皮肤鳞状细胞癌２０例）石蜡包埋组织中ＨＰＶ６，１１，１６及１８ＤＮＡ。Ｂｏｗｎｅ’ｓ病ＨＰＶ１ＤＮＡ２例（２／１７）阳性Ｑｕｅｙｒａｔ增殖性红斑ＨＰＶ１６ＤＮＡ１例（１／５）阳性，鲍温样丘疹病ＨＰＶ１６ＤＮＡ９例（９／１６）阳性，皮阳鳞状细胞癌ＨＰＶＤＮＡ２０例均阴性，提示鲍温     

食管癌组织中人乳头瘤病毒的检测

用人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）保守基因的通用引物和１６、１８型特异性引物，通过聚合酶链反应（ＰＣＲ），检测２０例正常新鲜活检食管粘膜，４０例新鲜食管癌组织和５１例石蜡包埋的食管癌组织标本的ＨＰＶＤＮＡ，在２０例正常人食管粘膜组织中ＨＰＶＤＮＡ检出率９．１％，癌组织中为３６．２％，鳞癌和腺癌分别为３４．７％、４７．１％，鳞癌以１６型感染为主，腺癌以１８型为主。但肿瘤分化程度与ＨＰＶ感染无关。结果提示：ＨＰＶ感染与食管癌的发生有一定关系，不同型别的ＨＰＶ与不同组织的亲和性有差别。     

漯河地区食管癌患者癌组织中人乳头状瘤病毒感染的检测

目的检测漯河地区食管癌患者中人乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染情况,探讨HPV感染与我国河南省漯河地区食管癌发生的相关性。方法应用HPV L1通用引物GP5+/6+、HPV16E6和HPV18E6型特异性引物多聚酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测漯河地区食管癌组织中HPV存在状况。结果 115例食管癌组织中,86例检测到HPV阳性,阳性率为74.8%;其中56例检测到HPV16E6基因,阳性率为48.7%;20例检测到HPV18E6基因,阳性率为17.4%;12例HPV16E6和HPV18E6基因均阳性为混合感染。结论我国河南省漯河地区食管癌与HPV DNA感染存在相关性,并且HPV感染可能是食管癌发生的重要因素之一。     

新疆不同民族喉乳头状瘤与喉癌组织中不同类型HPV的检测

目的：探讨新疆部分民汉族喉乳头状瘤（LP）和喉癌（LC）与人乳头状瘤病毒（HPV）感染的关系。方法：应用聚合酶链反应的（PCR）技术，对83例喉癌患者（维吾尔族27例，哈萨克族4例，汉族52例），63例喉乳头状瘤患者（维吾尔族33例，汉族30例），20例声带炎性息肉（LIP）患者（维、汉各10名），总共166例分别进行HPV6／11的9．6％（8／83）和LIP的0．0％（0／20）（P＜0．05）；（2）LC组织中HPV16／18感染的阳性率为37．3％（31／83）明显高于LP的6．3％（4／63）和LIP的0．0％（0／20（P＜0．05）；（3）民汉之间的差异无统计学意义（P＞0．05）。结论：（1）民汉LP的发生主要与HPV6／11感染有关；LC主要与HPV16／18感染关系密切，HPV感染可引起细胞基因的异常调控，可能是喉上皮组织发展成为肿瘤病变的促进因子。     

PCR和原位杂交技术检测新疆哈萨克族食管癌中HPV感染情况

目的:检测人乳头状瘤病毒(HPV)在新疆哈萨克族食管癌及癌旁组织中的感染情况.方法:分别采用PCR法和原位杂交法检测60例食管鳞癌组织及相应癌旁正常鳞状上皮组织中HPV感染情况.结果:PCR和原位杂交检测食管癌组织中的HPV阳性率为51.7%和45% ;正常食管癌癌旁组织中 HPV阳性率为25%和15%.统计学结果显示食管癌组与癌旁正常鳞状上皮组中HPV感染,差异有统计学意义P<0.05.结论:新疆哈萨克族食管癌组织中存在HPV感染,HPV感染可能是其发病的危险因素之一.     

喉癌组织乳头状瘤病毒的检测

应用聚合酶链反应对成人型喉癌，喉癌旁组织及颈部淋巴结组织进行乳头状瘤病毒（ＨＰＶ）检测，发现２０例喉癌组织中有１６例呈ＨＰＶ－６，１１例阳性，１例ＨＰＶ－１６，１８例阳性，２例癌旁１ｃｍ内组织有１例ＨＰＶ－６，１１阳性，２例癌旁２ｃｍ外组织均呈ＨＰＶ－６，１１，１６，１８阴性，３例淋巴结病是检查有癌转移，均主ＨＰＶ－６，１１型阳性。     

宫颈癌高危人群HPV16及18感染检测方法的建立

①目的　建立宫颈癌高危人群人乳头状瘤病毒 (HPV) 1 6及 1 8感染的检测方法。②方法　对HPV1 6及 1 8E6 /E7基因序列进行序列比较分析 ,根据二者的共享序列设计通用引物 ,进行外侧扩增 ;在通用引物扩增序列之间分别设计HPV1 6和 1 8的特异性引物 ,分别进行半套式PCR扩增 ,以检测并鉴定女性宫颈分泌物中HPV1 6及 1 8的感染。对该方法的敏感度和特异度进行了测定 ,并用该法对 31例宫颈癌病人和 1 1 3例对照组妇女宫颈分泌物进行了检测。③结果　PCR扩增后HPV1 6、HPV1 8分别有 341、4 30bp和 1 0 9、4 73bp的带产生。该反应体系最低可检测浓度为 3μg/L。用该方法对人类基因组DNA、人类巨细胞病毒 (HCMV)和大肠埃希菌DNA以及其他型别的HPV进行检测 ,均未见假阳性结果产生。宫颈癌病人HPV1 6的感染率为 6 7.7% ,HPV1 8的感染率为 1 9.4 % ,明显高于对照组 (χ2 =31 .5 2、6 .2 6 ,P <0 .0 1、0 .0 5 )。④结论　HPV1 6、HPV1 8感染与宫颈癌的发生密切相关。本研究建立的方法具有特异度和敏感度高、简便、快速等特点 ,可推广应用于临床检测。     

100例食管癌中的人乳头瘤病毒感染检测

目的 检测食管鳞癌中的人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）感染，探索ＨＰＶ与食管癌大体生长方式的关系。方法 应用通用引物ＰＣＲ法和多重ＰＣＲ法检测１００例食管癌组织标本中的ＨＰＶ感染。结果 共检测出ＨＰＶ阳性２６例（２６／１００），按照食管癌的病理大体分型，其中溃疡型食管癌中的ＨＰＶ阳性５例（５／２５）、蕈伞型中阳性３例（３／２５）、缩窄型中阳性１２例（１２／２５）、髓质型中阳性６例（６／２５）。对２６例ＨＰＶ     

宫颈上皮内瘤变和宫颈癌中HPV 16,18的关系

目的 探讨宫颈上皮内瘤变（CIN）和宫颈癌的临床病理与人乳头状瘸病毒（HPV）之间的关系。方法 收集妇科门诊活检和手术切除标本139例（其中CIN 108例、宫颈癌31例），同时进行HPV16，18检测。结果 31例宫颈癌中HPV16，18型阳性表达率为58．1％（18／31），108例CIN HPV16，18型阳性率为47．2％，两者阳性率差异无显著性（P〉0．05）；CIN 1级阳性表达率最低33．4％，呈现级别越高，其HPV阳性率越高。结论 提示HPV 16，18有促进肿瘤生长的作用。     

100例食管癌中的人乳头瘤病毒感染检测

目的　检测食管鳞癌中的人乳头瘤病毒 (HPV)感染 ,探索HPV与食管癌大体生长方式的关系。方法　应用通用引物PCR法和多重PCR法检测 10 0例食管癌组织标本中的HPV感染。结果　共检测出HPV阳性 2 6例 (2 6 / 10 0 ) ,按照食管癌的病理大体分型 ,其中溃疡型食管癌中HPV阳性 5例 (5 / 2 5 )、蕈伞型中阳性 3例 (3/ 2 5 )、缩窄型中阳性 12例 (12 / 2 5 )、髓质型中阳性 6例 (6 / 2 5 )。对 2 6例HPV阳性标本中的 2 0例进行了多重PCR检测 ,发现HPV6 / 11型 6例、HPV16型 11例、HPV18型 3例。结论　我国食管癌中存在HPV感染 ,存在HPV感染的食管癌可能并不是在HPV引起的湿疣样病变基础上发展而来。     

HPV的快速检测与分型

以通用引物PCR初筛158例标本，凡HPV感染阳性标本再用型持异引物PCR作分型检测，结果：疣、乳头瘤等良性病变的HPV检出率为61．1％（55／90），主要检出HPV6和／或HPV11，占阳性例数的89．1％（49／55）；食管癌组织有较高的HPV感染率（66．2％，45／68），以检出HPV6，11，16为主，并明显高于HPV8（X2检验，P＜0．01），提示HPV感染可能与本地区食管癌发生密切用关。本研究建立的HPV快速检测和分型方法，用于临床检测和回顾性研究均可获得满意结果。     

胃癌组织中HPV感染的意义

目的 研究西安地区人乳头瘤病毒（HPV）的感染与胃癌的关系。方法 运用PCR方法,同时设计HPV共同引物和HPV16型和HPV18型巢式引物,对胃癌组织（n=40)、癌旁组织和非肿瘤组织（n=10)进行HPV DNA的检测。结果 胃癌40例组织中HPV检出15例,总检出率为37．5％;癌旁组织和非肿瘤组织未检出。HPV的检出以HPV16型为主,占检出阳性的80．0％,且与癌组织的分化程度密切相关。结论 HPV的感染、主要为高危型HPV16型的感染与本地区胃癌的病因学可能关系密切。     

宫颈癌组织中HPV16 E7序列多态性分析

目的探讨广东地区宫颈癌组织中HPV16肿瘤相关性抗原E7基因序列的多态性.方法采用通用引物PCR直接测序法对宫颈癌标本中的HPV分型,从含有HPV16型的标本中采用自行设计的多重引物通过巢式PCR扩增出HPV16E7,经DNA序列测定法检测其基因变异,进而寻找其热点突变.结果50例宫颈癌组织HPV-DNA的检出率为78%,其中HPV16和HPV18型混合感染18例,单纯HPV16型感染15例.33例含有HPV16型的标本中扩增出25例HPV16E7,其中17例647位核苷酸“T”变异“C”,导致相应的蛋白质由天冬氨酸变异为丝氨酸.结论广东地区宫颈癌组织中HPV16E7DNA序列发生碱基替换的区域主要在647位至846位,热点突变点为Nt647和Nt846.     

人乳头瘤病毒16,18型核酸检测质控物的研制及应用

目的研制得到能模拟真实临床标本的人乳头瘤病毒（HPV）高危型16,18核酸检测质控物,并探讨其用于临床实验室室间质量评价的有效性。方法采用分子克隆方法得到含HPV．16靶基因的重组质粒载体,转染已含HPV-18的宫颈癌上皮细胞系（HeLa）,获得含HPV-16,18核酸的上皮细胞原液,经适当灭活后甲醇固定。将该细胞原液适当稀释后,组成含阴阳性共12份标本的样本盘,发至全国各开展临床HPV一16,18检测的实验室,对回报结果进行分析。结果细胞原液经1：10,1：50,1：100,1：500稀释,实时荧光PCR检测,HPV-16Ct值分别为29．10,31．19,32．15和32．73,HPV-18Ct值分别为30．32,32．13,32．22和35．55。质控物在4℃可稳定40d以上,盲邮至新疆乌鲁木齐、内蒙古呼和浩特和厦门的样本,返回后检测无明显变化。44个临床实验室对高浓度样本的检测符合率平均为95．1％,对低浓度样本的检测符合率为57．4％。对阴性样本符合率为98．3％。结论获得可模拟临床标本的HPV-16,18核酸检测质控物,质评结果表明可有效地用于临床实验室室间质评。