人截短型凋亡诱导因子AIF△1-480的表达对HeLa细胞的促凋亡作用

目的: 观察人截短型AIF(AIF△1-480)基因的表达对HeLa细胞的促凋亡作用. 方法: 在人截短型AIF(AIF△1-120)基因克隆成功的基础上,进一步改造,构建截去AIF基因线粒体定位信号、FAD结合结构域和NADH结合结构域(1-480位氨基酸)编码序列的人截短型AIF(AIF△1-480)基因.将其克隆入pIRES2-EGFP绿色荧光蛋白(EGFP)共表达载体,用脂质体法转染HeLa细胞,通过荧光显微镜观察、电镜观察等方法,检测目的基因在转染细胞中的表达以及对转染细胞形态的影响.结果: 成功构建了人截短型AIF(AIF△1-480)基因的真核表达载体.转染细胞后,可检测到人截短型AIF(AIF△1-480)分子的表达.转染后48 h,可观察到表达人截短型AIF(AIF△1-480)分子的细胞呈现典型的凋亡特征.结论: 人截短型AIF(AIF△1-480)基因的表达可诱导HeLa细胞凋亡.     

截短型人Bid融合蛋白对HeLa细胞的促凋亡作用

目的：观察截短型人bid及其N端融合蛋白的表达对HeLa细胞的促凋亡作用．方法：通过反转录PCR方法获取人全长bid基因，再经PCR方法克隆得到截短型bid(truncated bid，tbid)基因及其N端融合蛋白基因插入pcDNA3真核表达载体，脂质体法转染HeLa细胞，通过间接免疫荧光，电子显微镜以及流式细胞仪等方法观察被转染细胞的生长及凋亡状况．结果：成功获得人bid基因，构建了tbid基因及tbid与绿脓杆菌外毒素(PE)转膜结构域部分肽段的融合蛋白基因的真核表达载体(pcDNA3-tbid61，pcDNA3-PE-tbid61)．与对照组相比，在转染后12～48h内两种基因的表达均导致．HeLa细胞发生凋亡，且两活性相当，结论：截短型Bid及其融合蛋白可促进转染的HeLa细胞发生凋亡．     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导HeLa细胞凋亡的差异蛋白质组分析

目的 比较分析肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)诱导人宫颈癌细胞系HeLa细胞凋亡前后蛋白质组中的差异表达蛋白,以进一步了解TRAIL的作用机制.方法 以TRAIL诱导人宫颈癌细胞系HeLa细胞凋亡为模型,用双向电泳技术分离HeLa全细胞蛋白质,MALDI-TOF质谱鉴定,MS-FIit数据库分析,RT-PCR半定量方法检测JNK2的表达.结果 鉴定得到12个明显的差异蛋白点,其中8个蛋白点上调,4个蛋白点下调.JNK2的表达与TRAIL有良好的量效关系.结论 JNKK、MAPKAPK-2、Dip13 beta、SHPS-1、DDBb、JEM-1、Macoilin、Leucine-rich repeat-containing protein 14、Ena/VASP-like protein、PTPase-MEG2,GRB10 adaptor protein、THUMP domain-containing pro-tein 1为TRAIL诱导HeLa细胞凋亡的新的相关蛋白.     

紫杉醇诱导HeLa细胞凋亡的研究

目的：探讨紫杉醇抑制ＨｅＬａ细胞生长的机制。方法；经荧光染色，电镜观察细胞形态，ＤＮＡ Ｌａｄｄｅｒ及流式细胞仪检测凋亡细胞。结果：紫杉醇作用２４ｈ经荧光染色细胞呈不均一亮蓝色，作用４８ｈ细胞被染色红色，电镜观察可见细胞变小，染色质浓缩并产生凋亡小体，ＤＮＡ Ｌａｄｄｅｒ未见明显的梯形条带，流式细胞仪检测紫杉醇作用２４ｈ细胞凋亡。结论；紫杉醇可诱导细胞凋亡，也可直接杀伤ＨｅＬａ细胞，而且以后者为主     

三氧化二砷诱导子宫颈癌HeLa细胞凋亡的初步研究

目的:研究三氧化二砷(As2O3)诱导子宫颈癌细胞系HeLa细胞凋亡,探讨As2O3 对子宫颈癌的临床应用意义。方法:采用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测浓度分别为1.0、2.0、5.0、10.0μmol/L的As2O3 作用1、2、3、4 d后HeLa细胞的存活率,并进行形态学观察;采用细胞凋亡原位检测(TUNEL)法进行细胞凋亡的检测。结果:2.0μmol/L As2O3 处理HeLa细胞48 h后,可见细胞的存活率明显降低(P<0.05),处理96 h后,细胞的存活率进一步降低(P<0.01),经5.0μmol/L As2O3 处理的HeLa细胞24 h后就明显可见细胞的存活率降低;As2O3 作用后,HeLa细胞具有明显的凋亡特征性改变;TUNEL法检测可发现HeLa细胞有DNA的断裂。结论:As2O3 可以诱导子宫颈癌HeLa细胞凋亡,抑制细胞增殖,随着As2O3 浓度增加,作用时间延长,效果越明显,其作用具有浓度和时间依赖性。     

紫花牡荆素通过线粒体凋亡途径诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡

目的:研究紫花牡荆素诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡作用,并探讨其诱导凋亡机制.方法:体外培养人宫颈癌HeLa细胞.细胞凋亡ELISA试剂盒检测HeLa细胞组蛋白/DNA碎片;碘化丙啶染色流式细胞术定量分析Sub-G1细胞百分率;DNA琼脂糖凝胶电泳观察DNA梯形条带.caspase比色试剂盒检测caspase-3/-9活性;Rh123探针染色FCM检测线粒体膜电位;Western blot检测细胞色素c、Bax、Bcl-2、Bcl-xL和XIAP蛋白的表达.结果:不同浓度的CAS处理48h后,HeLa细胞组蛋白/DNA碎片增加、Sub-G1细胞百分率显著增高、DNA琼脂糖凝胶电泳法观察到典型的DNA梯形条带;CAS处理组caspase-3/-9活性明显升高、线粒体膜电位降低、细胞色素c、Bax显著升高,而Bcl-xL和XIAP蛋白表达水平降低.结论:CAS通过线粒体凋亡途径诱导HeLa细胞凋亡.     

中草药诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡及其分子机制

本文综述中草药或其有效成分诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的研究进展，指出中草药诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的机制主要是细胞周期阻滞作用，提高细胞内游离钙离子水平，调控凋亡相关基因表达并激活相关信号转导通路，下调端粒酶活性和降低线粒体膜电位等。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体和顺铂对Hela细胞的诱导凋亡作用

目的 观察不同浓度的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)和顺铂对Hela细胞的诱导凋亡作用.方法 采用不同浓度的TRAIL作用于Hela细胞24 h,TRAIL 100 ng/mL、顺铂10 μmol/L及两者联合作用于细胞24 h,应用ELISA方法检测细胞凋亡率.结果 不同浓度的TRAIL作用于细胞后,细胞凋...     

银杏叶提取物对LPS诱导HeLa细胞凋亡的影响

目的研究银杏叶提取物(Ginkgo biloba leaf extract,GbE)对细菌脂多糖(LPS)诱导的人宫颈癌细胞HeLa细胞凋亡的影响。结论将HeLa细胞分成LPS组、GbE+LPS干预组和对照组,各组细胞加入相应药物干预8～72h。采用MTT法检测GbE对细胞的毒性作用;计算各组细胞不同时间段细胞数,测定各组细胞的增殖情况;通过细胞形态学检测(AO/EB染色)测定细胞凋亡发生情况。结果在72h内不同浓度GbE对HeLa细胞无明显细胞毒性作用,细胞存活率在90%～100%之间,差异无统计学意义(P>0.05);LPS组经LPS诱导8h后细胞在各时间段增殖均较其他两组活跃,细胞数明显高于其他两组(tGbE+LPS=6.423,P<0.001;t对照组=3.976,P<0.005);GbE+LPS组培养48h后细胞凋亡数明显高于LPS组和对照组。结论 GbE具有抑制LPS诱导的HeLa细胞增殖及促进细胞凋亡的作用。     

多囊蛋白1基因对人宫颈癌HeLa细胞的抗凋亡作用

目的：研究多囊蛋白1（PC1）对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响,为进一步阐明PC1对凋亡的作用提供依据。方法：采用PC1基因重组质粒pEGPF-PC1-5TMC和空白对照质粒pEGFP分别转染HeLa细胞,Western blotting法进行验证。采用MTT法分别检测转染组（转染PC1重组质粒）、空白对照组（转染空白对照质粒pEGFP）和正常对照组（正常HeLa细胞）转染后48和72 h时细胞增殖活性,采用TUNEL法检测转染组和空白对照组细胞凋亡率。结果：转染后48和72 h,与正常对照组比较,转染组细胞增殖活性差异无统计学意义（P>0.05）;与空白对照组比较,转染组细胞增殖活性明显升高（P<0.05）。转染组细胞凋亡率明显低于空白对照组（P<0.01）。结论：PC1基因对人宫颈癌HeLa细胞有抗凋亡作用。     

樟脑磺哑嗪对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的诱导作用及其机制

目的：探讨樟脑磺哑嗪对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的诱导作用及其机制。方法：人宫颈癌HeLa细胞分为对照组和不浓度樟脑哑嗪组,分别以浓度为0、0.5、1.0、5.0和10.0 μmol·L^-1樟脑磺哑嗪处理,24 h后MTT法检测各组HeLa细胞存活率和增殖抑制率。人宫颈癌HeLa细胞分为0、0.5、1.0和5.0 μmol·L^-1樟脑磺哑嗪组,12 h后倒置显微镜下观察各组HeLa细胞形态表现,Hoechst 33258染色检测各组HeLa细胞凋亡形态表现,Western blotting法检测HeLa细胞中凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2相对表达水平。结果：MTT法检测,与对照组（0 μmol·L^-1）比较,0.5,1.0,5.0和10.0 μmol·L^-1樟脑磺哑嗪组HeLa细胞存活率降低（P<0.05或P<0.01）,增殖抑制率升高（P<0.05或P<0.01）;樟脑磺哑嗪对HeLa细胞的半数抑制浓度（IC₅₀）为2.6 μmol·L^-1。对照组（0 μmol·L^-1樟脑磺哑嗪组）细胞生长状态良好,0.5、1.0和5.0 μmol·L^-1樟脑磺哑嗪组HeLa细胞的体积明显缩小,细胞间连接消失;Hoechst 33258染色,樟脑磺哑嗪处理的细胞出现明显的染色增加。Western blotting法检测,与对照组（0 μmol·L^-1樟脑磺哑嗪组）比较,0.5、1.0和5.0 μmol·L^-1樟脑磺哑嗪组HeLa细胞中Bcl-2蛋白相对表达水平明显降低（P<0.05或P<0.01）,Bax蛋白相对表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）。结论：樟脑磺哑嗪可有效抑制体外培养的宫颈癌HeLa细胞的增殖,诱导HeLa细胞凋亡。     

四溴苯三唑对宫颈癌HeLa细胞凋亡的诱导作用及其机制

目的：探讨四溴苯三唑（TBB）对人宫颈癌HeLa细胞的促凋亡作用,阐明其对相关信号转导通路的作用机制。方法：选取处于对数生长期的人宫颈癌HeLa细胞,将其分为对照组（未给予TBB）和实验组（给予TBB）。采用MTT比色法检测HeLa细胞存活率,采用倒置显微镜观察人宫颈癌HeLa细胞形态表现,采用Annexin Ⅴ-FITC/PI双染法及流式细胞术检测HeLa细胞凋亡率,采用Western blotting法检测细胞中凋亡相关蛋白p-Akt、Akt、Bcl-2、Bax、cleaved-caspase-3和Pro-caspase-3表达水平。结果：MTT法检测,与对照组比较,实验组HeLa细胞存活率明显降低（P<0.01）,且呈浓度依赖性;倒置显微镜下观察,实验组HeLa细胞出现体积缩小、细胞核皱缩等细胞凋亡的形态变化;Annexin Ⅴ-FITC/PI双染法和流式细胞术检测,与对照组比较,实验组各时间段（3、6、12和24 h）细胞凋亡率明显升高（P<0.05或P<0.01）;Western blotting检测,与对照组比较,实验组HeLa细胞中抗凋亡蛋白p-Akt和Bcl-2表达水平逐渐降低,促凋亡蛋白Bax和cleaved-caspase-3表达水平逐渐升高,Pro-caspase-3表达水平逐渐降低（P<0.05或P<0.01）。结论：TBB可能通过抑制Akt信号通路的活性进而有效促进HeLa细胞凋亡。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对非小细胞肺癌细胞凋亡的诱导作用及其机制

目的：探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）诱导人非小细胞肺癌H596细胞发生凋亡,初步阐明非小细胞肺癌细胞经TRAIL诱导凋亡的作用和机制。方法：培养H596细胞,设对照组和不同浓度(0.01、0.03、0.10、0.30、1.00、3.00、10.00、30.00和100.00 μg•L^-1） TRAIL组,TRAIL作用H596细胞24 h后,酸性磷酸酶法检测细胞凋亡的百分率;Western blotting法检测TRAIL相关蛋白caspase-8、Bcl-2及Fas 相关死亡结构域（FADD）的表达情况。结果：TRAIL浓度为0.01～0.03 μg•L^-1时,对H596细胞的生长无明显抑制作用,细胞出现增殖趋势;从0.10 μg•L-1开始,随着TRAIL浓度升高,细胞开始出现凋亡,至10.00 μg•L^-1时细胞凋亡水平显著增加,与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）。Western blotting检测,caspase-8、Bcl-2和FADD蛋白表达正常。结论：高浓度的TRAIL可以诱导H596细胞发生凋亡,可能与TRAIL相关蛋白表达正常有关联。     

芍药苷诱导子宫颈癌HeLa细胞凋亡的相关性分析

目的 探讨芍药苷对人子宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响.方法 不同浓度芍药苷作用于人宫颈癌HeLa细胞后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同时间HeLa细胞的生长抑制效应,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)双染色流式细胞术检测HeLa细胞凋亡率及细胞周期变化,透射电镜观察HeLa细胞形态变化,免疫细胞化学法检测芍药苷作用后HeLa细胞Bcl-2、Bax及Caspase-3表达的变化.结果 不同浓度的芍药苷作用不同时间后,对子宫颈癌HeLa细胞的生长抑制率呈明显的浓度-时间依赖关系,在24、48、72 h的IC50值分别为5054、2965、2459 μg/ml(P＜0.05);应用不同浓度芍药苷后HeLa细胞凋亡率逐渐增高,对照组及1000、2000μg/ml组凋亡率分别为0.94%、10.94%、13.95%(P＜0.05),细胞周期S期比例呈增多趋势;芍药苷作用48 h后透射电镜下可见HeLa细胞出现典型凋亡改变;芍药苷作用于HeLa细胞48 h后,与对照组相比Bcl-2表达减少、Bax及Caspase-3表达增多(P＜0.05).结论 芍药苷能够诱导子宫颈癌HeLa细胞凋亡,其作用机制可能与抗凋亡基因Bcl-2表达减弱及促凋亡基因Bax、Caspase-3表达增强有关.     

Rab26诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡并抑制其迁移

目的 研究调控Rab26蛋白表达对宫颈癌HeLa细胞凋亡及迁移的影响.方法 常规培养HeLa细胞,分别将含有Rab26 cDNA全长的真核表达载体(过表达组)、含有Rab26 siRNA序列的真核表达载体(siRNA组)瞬时转染HeLa细胞,同时设立正常细胞组及空载体转染组作为对照.转染48 h后,分别用RT-PCR和Westem blot检测各组细胞中Rab26的mRNA及蛋白表达水平;采用流式细胞仪(FCM)检测各组细胞的凋亡率;同时采用划痕实验检测各组细胞迁移速度.结果 与正常细胞组及空载体转染组相比,过表达组HeLa细胞中Rab26 mRNA及蛋白表达水平显著上调(P＜0.05),而siRNA组细胞中Rab26 mRNA及蛋白表达水平显著下调(P＜0.05),过表达组HeLa细胞凋亡率增高并抑制细胞迁移速度(P＜0.01),siRNA组则促进细胞迁移(P＜0.05).结论 Rab26与HeLa细胞的凋亡及细胞迁移有关,故调控Rab26的表达有望成为治疗宫颈癌的新靶点.     

姜黄素诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及其作用机制的研究

目的:研究姜黄素在体外诱导宫颈癌H eL a细胞凋亡及其作用机制。方法:3H-脱氧胸苷掺入法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR检测HPV E 6的mRNA水平表达;W estern b lot检测细胞凋亡相关基因bcl-2、bax、P 53和P 21ras的蛋白水平表达。结果:姜黄素对H eL a细胞生长有抑制作用,并呈剂量依赖性;流式细胞仪和荧光双染法结果提示姜黄素可诱导H eL a细胞凋亡;RT-PCR提示姜黄素作用H eL a细胞后HPV E 6的mRNA水平表达逐渐降低;W estern b lot结果提示姜黄素能上调B ax、P 53和P 21ras的蛋白水平表达,而B cl-2的表达无明显影响。结论:姜黄素通过抑制HPV E 6的表达,恢复P 53的功能,引起细胞凋亡,起到杀伤肿瘤的作用。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导骨肉瘤细胞凋亡的研究

目的：研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）对骨肉瘤OS-732细胞的诱导凋亡作用，探寻骨肉瘤临床化疗的斯方案。方法：将TRAIL应用于体外培养的骨肉瘤OS-732细胞，采用MTr法检测细胞毒性作用，倒置相差显微镜及荧光染色方法观察肿瘤细胞形态改变，扫描及透射电镜在亚细胞形态上证实凋亡细胞。结果：不同浓度TRAIL作用下，细胞抑制率问差别十分显著（P〈0.01）。超微结构观察显示骨肉瘤细胞凋亡。结论：TRAIL诱导骨肉瘤细胞凋亡，且具有浓度依赖性。