重组人角质细胞生长因子-2流体膜的研究

人角质细胞生长因子-2（keratinocyte growth factor-2，KGF-2）又称为成纤维细胞生长因子-10（fibroblast growth factor—10，FGF-2），是FCF家族成员之一，特异性靶细胞为各种上皮细胞，特异性受体为氨酸激酶受体FGFR-2IIIb（KGFR）和FGFRI。KGF-2生理作用主要承担间质细胞一上皮细胞之间的信号传递，它能促进角质上皮细胞的增殖，刺激伤口周围上皮细胞的再生、分化和迁移，但对成纤维细胞和内皮细胞则无直接作用，     

重组人角质细胞生长因子-2对兔碱烧伤模型角膜上皮损伤的治疗作用

目的: 研究外用旋滴重组人角质细胞生长因子-2（KGF-2）对兔碱烧伤模型角膜上皮损伤的治疗作用,为角膜上皮损伤的早期治疗探索新方法。 方法: 制备兔角膜碱烧伤模型,60只日本大耳白兔随机分为碱烧伤对照组和KGF-2组（25 mg/L）(n=30);各组日本大耳白兔于造模后以50 μL药物滴眼,每日3次。7和14 d裂隙灯观察角膜烧伤面积以及角膜新生血管的形成,MTT法检测角膜上皮细胞活性,免疫组化方法进行病理组织学检查。结果：碱烧伤后7和14 d,KGF-2组角膜烧伤面积小于碱烧伤对照组,差异有显著性（P<0.01）。碱烧伤对照组7 d角膜新生血管发生率为17.50%,KGF-2组为7.32%;碱烧伤对照组14 d角膜新生血管发生率为41.67%,KGF-2组为32.5０%。MTT检测结果显示：碱烧伤后7和14 d,KGF-2组492 nm吸光度与碱烧伤对照组比较差异有显著性（P<0.05或P<0.01）。碱烧伤后7和14 d,病理切片HE染色显示：对照组角膜基质水肿,板层纤维排列松散、紊乱,炎症反应反复出现,角膜上皮层变薄,部分脱落,角膜内皮层内侧有大量成纤维细胞增生;KGF-2组碱烧伤后7 d,角膜上皮细胞生长良好,基质轻度增厚,无明显的炎症反应;碱烧伤后14 d,未出现炎症复发,角膜上皮细胞生长良好,排列整齐,角膜基质仅有轻度增厚。结论：外用旋滴25 mg/LKGF-2可加速角膜上皮损伤的恢复,减轻角膜烧伤的各种炎症反应症状;减轻角膜基质水肿和纤维化,同时KGF-2 亦表现出显著的抑制角膜新生血管形成的作用;KGF-2有可能成为另一个对角膜上皮损伤具有重要调控作用的生长因子。     

角质细胞生长因子2的优化表达及纯化研究

目的优化工程菌的表达,比较肝素亲和层析、离子交换层析两种方法的角质细胞生长因子2（keratinocyte growthfactor,KGF-2）的纯化产量及纯度,以获取高效的提纯工艺。方法工程菌分别进行生长密度和诱导时间的实验,并将细茵裂解液上两种层析柱进行分步洗脱,收集目标蛋白,进行电泳分析。结果获得高表达KGF-2工程菌,表达率为29％;用两种层析方法获得电泳纯KGF-2。结论 离子交换层析在纯化过程中具有一定优势。     

乳糖诱导角质细胞生长因子-2在大肠杆菌中的表达

目的：研究用乳糖替代IPTG作为诱导剂进行角质细胞生长因子-2(KGF-2)基因重组蛋白的表达,探讨工程化生产的可能性。方法：分别比较乳糖诱导浓度、诱导时机、诱导时间及诱导温度对重组表达产物的影响,并以IPTG诱导作为对照,确定较为优化的乳糖诱导条件。结果：对于重组目的产物,乳糖作为诱导剂也可以起到良好效果,以乳糖为诱导剂的A₆₀₀值较IPTG高,诱导产物的表达量与IPTG诱导产物相当。以终浓度为10 g/L乳糖在33℃下诱导6 h,可以达到良好的诱导效果,并且具有较好的可溶性和促细胞生长活性。结论：乳糖可替代IPTG诱导角质细胞生长因子基因表达,并取得良好效果,为工程
化生产提供了良好的实验依据。     

角质细胞生长因子2在创面愈合中的作用

角质细胞生长因子2是成纤维细胞生长因子家族近年新发现成员之一,由间质细胞分泌,其受体分布于上皮细胞,能特异性的促进上皮细胞生长、分化和迁移。研究显示角质细胞生长因子2是一个多功能因子,对表皮、真皮和黏膜组织具有显著的促再生和修复作用。     

角质细胞生长因子-2对右旋葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠结肠炎和肠道黏膜屏障的保护作用

 目的  探究角质细胞生长因子-2 (keratinocyte growth factor 2,KGF-2)对右旋葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate,DSS)诱导的小鼠结肠炎和肠道黏膜屏障的保护作用及其作用机制。方法  36只C57BL/c雄性小鼠随机分为正常对照组、DSS模型组、中剂量KGF-2(5 mg/kg)组和高剂量KGF-2(10 mg/kg)组。除正常对照组外小鼠饮用水中均添加3.5%DSS,KGF-2组同时腹腔注射相应剂量的KGF-2。检测小鼠体重、疾病活动指数(disease activity index,DAI)、结肠长度缩短、结肠组织病理评分评价KGF-2对结肠炎的保护作用,多功能酶标仪检测血清异硫氰酸荧光素葡聚糖(fluorescein isothiocyanate-dextran,FITC-D)肠道渗透率,免疫组化和Western blot检测结肠组织ZO-1和occludin蛋白的表达,ELISA分析结肠组织匀浆的TNF-α、IL-6、IL-10、TGF-1β、IFN-γ、IL-1β浓度,以探讨KGF-2对肠道屏障功能保护作用机制。结果  与DSS模型组相比,高剂量KGF-2组结肠DAI显著下降(P=0.021 1),体重减轻明显改善(P=0.017 6),HE评分显著降低(12.17±1.222 vs.7.000±0.632 5,P=0.001 1),FITC-D渗透率显著降低(168.5±27.01 vs.14.62±1.812,P=0.004 7),结肠较长(4.956±0.2583 vs.6.289±0.2157,P=0.001 1);ZO-1 (0.158 6±0.010 51 vs.0.387 9±0.028 64,P<0.000 1)和occludin (0.300 5±0.026 56 vs. 0.445 0±0.056 62,P=0.043 4)蛋白表达水平显著升高;肠道组织TNF-α表达显著降低(68.93±3.379 vs.40.41±1.576,P<0.000 1),而IL-10 (304.0±21.47 vs. 521.2±49.40,P=0.002 4)和IL-6 (3755±309.8 vs.5 640±418.0,P=0.004 7)的表达显著升高,疗效呈剂量依赖性。 结论  KGF-2能够减轻DSS导致的肠道黏膜损伤,修复肠道黏膜屏障。KGF-2对肠道黏膜屏障的保护作用可能与增加ZO-1和occludin等紧密连接蛋白的表达、抑制TNF-α及促进IL-6和IL-10分泌有关。     

KGF-2对COPD小鼠保护性作用的免疫学研究

 目的  研究角质细胞生长因子2(keratinocyte growth factor-2,KGF-2)对慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)模型小鼠肺部炎症及免疫功能的影响。方法  取15只6～8 周龄(体重20～25 g)的雄性BALB/C小鼠,首先用烟熏加气道滴注脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)的方法构建COPD模型。KGF-2组于第1天和第14天给予KGF-2,共2次。采用肺组织HE染色及肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)蛋白浓度评价小鼠气道炎症及肺泡壁屏障的破坏。ELISA检测小鼠血浆及BALF中IL-6和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor α,TNF-α)的水平。流式细胞术检测小鼠脾脏中CD4+T细胞及CD8+T细胞的比例及细胞程序性死亡蛋白1(programmed cell death protein 1,PD-1)的表达。结果  与COPD组小鼠比较,KGF-2组小鼠肺部炎症细胞浸润减少,肺泡结构相对完整,肺泡灌洗液及血浆中IL-6和TNF-α水平有降低的趋势。与COPD组比较,KGF-2组小鼠脾脏中CD4+T细胞及CD8+T细胞的比例升高(P<0.05),PD-1比例降低(P<0.05)。结论  KGF-2可能具有抑制COPD相关肺组织炎症及增强免疫功能的作用。     

转移生长因子β2对培养的人类视网膜色素上皮细胞DNA合成增殖影响的研究

目的：为研究转移生长因子β2（TGF－β2）对培养的人类视网膜色素上皮细胞DNA合成与增殖的作用。方法：取自愿者贡献的眼球并游离其视网膜色素上皮细胞，用DMEM加10％血清及MEM氨基酸和庆大霉素，进行细胞传代培养。用溶血磷脂酸、转移生长因子β2（TGF－β2）及TGF－β2＋LPA进行视网色素上皮细胞增殖试验，用细胞染色法进行细胞计数，提取视网膜色素上皮细胞DNA，用Spectrophotometer进行DNA定量测定。结果：含有和／或缺乏1％小牛血清的两种LPA（10uM）均明显刺激视网膜色素上细胞增殖，但这种细胞的增殖被2nG/ml的转移生长因子－β2所阻滞。结论：增殖性玻璃体视网膜病变（PVR）是一种以细胞增殖为主的疾病，参与增殖的主要细胞为视网膜色素上皮细胞，转移生长因子－β2能阻滞体外培养的人类视网膜色素上皮细胞DNA合成与增殖，应用TGF－β2治疗由RPE细胞引起的PVR疾病，仍需进一步深入研究。     

2型糖尿病患者结膜上皮细胞中TGF-β_1和NF-κB的表达

[目的]观察2型糖尿病患者结膜上皮细胞中转化生长因子-β1(TGF-β1)和核转录因子-κB(NF-κB)的表达情况.[方法]选择2型糖尿病患者92例和正常人70例,任意选取一眼进行泪膜破裂时间(BUT)、基础泪液分泌试验及角膜荧光染色试验,并应用免疫组织化学方法检测结膜上皮细胞中TGF-β1及NF-κB的表达.[结果]糖尿病组患者BUT值小于10 s和基础泪液分泌值小于5 mm者所占比例较对照组明显升高,角膜荧光染色程度较对照组明显增强.结膜上皮细胞TGF-β1和NF-κB的染色程度均较对照组明显增强;糖尿病组患者结膜上皮细胞TGF-β1与NF-κB的染色程度呈正相关.[结论]2型糖尿病患者BUT值和基础泪液分泌试验值降低,角膜荧光染色程度增强,是干眼症易患人群.     

角质细胞生长因子对上皮细胞损伤的防护作用

角质细胞生长因子（KGF）属于成纤维细胞生长因子家族,由成纤维细胞和其他来源的基质细胞合成分泌,可特异性地促进上皮细胞的增殖分化，在多种组织器官中发挥着重要功能,尤其是在上皮细胞损伤的修复中起重要作用。KGF防护作用的机制可能是通过调节促细胞增殖、抗氧化蛋白等相关基因的表达来实现的。     

结缔组织生长因子在TGF-β2诱导的视网膜色素上皮细胞纤维化中的作用

目的 探讨不同浓度2型转化生长因子-β(TGF-β2)对视网膜色素上皮细胞(RPE)生物学特性及纤维化指标结缔组织生长因子(CTGF)的调控.方法 RPE细胞分别用0,1,5,10,15 ng/ml TGF-β2处理,并用CCK-8检测细胞增殖活性确定合适的TGF-β2浓度范围.根据CCK-8结果确定后续实验分为0,1...     

成纤维细胞生长因子10在肺损伤性修复中的研究进展

成纤维细胞生长因子(FGF)10来源于间充质细胞,介导间充质-上皮之间的信号转导,调控支气管-肺泡上皮细胞的增殖分化,在胚胎支气管-肺的形态发生过程中发挥重要调控作用.伴随组织修复和再生医学的兴起,FGF10在肺损伤中的修复能力开始受到关注,FGF10-FGF受体2b信号通路决定了FGF10靶向调控支气管-肺泡上皮的细...     

表皮生长因子受体和HER2在膀胱移行上皮细胞癌中的过度表达及其意义

目的分析表皮生长因子受体和HER2在膀胱移行上皮细胞癌中的过度表达及意义。方法选择惠州市中心人民医院收治的100例膀胱移行上皮细胞癌患者(研究组)及健康膀胱组织的体检人群100例(参照组)进行观察,观察时间为2016年1月—2018年6月,针对两组观察对象实施免疫组织化学SP法检验,观察对比两组观察对象之间的指标差异。结果研究组100例膀胱移行上皮细胞癌患者检测后的表皮生长因子受体及HER2的过度表达率明显高于对照组健康人群(对照组无表达),两组相比差异有统计学有意义。研究组中表皮生长因子受体的过度表达在不同病理特征之间存在明显差异,HER2的过度表达与临床分期存在关系差异有统计学意义。结论表皮生长因子受体及HER2在膀胱移行上皮细胞癌中的过度表达及病情发展具有一定的相关性,两个指标均呈现过度表达状态表明患者预后较差。     

食管癌上皮细胞及其浸润淋巴细胞白介素2和白介素10的表达

目的观察食管癌上皮细胞及其浸润淋巴细胞(TIL)白介素-2(IL-2)和白介素-10(IL-10)的表达，探讨二者与食管癌发生、发展的关系。方法应用即用型SABC免疫组化法(SP法)观察20例食管癌上皮细胞及其TIL的IL-2、IL-10表达情况。结果全部标本的癌上皮细胞IL-2、IL-10的表达均高于对照癌旁组织，16例标本(80％)的癌上皮细胞IL-10的表达高于IL-2；癌组织中淋巴细胞(TIL)很多，大部分标本的TIL存在表达IL-2(16，80％)、IL-10(18，90％)的不同的TIL，16例标本(80％)的TIL的IL-10表达高于IL-2；对照癌旁组织中淋巴细胞均未见IL-2、IL-10的表达。结论食管癌上皮细胞表达IL-2、IL-10。可能与其发生、发展有关；食管癌组织存在表达IL-2、IL-10的异质性TIL，且呈Th2漂移；对照癌旁组织中淋巴细胞均未见IL-2、IL-10的表达。     

VEGFR-2酪氨酸激酶抑制剂3-取代吲哚-2-酮的合成及抑制活性

目的:合成一系列结构新颖的3-取代吲哚-2-酮类化合物,并测试其对血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)的抑制活性。方法:以2-(羟甲基)-5-氰基-1H-吲哚为起始原料,经水解、氧化、缩合和胺化反应得到目标产物(6-14);以舒尼替尼为阳性对照,用MTT法测试目标产物对VEGFR-2高表达的人乳腺上皮细胞(HMEC)的抑制活性。结果:合成9个未见报道的目标产物,其结构均经1H NMS,ESI-MS确证;样品浓度为10μmol/L时,化合物14对VEGFR-2的抑制率为68.56%,舒尼替尼为62.53%。结论:化合物14对VEGFR-2的抑制活性优于阳性对照舒尼替尼。     

表皮生长因子对培养的兔角膜上皮细胞的影响

目的 :探讨表皮生长因子 (epiderm al growth factor,EGF)对兔角膜上皮细胞的影响 ,观察活体细胞生长状况和细胞内超微结构的变化。方法 :兔角膜上皮体外培养技术及组织学检查方法。结果 :接种后 2 40 h角膜上皮细胞总数实验组 (培养液中加 EGF)为 (8.96± 0 .5 6 )× 10 5 ,对照组为 (7.44± 0 .6 4)× 10 5 ,二者差异显著 ,P <0 .0 1。结论 :EGF对角膜上皮细胞有显著的促进增殖的作用     

1,25（OH）2D3对血管紧张素Ⅱ诱导的肾小管上皮细胞转化的抑制作用

目的探讨1,25(OH)2D3对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的肾小管上皮细胞转化起始过程的抑制作用,为临床肾间质纤维化的防治提供理论依据。方法分离SD大鼠肾小管上皮细胞,将其分为对照组、AngⅡ诱导组(AngⅡ终浓度10-8mol/L)以及AngⅡ(10-8mol/L)+1,25(OH)2D3干预组[1,25(OH)2D3终浓度分别为10-6mol/L、10-7mol/L、10-8mol/L],培养48 h后收集各组细胞。利用酶联免疫吸附实验检测ColⅠ和FN;Real-time RT-PCR检测肾小管上皮细胞TGF-β1mRNA表达;Western Blot检测肾小管上皮细胞TGF-β1蛋白表达。结果实验48 h后,AngⅡ组TGF-β1mRNA表达、蛋白表达及培养上清中ColⅠ和FN浓度均较对照组显著增高,AngⅡ+10-6mol/L1,25(OH)2D3组TGF-β1mRNA表达、蛋白表达较对照组明显增高,但细胞培养上清中ColⅠ和FN浓度仅略有增高,差异无显著性,随着1,25(OH)2D3浓度的降低(10-7mol/L,10-8mol/L),TGF-β1mRNA表达、蛋白表达,细胞培养上清中ColⅠ和FN浓度也随之显著增高(P<0.05)。结论 1,25(OH)2VD3可以部分抑制AngⅡ诱导的肾小管上皮细胞EMT,其机制可能是通过抑制肾小管上皮细胞TGF-β1基因与蛋白表达、减少肾小管上皮细胞ColⅠ和FN分泌实现的。     

角质细胞生长因子及其防护作用的研究

角质细胞生长因子(keratinocyte growth factor, KGF)是在1989年由Rubin等[1]从人胎肺成纤维细胞的培养上清中分离并纯化的,并发现具有促进小鼠角质细胞有丝分裂的作用,故将其定名为角质细胞生长因子.KGF是具有肝素结合特性的成纤维细胞生长因子超家族中的成员,又称为FGF-7[2].     

环氧化酶-2、血管内皮生长因子在大肠癌中的表达及意义

目的:探讨环氧化酶-2、血管内皮生长因子在大肠腺癌中的表达及临床意义,并分析两者在大肠腺癌癌变过程中的作用。方法:运用免疫组织化学SP法检测大肠腺癌53例、大肠腺瘤12例和正常大肠粘膜10例中环氧化酶-2、血管内皮生长因子的表达情况,并分析其与大肠腺癌临床病理特征之间的关系,以及两者之间的关系。结果:(1)在大肠腺癌、大肠腺瘤与正常大肠粘膜中,环氧化酶-2的阳性表达率分别为83.0%(44/53)、83.3%(10/12)和20.0%(2/10);血管内皮生长因子为86.8%(46/53)、66.7%(8/12)和30.0%(3/10)。环氧化酶-2的表达在大肠腺癌与正常大肠粘膜、大肠腺瘤与正常大肠粘膜之间差异有统计学意义(P<0.01,P<0.01)。血管内皮生长因子的表达在大肠腺癌与正常大肠粘膜之间差异有统计学意义(P<0.01)。环氧化酶-2与血管内皮生长因子在大肠腺癌中的表达均呈显著正相关(均为P<0.05)。(2)大肠腺癌53例中环氧化酶-2的表达与肿瘤分化程度、浸润深度关系密切(P<0.05,P<0.05)。大肠腺癌53例中血管内皮生长因子的表达与肿瘤分化程度、浸润深度关系密切(P<0.05,P<0.01)。结论:环氧化酶-2与血管内皮生长因子在大肠癌中的表达呈正相关,提示环氧化酶-2可能通过某种机制促进血管内皮生长因子的表达,共同参与大肠腺癌的发生发展。     

妇产科概论：解剖、生理和组胚学

不同促排卵方案宫颈黏液中IL-6与卵泡发育、排卵的相关性；角质细胞生长因子对无排卵型功血子宫内膜上皮细胞生长与分泌CA125的影响；多囊卵巢综合征促排卵治疗后子宫内膜HOXA10的表达。