二硫代氨基甲酸吡咯烷对小鼠免疫性肝损伤的抑制作用

目的探讨二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)对免疫性肝损伤的抑制作用及其机制。方法设正常对照、脂多糖(LPS)、卡介苗(BCG)、BCG+LPS、PDTC和BCG+PDTC+LPS组。除正常对照、LPS和PDTC组外,其余各组小鼠经尾静脉注射BCG(每只2.5mg)。10d后,LPS和BCG+LPS组分别给予LPS(0.2mg·kg-1,ip),PDTC和BCG+PDTC+LPS组在给予LPS前24和2h分别给予PDTC(100mg·kg-1,ip),对照组给予等体积生理盐水。每组15只小鼠用于观察LPS处理后72h的死亡率;每组6只小鼠于LPS处理后1.5h处死,取肝脏,用RT-PCR检测肝脏组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)mRNA表达水平,用凝胶电泳迁移率分析法测定肝脏核因子κB(NF-κB)结合活性;每组12只小鼠于LPS处理后6h取血,处死,留取肝脏,测定血清谷丙转氨酶(GPT)活性、一氧化氮(NO)水平和肝组织还原型谷胱甘肽(GSH)含量,制备肝组织切片进行HE染色,观察组织病理变化。结果与正常对照组比较,BCG和LPS组小鼠肝脏炎症细胞明显增加,血清GPT活性升高,肝脏GSH含量显著下降,肝脏TNF-α与IL-1β mRNA表达增强,各组均未见小鼠死亡;PDTC组除血清GPT活性升高外,上述其他指标均未发生明显改变。与BCG和LPS组比较,BCG+LPS组血清GPT活性进一步升高,并伴有大面积肝脏坏死和大量炎症细胞浸润,肝脏NF-κB结合活性显著升高,TNF-α和IL-1β表达进一步增强,GSH水平下降,血清NO水平增加,小鼠死亡率40%。与BCG+LPS组比较,PDTC预处理明显抑制BCG+LPS引起的肝脏NF-κB活性、TNF-α及IL-1β mRNA表达增强,升高肝脏GSH含量,降低血清GPT活性和NO水平,减轻BCG+LPS引起的肝脏炎症和坏死,未见小鼠死亡。结论PDTC可抑制BCG+LPS引起的小鼠免疫性肝损伤,其机制可能与其抗炎和抗氧化作用有关。     

二硫代氨基吡咯烷对大鼠急性肺损伤保护作用

目的探讨二硫代氨基吡咯烷（PDTC）对内毒素（LPS）诱导急性肺损伤（ALI）大鼠肺组织的保护作用及其机制。方法将72只Wistar大鼠随机分为对照组（C组）,LPS组（L组）,PDTC＋LPS组（P组）。各组分为1,3,6,12 h亚组,每组6只。L组和P组制作内毒素性肺损伤模型。P组腹腔注射LPS前30 min尾静脉注射PDTC,120 mg•kg－1,L组和C组给予等体积0.9%氯化钠溶液。观察大鼠肺组织病理变化,肺组织湿/干质量比（W/D）变化,RT PCR法检测大鼠肺组织细胞间黏附分子 1 mRNA （ICAM 1mRNA）的表达,放射免疫法检测大鼠血清肿瘤坏死因子α（TNF α）、白细胞介素6（IL 6）含量变化。结果病理切片显示,与C组比较,L组肺组织结构破坏严重,W/D明显增大,ICAM 1mRNA在各时间点表达明显增强（P＜0.05）,血清TNF α、IL 6含量在1,3,6 h增高（P＜0.05）。与L组比较,P组肺组织结构破坏明显减轻,W/D减小（P＜0.05）,ICAM 1mRNA表达明显减少（P＜0.05）,血清TNF α、IL 6含量1,3,6 h降低（P＜0.05或P＜0.01）。结论PDTC能明显抑制ICAM 1mRNA表达,降低TNF α和IL 6含量,PDTC可能对ALI大鼠有保护作用。     

吡咯烷二硫代氨基甲酸盐下调基质金属蛋白酶9表达机制的研究

目的探讨TNF-α诱导的肺泡巨噬细胞(AM)性基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的信号通路以及吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)对MMP-9表达的影响机制。方法从慢性阻塞性肺疾病患者支气管肺泡灌洗液中分离与培养AM,以PDTC预处理AM,以TNF-α或IL-1刺激AM。半定量逆转录-聚合酶链反应法检测MMP-9 mRNA的表达;Western blot检测MMP-9蛋白的表达及TNF-α或IL-1诱导的IκBα磷酸化水平。凝胶阻滞分析实验检测NF-κB活性。结果TNF-α上调AM源性MMP-9 mRNA和蛋白的表达(P<0.05);PDTC抑制TNF-α诱导的MMP-9的表达(P<0.05)。PDTC对TNF-α或IL-1诱导的IκBα的磷酸化均无抑制作用(P>0.05)。PDTC对TNF-α或IL-1诱导的NF-κB的活化均有抑制作用(P<0.05);且PDTC不能在体外直接抑制NF-κB的DNA结合活性(P>0.05)。结论NF-κB在TNF-α诱导的AM源性MMP-9的表达中起着重要作用;PDTC可能通过抑制泛素化-蛋白酶小体途径来下调TNF-α诱导的AM源性MMP-9的表达。     

二硫代氨基甲酸吡咯烷在铜绿假单胞菌肺炎中的抗炎作用

目的探讨二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)在大鼠铜绿假单胞菌(PA)肺炎中的抗炎作用。方法54只SD大鼠建立急性PA肺炎模型,按随机法分为对照组、PA组和PDTC组,每组18只。模型制作前60min,大鼠腹腔分别注射生理盐水(对照组及PA组)和PDTC(PDTC组),每组按PA刺激后不同时间又分为3、9、24h亚组,每亚组6只大鼠。观察大鼠临床表现及肺组织湿/干比(W/D);病理组织切片观察大鼠肺组织形态学改变,行半定量中性粒细胞(PMN)计数;免疫组织化学染色检测肺组织NF-κB p65表达;用酶联免疫吸附法(ELISA)测定支气管肺泡灌洗液中IL-8含量。结果PA组大鼠肺组织明显水肿,大量炎性细胞浸润,PDTC组较PA组明显减轻;免疫组织化学染色显示PA刺激后3h可见NF-κB阳性细胞,3~24h均较PDTC组明显增多(P<0.01);IL-8蛋白分泌在PA刺激后3h开始升高,9h达高峰,3~24h均较PDTC组明显增高(P<0.01)。结论NF-κB及其诱导的IL-8在PA肺炎中发挥重要作用,PDTC可能通过抑制NF-κB的活性减轻肺损伤。     

吡咯烷二硫代氨基甲酸酯对树突状细胞成熟的影响

目的：观察NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯（PDTC）对树突状细胞（DC）成熟的影响。方法：利用PDTC作用于体外培养的大鼠不成熟DC，细菌脂多糖（LPS）刺激后，流式细胞仪检测DC共刺激分子CD80、CD86、CD40表达；ELISA分析DC分泌IL—12的变化，NF—κB DNA结合ELISA检测核内NF—κB活性。结果：PDTC抑制DC共刺激分子CD80、CD86、CD40表达；减少DC分泌IL-12；抑制核内NF—κB DNA结合活性。结论：PDTC抑制DC成熟。     

二硫代氨基吡咯烷对急性肺损伤中性粒细胞粘附分子和弹性蛋白酶的影响

二硫代氨基吡咯烷（pyrrolidine dithiocarbamate，PDTC）是新一代二硫代氨基甲酸盐类药物，具有抗癌、抗炎及免疫调节功能，临床上已被用于治疗艾滋病。急性肺损伤的显著性病理特征是大量活化的中性粒细胞（PMN）在肺血管和间质聚集，活化的PMN通过释放弹性蛋白酶（NE）和氧自由基，对肺组织造成广泛损害。其中PMN表面的粘附分子CD11a、CD11b和CD18的表达对于PMN的聚集和活化起着关键作用。本研究拟观察PDTC对油酸致大鼠ALI的保护作用及其机制，为药物治疗ALI提供理论依据。     

抑制NF-κB的活化对免疫性肝损伤小鼠CYP3A代谢活力的影响

<正>免疫性肝损伤通常由生物因素引起,重要的特征是肝组织内大量的炎症细胞浸润,从而产生免疫-炎症应答~([1])。因此,现代医学认为免疫性肝损伤的发病机制与免疫应答和免疫调节紊乱有关~([2-3])。肝脏免疫系统包含众多的固有天然免疫细胞,如巨噬细胞、NK细胞和NKT细胞。这些细胞群体大量聚集在肝脏中,能够为机体提供抵抗外来抗原入侵的免疫监视及保护作用。如果这些免疫细胞功能表现异常,会破坏肝脏内原有的免疫平衡,从而诱发一系列的肝脏病理损     

硫普罗宁钠与硫普罗宁对小鼠急性肝损伤预防和治疗作用的比较

目的观察并比较硫普罗宁钠(MPG-Na)及硫普罗宁(MPG)对急性肝损伤的预防和治疗作用。方法采用D-氨基半乳糖(Gal)(800mg.kg-1,ip)制备小鼠急性肝损伤模型。预防性给药时,分别ip给予小鼠MPG-Na或MPG37.5,75和150mg.kg-1,共7d,于最后一次给药后30min,用Gal染毒造模。治疗性给药时,在Gal染毒造模30min后分别ipMPG-Na或MPG37.5,75和150mg.kg-1,共2d。预防性给药小鼠Gal染毒24h、治疗性给药小鼠染毒48h后,检测血清谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)和Alb/球蛋白比值(A/G)。取肝脏组织,常规石蜡包埋,切片,HE染色,光镜下观察肝脏组织病理变化。结果与正常对照组比较,模型组小鼠血清GPT和GOT活性明显升高,肝脏组织出现明显的脂肪变性、肿胀或肝细胞变性坏死。预防性给予MPG-Na150mg.kg-1小鼠血清GPT和GOT活性与模型组比较显著降低,治疗性给予MPG-Na3个剂量血清GPT活性与模型组比较均明显降低,TP,Alb和A/G比值均无明显变化。预防性和治疗性给药后,肝脏组织病理损伤均明显减轻。另外,预防性和治疗性给药2种条件下,MPG-Na的作用与MPG相当。结论MPG-Na对Gal引起的急性肝损伤具有预防和治疗作用,与MPG作用相当。     

吡咯烷二硫代氨基甲酸盐对糖尿病大鼠血管内皮功能不全的影响及其机制

目的探讨吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)对糖尿病大鼠血管内皮依赖性舒张功能损害的保护作用及其机制。方法雄性SD大鼠一次性ip给予链脲佐菌素60 mg·kg-1制备糖尿病模型,通过饮水中给予PDTC 10 mg·kg-1,连续治疗8周。检测血糖、血脂和血清内源性一氧化氮合酶(NOS)抑制物非对称性二甲基精氨酸(ADMA)浓度。用含有人二甲基精氨酸二甲胺水解酶2(h DDAH2)基因的重组腺病毒(Ad5CMV-h DDAH2)体外感染糖尿病大鼠血管环,分别检测感染前后血管环对乙酰胆碱诱导的最大舒张反应(Emax)、半数有效量(EC50)及血管组织DDAH活性。结果与正常组比较,糖尿病大鼠血糖明显升高,血清ADMA浓度从正常组的(1.14±0.26)μmol·L-1升至(2.18±0.52)μmol·L-1(P<0.01);血管组织DDAH活性也从正常组的(0.10±0.02)U·g-1蛋白降至(0.05±0.01)U·g-1蛋白(P<0.01);血管内皮依赖性舒张功能损伤,表现为Emax由正常组的(93.6±4.4)%降至(50.8±4.9)%(P<0.01),EC50由正常组的(88±22)nmol·L-1升至(240±45)nmol·L-1(P<0.01)。PDTC治疗降低血糖和血清ADMA浓度分别至(13.2±3.5)mmol·L-1和(1.40±0.25)μmol·L-1(P<0.01),增加血管DDAH活性至(0.08±0.02)U·g-1蛋白(P<0.01),改善内皮依赖性血管舒张功能,使Emax增至(84.6±4.5)%,EC50降至(134±27)nmol·L-1(P<0.01)。糖尿病大鼠血管转染DDAH2基因后,血管DDAH活性及Emax和EC50的变化与PDTC治疗组相似。结论 PDTC对糖尿病大鼠血管内皮依赖性舒张功能具有明显的保护作用,其机制可能与上调血管DDAH活性,降低内源性NOS抑制物ADMA蓄积有关。     

新型氨基二硫代甲酸酯类抗肿瘤化合物HGWJ—11c的发现

为发现新结构类型的抗肿瘤化合物,基于我们发现的氨基二硫代甲酸酯类化合物的合成新方法,利用液相组合化学技术,通过两轮共构建了74个化合物库,对从中筛选出的6个可能具有活性的化合物进行了合成及活性验证,发现结构新颖的化合物13（HGWJ-11C）具有明显抗肿瘤作用,其中的氨基二硫代甲酸骨架是产生活性的必需结构。化合物13值得作为一个苗头化合物进行深入研究。     

赤芍甘草冲剂对D-半乳糖诱导肝损伤的保护作用

目的:探讨赤芍甘草冲剂对D-半乳糖胺(D-GalN)致小鼠急性化学性肝损伤的保护作用及可能机制。方法:建立D-GalN诱导小鼠化学性肝损伤模型,分光光度法检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬门氨酸氨基转移酶(AST)水平和肝匀浆丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量。结果:赤芍甘草冲剂(200、400、800 mg.kg-1)灌胃给药均能降低血清中升高的转氨酶水平,使升高的肝脾指数降低;同时发现赤芍甘草冲剂可降低肝匀浆中升高的MDA和NO水平。结论:赤芍甘草冲剂对D-GalN致小鼠急性化学性肝损伤具有保护作用,其机制与其抗氧化活性等有关。     

柿叶总黄酮对急性肝损伤小鼠肝组织的保护作用

目的探讨柿叶总黄酮(PLF)对四氯化碳(CCl 4)诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用。方法采用CCl 4肝损伤模型,测定小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的含量及肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、脂质过氧化物丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量,HE染色观察肝脏组织病理形态学的改变。结果PLF高、中、低剂量组均能降低肝损伤小鼠ALT和AST的含量,提高肝组织SOD和GSH含量,降低MDA和TNF-α含量,并能改善肝组织的病理损伤程度。结论PLF对CCl 4所致的小鼠肝损伤有较好的保护作用,其作用机制可能与提高小鼠的抗脂质氧化能力有关。     

口服齐墩果酸对D-氨基半乳糖致小鼠急性肝损伤的保护作用

目的 研究口服齐墩果酸(OA)对D-氨基半乳糖诱导小鼠急性肝损伤的保护作用.方法 将♂昆明种小鼠随机分为对照组、OA给药组、模型组、OA预处理组.采用ig给予OA给药组和OA预处理组小鼠200 μmol· kg-1 OA,ig给予对照组、模型组等体积菜籽油,每天2次,连续3d,末次给药1h后,ip给予对照组、OA给药组等体积生理盐水,ip给予模型组和OA预处理组800 mg· kg-1D-氨基半乳糖溶液造模,造模8h后,收集各组小鼠的血液和肝脏组织,测定小鼠血清中天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和肝脏中丙二醛(MDA)的含量,观察肝组织病理学的改变,并应用实时定量RT-PCR检测肝毒性相关基因的表达水平.结果 OA预处理能降低D-氨基半乳糖所致小鼠血清中AST、ALT的活性及肝组织中MDA的含量,明显改善肝细胞坏死病变的程度,并逆转小鼠急性肝损伤所致的生长停滞及DNA损伤诱导基因153(Chop10)、生长停滞及DNA损伤诱导基因45、Egr1、mKC、TNF-α mRNA表达的增高.结论 OA对D-氨基半乳糖所致小鼠急性肝损伤具有保护作用,其机制可能与缓解急性内质网应激、减轻炎症和抗氧化有关.     

D-半乳糖葡胺增敏小鼠对非致死剂量细菌脂多糖致死作用与肝脏DNA片段化的高度相关性

目的：本实验研究了以非致死剂量脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）攻击半乳糖葡胺（D-galactosamine,D-GalN）增敏小鼠的残废是否伴有重要器官的凋亡特征。方法：实验小鼠以LPS（0.05μg）与D-GalN(20mg)直接攻击,而对照组小鼠仅仅以LPS或D-GalN,在规定实验时间经乙醚麻醉后,取出脑、肾、心、脾、肺、肝,并立即匀浆和抽提DNA,对所抽提的各器官的DNA以常规琼脂糖凝胶电泳分析是否存在DNA梯度现象;并测定血浆中乳酸脱氢酶和谷氨酸草酰乙酸转移酶,同时将DNA片段化现象与小鼠致死作用的关联性在实验组和对照组间做比较。结果：LPS攻击D-GalN增敏的小鼠4h时,在所检测的器官中,仅仅肝脏可见重叠凋亡特征DNA片段化现象,至7h时小鼠死亡,而仅用LPS或D-GalN攻击的对照组小鼠,不仅全部存活而且肝脏DNA分子完整。结论：LPS攻击D-GalN增敏的小鼠,肝脏是唯一出现DNA片段化的靶器官,由细菌LPS引发小鼠的死亡,肝脏的损伤可能是关键的原因。     

激动素对小鼠急性四氯化碳肝损伤的保护作用

目的:探讨激动素对四氯化碳(CCl_4)所致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法:建立小鼠四氯化碳急性肝损伤模型,透射电镜观察肝组织超微结构,生化法测定肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量与血清丙氨酸转氨酶(ALT)活性、天冬氨酸转氨酶(AST)活性、清蛋白(Alb)含量,观察激动素对肝损伤的保护作用。结果:激动素(20,40 mg·kg~(-1)·d~(-1))能明显抑制肝细胞肿大、空泡变性和染色质增多边集,减轻肝损伤引起的线粒体、粗面内质网肿胀,抑制肝组织中SOD和CAT活性的降低和MDA含量的升高,提高肝组织抗氧化能力;同时激动素能降低血清ALT和AST活性,提高血清AIb含量。结论:激动素能够抵抗CCl_4所致小鼠急性肝损伤,其作用的发挥与清除自由基、提高抗氧化酶活性、维持细胞膜完整性有关。