新疆兵团农六师五家渠地区含cagA基因型幽门螺杆菌感染的流行病学调查

幽门螺杆菌 (Ｈｐ)的毒素在其致病性中的地位越来越受到人们重视。部分Ｈｐ菌株能表达细胞空泡毒素 (ＶａｃｕｏｌａｔｉｎｇＣｙｔｏｔｏｘｉｎ ,ＶａｃＡ)和细胞空泡毒素相关蛋白 (ＣｙｔｏｔｏｘｉｎＡｓｓｏｃｉａｔｅｄＰｒｏｔｅｉｎ ,ｃａ ｇＡ) [1 ,2 ] ,ｃａｇＡ与ＶａｃＡ高度相关 ,被认为是Ｈｐ的毒力标志。许多研究资料表明Ｈｐ毒素与消化性溃疡及胃癌密切相关[3] 。本文用整群抽样的方法对新疆兵团农六师五家渠地区 1 1 1 2名自然人群的血清用ＥＬＩＳＡ法测定ｃａｇＡ -ＩｇＧ抗体 ,间接检测ｃａ ｇＡ基因。寻找其感染的重要…     

幽门螺杆菌的毒力因子与老年人胃十二指肠疾病

幽门螺杆菌 (Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ,Ｈｐ)感染是慢性胃炎、消化性溃疡的重要病因 ,近年来研究发现 ,Ｈｐ感染后可出现致病的多样性 ,这可能与Ｈｐ菌株毒力差异有关 ,细胞毒素相关蛋白 (ＣａｇＡ)和空泡细胞毒素 (ＶａｃＡ)被认为是Ｈｐ毒力的主要标志。随着社会的老龄化 ,老年人溃疡病和胃炎合并Ｈｐ感染占相当比例。本研究通过对患有胃十二指肠疾病伴Ｈｐ感染的老年人 ,检测血清ＣａｇＡ、ＶａｃＡ因子 ,以了解老年人Ｈｐ感染的菌株类型 ,探讨老年人Ｈｐ毒力因子与胃十二指肠疾病的关系。材料与方法一、研究对象1997年 3月…     

肠出血性大肠杆菌志贺毒素的研究进展

肠出血性大肠菌 (ｅｎｔｅｒｏｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃＥ .ｃｏｌｉＥＨＥＣ)是致腹泻性大肠菌中的一种 ,它具有以下特性 :①能够导致出血性结肠炎 (ＨＣ)和溶血性尿毒综合征 (ＨＵＳ) ;②表达志贺毒素(Ｓｔｘ) ;③导致上皮细胞的黏附与消除 (ａｔｔａｃｈｉｎｇａｎｄｅｆｆａｃｉｎｇ,Ａ/Ｅ)病变 ;④具有编码溶血素等毒力因子的 6 0 ＭＤａ质粒。ＥＨＥＣ可通过食物 ,水 ,以及直接接触而传播。该菌对人的感染与发病呈上升趋势 ,故引起了人们的广泛关注。 1977年Ｋｏｎｏｗａｌｃｈｕｋ[1] 等首次在大肠菌中发现一种对Ｖｅｒｏ细胞 (非洲…     

NADase细菌毒素的非放射性测定法

建立一种测定ＮＡＤａｓｅ细菌毒素活性的非放射性测定法,方法建立一个ＮＡＤ依赖的显色系统,在该系统中ＮＡＤ接受乳酸脱氢酶从乳酸脱下来的氢,再通过ＰＭＳ传递传递给ＩＮＴ,使后者还原而显色。如果ＮＡＤａｓｅ毒素分解ＮＡＤ,就会打断递氢链而抑制显色反应。     

PCR法检测大肠杆菌O_(157)志贺样毒素

Ｅ.ｃｏｌｉＯ157是一种产毒性大肠杆菌,产生的志贺样毒素(ｓｈｉｇａｌｉｋｅｔｏｘｉｎｓ,ＳＬＴ)又称Ｖｅｒｏ毒素(ｖｅｒｏｔｏｘｉｎｓ,ＶＴ)。研究表明Ｅ.ｃｏｌｉＯ157致病性与其能产生ＶＴ有关[1]。ＶＴ通过细胞糖脂性受体ＧＢ3的介导,作用于靶细胞,引起细胞蛋白质合成障碍,从而引起出血性腹泻和溶血性尿毒综合征(ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｒａｅｍｉｃｓｙｎｄｒｏｍｅ,ＨＵＳ)[2]。因此,Ｖｅｒｏ毒素基因的检测具有重要的意义。我们用一对设计引物,使用ＰＣＲ法对Ｅ.ｃｏｌｉＯ157基因型进行研究,对可疑菌株进行毒力分析和鉴定。材…     

幽门螺杆菌空泡毒素活性的体外观察

目的研究幽门螺杆菌(Hp)液体浓缩上清液对胃上皮细胞的空泡毒性作用,为进一步开展空泡变性细胞毒素(VacA)的纯化及探讨VacA的致病机制奠定基础。方法将Hp菌株液体培养上清液制成粗制VacA蛋白,粗制VacA经倍比稀释(1∶160～1∶2)后与胃癌SGC7901细胞共同孵育后观察胃癌细胞形态变化,同时观察1∶2及1∶5滴度组于0、2、4、8、16和24h时的空泡活性。采用中性红摄入法(NRU)评价空泡活性。结果1∶2及1∶5滴度组胃癌细胞于24h时空泡形成细胞达100%,空泡细胞比例随毒素滴度递减。孵育24h时粗制VacA产生空泡活性的最小剂量约为6μg,超过120μg可导致细胞死亡。当毒素滴度为1∶2时,孵育4h即产生明显空泡[550nm光吸收值(A550)=0.43±0.06],至16h达最高吸收值(A550=0.71±0.03),至24h时因细胞大量死亡,A550反而下降至0.06±0.04,与空白对照组的差异无显著性(P>0.05)。1∶5毒素滴度的时间曲线较1∶2滴度更恰当反映出空泡活性随孵育时间变化的特性。结论Hp液体培养上清浓缩液对胃癌细胞具有明显的空泡毒性作用,VacA导致的空泡毒性具有明显的浓度及时间依赖性,且易受多种因素的影响,适当的浓度及孵育时间是VacA致病机制研究过程中的关键因素。     

幽门螺杆菌液体培养的研究

目的 :建立一种适用于幽门螺杆菌 (Hp)大量扩增并提取致空泡变性细胞毒素 (Vac A)的液体培养方法。 方法 :采用TSB及 MHB培养液 ,加入小牛血清 (FBS)或环糊精 (CD)作为支持剂 ,比较其对 Hp的扩增效果及上清中空泡毒素活性的差异。结果 :TSB+CD组 Hp平均扩增速度及菌体湿重与 TSB+FBS组相比无显著差异 ,二者均显著高于 MHB培养液组 (P<0 .0 1)。 TSB+CD组上清蛋白浓度为 (2 .4 4± 0 .39) m g/ m l,显著高于 MHB+CD组。 TSB培养液组浓缩上清具有明显的空泡毒性 ,且蛋白电泳可见相对分子质量为 95 0 0 0的 Vac A,而 MHB培养液组无空泡毒性。 结论 :以 TSB为培养液 ,加入适量的CD作为支持剂 ,在不损失 Vac A活性的前提下 ,可明显增加浓缩上清液中的蛋白纯度 ,是大量提取和制备 Hp Vac A蛋白理想的液体培养方法。     

霍乱毒素对不同细胞株增殖效应的影响

以霍乱毒素（ＣＴＸ）为探针，以不同细胞株体外增殖和细胞内ｃＡＭＰ水平为观察指标，探讨霍乱毒素对不同细胞株体外增殖的影响。结果表明，ＣＴＸ对淋巴细胞的增殖抑制作用随细胞不同而异，ＣＴＸ（１ｍｇ／Ｌ）可显著升高Ｄａｕｄｉ、Ｋ５６２细胞内ｃＡＭＰ水平（均为Ｐ〈０．０５），并对上述细胞的增殖具有显著抑制作用（均为Ｐ〈０．０５）；对ＣＴＬＬ细胞ｃＡＭＰ水平无影响，但可显著抑制ＣＴＬＬ细胞的增殖（Ｐ〈０．０１     

缓症链球菌致热性外毒素蛋白的生化性质

目的 研究缓症链球菌外毒素蛋白的分子量、等电点、氨基酸组成及Ｎ＾－末端序列。方法 将纯化的毒素蛋白用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳,据低分子量标准蛋白质算出其相对分子质量;以微型聚丙烯酰胺等电聚焦（ｍｉｎｉＩＥＦ）法进行此素蛋白的等点电测定;采用电印迹将ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳胶上的毒素蛋白转移到ＰＶＤＦ膜上,用Ｂｅｃｋｍａｎ３４４ＨＰＬＣ仪测定外毒素蛋白的氨基酸组成;用自动化蛋白质序列仪测定缓症链球菌外毒素Ｎ     

幽门螺杆菌细胞空泡毒素的PCR检测

目的：建立幽门螺杆菌（ＨＰ）细胞空泡毒素（ＶＣ）的聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测方法。方法：根据ＨＰＶＣ基因图谱，设计了两对顺序特异性引物，分别扩增包括信号肽顺序（４０６－１５１６）和不含此顺序（８１１－１５１６）的基因片段。对１４株经形态学和生化鉴定证实为ＨＰ的菌株提取其基因组ＤＮＡ，以上述引物进行ＰＣＲ。结果：已知ＶＣ阳性的ＨＰ标准株（ＮＣＴＣ１１６３８）、临床分离株ＮＺ７、ＮＺ８、ＨＰ２３、ＨＰ３５、ＨＰ５７、ＨＰ６５、ＨＰ６６、ＨＰ６７和ＨＰ７０共１０株为ＶＣ阳性。扩增产物中均检出ＶＣ特异的１１００ｂｐ、７０５ｂｐ、５４３ｂｐ片段，敏感性约为０．６ｎｇ基因组ＤＮＡ。结论：所设计的引物和ＰＣＲ检测方法正确，可应用于临床检测。