人参不同部位皂甙对人胚肺成纤维细胞寿命的影响

当人胚肺成纤维细胞被传至40代龄后,在培养液中加入人参根皂甙(SRG)sμg/ml,人参果皂甙(SFG)1.5μg/ml和人参茎叶皂甙(SSLG)1.0μg/ml可分别延长细胞传代寿命的120％,110％和130％。当培养液中三种皂甙的终浓度分别在1.78～16.00μg/ml,0.50～4.50μg/ml和0.25～4.00μg/ml范围内时。实验结果表明,高代龄细胞的饱和密度明显增加,细胞的克隆生长也受到显著影响,SRG的作用较SFG和SSLG更明显。而同样条件下三种皂甙对低代龄细胞的影响则不明显。     

人参皂甙Rb1,Rg1,Re和Rh1对人胚肺成纤维细胞非程序DNA合成的 …

应用＾３Ｈ－ＴｄＲ和＾１４Ｃ－ＴｄＲ双标记法，液闪测定不同代龄人胚面纤维细胞（２ＢＳ）由丝裂霉素Ｃ（ＭＭＣ）诱导的非程序ＤＭＡ合成（ＵＤＳ）以及人参皂甙Ｒｂ１，Ｒｇ１，Ｒｈ１和Ｒｅ对照细胞ＵＤＳ的影响，结果表明，当ＭＭＣ剂量在１０ｎｇ／ｍｌ时，衰老细胞的ＵＤＳ水平下降，而年轻细胞的ＵＤＳ水平显著升高，人参皂甙Ｒｂ１，Ｒｇ１，Ｒｈ１，Ｒｅ均能显著提高衰老细胞的ＵＤＳ水平且Ｒｂ１，Ｒｇ１作用更明显。     

人参皂甙Rb_1、Rg_1、Re和Rh_1对人胚肺成纤维细胞非程序DNA合成的影响

应用３Ｈ－ＴｄＲ和１４Ｃ－ＴｄＲ双标记法，液闪测定不同代龄人胚肺成纤维细胞（２ＢＳ）由丝裂霉素Ｃ（ＭＭＣ）诱导的非程序ＤＭＡ合成（ＵＤＳ），以及人参皂甙Ｒｂ１、Ｒｇ１、Ｒｈ１和Ｒｅ对细胞ＵＤＳ的影响。结果表明，当ＭＭＣ剂量在１０ｎｇ／ｍｌ时，衰老细胞的ＵＤＳ水平下降，而年轻细胞的ＵＤＳ水平显著升高。人参皂甙Ｒｂ１、Ｒｇ１、Ｒｈ１、Ｒｅ均能显著提高衰老细胞的ＵＤＳ水平，且Ｒｂ１、Ｒｇ１作用更明显。     

人胚胎肺成纤维细胞复制性衰老模型的建立

目的建立人胚肺成纤维(HEL)细胞,复制性衰老模型,模拟正常细胞的衰老过程。方法利用HEL细胞的复制性衰老特性,通过细胞传代培养的办法,将获得的原代HEL细胞培养直至其衰老,冻存不同代的HEL细胞备用。然后利用β-半乳糖苷酶染色、端粒长度的检测以及p21蛋白的表达变化检测细胞的衰老状态。结果培养HEL细胞,按1∶2分瓶传代直至其衰老,最终细胞代龄为64。通过染色与分子检测证实细胞随着传代逐渐衰老。结论成功建立了HEL衰老模型,为进一步研究正常细胞复制性衰老奠定了基础。     

6种细胞因子对巨细胞病毒感染人胚肺成纤维细胞的影响

目的 研究6种细胞因子（IL－1β、IFN－α、IFN－γ、GM－CSF、TGF－β1、bFGF）对人巨细胞病毒（HCMV）感染人胚肺成纤维细胞（HEL）的影响,探讨细胞因子在HCMV感染免疫中的作用。方法 用不同浓度的6种细胞因子分别作用于HEL,24h后感染病毒,研究6种细胞因子对HCMV感染HEL的影响。结果 在病毒感染前,IL－1β、IFN－α、INF－γ、bFGF作用于HEL可抑制HCMV的增殖;TGF－β1作用于HEL可增加HCMV的增殖,上述细胞因子对病毒复制的影响与细胞因子的浓度有关。GM－CSF地人巨细胞病毒感染人胚肺成纤维细胞无明显影响。结论 细胞因子在HCMV感染免疫过程中起重要作用。     

红景天甙对体外培养人胚肺二倍体成纤维细胞的影响

本实验采用体外培养人胚肺二倍体成纤维细胞,从30代开始在培养液中加入红景天甙为实验组、不加红景天甙为对照组。分别观察了两组细胞的形态、增殖速度及对单胺氧化酶(MAO)活性的测定。结果表明,实验组细胞形态、增殖速度均比同代对照组好,MAO活性比对照组低。认为红景天甙对体外培养人胚肺二倍体成纤维细胞具有一定的抗衰老作用。     

地塞米松对人胚肺成纤维细胞中糖皮质激素受体的影响

目的 研究经脂多糖处理后人胚肺成纤维细胞中糖皮质激素受体的表达及地塞米松对其的影响.方法 人胚肺成纤维细胞经脂多糖处理后,给予地塞米松进行干预,行细胞病理学检查及细胞增殖实验,检测培养细胞上清液中羟脯胺酸含量,采用免疫组织化学及Western blot法检测细胞中糖皮质激素受体的表达.结果 应用地塞米松后,人胚肺成纤维细胞病理变化减轻,细胞的增殖明显减少,细胞上清液中羟脯胺酸含量显著下降,糖皮质激素受体表达增加,与脂多糖组比较差异均有统计学意义.结论 地塞米松可减轻脂多糖所致人胚肺成纤维细胞的纤维化反应,其作用机制可能与上调糖皮质激素受体有关.     

人衰老成纤维细胞凋亡的可诱导性

目的 研究体外培养的人成纤维细胞衰老时可诱发凋亡的能力。方法 用于酸钠和去血清两种方法诱导人衰老和年轻或纤维细胞生存曲线、细胞形态和超微结构、ＤＮＡ断裂电科 、流式细胞仪分析凋亡等手段检测凋亡的发生情况。结果 ５０ｍｍｏｌ／Ｌ的丁酸钠诱导年轻细胞４８ｈ即发生凋亡,而老细胞耐９６ｈ,去血清诱导年轻细胞１５ｄ左右发生凋亡,而衰老细胞此时未出现凋亡现象。结论 人老成纤维细胞可凋亡的能力明显低于年轻细胞。     

蜕皮激素对人胚肺二倍体细胞增殖的影响

目的：从细胞水平探讨怀牛膝主要活性成分蜕皮激素抗衰老的作用机制。方法：以体外培养的人胚肺二倍体成纤维细胞为材料,分为蜕皮激素组和正常对照组,以生长曲线、MTT法、^3H-TdR掺入法以及流式细胞仪法观察细胞增殖、细胞周期变化及DNA合成情况。结果：同一代龄,悦皮激素组细胞增殖数、OD490值、PI值、CPM掺入量等均明显高于对照组。结论：蜕皮激素有较显著的促细胞增殖能力。     

转化生长因子β1对人胚肺成纤维细胞平滑肌肌动蛋白α表达的影响

在肺纤维化动物模型以及人类特发性肺纤维化(IPF)中,纤维化肺组织局部不仅转化生长因子β1(TGF β1)水平升高,而且还聚集了大量表达平滑肌肌动蛋白α(αSMA)的肌成纤维细胞。肌成纤维细胞与肺纤维化进展过程密切。本研究拟探讨外源性TGF β1对人胚肺成纤维细胞αSMA蛋白和mRNA表达水平的影响。材料与方法　材料:人胚肺成纤维细胞系(HLF 0 2 )由我校细胞中心构建[1] 。TGF β1为Peprotech公司产品,小鼠αSMA单克隆抗体购自Novocastra公司,RTKit为Promega产品,TrizolRNA提取试剂购自LifeTechnology公司,SPKit则由北京中山公…     

黄芪甲甙对衰老HELF细胞端粒酶活性及klotho表达的影响

目的 探讨黄芪甲甙对衰老人胚肺成纤维细胞(HELF)端粒酶活性及抗衰老基因klotho mRNA表达的影响.方法 体外培养 HELF,实验组从50代开始加入黄芪甲甙,倒置显微镜观察细胞形态,MTT方法检查细胞活力,Dimiri氏法检测β-半乳糖苷酶活性,TRAP-PCR银染法检测端粒酶活性,RT-PCR法检测klotho mRNA表达.结果 与青年组比较:衰老组细胞活力和klotho mRNA表达均降低(P<0.01)、β-半乳糖苷酶活性升高(P<0.01);与衰老组相比:黄芪甲甙可降低β-半乳糖苷酶活性(P<0.01)、提高细胞活力、端粒酶活性和klotho mRNA表达(P<0.01).结论 黄芪甲甙可以通过改变细胞端粒酶活性、klotho基因的表达而发挥其抗HELF细胞衰老的作用.     

不同浓度山茱萸多糖对HDF细胞衰老的影响

目的 研究不同浓度山茱萸多糖对体外培养人胚肺二倍体成纤维细胞(HDF)的影响,探讨制备含山茱萸多糖家兔血清的最佳采血时间.方法　选择家兔为对象,制备含山茱萸多糖血清,DMEM培养基培养复制性衰老HDF细胞;采用苯酚-硫酸法测定多糖含量,MTT法检测细胞活力.将HDF细胞分为4组,观察不同浓度含山茱萸多糖家兔血清培养基对衰老HDF细胞细胞活力的影响.结果 血清中山茱萸多糖浓度在给药1.5,2,4 h明显高于给药0.5、11 h(P<0.001),给药2,2.5,3,3.5,4 h高于0.5、11 h(P<0.01),而在给药48,72 h则明显降低(P<0.01).培养基中加入含山茱萸多糖兔血清(SCP)0.5%、1%和1.5%均能提高衰老HDF细胞活力(P<0.01),细胞衰老表型不明显,其中1%SCP组效果好于0.5%,1.5%组.而2%SCP组和 3%SCP组表现明显的细胞生长抑制.结论 制备含山茱萸多糖家兔血清最佳取血时间是在给药后1.5～2 h或4 h,山茱萸多糖抗HDF细胞衰老作用效果最好的是1%含山茱萸多糖兔血清组.     

成纤维细胞的衰老和基因表达

本文综述了人胚二倍体成纤维细胞的衰老和原癌基因、抑癌基因、细胞周期基因、热休克蛋白基因、延长因子基因及衰老细胞中其他一些基因表达和调控的变化。目前已经阐明的许多基因表达,大部分可能伴随细胞衰老而发生变化,而不是引起细胞衰老的原因。     

青蒿琥酯对人胚肺成纤维细胞系HFL—I细胞增殖、凋亡的影响及机制

目的进一步探讨青蒿琥酯的抗纤维化作用及机制。方法取对数生长期人胚肺成纤维细胞（HELF）系HFL-I细胞株,随机分为观察1—4组及对照组,观察1-4组分别加入质量浓度为4、8、16、32mg／L的青蒿琥酯,对照组加入等体积培养液后继续培养。用CCK-8法检测细胞增殖情况（A值）,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率,RT-PCR法测定Survivin mRNA表达。结果观察1-4组G0＋G1期细胞所占比例及细胞凋亡率均显著高于对照组,细胞A值及Survivin mRNA表达均显著低于对照组,且各观察组间亦有显著差异（P〈0．05）。结论青蒿琥酯具有抗肺纤维化作用,可能机制为通过下调Survivin mRNA表达抑制HFL-I细胞增殖、促进HFL-I细胞凋亡。     

转化生长因子—β对人胚肺成纤维细胞胶原表达的影响

转化生长因子－β（ＴＧＦ－β）是一族多功能的细胞因子，具有调节细胞外基质代谢的功能，在肺间质纤维化的形成中具有重要作用。胶原是细胞外基质的主要成分。胶原积聚是肺间质纤维化的一个重要特征。为了进一步探讨肺间质纤维化形成的机制，在体外观察了ＴＧＦ－β对人胚胎成纤维细胞胶原蛋白合成及胶原Ｉ、胶原ＩＩＩｍＲＮＡ表达的影响。结果发现：ＴＧＦ－β能刺激胶原蛋白的合成，胶原Ｉ、胶原ＩＩＩｍＲＮＡ的表达。而对纤维     

青蒿琥酯对人胚肺成纤维细胞系HFL-Ⅰ细胞胶原合成的影响及机制

目的进一步探讨青蒿琥酯对肺纤维化的治疗作用及机制。方法取对数生长期的人胚肺成纤维细胞（HELF）系HFL-Ⅰ细胞,随机分为观察1～3组及对照组,观察1～3组分别加入质量浓度为1、10、100 mg/L的青蒿琥酯,对照组加入等体积培养液继续培养。用天狼猩红染色法检测胶原蛋白的分泌水平,RT-PCR法测定Ⅰ型和Ⅲ型前胶原蛋白mRNA的表达。结果观察1～3组胶原表达量、Ⅰ型、Ⅲ型前胶原蛋白mRNA表达均显著低于对照组,且各观察组间两两比较有显著差异（P均〈0.05）。结论青蒿琥酯具有抗纤维化的作用,可在一定程度上降低胶原分泌,其机制可能为下调Ⅰ型和Ⅲ型前胶原蛋白mRNA表达。     

花粉对人胚肺二倍体成纤维细胞的抗衰老研究

本研究选用体外培养的人胚肺二倍体成纤维细胞(2BS株)作为抗衰老研究体外模型,从30代开始在培养液中加入花粉精为实验组,加入氢化可的松为阳性对照组,不加任何药物为空白对照组。结果表明,加入花粉组传至80代,空白对照组细胞传至64.5代,阳性对照组传至72代。花粉组细胞的生长形态和增殖速度均优于对照组。本研究证明,花粉对体外培养的人胚肺二倍体成纤维细胞有抗衰老作用。     

蛋白激酶C-ε对人胚肺成纤维细胞趋化运动调节的研究

目的 探讨蛋白激酶C-ε(PKC-ε)家族在肺成纤维细胞向纤维粘连蛋白趋化运动中的作用.方法 于2006年10月至2007年4月在北京世纪坛医院內科实验室和美国內布拉斯加大学呼吸科实验室进行.(1) 人胚肺成纤维细胞体外培养.(2) 以纤维粘连蛋白作为趋化因子,采用Boyden趋化小室技术测定人胚肺成纤维细胞的趋化运动.(3) 将人胚肺成纤维细胞转染PKC-ε小干扰RNA(siRNA), 24h后应用蛋白质印迹法测定PKC-ε的表达.(4) 分别采用PKC-ε非选择性抑制剂(Calphostin C)和选择性抑制剂(Ro-31-8220)及转染PKC-εsiRNA的人胚肺成纤維细胞,研究PKC-ε在肺成纤维细胞趋化运动中的调节作用.结果 Calphostin C和Ro-31-8220显著抑制人胚肺成纤维细胞向纤维粘连蛋白的趋化运动[细胞迁移数分别为对照组的(68.50±4.68)%和(59.94±5.20)%, P<0.01].成纤维细胞转染PKC-εsiRNA,孵育24h后PKC-ε的表达显著减少,成纤维细胞在纤维粘连蛋白作用下的趋化运动显著减弱[迁移的细胞数是对照组的(82.56±2.80)%, P<0.05)].结论 PKC-ε参与肺成纤维细胞趋化运动的调节,进而在肺成纤维细胞介导的组织重构中发挥作用.     

氨基胍延缓人胚肺二倍体成纤维细胞复制性衰老的实验研究

目的探讨人工合成单体抗氧化剂氨基胍（2-AG）对人胚肺二倍体成纤维细胞（2BS）复制性衰老的影响及其分子机制。方法观察2-AG对2BS细胞衰老表型、细胞代龄、传代速度、细胞周期、细胞增殖能力、晚期糖基化终末产物（AGEs）水平及衰老相关β半乳糖苷酶（SA-β-Gal）阳性率的影响。结果2-AG可维持细胞的非衰老表型，增加2BS细胞代龄19～20代，MTT法分析发现用2-AG孵育细胞84h，细胞增殖能力较对照组升高36％～40％。2-AG显著加快了细胞的增殖速度，其培养细胞S期的比例较对照细胞升高约1倍。另外，2-AG连续培养的细胞在老龄阶段AGEs、SA-β-Gal阳性率均显著低于老年对照细胞，而与年轻2BS细胞相似。结论2-AG可有效延缓2BS细胞的复制性衰老。     

辛伐他汀诱导肺成纤维细胞凋亡的研究

成纤维细胞过度增殖并产生过量细胞外基质可导致多种肺部疾病 ,如特发性肺间质纤维化、气道重建[1 ] ,目前对此类疾病尚缺乏有效治疗方法 ,羟甲基戊二酸单酰辅酶 Ａ(ＨＭＧ ＣｏＡ)还原酶抑制剂辛伐他汀是目前广泛应用于临床的降脂类药物。近年来 ,很多研究证实 ,ＨＭＧ ＣｏＡ还原酶抑制剂具有诱导多种细胞凋亡的作用[2 ,3] 。本实验在体外研究辛伐他汀对肺成纤维细胞凋亡的诱导作用。材料与方法　 (1 )肺成纤维细胞的原代培养 :取肺组织约 1ｃｍ3,剪成碎块 ,加入 0 2 5 %的胰蛋白酶 ,37℃消化30ｍｉｎ ,1 0 0目钢丝网过滤 ,离心混悬液 ,…