一种简单快速制备动物线粒体DNA的方法

目的探索通过核质分离的方法制备mtDNA。方法利用TritonX 100等非离子型去污剂能溶解除核被膜以外的所有细胞膜的特点 ,通过适当离心 ,分离细胞核/细胞质来获取mtDNA。结果所得mtDNA样品纯度产率较高 ,且无核DNA污染。结论此方法简单快速 ,方法重复性好 ,值得推广应用。     

石蜡包埋淋巴瘤组织线粒体DNA的提取及PCR扩增

目的:探讨从石蜡包埋组织标本获取线粒体DNA (mtDNA)并进行PCR扩增的有效方法。方法:选取27例石蜡包埋的淋巴瘤组织,分别使用二甲苯/乙醇和0.5% Tween-20进行脱蜡,改进裂解缓冲液的成分及浓度,酚/氯仿抽提以获取mtDNA并进行电泳和PCR分析。结果:0.5% Tween-20法获取mtDNA纯度及浓度含量明显高于二甲苯/乙醇法(P<0.01);二甲苯/乙醇法和0.5% Tween-20法获取的mtDNA PCR扩增成功率分别为11.1%和40.7%,两者差异有统计学意义(P<0.05)。结论:二甲苯/乙醇和0.5% Tween-20两种方法都可以扩增出mtDNA的目的片段,但0.5% Tween-20法操作简便,PCR扩增成功率高,不用接触二甲苯等有毒化学试剂,是一种较为理想的mtDNA提纯方法。     

甲状腺乳头状癌组织中线粒体DNA含量的变化

 目的 探讨线粒体DNA（mtDNA）含量变化在甲状腺乳头状癌发生中的作用及其意义。方法 应用TaqMan实时荧光定量聚合酶链反应检测29例甲状腺乳头状癌,14例甲状腺腺瘤,11例结节性甲状腺肿及其配对正常甲状腺组织的mtDNA含量变化,并结合甲状腺乳头状癌主要临床病理参数进行分析。结果 （1）29例甲状腺乳头状癌中mtDNA相对含量为224.13±217.24;配对癌旁正常甲状腺组织mtDNA相对含量为88.69±44.06,明显高于癌旁正常甲状腺组织（P＜0.01）。与癌旁正常甲状腺组织相比,甲状腺乳头状癌中mtDNA含量增加、无明显变化和减少的比例为21：2：6。（2）25例甲状腺良性病变中mtDNA相对含量为129.48±105.27;配对瘤旁正常甲状腺组织mtDNA相对含量为89.44±29.75。甲状腺良性病变mtDNA含量与瘤旁正常甲状腺组织无显著差异,但低于甲状腺乳头状癌组（P＜0.05）。（3）甲状腺良性病变中,甲状腺腺瘤和结节性甲状腺肿的mtDNA含量差别无统计学意义。（4）甲状腺乳头状癌的mtDNA含量变化与患者年龄、肿瘤大小、淋巴结转移等临床病理参数无关（P＞0.05）。结论 mtDNA含量增加与甲状腺乳头状癌发生有关,但与其临床病理参数未见相关性,是肿瘤发生的早期事件。     

线粒体DNA异质性检测方法研究进展

线粒体是真核细胞内的重要细胞器,能量生成的场所,参与脂肪酸的合成及某些蛋白质的合成,也是核外惟一的遗传物质。线粒体在生物的生长、发育、代谢、衰老、疾病、死亡以及生物进化等方面都有非常重要的意义。由于线粒体DNA具有母系遗传、拷贝数多、阈值效应、较高的突变率和序列的多样性等特点,因此线粒体DNA异质性在生物学、医学、法医、生物技术等领域有重要的应用。近几年来,mtDNA异质性研究的新成就为揭示许多疾病的发生机制提供了新的线索。现就线粒体DNA异质性检测方法及研究等进行综述。     

线粒体DNA在检测线粒体功能障碍中的应用

<正>人类基因组包括线粒体基因和核基因,线粒体基因是位于核外的独立双链DNA。由于线粒体DNA没有内含子,全部都是外显子,因此线粒体DNA的任何改变都会导致其基因序列发生改变,进而导致其编码的蛋白质发生改变,引起呼吸链功能的变化和能量代谢的缺陷,从而引发一系列疾病。近年来,随着对线粒体研究的增多,很多与线粒体功能障碍有关的疾病相继被报道。在PubMed、NCBI中关于线粒体功能障碍与疾病的文献引用已超过10 000条。线粒体DNA作为     

乳腺癌线粒体DNA拷贝数改变的研究及意义

目的:用实时定量PCR对乳腺癌组织线粒体DNA的拷贝数进行检测,探讨线粒体DNA拷贝数改变与乳腺癌的关系。方法:对30例乳腺癌患者组织及其相应外周全血、30例健康献血员外周全血标本的线粒体DNAD-loop区克隆并制备标准品;用实时定量PCR检测标本线粒体DNA的拷贝数。结果:乳腺癌组织线粒体DNA的拷贝数平均值为7.75×1013copy/μgDNA,高于其相应外周血的平均值3.22×1011copy/μgDNA(P<0.05)和对照的平均值6.55×1010copy/μgDNA(P<0.05)。结论:线粒体DNA拷贝数改变与乳腺癌发生有关。     

线粒体DNA单核苷酸多态性研究进展

线粒体不仅是能量生成的场所,还参与脂肪酸的合成及某些蛋白质的合成。线粒体基因组(mtDNA)是约1650 bp的环状分子,含有37个基因,其中24个是合成蛋白质时所需的RNA编码基因,其余的13个基因参与编码呼吸链关键性复合酶的亚单位。所以mtDNA在调节机体氧化磷酸化中起关键作用。由于线粒体中的氧化呼吸链,mtDNA的突变率高于核中DNA,并且缺乏自我修复能力,mtDNA的任何突变都会累及到基因组中的功能区域,其突变和编码线粒体蛋白的基因组DNA的突变可导致线粒体功能的异常,对机体代谢、组织功能都有影响。笔者对线粒体单核苷酸多态性的生理、病理的新进展做一综述。     

从动物组织细胞中提取线粒体DNA的方法

从动物组织细胞中提取线粒体ＤＮＡ的方法刘桂芬Ａｖａｄｈａｎｉ（中国医科大学法医学系法医血清学教研室）（美国宾夕法尼亚大学生物化学实验室）关键词线粒体；ＤＮＡ目前对线粒体ＤＮＡ的研究逐步深入，提取线粒体ＤＮＡ有几种不同方法。现就美国宾夕法尼亚大学生物化...     

药用动物乌梢蛇线粒体基因组全序列分析

[目的]获取药用动物乌梢蛇线粒体基因组全序列。[方法]采用Ion Torrent PGM技术,对乌梢蛇全基因组DNA进行提取测序,采用MIRA方法从头组装方法和近缘种mapping方法进行组装拼接,应用MITOS等方法进行注释。[结果]获得17 162 bp乌梢蛇线粒体基因组全序列。其共编码22个tRNA,13个蛋白编码基因,2个rRNA(16S rRNA、12S rRNA)并有1个轻链(L链)复制起始区。[结论]获取乌梢蛇线粒体基因组全序列,并可用于该药用动物的资源调查与保护研究。     

线粒体DNA与衰老的研究进展

线粒体是细胞呼吸和物质氧化的中心，是机体产生ATP的重要场所，动物体内85％的ATP产生于此。线粒体是一种半自主细胞器，含有自身的DNA（mtDNA），研究表明mtDNA突变在组织细胞衰老过程中起着重要作用。     

线粒体DNA与糖尿病的研究进展

线粒体细胞内氧化应激的平衡会影响线粒体DNA(mt DNA)的生物合成,导致mt DNA突变和水平的改变,线粒体基因突变导致三羧酸循环障碍,引起胰岛β细胞分泌胰岛素不足导致糖尿病。同一个体不同组织mt DNA的水平不同,外周血mt DNA水平的改变与2型糖尿病的关系尚无定论。该文将探讨mt DNA突变的研究进展,mt DNA单倍群涉及糖尿病及其并发症的病理学,以线粒体为靶向位点的药物或者治疗对于预防和治疗2型糖尿病具有巨大潜力。     

转线粒体小鼠的研究进展

线粒体转移技术的发展和成熟使得我们业已成功的建立了转线粒体小鼠动物模型。目前常用的方法主要有:一是直接应用显微注射技术将活的线粒体转入小鼠胚胎;二是通过脱核胞质体与胚胎干细胞融合,再将胚胎干细胞显微注入小鼠囊胚,从而形成嵌和鼠;三是将脱核胞质体与小鼠胚胎直接融合而产生的转线粒体小鼠。随着越来越多线粒体相关疾病的发现,各种不同线粒体疾病的转线粒体小鼠的开发具有十分重要的应用价值和广阔的研究前景。     

线粒体DNA与帕金森病的研究进展

帕金森病是一种常见的神经退行性疾病,其发病机制尚未完全阐明.近年来,越来越多的研究表明线粒体DNA突变在帕金森病发病中扮演着重要的角色,改善线粒体功能为帕金森病的防治带来了新的思路.     

细菌质粒DNA基因的研究进展

细菌质粒是细菌染色体外的遗传物质,以超螺旋状态存在于宿主细胞胞浆中.它具有自主复制和转录能力,质粒的复制和转录依赖于宿主细胞编码的某些酶和蛋白质.最常用的质粒是大肠杆菌的质粒[1].现就细菌质粒DNA的种类、特性、复制的类型、常用的载体,以及细菌质粒DNA的制备、分离、提取、纯化、鉴定和保存方法综述如下.     

一种改进的提取人外周血和组织线粒体DNA的方法

目的：建立一种简便、快捷地从人外周血和组织中制备高质量线粒体DNA的方法。方法：以差速离心法分离线粒体,用碱性SDS法裂解线粒体膜,释放线粒体DNA后用酚／氯仿抽提,TE或ddH2O溶解。然后将所得线粒体DNA进行纯度鉴定并和其他现有方法制备的线粒体DNA用PCR进行长片段扩增,比较扩增效果。结果：用改进的方法制备的线粒体DNA中没有检测到核DNA,并能有效扩增8kb长的目的片段。结论：改进后的方法简便、快捷,制备的线粒体DNA纯度高,也有利于长片段PCR扩增。     

线粒体DNA拷贝数变异机制研究进展

前人关于线粒体遗传性疾病已进行了大量的研究。近年来,有关线粒体DNA突变与肿瘤发生关系的研究吸引了众多研究者的兴趣,前者有可能成为一种新的肿瘤标记物。除了对常规的单碱基突变(单核苷酸多态性)和大片段缺失或重排进行检测外,细胞器内线粒体DNA数量的变化作为突变的一个重要方面则往往为研究者所忽略。本文对影响线粒体基因组复制及拷贝数变化的因素和对线粒体DNA拷贝数变化在肿瘤发病机制研究中的意义进行了综述。     

淋巴瘤组织中线粒体DNA突变的研究

目的 通过检测恶性淋巴瘤组织中线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)的突变,以探讨mtDNA突变在恶性淋巴瘤发生中的作用.方法 提取38例恶性淋巴瘤组织及其对应患者外周血白细胞的DNA,经PCR扩增部分mtDNA片段,PCR产物直接测序法测定mtDNA序列.以外周血淋巴细胞测序结果作为对照,确定肿瘤组织mtDNA的突变.结果 18例(47.4%)恶性淋巴瘤组织中发现25个突变,25个突变发生在15个核苷酸位点,其中21个突变位于mtDNA的D-Loop区,4个突变位于mtDNA的编码区,D-Loop发生变异的频率是编码区的4.26倍.13个(13/25,52%)突变位于mtDNA多态性位点.结论 恶性淋巴瘤组织中存在mtDNA的突变,mtDNA突变可能与淋巴瘤的发生、进展有一定关系.     

线粒体DNA与2型糖尿病关系的研究进展

2型糖尿病(T2D)是最常见的糖尿病类型,其通常以胰岛素抵抗为特征,由两个主要因素共同引起：胰腺β细胞的胰岛素分泌减少和机体产生胰岛素抵抗。在过去几十年的研究中,越来越多的证据表明线粒体DNA(MtDNA)在T2D的发生中具有重要作用。在这篇综述中,我们重点介绍了MtDNA拷贝数、MtDNA异质性和MtDNA甲基化在T2D发生和发展中的各种作用。     

线粒体DNA拷贝数的研究新进展

线粒体DNA(mtDNA)拷贝数是mtDNA在线粒体基因组中的个数,目前存在几种mtDNA拷贝数调控模式假说。mtDNA拷贝数受线粒体转录因子A、同源重组修复蛋白Rad51、DNA聚合酶γ等调控。氧化应激对mtDNA拷贝数的影响与其对mtDNA的损伤程度有关,呈双向调节作用。近年来研究发现,mtDNA拷贝数变化与骨质疏松、糖尿病、心血管疾病、肿瘤等多种疾病的发生、发展有一定的相关性,且在不同疾病或疾病发展的不同阶段变化不同。     

线粒体DNA异质性检测方法的研究进展

目的探讨线粒体DNA异质性检测方法在法医学中的应用进展。方法本文就线粒体DNA异质性检测方法及研究等进行综合评述。结果mtDNA呈母系遗传,加之其拷贝数多、突变率高、抗腐败能力强。故mtDNA具有极高的法医学应用价值。随着相关技术的发展,有很多文献报道在非编码区检出异质性,并且以一定的频率存在于正常人群中,因此必须正确评估mtDNA在法医常规检案工作中的重要性。结论异质性的检出在很大程度上依赖检测方法的灵敏度,所以选择检出方法就显得非常重要。