肾上腺髓质素对大鼠血管钙化的影响

目的　观察肾上腺髓质素 (ADM)对血管钙化的影响。方法　维生素D3 (VitD3 )和尼古丁制备大鼠血管钙化模型 ,分别测定血管、心肌钙含量和血管碱性磷酸酶 (ALP)活性 ,血浆和血管ADM含量 ,12 5I ADM与ADM受体的结合力及血管环磷酸腺苷 (cAMP)含量。结果　与对照组相比 ,钙化组 (VDN组 )的血管钙含量和ALP活性明显升高 ;血管及血浆ADM的含量亦升高 ,但12 5I ADM与血管质膜ADM受体结合的位点减少 ,Kd值升高 ,提示亲合力降低 ,同时伴钙化血管的cAMP合成减少。提示钙化血管对ADM的反应减弱。空载脂质体对血管钙化无影响。用脂质体包裹ADM组 (VDN ADM组 )与钙化组相比 ,其血管的钙含量、ALP的活性均明显降低 ;12 5　I ADM与血管质膜ADM受体结合的位点增加 ,Kd值减少 ,cAMP的合成也增加 ,提示该组血管对ADM的反应增强。结论　血管钙化时ADM ADM受体 cAMP途径发生变化 ,外源性ADM通过改善ADM ADM受体 cAMP途径 ,发挥抑制血管钙化的作用     

钙化血管平滑肌细胞肾上腺髓质素及其受体系统的基因表达上调

探讨钙化的血管平滑肌细胞肾上腺髓质素生成和肾上腺髓质素受体系统一降钙素受体样受体和受体活性修饰蛋白基因表达的改变及其病理意义。采用β-甘油磷酸盐诱导培养的大鼠血管平滑肌细胞钙化;放射免疫法测定血管平滑肌细胞分泌的肾上腺髓质素含量;半定量逆转录聚合酶链反应测定细胞肾上腺髓质素、降钙素受体样受体和受体活性修饰蛋白的mRNA水平;原子吸收分光光度计测定细胞钙含量;碱性磷酸酶试剂盒测定血管平滑肌细胞碱性磷酸酶活性;β液体闪烁计数仪测定45Ca2+放射活性。结果发现,与非钙化血管平滑肌细胞比较,钙化血管平滑肌细胞内钙含量、45Ca2+摄入及碱性磷酸酶活性分别增加118％、174％和7倍(P<0.01);钙化细胞肾上腺髓质素分泌量增高99％(P<0.01),肾上腺髓质素、降钙素受体样受体、受体活性修饰蛋白2和3的mRNA水平分别增加78％、93.7％、91.8％和109.5％(P均<0.01)。肾上腺髓质素与降钙素受体样受体、受体活性修饰蛋白2和3的mRNA水平呈正相关,其相关系数分别为0.83、0.92和0.93(P均<0.01)。结果提示,血管平滑肌细胞肾上腺髓质素 旁/自分泌功能改变可能参与血管钙化的调节过程。     

慢性应激刺激致高血压大鼠下丘脑肾上腺髓质素特异性受体组件基因表达变化

目的探讨慢性应激致高血压过程中肾上腺髓质素特异性受体组件降钙素受体样受体、受体活性修饰蛋白2和受体活性修饰蛋白3在下丘脑的动态变化。方法将48只大鼠分为对照组(18只)和应激组(30只),应激组给予噪声加足底电击刺激,分别在刺激开始后的第1、5、10和第15d以及停止刺激后的第5和第10d处死动物,分离下丘脑,抽提总RNA,用逆转录聚合酶链式反应检测降钙素受体样受体、受体活性修饰蛋白2和受体活性修饰蛋白3的基因表达变化。结果与对照组相比较,应激组动物降钙素受体样受体基因表达10d内逐渐上调(1.236±0.040比0.941±0.041,P<0.01),而后表达下调,在应激第15d明显低于于对照组(0.860±0.041比0.938±0.042,P<0.05)。受体活性修饰蛋白2mRNA表达在应激第1和第5d显著升高(0.975±0.023比0.880±0.035和1.160±0.045比0.897±0.036,P<0.05或P<0.01),在第5d达到高峰,而后开始下调,在应激第15d和应激结束后5d低于对照组(0.670±0.021比0.897±0.041,0.719±0.039比0.910±0.032,P<0.01)。受体活性修饰蛋白3mRNA表达在应激第1d显著升高(1.197±0.053比0.870±0.039,P<0.01),而后开始逐渐下调,在应激第10、15d后开始明显低于对照组的表达水平(P<0.05或P<0.01)。应激结束后10d受体活性修饰蛋白3mRNA表达水平仍低于对照组,但无统计学差异。结论慢性应激所致血压升高变化过程中伴随下丘脑中肾上腺髓质素特异性受体组件mRNA表达的不同时段特异性改变,提示其可能参与应激致高血压过程。     

慢性应刺激致高血压大鼠下丘脑肾上腺髓质素特异性受体组件基因表达变化

目的 探讨慢性应激致高血压过程中肾上腺髓质素特异性受体组件降钙素受体样受体、受体活性修饰蛋白2和受体活性修饰蛋白3在下丘脑的动态变化.方法 将48只大鼠分为对照组(18只)和应激组(30只),应激组给予噪声加足底电击刺激,分别在刺激开始后的第1、5、10和第15 d以及停止刺激后的第5和第10 d处死动物,分离下丘脑,抽提总RNA,用逆转录聚合酶链式反应检测降钙素受体样受体、受体活性修饰蛋白2和受体活性修饰蛋白3的基因表达变化.结果 与对照组相比较,应激组动物降钙素受体样受体基因表达10 d内逐渐上调(1.236±0.040 比 0.941±0.041,P<0.01),而后表达下调,在应激第15 d明显低于于对照组(0.860±0.041比0.938±0.042,P<0.05).受体活性修饰蛋白2 mRNA表达在应激第1和第5 d显著升高(0.975±0.023比0.880±0.035和1.160±0.045比0.897±0.036,P<0.05或P<0.01),在第5 d达到高峰,而后开始下调,在应激第15 d和应激结束后5 d低于对照组(0.670±0.021比0.897±0.041,0.719±0.039比0.910±0.032,P<0.01).受体活性修饰蛋白3 mRNA表达在应激第1 d显著升高(1.197±0.053比0.870±0.039,P<0.01),而后开始逐渐下调,在应激第10、15 d后开始明显低于对照组的表达水平(P<0.05或P<0.01).应激结束后10 d受体活性修饰蛋白3 mRNA表达水平仍低于对照组,但无统计学差异.结论慢性应激所致血压升高变化过程中伴随下丘脑中肾上腺髓质素特异性受体组件mRNA表达的不同时段特异性改变,提示其可能参与应激致高血压过程.     

肾上腺髓质素受体及其在肾脏中的表达和调节

肾上腺髓质素(AM)是一种生物活性多肽,可以与降钙素基因相关肽受体、降钙素受体样受体和孤儿G蛋白偶联受体RDC-1、L1作用,这些受体活化后可通过激活cAMP、一氧化氮合酶等多种信号转导通路实现生理功能。近年有文献报道,肾脏疾病明显影响肾脏中AM受体——主要是受体活性修饰蛋白的表达和调节,研究其病理生理作用和机制对临床肾病的诊疗、防治及新型药物的研发具有十分重要的作用。     

支气管哮喘豚鼠肺内肾上腺髓质素和受体表达及地塞米松的影响

肾上腺髓质素(ADM)是从肾上腺嗜铬细胞瘤中分离出的一种新的生物活性肽…，具有舒张血管、扩张支气管等多种作用^[2]。支气管哮喘(简称哮喘)发作时ADM及其受体(ADMR)基因表达过程仍未明确，我们的研究旨在观察哮喘豚鼠肺内ADM／ADMR基因的表达以及是否受糖皮质激素的调控。     

自发性高血压大鼠心血管组织中肾上腺髓质素2受体系统的变化

目的:探讨自发性高血压大鼠(SHR)心血管组织中肾上腺髓质素2(ADM2)及其受体系统的基因表达和蛋白水平变化,以及与ADM2血浆水平的相互关系.方法:8只11周龄的雄性SHR(SHR组),8只同龄的雄性Wistar Kyoto大鼠(WKY组).半定量RT-PCR方法测定大鼠心血管组织中ADM2及其受体系统降钙素受体样受体(CRLR)和受体活性修饰蛋白(RAMPs)mRNA水平;Western blot法测定心血管组织中CRLR和RAMPs的蛋白含量;放射免疫法测定血浆中ADM2含量.结果:①SHR心肌中ADM2、CRLR、RAMP1、RAMP2和RAMP3的mRNA水平较WKY组分别高76.1%、41.6%、69.2%、48.3%和109.1%(均P＜0.05);主动脉中分别高171.11%(P＜0.01)、69.9%(P＜0.05)、100.09%(P＜0.01)、131.8 0%和69.7%(均P＜0.05).②SHR心肌中CRLR、RAMP1和RAMP3的蛋白水平较WKY组分别高136.0%、60.3%、63.9%(均P＜0.05),而RAMP2则显著增高292.5%(P＜0.01);SHR主动脉中CRLR、RAMP1、RAMP2和RAMP3的蛋白水平较WKY组分别高112.4%、92.3%、41.1%和67.7%(均P＜0.01).③SHR的ADM2血浆含量和受体的蛋白水平-CRLR、RAMP1、RAMP2在主动脉中的含量呈显著正相关(r=0.883 8,0.929 9,0.888 1,均P＜0.05).结论:ADM2及其受体系统在原发性高血压的发生发展过程中可能具有重要的病理生理意义.     

肾上腺髓质素与高血压的研究进展

肾上腺髓质素是一种具有多种生物学特性的血管活性多肽 ,在高血压的发生发展中起着重要的作用。其作用机制主要有 :维持体液的平衡 ,参与血管内皮NO系统的调节以及抑制氧化应力等。     

肾上腺髓质素和心力衰竭

肾上腺髓质素是近年来发现的具有众多生物学功能的血管活性多肽,在体内组织器官分布广泛,对心血管系统作用明显,其强大的扩血管、降低血压、排钠利尿、减轻心脏前后负荷的生物学作用决定了在心力衰竭的发生发展和治疗中可能具有重要的临床意义。本文了肾上腺髓质素分子生物学特性、对小血管系统的生理作用和在心力衰竭的病理代偿调节作用。     

冠心病患者血浆肾上腺髓质素与内皮素的变化

目的探讨冠心病患者血浆肾上腺髓质素(ADM)、内皮素(ET-1)含量的变化及其与心功能的关系.方法应用放射免疫法测定92例冠心病患者和30名正常对照者(对照组)血浆ADM和ET-1水平,同时用彩色超声心动图测定40例急性心肌梗塞患者(AMI组)的左心室射血分数.结果冠心病各组血浆ADM水平均高于对照组(P<0.05);AMI组血浆ADM显著高于不稳定性心绞痛组(UA组)和稳定性心绞痛组(SA组)(P<0.05),而UA组与SA组比较差异无显著性(P>0.05),AMI患者按心功能分组,各组间血浆ADM差异有显著性(P<0.05).血浆ADM水平与ET-1呈显著正相关(r=0.5743,P<0.01);AMI组血浆ADM水平与左心室射血分数呈显著负相关(r=-0.6152,P<0.01).结论 ADM参与了冠心病及心力衰竭的病理生理过程,血浆ADM升高可能与ET-1升高有关.     

Involvement of Protein Kinase C in Ethanol-Induced Inhibition of NMDA Receptor Function in Cerebellar Granule Cells

Ethanol inhibits N -methyl- d -aspartate (NMDA)-stimulated increases in intracellular Ca²⁺ in cerebellar granule cells apparently by reducing the potency of glycine to act as a co-agonist at the NMDA receptor. The inhibitory effect of ethanol on the NMDA response in these cells can be reversed not only by a high concentration of glycine, but also by the protein kinase inhibitors, staurosporine and calphostin C. We previously showed that activation of protein kinase C in cerebellar granule cells also resulted in inhibition of the NMDA response, and in decreased potency of glycine at the NMDA receptor. Furthermore, the inhibitory effects of ethanol and protein kinase C activation are not additive. These results suggest a role for protein kinase C in ethanol inhibition of NMDA responses in cerebellar granule cells. In contrast, although ethanol can inhibit the response to kainate in these cells in a "competitive" manner, this response is not affected by activation of protein kinase C.     

葛根素对血管平滑肌细胞增殖及Bcl-2蛋白和凝血酶受体mRNA表达的影响

目的观察葛根素对凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖及Bcl-2蛋白和凝血酶受体mRNA表达的影响,旨在认识葛根素作用的分子机制。方法以细胞计数法和流式细胞仪DNA含量测定,细胞周期分析法观察凝血酶及葛根素对血管平滑肌细胞增殖和DNA合成的影响。凝血酶及葛根素等各处理因素作用24 h后,用免疫印迹法检测Bcl-2蛋白表达,以半定量逆转录聚合酶链反应检测凝血酶受体mRNA的表达。结果凝血酶对血管平滑肌细胞有明显促增殖作用,促增殖效应在24 h末达峰值,且凝血酶浓度在0.1~1.0 u/L之间有剂量依赖关系;葛根素呈剂量依赖性地抑制凝血酶诱导的细胞增殖、DNA合成及血管平滑肌细胞Bcl-2蛋白的表达;高浓度(1.5×10-3mol/L)葛根素可显著抑制凝血酶诱导的凝血酶受体mRNA上调。结论葛根素能抑制凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖,这可能与其抑制Bcl-2蛋白有关,并部分与其抑制凝血酶受体mRNA表达有关。     

肾上腺髓质素及其受体系统抑制溶血磷脂酸诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖

目的观察溶血磷脂酸对肾上腺髓质素及其受体系统生成的影响和肾上腺髓质素在溶血磷脂酸促进血管平滑肌细胞增殖中的作用。方法贴块法培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,H3-TdR掺入测定血管平滑肌细胞DNA合成,γ-32P-ATP标记的同位素法测定丝裂原活化蛋白激酶活性,放射免疫法测定血管平滑肌细胞中肾上腺髓质素的含量。结果溶血磷脂酸促进大鼠血管平滑肌细胞肾上腺髓质素生成,上调血管平滑肌细胞肾上腺髓质素及其受体CRLR、RAMP2和RAMP3mRNA表达;肾上腺髓质素可抑制溶血磷脂酸刺激大鼠血管平滑肌细胞3H-TdR掺入,抑制溶血磷脂酸诱导的丝裂原活化蛋白激酶激活。结论溶血磷脂酸上调血管平滑肌细胞肾上腺髓质素及其受体系统,肾上腺髓质素及其受体抑制血管平滑肌细胞增殖的作用与其抑制丝裂原活化蛋白激酶激活有关。     

慢性应激刺激致高血压大鼠下丘脑肾上腺髓质素和降钙素受体样受体基因表达改变

为探讨慢性应激刺激致高血压过程中肾上腺髓质素及其特异性受体组件降钙素受体样受体在下丘脑的动态变化。将48只大鼠分为对照组(18只)和应激组(30只),应激组给予噪声或噪声加足底电击刺激,分别在刺激开始后的第1、5、10和第15天,以及停止刺激后的第5和第10天,处死动物,分离下丘脑,抽提总RNA,用逆转录聚合酶链反应检测肾上腺髓质素和降钙素受体样受体基因表达变化。结果发现,与对照组比较,肾上腺髓质素mRNA表达在应激刺激10天内逐渐上调(第5天0.92±0.04比0.99±0.05,P<0.05;第10天1.26±0.04比0,92±0.04,P<0.01);而后表达下调,在应激刺激第15天仍高于对照组(1.00±0.04比0.92±0.04,P<0.05);应激刺激结束后第5天表达弱高于对照组,但无统计学差异。降钙素受体样受体mRNA表达和肾上腺髓质素mRNA表达趋势大致相同。实验结果说明,下丘脑中肾上腺髓质素及降钙素受体样受体mRNA表达在一定程度上与慢性应激所致血压升高变化过程一致,提示其可能参与应激致高血压过程。     

急性心肌梗死伴2型糖尿病患者内皮祖细胞动员障碍

目的观察急性心肌梗死伴2型糖尿病患者血浆缺血相关因子血管内皮生长因子和基质细胞衍生因子水平,骨髓内皮祖细胞动员是否存在障碍,以及基质细胞衍生因子、血管内皮生长因子-内皮祖细胞动员通路是否存在异常。方法采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,用流式细胞仪检测急性心肌梗死后不同时间点(1、3、5、7、14和28天)外周血CD45-/low /CD34 /CD133 /KDR 早期内皮祖细胞数量。酶联免疫吸附法检测血浆中血管内皮生长因子、基质细胞衍生因子以及高敏C反应蛋白的浓度。结果急性心肌梗死伴2型糖尿病患者外周血内皮祖细胞动员高峰(第7天)较急性心肌梗死非糖尿病患者(第5天)延迟且显著减少[(140±48)/106比(246±100)/106,P<0.05]。糖尿病组血浆血管内皮生长因子(第5天:277±95ng/L比168±35ng/L,P<0.05)、基质细胞衍生因子(第5天:3835±402ng/L比3287±384ng/L,P<0.05)以及高敏C反应蛋白(第3天:55.55±14.88mg/L比36.92±14.83mg/L,P<0.05)在高峰点的水平显著高于非糖尿病组。结论糖尿病患者心肌梗死后组织缺血程度较重,但组织缺血后基质细胞衍生因子、血管内皮生长因子-内皮祖细胞动员通路存在障碍,这可能是糖尿病患者缺血后血管新生功能障碍,发生急性心肌梗死后预后较差的原因之一。     

骨髓间充质干细胞移植对心肌缺血/再灌注大鼠心肌胶原与血管新生的影响

目的通过心肌缺血/再灌注模型观察大鼠骨髓间充质干细胞心肌移植对心肌细胞外胶原、小血管新生和心功能变化的影响,并探讨其机制。方法分离、原代培养Wistar大鼠骨髓间充质干细胞,建立缺血/再灌注动物模型,分为假手术组、心肌梗死 骨髓间充质干细胞移植组、心肌梗死对照组,观察骨髓间充质干细胞移植后动物模型血流动力学指标、心肌梗死面积和心肌细胞形态、心肌间质、血管密度、心室膨展指数、心肌细胞横截面积和心肌胶原变化。结果(1)骨髓间充质干细胞心肌移植可缩小60min缺血/再灌注大鼠28d心肌梗死面积;(2)骨髓间充质干细胞移植可减轻心肌梗死动物左心室重塑,但心功能改善作用不明显;(3)骨髓间充质干细胞移植发挥细胞外基质抑制、促血管生成作用,心肌间质胶原含量、胶原分数下降,心肌毛细血管、小动脉密度增加。结论骨髓间充质干细胞移植可改善心肌梗死后心室重塑、促进血管新生和降低心肌胶原作用。     

瑞舒伐他汀抑制C反应蛋白诱导的血管内皮细胞血小板反应蛋白1 mRNA表达

目的 研究瑞舒伐他汀对C反应蛋白诱导的人血管内皮细胞血小板反应蛋白1表达的影响.方法 体外培养人血管内皮细胞,ELISA和RT-PCR检测C反应蛋白对血管内皮细胞血小板反应蛋白1表达的剂量与时间效应.Western blotting检测信号蛋白p38MAPK的表达水平.结果 C反应蛋白以剂量和时间依赖方式显著增加血管内皮细胞血小板反应蛋白1 mRNA表达,p38MAPK表达增加,其抑制剂SB203580减少p38MAPK的磷酸化及血小板反应蛋白1 mRNA表达水平,瑞舒伐他汀显著抑制p38MAPK表达及血小板反应蛋白1 mRNA和蛋白的表达.结论 C反应蛋白至少通过p38MAPK磷酸化途径直接诱导血管内皮细胞血小板反应蛋白1表达,促进细胞炎症反应,而瑞舒伐他汀抑制C反应蛋白的这种效应.