长链非编码RNA癌症易感性候选物2与印记基因H19在肝外胆管癌中差异表达的分析

目的 探讨肝外胆管癌(ECC)中长链非编码RNA(lncRNA)癌症易感性候选物2(CASC2)和印记基因H19表达及其潜在的功能作用。方法 收集ECC患者样本4例,基于高通量测序技术进行转录组测序,分析lncRNA CASC2和H19的表达模式,并基于生物信息学方法预测潜在功能。另取22例ECC组织样本和不同分化程度的胆管癌细胞株(RBE、QBC939、HuH-28、HuCCT1)进行验证,分别以癌旁组织和正常胆管上皮细胞(HIBEC)作为对照,应用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法分别检测癌组织、癌旁组织与细胞系中lncRNA CASC2和H19的表达水平。汇总患者临床指标并结合目标基因的差异表达进行相关性分析。结果 4对ECC癌组织与癌旁组织中lncRNA CASC2和H19的表达差异有统计学意义(P均<0.05)。qRT-PCR结果显示,lncRNA CASC2在ECC癌组织中表达水平明显高于癌旁组织(t=1.262,P=0.025),而lncRNA H19在ECC癌组织中表达水平明显低于癌旁组织(t=1.285,P=0.005);细胞系QBC939(t=8.1...     

乳腺癌组织lncRNA CASC2、miR-532-3p表达水平与患者术后5年内生存的相关性

目的 探究乳腺癌(BC)组织长链非编码RNA癌易感性候选基因2(lncRNA CASC2)、微小RNA-532-3p(miR-532-3p)表达与患者术后5年内生存的相关性。方法 选择2015年1月—2018年6月大同市第五人民医院普通外科收治BC患者127例,术中收集BC组织及癌旁正常组织,荧光定量PCR法检测BC组织和癌旁正常组织中lncRNA CASC2、miR-532-3p表达;对BC患者术后进行为期5年的随访,记录患者5年内生存和死亡情况。比较癌旁正常组织和BC组织lncRNA CASC2及miR-532-3p表达,BC组织中lncRNA CASC2和miR-532-3p表达在不同临床病理特征中的差异,生存组和死亡组临床病理特征和BC组织中lncRNA CASC2及miR-532-3p表达的差异。分析BC组织lncRNA CASC2、miR-532-3p表达的相关性;BC组织中lncRNA CASC2和miR-532-3p表达与术后5年内生存的关系;影响BC患者术后5年内生存的因素;lncRNA CASC2、miR-532-3p对BC患者术后5年内生存的预测价值。结果 BC组...     

原发性肝癌中AnnexinA2和P19的表达及意义

目的检测AnnexinA2和P19在原发性肝癌中的表达并探讨其在肝癌发生发展及转移中的作用。方法原发性肝癌62例,分别取癌组织及癌旁肝组织,采用IHC、RT-PCR及Western blot法分别检测AnnexinA2和P19 mRNA及蛋白的表达。结果肝癌组织中AnnexinA2 mRNA及蛋白表达量均明显高于癌旁肝组织(P<0.05),肝癌组织中P19 mRNA及蛋白表达量均明显低于癌旁肝组织(P<0.05);AnnexinA2、P19阳性表达与肝癌患者的性别、年龄和肿瘤大小均无关(P>0.05),而与乙肝表面抗原、组织分级和脉管内有无癌栓均有关(P<0.05)。结论联合检测AnnexinA2、P19 mRNA及蛋白在原发性肝癌中的表达水平,对判断其发生和转移有重要价值,可为临床治疗和判断预后提供依据。     

Pyk2、Twist及MMP-7在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的:检测肝癌组织中富含脯氨酸的酪氨酸蛋白激酶2(proline-rich tyrosine kinase-2,Pyk2)、Twist和基质金属蛋白酶-7(MMP-7)的表达,并分析它们相互之间的关系及其临床意义。方法:应用免疫组织化学法检测80例肝癌组织及癌旁肝组织中Pyk2、Twist及MMP-7蛋白的表达情况,分析其与临床病理因素的关系。结果:Pyk2在肝癌组织及癌旁肝组织中的阳性表达率分别为71.3%、12.0%,差异有统计学意义(P0.05);Twist在肝癌组织及癌旁肝组织中的阳性表达率分别为66.3%、6.0%,差异有统计学意义(P0.05);MMP-7在肝癌组织及癌旁肝组织中的阳性表达率分别为68.8%、8.0%,差异有统计学意义(P0.05)。Pyk2阳性表达与肝癌病理分级、分化程度、血管侵犯及TNM分期明显相关(P0.05),Twist阳性表达与肝癌病理分级、分化程度、血管侵犯及TNM分期明显相关(P0.05),MMP-7阳性表达与肝癌病理分级、分化程度、血管侵犯及TNM分期明显相关(P0.05)。肝癌组织中,Pyk2与Twist表达呈正相关(P0.05),Pyk2和MMP-7表达亦呈正相关(P0.05),Twist和MMP-7表达亦呈正相关(P0.05)。结论:Pyk2、Twist和MMP-7蛋白的表达水平在肝癌组织中与肿瘤组织的分化程度、病理分级、血管侵犯及临床TNM分期等均有关。因此,临床联合检测Pyk2、Twist和MMP-7对肝癌患者的预后判断具有重要意义。     

miR-148b-3p通过调节脂代谢基因对肝癌细胞恶性生物学行为的影响

目的 探讨miR-148b-3p通过调节脂代谢基因对肝癌细胞增殖、转移及侵袭能力等恶性生物学行为的影响。方法 通过癌症和肿瘤基因图谱(TCGA)数据库寻找miR-148b-3p、肝癌及脂代谢三者的交集基因,筛选miR-148b-3p治疗肝癌的潜在靶点基因;采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-148b-3p在正常肝脏细胞LO2和肝癌细胞Huh7、Hep1中的表达水平,选取miR-148b-3p表达量最低的细胞Huh7作为研究对象;Huh7肝癌细胞分为对照组(转染miR-148b-3p NC)和实验组(转染miR-148b-3p mimics),CCK8实验和克隆形成实验、划痕实验、Transwell实验、以及油红O染色分别检测两组肝癌细胞的增值、迁移、侵袭能力及脂滴形成情况,采用RT-PCR和Western blot检测交集基因及脂肪生成指标基因FASN、PPAR-γ及SCD1的mRNA和蛋白表达水平。结果 miR-148b-3p在Huh7细胞中mRNA相对表达量显著低于Hep1细胞(P<0.01)和LO2细胞(P<0.001);与对照组相比,实验组H...     

肝癌组织miR-146b-5p和miR-134的表达下调及临床意义

目的 探讨微小RNA(miR)-146b-5p和miR-134在肝癌组织中的表达及其临床病理意义.方法 选取2017年6月～2018年12月我院收治的原发性肝癌患者73例,取患者的原发肿瘤组织为观察组,同时选取相对应的癌旁正常组织标本为对照组.采用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测癌组织和癌旁正常组织中miR-...     

原发性肝癌中AnnexinA2和P19的表达及意义

目的检测AnnexinA2和P19在原发性肝癌中的表达并探讨其在肝癌发生发展及转移中的作用。方法原发性肝癌62例,分别取癌组织及癌旁肝组织,采用IHC、RT-PCR及Western blot法分别检测AnnexinA2和P19 mRNA及蛋白的表达。结果肝癌组织中AnnexinA2 mRNA及蛋白表达量均明显高于癌旁肝组织（P〈0.05）,肝癌组织中P19 mRNA及蛋白表达量均明显低于癌旁肝组织（P〈0.05）;AnnexinA2、P19阳性表达与肝癌患者的性别、年龄和肿瘤大小均无关（P〉0.05）,而与乙肝表面抗原、组织分级和脉管内有无癌栓均有关（P〈0.05）。结论联合检测AnnexinA2、P19 mRNA及蛋白在原发性肝癌中的表达水平,对判断其发生和转移有重要价值,可为临床治疗和判断预后提供依据。     

lncRNA CASC2通过调控miR-218-5p表达对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞炎症反应及迁移与侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA肿瘤易感候选基因2(CASC2)对类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞炎症反应、迁移及侵袭的影响及其机制。方法 收集45例RA患者滑膜组织和18例健康对照者滑膜组织，采用qRT-PCR检测滑膜组织中CASC2和miR-218-5p的表达水平。ENCORI在线软件预测和双荧光素酶报告实验分析CASC2和miR-218-5p的靶向相互作用。将CASC2过表达质粒及miR-218-5p mimic转染至人RA滑膜成纤维细胞系MH7A中，qRT-PCR检测细胞中CASC2和miR-218-5p表达水平；CCK-8检测细胞的增殖水平；ELISA检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)水平；Transwell检测细胞迁移和侵袭能力；Western blot检测基质金属酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达水平。结果 RA患者滑膜组织中CASC2表达水平较健康对照者滑膜组织减少(P<0.05),而miR-218-5p表达水平则增加(P<0.05)。双荧光素酶报告实验结果显示，CASC2与miR-218...     

LncRNA CASC15通过miR-153-3p/Nrf2反馈环调控胃癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化

目的:探讨LncRNA CASC15通过miR-153-3p/Nrf2反馈环对SGC-7901细胞增殖、侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响.方法:采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法分析胃癌组织、癌旁正常组织、SGC-7901细胞、GES-1细胞中LncRNA CASC15、miR-153-3p和Nrf2的表达量...     

lncRNA CASC9通过调控miR-424-5p/SOX9分子轴对食管鳞状细胞癌细胞恶性生物学行为的影响

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)癌症易感性候选基因9(CASC9)通过调控miR-424-5p/SOX9分子轴对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞恶性生物学行为的影响.方法 采用RT-qPCR检测CASC9在食管鳞状细胞癌组织、配对癌旁组织、食管鳞状细胞癌细胞系(KYSE450、KYSE150、EC190、EC9...     

PDSS2在肝细胞癌中的表达及对肝癌细胞生长和侵袭的影响

目的探讨异戊二烯基二磷酸合酶第二亚基(PDSS2)在肝细胞癌组织及肝癌细胞株中的表达水平变化及对肝癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法采用定量RT-PCR检测肝细胞癌组织、癌旁非癌肝组织、正常肝组织以及肝癌细胞株、正常肝细胞株PDSS2 m RNA表达水平,并分析肝细胞癌组织PDSS2 m RNA表达水平与患者临床病理特征的关系。将PDSS2表达质粒、阴性对照质粒分别转染Huh7肝癌细胞(另设空白对照,即未处理的Huh7细胞),并用MTT法检测Huh7肝癌细胞增殖能力变化,流式细胞术检测凋亡变化,Transwell法检测迁移及侵袭能力变化。结果肝细胞癌组织PDSS2 m RNA表达水平明显低于配对的癌旁非癌肝组织及正常成人肝组织,配对的癌旁非癌肝组织PDSS2 m RNA的表达水平也明显低于正常成人肝组织(P0.05);Huh7、Hep3B和Bel-7402肝癌细胞PDSS2 m RNA表达水平均明显低于HL-7702正常肝细胞。与高表达PDSS2 m RNA者比较,低表达PDSS2m RNA的肝癌患者中其癌组织分化程度较差者(Edmondson gradeⅢ-Ⅳ)比例及存在门静脉癌栓者比例均较高;而肝细胞癌组织PDSS2 m RNA表达水平与其他临床病理参数之间,包括年龄、性别、肿瘤大小、甲胎蛋白水平均无明显相关性。与空白及阴性对照组比较,转染pc DNA3.1-PDSS2质粒的Huh7肝癌细胞增殖活性明显降低,细胞凋亡显著增加,细胞迁移和侵袭能力明显受到抑制。结论 PDSS2其表达下调参与肝细胞癌的发生发展,并且与肝细胞癌的恶性生物学特征相关;上调PDSS2表达可以抑制肝癌细胞生长和侵袭能力,PDSS2可能成为潜在的基因治疗靶点。     

原发性肝细胞癌中雌激素受体α与β的表达及临床意义

目的 :研究雌激素受体 ( ER) α与 β在原发性肝细胞癌中的表达水平及分布规律。方法 :用免疫组织化学方法检测了 63例原发性肝细胞癌及 63例非肝癌肝组织的 ERα与 ERβ的表达。结果 :原发性肝细胞癌中 ERα与 ERβ的阳性率分别为 2 7% ( Edmondson分级 级的肝癌为 2 3%、 级为 2 8%、 级为 2 9% )和 1 3% ( Edmondson分级 级的肝癌为31 %、 级为 8%、 级为 7% ) ,非肝癌肝组织中 ERα与 ERβ的阳性率分别为 32 % (肝硬化 :30 %、肝海绵状血管瘤 :32 %、正常肝组织 :5 0 % )和 2 9% (肝硬化 :30 %、肝海绵状血管瘤 :2 6%、正常肝组织 :2 5 % )。肝癌与非癌肝组织比较 ERα阳性率无显著差异 ( P>0 .0 5 ) ,但ERβ阳性率有显著意义 ( P<0 .0 5 ) ;Edmondson分级 级的肝癌 ERβ的阳性率与 、 级肝癌比较 ,统计学差异有显著性 ( P<0 .0 5 ) ;肝癌组内 ERα阳性较 ERβ有显著差异 ( P<0 .0 5 )。结论 :原发性肝细胞癌可能具有一定的激素依赖性 ,肝癌的发生、发展及预后可能与ERα的表达无关 ,但与肝癌组织中 ERβ含量的降低有关     

MALAT1调控 miR-19b-3p/HIF-1α分子轴参与非小细胞肺癌的发生发展

摘要:目的 探讨 MALAT1调控 miR-19b-3p/HIF-1α影响非小细胞肺癌(NSCLC)的发病机制。方法 采用实时 荧光定量 PCR(qRT-PCR)检测 MALAT1、miR-19b-3p在 NSCLC 肺癌组织和 NSCLC 细胞系中的表达水平。过表达 miR-19b-3p和敲除 MALAT1后,采用qRT-PCR和 Westernblot检测 A549细胞中 MALAT1、miR-19b-3p、缺氧诱导因 子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)表达水平的变化。采用细胞增殖毒性检测试剂盒(CCK-8)和流式细胞术检 测细胞增殖、细 胞 周 期 和 凋 亡 情 况。采 用 Transwell实 验 检 测 细 胞 迁 移 及 侵 袭 能 力。结 果 在 NSCLC 癌 组 织 及 NSCLC细胞系中 MALAT1表达升高、miR-19b-3p表达降低,并且 MALAT1与 miR-19b-3p表达水平呈负相关(r= -0.8969,P<0.01);过表达 miR-19b-3p及敲除 MALAT1可使 A549细胞中 miR-19b-3p基因表达升高,MALAT1、 HIF-1α及 VEGF基因表达下降。过表达 miR-19b-3p使 A549细胞增殖能力、分裂能力、侵袭迁移能力下降,凋亡率增 加。结论 MALAT1可能靶向 miR-19b-3p调节 HIF-1α/VEGF参与非小细胞肺癌发生发展。     

乳腺癌组织中miR-199b-5p和MTA1表达水平与临床病理特征和预后的关系

目的 检测乳腺癌组织中miR-199b-5p与MTA1表达情况，并分析其表达水平与临床病理特征和预后关系。方法 选取2017年10月至2018年10月期间河南大学第一附属医院收治的行乳腺切除手术的乳腺癌患者135例作为研究对象，取其癌组织与癌旁组织分别作为癌旁组织组与乳腺癌组，qRT-PCR法测定癌组织与癌旁组织miR-199b-5p、MTA1 mRNA水平，免疫组化法分析组织MTA1阴阳性，分析miR-199b-5p、MTA1表达与乳腺癌患者年龄、绝经情况(是、否)、肿瘤直径(<2 cm、≥2 cm)、临床分期(Ⅰ～Ⅱ期、Ⅲ期)、分子分型(Lumina A/B型、HER-2阳性型、三阴性型)、淋巴结转移(是、否)关系。结果 与癌旁组织组相比，乳腺癌组癌组织miR-199b-5p水平降低，MTA1 mRNA水平升高(P<0.05);与癌旁组织组相比，乳腺癌组MTA1阳性率升高(P<0.05);乳腺癌患者癌组织miR-199b-5p表达与临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05);MTA1表达与临床分期、淋巴结转移、分子分型有关(P<0.05);乳腺癌患者治疗...     

原发性肝癌组织中SOX7mRNA的表达

目的:探讨原发性肝癌(HCC)组织中SOX7 mRNA的表达及意义.方法:应用实时荧光定量PCR检测SOX7 mRNA在7种肝癌细胞系(HepG2、SNU449、SNU182、SMMC-7721、HUH-7、PLC-PRF-5及Hep3B)和40例HCC及其配对癌旁正常肝组织中的表达.结果:肝癌细胞系中SOX7 mRN...     

Sonic Hedgehog信号通路分子Shh和Smo在肝细胞肝癌中表达与意义

目的:探讨Sonic Hedgehog(SHH)信号通路分子Shh和Smo在肝细胞肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达及其意义?方法:用RT-PCR方法检测10例HCC组织及相应癌旁组织和肝癌细胞系HepG2?Huh7中Shh?Smo mRNA的表达?采用免疫组化方法检测30例肝癌组织及10例正常肝组织中Shh?Smo蛋白的表达?结果:RT-PCR结果显示HCC组织中Shh?Smo mRNA的表达率显著高于癌旁组织(P < 0.05);Shh?Smo mRNA在Huh7中的表达强度高于HepG2,但两者间无显著性差异(P > 0.05)?免疫组化结果显示Shh?Smo蛋白在HCC组织中阳性率分别为63.3%(19/30)?76.7%(23/30);Smo蛋白的表达与肿瘤大小相关(P < 0.05)?Shh?Smo蛋白在正常肝组织中均无表达?结论:Shh和Smo在肝癌中高表达,表明SHH信号通路可能参与肝癌的发生,为肝癌防治提供新的依据?     

增强miR-146b-3p表达对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨增强miR-146b-3p表达对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 Real time PCR检测miR-146b-3p在6种人胰腺癌细胞系(MIA PaCa-2、BxPC-3、AsPC-1、PANC-1、SW1990、PC-3)和手术切除的12对胰腺癌/癌旁组织中的表达.将Pre-miR-hsa-miR-146b-3p Precursor 转染MIA PaCa-2 细胞,Real time PCR检测转染后miR-146b-3p的表达变化,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-8的表达变化.结果 与正常胰腺组织相比,miR-146b-3p在6种胰腺癌细胞系中均呈低表达,以MIA PaCa-2细胞最为明显;12对胰腺组织中,癌组织miR-146b-3p表达水平均低于癌旁组织.同阴性对照组比较,转染前体组的MIA PaCa-2细胞,miR-146b-3p表达增强383.25倍,细胞增殖能力下降,细胞凋亡率增加,蛋白Bcl-2表达降低(50.0%),Bax表达升高(4.29倍).结论 miR-146b-3p在胰腺癌细胞系和癌组织中低表达;上调胰腺癌细胞MIA PaCa-2中 miR-146b-3p的表达,能够抑制增殖和诱导细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2表达,上调Bax的表达有关.     

Kindlin-1在肝细胞性肝癌中的表达作用及其临床意义

目的 检测黏着斑蛋白(Kindlin-1)在肝细胞性肝癌(简称肝癌)中的表达,探讨其在肝癌转移中的临床意义.方法 收集58例肝癌组织和癌旁组织及7例正常肝组织,采用免疫组化染色、Western blot法和实时定量PCR(qRTPCR)法检测Kindlin-1的表达,分析Kindlin-1表达与肝癌临床病理特征之间的关系.结果 免疫组化染色显示Kindlin-1主要表达在细胞质中.肝癌组织中Kindlin-1阳性表达率为55％,显著高于癌旁组织的10％和正常肝组织的0％(x2=26.456、5.560,P＜0.05).Kindlin-1表达水平与肝癌大小和有无转移相关(x2=7.857、4.076,P＜0.05),而与患者性别、年龄、肿瘤有无包膜、Edmondson分级、血清甲胎蛋白(AFP)水平及乙肝表面抗原(HBsAg)等临床病理特征无明显关系.Western blot法和qRT-PCR检测结果显示肝癌组织中Kindlin-1相对含量显著高于癌旁组织和正常肝组织(P＜0.01).结论 Kindlin-1在肝癌组织中的表达高于癌旁组织及正常肝组织,且与肝癌大小和有无转移相关,提示Kindlin-1可能参与了肝癌的转移,可能作为肝癌转移的预测指标之一.     

ABCG2在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的 探讨人肝细胞癌组织中干细胞标志物ABCG2的表达及临床意义.方法 采用实时荧光定量PCR和免疫组织化学方法检测40例肝细胞癌及癌旁组织中ABCG2 mRNA和蛋白的表达.结果 ABCG2mRNA在肝细胞癌组织中的表达是癌旁组织的1.619倍,差异有显著性(P=0.000).肝细胞癌及癌旁组织中ABCG2蛋白阳性表达率分别为47.5%(19/40)、22.5%(9/40),两组比较差异有显著性(P=0.019);ABCG2蛋白的表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小等均无关(均P>0.05),而与肝癌分化程度、肝癌包膜是否受累及是否有癌栓关系密切(均P<0.05).结论 ABCG2在肝细胞癌组织中的表达明显高于癌旁组织,且与组织分化程度、肝癌包膜是否受累及是否有癌栓等临床病理特征有关,提示ABCG2在肝细胞癌的发生、发展过程中发挥一定作用,可能与肝细胞癌的侵袭和转移有关.     

小鼠原发性肝癌中胰岛素样生长因子2和H19的表达及意义

目的 观察IGF2、H19在原发性肝癌中的表达并了解其意义.方法 建立原发性肝癌模型,模型建立后第20周处死小鼠取肝癌及癌旁组织储存于-80℃备用,另取正常小鼠肝脏作对照,用Real time RT-PCR方法检测IGF2、H19 mRNA的变化.结果 与对照组比较,IGF2、H19在癌旁及癌组织中的表达都显著增加,在癌组织中增加更为显著P＜0.05.结论 IGF2、H19的异常变化与小鼠原发性肝癌的发生发展有关.