cGAS/STING通过NLRP3炎性小体调控人肺微血管内皮细胞炎症的作用机制

目的探讨鸟嘌呤核苷酸腺嘌呤核苷酸合成酶（cGAS）/干扰素激活蛋白（STING）通过NOD样受体蛋白3（NLRP3）炎性小体调控人肺微血管内皮细胞（HPMVECs）炎症的作用机制。 方法原代培养HPMVECs,进行脂多糖（LPS）量效实验及cGAS、STING和NLRP3抑制干预实验。（1）量效实验：以50、100、1000 ng/ml的LPS作用24 h后（分别为50 ng/ml LPS组、100 ng/ml LPS组、1000 ng/ml LPS组）,用实时荧光反转录-聚合酶链反应（qRT-PCR）和蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）分别检测cGAS、STING和NLRP3表达。（2）cGAS抑制干预实验：使用cGAS（siRNA）转染,再加入100 ng/ml的LPS处理24 h;同时设立空白对照组、LPS刺激组、siRNA单独处理组,采用Western Blot检测STING、NLRP3,及NLRP3下游因子白介素（IL）-1β和IL-18的表达。（3）STING抑制干预实验：使用STING（siRNA）转染,再加入100 ng/ml的LPS处理24 h;同时设立空白对照组,采用Western Blot检测cGAS、NLRP3,及NLRP3下游因子IL-1β和IL-18的蛋白表达。（4）NLRP3抑制干预实验：使用NLRP3炎性小体抑制剂MCC950预处理30 min,再加入100 ng/ml的LPS处理24 h;同时设立空白对照组,采用Western Blot检测cGAS、STING,及NLRP3下游因子IL-1β和IL-18的蛋白表达。 结果（1）量效实验：与空白对照组比较,HPMVECs中cGAS、STING、NLRP3的mRNA水平和蛋白表达均显著升高,差异有统计学意义（P＜0.05）。（2）cGAS抑制干预实验：与空白对照组比较,LPS刺激HPMVECs,cGAS表达水平显著升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;与LPS刺激组比较,抑制cGAS时,siRNA＋LPS处理组STING、NLRP3及其下游因子IL-1β、IL-18的表达水平均显著降低,差异有统计学意义（P＜0.05）。（3）STING抑制干预实验：与空白对照组比较,LPS刺激HPMVECs,STING表达水平显著升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;与LPS刺激组比较,抑制STING时,NLRP3及其下游因子IL-1β、IL-18的表达水平均显著降低,差异有统计学意义（P＜0.05）,而cGAS的表达水平无显著降低（P＞0.05）。（4）NLRP3抑制干预实验：与空白对照组比较,LPS刺激HPMVECs,siRNA＋LPS处理组NLRP3表达水平显著升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;与LPS刺激组比较,抑制NLRP3显著降低了NLRP3下游因子白细胞IL-1β和IL-18的表达,差异有统计学意义（P＜0.05）,而cGAS和STING的表达水平无显著降低;差异无统计学意义（P＞0.05）。 结论（1）LPS刺激下,在HPMVECs中cGAS、STING、NLRP3、IL-1β和IL-18的表达水平均显著升高,参与调控炎症反应;（2）cGAS/STING/NLRP3信号通路顺序参与调控PMVECs炎症作用。     

急性缺血性脑卒中小鼠模型脑组织中miR-21 表达对炎症反应和细胞凋亡的影响及相关机制研究

目的 研究急性缺血性脑卒中（acute ischemic stroke, AIS）小鼠模型脑组织中miR-21 表达对炎症反应和细胞凋亡的影响,并探讨其相关分子机制。方法 选取C57/BL6 小鼠30 只随机均分为假手术组、短暂局灶性大脑中动脉闭塞（tran-sient middle cerebral artery occlusion,tMCAO）模型组（利用线栓法构建短暂局灶性大脑中动脉闭塞小鼠模型）及miR-21 agomir 激动剂预处理组（tMCAO 术后侧脑室注射miR-21 agomir 激动剂）。RT-PCR 法检测小鼠脑组织中miR-21 表达水平;改良神经严重程度评分（modified neurological severityscore,mNSS）评估小鼠神经功能;2,3,5-三苯基氯化四氮唑（2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride,TTC）染色法检测小鼠脑梗死体积;酶联免疫吸附法检测炎症因子（TGF-β1,TNF-α,IL-18 和IL-10）水平变化;原位末端标记（terminal-deoxynucleoitidyl transferase mediatednick end labeling,Tunel）法观察小鼠神经细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法检测TLR4/NF-κB/NLRP3 通路相关蛋白及凋亡蛋白（Bcl-2/Bax）表达情况。结果 假手术组﹑ tMCAO 模型组和miR-21 agomir 组小鼠脑组织中miR-21 表达水平分别为0.83±0.17,0.50±0.11 和1.55±0.32,组间差异有统计学意义（F=43.805,P<0.05）。假手术组小鼠神经功能mNSS 评分均为0 分,tMCAO 组mNSS 评分明显高于miR-21 agomir 组（11.30±3.42 vs 5.61±1.73）,差异有统计学意义（t=12.784,P<0.05）。假手术组小鼠脑组织未出现梗死现象,tMCAO 组脑梗死体积（62.72%±5.30%）高于miR-21 agomir 组（38.22%±3.31%）,差异有统计学意义（t=31.309,P<0.05）。与tMCAO 组比较,miR-21 过表达明显降低促炎因子TNF-α 和IL-18 水平,升高抗炎因子TGF-β1 和IL-10 水平,差异均有统计学意义（t=3.785 ～ 9.693,均P<0.05）。假手术组脑组织皮层细胞凋亡数约为9.40±5.21 个,明显低于 tMCAO 组的75.52±12.81 个,差异有统计学意义（t=38.552,P<0.05）;miR-21 agomir 组细胞凋亡数约为42.41±9.62 个,低于tMCAO 组,差异有统计学意义（t=19.174,P<0.05）。与tMCAO 组比较,miR-21 过表达组小鼠脑组织中TLR4, NF-κB,p-NF-κB 和NLRP3 蛋白表达降低,Bcl-2/Bax 表达升高,差异均有统计学意义（t=2.314 ～ 3.098,均P ＜ 0.05）。结论 miR-21 在急性缺血性脑卒中后小鼠脑组织中表达明显下降,其过表达可以调节脑缺血后促炎因子和抗炎因子之间的平衡,改善皮层细胞凋亡,可能是通过调控TLR4/NF-κB/NLRP3 通路发挥脑损伤保护作用。     

rTMS对脑梗死大鼠记忆功能及海马IL-1的影响研究

目的:研究重复经颅磁刺激(rTMS)对脑梗死大鼠空间记忆功能的影响,并探讨其可能机制。方法:45只大鼠随机分为假手术组、对照组和rTMS组各15只,采用大脑中动脉栓塞再灌注(tMCAO)法制作脑梗死大鼠模型。采用Morris水迷宫评定学习记忆功能变化,通过实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)观察患侧海马白细胞白介素1β(IL-1β)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、肿瘤坏死因子(TNF-α)以及梗死灶区(IL-1β)mRNA表达量。结果:与假手术组相比,对照组及rTMS组大鼠逃避潜伏期显著延长(P0.01),而rTMS组较对照组的逃避潜伏期则明显缩短(P0.05)。对照组、rTMS组IL-1βmRNA在患侧海马及皮层的表达量均较假手术组增高(P0.01),rTMS组患侧海马IL-1βmRNA表达较对照组显著增高(P0.01),患侧皮层IL-1βmRNA表达较对照组无明显变化。对照组、rTMS组iNOS、TNF-αmRNA表达量均较假手术组增高(P0.01),rTMS组与对照组无明显差异。结论:rTMS治疗可促进脑梗死后空间学习记忆功能恢复,并可能通过增加患侧海马区IL-1βmRNA表达来实现。     

胡须刺激通过调节神经可塑性 改善小鼠桶状皮质缺血性脑卒中后的神经功能缺损

目的：探讨规律胡须刺激是否可改善小鼠桶状皮质（Barrel Cortex）局灶性脑缺血后神经功能并从神经可塑性角度探讨其机制。方法：60只雄性C57BL/6随机分成假手术组、脑梗死组和胡须刺激组,每组20只。胡须刺激组在小鼠桶状皮质局灶性脑缺血模型建立后第3天开始给予规律胡须刺激（15 min/次,3次/d,共12 d）。3组小鼠均在造模后3、7、14 d进行贴纸去除试验;造模后14 d进行HomeCage行为学检测、采用Western blot技术检测脑梗死灶周围突触素（SPY）-1、生长相关蛋白43(GAP 43)、脑源性神经营养因子（BDNF）和神经丝（NF）蛋白表达水平,免疫荧光染色检测NF纤维。结果：脑梗死造模后3、7、14 d,脑梗死组小鼠的贴纸感知时间和贴纸去除时间均高于假手术组（均P<0.05）;造模后7 d,胡须刺激组小鼠的贴纸去除时间短于脑梗死组（P<0.05）;造模后14 d,胡须刺激组小鼠的贴纸感知时间和贴纸去除时间均短于脑梗死组（均P<0.05）。HomeCage行为学分析结果显示,与假手术组相比,脑梗死组和胡须刺激组小鼠活跃性指标均有明显下...     

姜黄素通过调控NLRP3/Caspase-1信号通路改善脑缺血大鼠神经功能障碍

目的：探讨姜黄素对局灶性脑缺血大鼠神经保护作用的机制。方法：将24只健康雄性SD大鼠,按随机数字表法分为假手术组（Sham）、脑缺血组（MCAO）和姜黄素干预组（CUR）,每组8只。采用Zea Longa线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞模型。在建立MCAO模型后即刻,姜黄素组大鼠接受第1次腹腔注射姜黄素（100mg/kg）,随后连续每天接受1次腹腔注射姜黄素（100mg/kg）,共7天。假手术组和脑缺血组大鼠在相同时间点接受腹腔注射等体积生理盐水。采用Longa法在造模后第1、7、14天对大鼠进行神经功能学评分,2～3分者纳入实验。在第14天,将大鼠处死后取出脑组织,采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TTC）对脑组织染色。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠脑组织中IL-18、IL1β及NLRP3含量。采用Western blot法检测TNF-α及Caspase-1及磷酸化的Caspase-1表达。结果：与Sham组相比,MCAO组大鼠神经功能评分显著升高（P<0.05）,脑梗死体积显著增多（P<0.05）;MACO组大鼠脑组织IL-18、IL-1β、NLRP3的含量显...     

烟碱型乙酰胆碱受体α7亚型在产后抑郁中的作用机制研究

目的 探讨烟碱型乙酰胆碱受体α7亚型(α7nAChR)在产后抑郁(PPD)中的作用机制。方法 使用激素模拟妊娠(HSP)诱导的PPD小鼠模型,并将小鼠分为4组：对照组、PPD组、PNU282987组和PNU282987+α7nAChR inhibitor组。对小鼠进行悬尾试验和强迫游泳试验以评估抑郁样行为。分别通过Nissl染色和免疫荧光染色检测海马CA1区神经细胞和α7nAChR表达。通过蛋白质印迹分析NLRP3炎症小体激活情况。结果 与PPD组相比,PNU282987组鼠海马组织中α7nAChR表达和海马区的神经细胞数量显著增加(P<0.01),和尾悬测试和强迫游泳测试中的不动时间显著降低(P<0.01);PNU282987组小鼠海马组织中NLRP3、NF-κB、pro-IL-1β、cleaved-caspase 1和IL-1β表达较PPD组显著降低(P<0.05);与PNU282987组小鼠相比,PNU282987+α7nAChR inhibitor组小鼠在尾悬测试和强迫游泳测试中的不动时间显著增加(P<0.01),且海马区的神经细胞数量显著降低(P<...     

低频重复经颅磁刺激预处理对氯化锂-匹鲁卡品致痫大鼠痫性发作及B细胞淋巴瘤/白血病基因-2、自杀因子和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3蛋白表达的影响

目的探讨低频重复经颅磁刺激(rTMS)预处理的抗痫作用及其与抗海马细胞凋亡的相关性。 方法将健康成年Wistar大鼠30只分为rTMS预处理组、假刺激组及空白对照组,每组10只。rTMS预处理组行低频rTMS（0.5 Hz、75%阈强度、20次/串、5串/d）预处理,假刺激组予以相同次数、声音相似的“假性”刺激,连续7d后,制作氯化锂-匹罗卡品诱导癫痫持续状态模型。观察各组大鼠痫性发作潜伏期及痫性发作程度,以免疫组织化学法观察各组大鼠海马CA1区B细胞淋巴瘤/白血病基因-2（Bcl-2）、自杀因子（Fas）及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）蛋白的平均阳性反应细胞数及阳性反应细胞平均光密度。 结果rTMS预处理组与假刺激组相比,痫性发作潜伏期显著延长、发作程度减轻(P<0.01),各时点Bc1-2蛋白表达增加,Fas及Caspase-3蛋白表达减少。 结论低频rTMS预处理具有抗痫作用,其机制可能与其调节海马区Bcl-2、Fas及Caspase-3蛋白表达水平,从而保护神经元有关。     

内质网应激和NOD样受体蛋白3在重症中暑小鼠肠黏膜损伤中的作用

目的:研究内质网应激和NOD样受体蛋白3（NOD-like receptor protein 3,NLRP3）在重症中暑肠黏膜损伤中的作用及内质网应激抑制剂4-苯基丁酸（4-phenylbutyric acid,4-PBA）的保护效应。方法:30只雄性BALB /c小鼠随机（随机数字法）分成对照组（control）、重症中暑组（heat stroke,HS）和4-PBA预处理组（4-PBA+HS,4-PBA 120 mg/kg,腹腔注射）。Control组置于室温,HS组和4-PBA+HS组置于高温气候动物培养箱[温度（35.5±0.5） ℃,湿度（60.0±5.0）%],小鼠直肠温度达到42 ℃为重症中暑造模成功标准。中暑6 h后,采用比色法检测小肠匀浆丙二醛（MDA）及超氧化物歧化酶（SOD）,ELISA法检测血清白介素-1β（IL-1β）及白介素-18 （IL-18）,HE染色观察肠道组织病理,电镜下观察肠道超微结构,Western blot检测葡萄糖调节蛋白78（glucose regulated protein 78,GRP78）、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein,CHOP）、NLRP3和活化含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1（cleaved caspase-1）蛋白表达。计量资料多组间比较如满足方差齐性采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD- t检验;如不满足方差齐性采用Welch分析,组间两两比较采用Dunnett's T3检验,以 P<0.05为差异有统计学意义。 结果:与control组相比,HS组小肠匀浆MDA升高（ t=14.243, P<0.01）而SOD下降（ t=7.781, P<0.01）,血清IL-1β和IL-18显著升高（ t=12.664, P<0.01; t=16.240, P<0.01）,小肠绒毛广泛破坏伴有炎症细胞浸润,内质网扩张及线粒体肿胀空泡化,小肠组织GRP78、CHOP、NLRP3和cleaved caspase-1蛋白表达增加（ t=14.824, P<0.01; t=12.667, P<0.01; t=9.298, P<0.01, t=6.588, P=0.001）。与HS组相比,4-PBA预处理降低MDA（ t=9.167, P<0.01）并升高SOD（ t=6.077, P<0.01）,降低血清IL-1β和IL-18（ t=4.889, P=0.001; t=5.693, P<0.01）,减轻小肠黏膜的病理改变及超微结构的损伤,降低了GRP78、CHOP、NLRP3和cleaved caspase-1蛋白表达（ t=9.080, P<0.01; t=7.152, P<0.01; t=4.249, P=0.005; t=3.650, P=0.011）。 结论:内质网应激和NLRP3参与重症中暑肠黏膜损伤,4-BPA通过抑制内质网应激及NLRP3炎症小体活化减轻重症中暑肠黏膜损伤。     

高频重复经颅磁刺激对脑梗死大鼠缺血半暗带超微结构及脑源性神经营养因子表达的影响

目的观察不同强度高频重复经颅磁刺激（rTMS）对脑梗死大鼠缺血半暗带超微结构及脑源性神经营养因子（BDNF）表达的影响。 方法将42只SD大鼠分为正常组、模型组、假刺激组及rTMS组,其中rTMS组按不同刺激强度又细分为80%运动阈值（MT）组、100%MT组及120%MT组。将模型组、假刺激组、rTMS组制成右侧大脑中动脉栓塞模型,rTMS组各亚组大鼠于制模24 h后分别给予不同强度20 Hz rTMS刺激,假刺激组大鼠给予假性磁刺激,模型组于制模后未给予其他特殊处理。于实验进行14 d后采用透射电镜、免疫组化及免疫印迹（WB）技术观察各组大鼠缺血半暗带超微结构及BDNF表达。 结果通过电镜观察发现,rTMS组各亚组大鼠缺血半暗带区超微结构损伤明显轻于模型组及假刺激组;通过WB技术检测发现,100%MT组和正常组BDNF光密度值均较假刺激组明显增高（P<0.05）,正常组和rTMS组各亚组BDNF光密度值虽然也高于模型组,但组间差异无统计学意义（P&rt;0.05）;通过免疫组化技术检测发现,各组大鼠BDNF阳性光密度值组间差异均无统计学意义（P&rt;0.05）。 结论20 Hz、特定强度（尤其是100%MT）rTMS能促进脑梗死大鼠缺血半暗带超微结构修复及BDNF表达,这可能是磁刺激治疗缺血性脑卒中的重要机制之一。     

迷走神经电刺激治疗对脑外伤意识障碍大鼠前额叶皮层NLRP3炎症小体表达变化的影响

摘要 目的：研究前额叶皮层NLRP3（nucleotide-binding domain-like receptor protein 3）炎症小体在迷走神经电刺激（vagus nerve stimulation, VNS）对脑外伤（traumatic brain injury, TBI）意识障碍大鼠的促醒作用及相关机制。 方法：将30只SD大鼠随机分为3组：TBI组、TBI+VNS组、TBI+VNS+NLRP3组,建立TBI意识障碍大鼠模型,应用VNS刺激TBI意识障碍大鼠,通过意识状态行为学量表评估意识状态水平改变情况,并用Western-Blot、免疫组织化学技术、QPCR技术分别检测各组大鼠前额叶皮层NLRP3、ASC、Caspase-1、Bax、Bcl-2、IL-1β、IL-18的表达变化。 结果：TBI意识障碍大鼠给予VNS刺激后意识状态水平得到改善,且前额叶皮层组织中NLRP3、ASC、Caspase-1、Bax、IL-1β、IL-18的表达明显低于TBI组,Bcl-2高于TBI组;而给予NLRP3激动剂后大鼠意识状态水平下降,同时伴随前额叶皮层组织中ASC、Caspase-1、Bax、TNF-α的表达升高,Bcl-2表达降低。 结论：VNS改善TBI大鼠意识水平的作用机制之一可能是通过抑制前额叶皮层NLRP3炎症小体的表达,最终降低神经细胞炎症反应和抗凋亡反应达到神经保护作用。     

机械应力调控软骨细胞炎症反应中长链非编码RNA的机制研究

目的探讨机械应力调控软骨细胞炎症反应的作用机制。 方法体外分离培养新生SD大鼠软骨细胞,经白介素-1β（IL-1β）干预构建软骨细胞炎症模型,设置对照组（IL-1β）、2000μstrain组（2000μstrain应力+IL-1β）、5000μstrain组（5000μstrain应力+IL-1β）,IL-1β浓度为5ng/ml,以1Hz应力干预2h。采用Real-time PCR和Western Blot检测Ⅱ型胶原（Col-2）、基质金属蛋白酶13（MMP13）、自噬标记蛋白LC3、Beclin-1及m-TOR表达,同时检测MEG3表达,采用免疫荧光染色检测自噬小体形成;si-RNA沉默MEG3后,采用Real-time PCR检测LC3及Beclin-1表达。 结果2000μstrain组软骨细胞Col-2、LC3、Beclin-1基因及Beclin-1蛋白表达量均较对照组及5000μstrain组明显上调（P<0.05）;2000μstrain组软骨细胞MEG3基因表达量较对照组及5000μstrain组明显下调（P<0.05）;5000μstrain组m-TOR蛋白表达较对照组及2000μstrain组明显增加（P<0.05）;应力组自噬标记蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ相对表达量均较对照组明显减少（P<0.05）;免疫荧光染色显示2000μstrain组自噬小体形成较对照组及5000μstrain组明显增加,5000μstrain组自噬小体形成较对照组及2000μstrain组明显减少（P<0.05）;si-RNA沉默MEG3后,发现LC3及Beclin-1表达量均明显增加（P<0.05）。 结论机械应力可影响软骨细胞LncRNA-MEG3表达,从而调控炎症环境中软骨细胞自噬水平。     

长程经颅磁刺激对脑梗死大鼠皮质脑源性神经营养因子表达及神经功能恢复的影响

目的探索长程经颅磁刺激（TMS）对脑梗死大鼠梗死灶周围皮质脑源性神经营养因子（BD-NF）表达和脑损伤体积、神经功能恢复的影响及作用机制，为经颅磁刺激在脑梗死治疗及康复中的应用提供理论依据。方法TMS组与假刺激组大鼠各48只，于大脑中动脉阻塞／再灌注（MCAO／R）90min后的3周内每日接受1次TMS（200脉冲）与假刺激治疗。检测2组大鼠神经功能恢复情况、梗死灶周围皮质BDNF免疫阳性细胞表达及脑损伤体积，对所得资料进行统计学分析。结果在治疗2周和3周时，TMS组神经功能缺损评分与假刺激组相比均明显降低（P〈0．01）。TMS组在治疗3d、7d、14d、21d时梗死灶周围皮质BDNF阳性细胞计数与假刺激组各对应时间点相比，差异均有统计学意义（P〈0．01），且2组治疗21d时梗死灶周围皮质BDNF阳性细胞计数与大鼠神经功能缺损评分呈显著负相关（r=-0．877，P〈0．01）。治疗3周后，TMS组脑损伤体积明显小于假刺激组（P〈0．05），2组脑损伤体积与最终神经功能缺损评分明显相关（r=0．859，P〈0．01）。结论长程TMS有促进脑梗死大鼠神经功能缺损恢复的作用，其作用通过持续上调梗死灶周围皮质BDNF阳性细胞表达、减小梗死后脑损伤体积等作用而实现。     

磁刺激对帕金森病鼠黑质多巴胺能神经元的保护及其机制

目的探讨重复经颅磁刺激（rTMS）对帕金森病(PD)小鼠黑质多巴胺能神经元及胶质源性神经营养因子（GDNF）的影响。 方法32只雄性C57BL/6J小鼠随机分为生理盐水组、模型组、假刺激组及磁刺激组，每组8只。采用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)皮下注射，每次15 mg/kg体重，连续注射4次，每次间隔2 h,建立急性PD小鼠模型。磁刺激组小鼠每天接受1 Hz、1 T的磁刺激治疗（共5个序列，25脉冲/序列）,疗程为2周。经rTMS干预后，通过免疫组织化学技术检测黑质酪氨酸羟化酶(TH)和GDNF的表达变化，并借助图像分析系统进行定量分析。 结果模型组、假刺激组TH免疫阳性(TH-ir)和GDNF免疫阳性(GDNF-ir）细胞计数、校正光密度(COD)值较生理盐水组减少(P<0.01)；磁刺激组TH-ir和GDNF-ir细胞计数、COD值均较模型组和假刺激组增加（P<0.05）。相关分析显示黑质区TH-ir和GDNF-ir细胞计数呈明显正相关(r=0.836,P<0.01)，相应的COD值比较亦呈明显正相关(r=0.921,P<0.01)。 结论rTMS明显增加PD小鼠黑质 TH-ir细胞数量和COD值，推测其对黑质多巴胺能神经元具有保护作用，而上调黑质区GDNF的表达可能是其作用机制。     

促红细胞生成素预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响

目的研究促红细胞生成素（EPO）预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响。方法将30只SD大鼠随机分为3组：假手术组、模型组、干预组,每组10只。干预组给予EPO预处理,15min后,对模型组和干预组建立大脑中动脉栓塞模型,建模后2h进行血流再灌注;对假手术组仅建立假手术模型,建模后2h灌注生理盐水。记录各组大鼠神经功能缺陷评分、脑梗死面积、脑神经元凋亡情况,用RT-PCR检测谷氨酸转运体（GLT-1）mRNA的表达量,免疫组化法检测谷氨酸-天冬氨酸转运体（GLAST）蛋白表达。结果干预组大鼠神经功能缺陷评分和脑梗死灶面积明显小于模型组（P均〈0．05）。与假手术组比较,模型组大量神经细胞凋亡,而干预组缺血区仅部分凋亡。脑缺血再灌注后2h,模型组与干预组大鼠缺血区GLT-1 mRNA和GLAST蛋白表达均低于假手术组（P均〈0．05）,而干预组表达水平明显高于模型组（P均〈0．05）。结论EPO预处理可减轻大鼠脑缺血再灌注损伤。     

电针百会穴对小鼠大脑中动脉栓塞的保护作用研究

目的:研究电针百会穴是否对小鼠局灶性脑梗死具有保护作用。方法:将雄性昆明小鼠48只随机分为电针组和针刺组各24只,均通过颈内动脉线栓法建立小鼠大脑中动脉阻塞模型,电针组给予电针百会穴治疗,针刺组给予针刺百会穴治疗。治疗4周后,评估2组小鼠神经功能评分,测量梗塞体积,免疫组化检测超大B细胞淋巴瘤因子(Bcl-xl)的表达,对梗塞周边区域进行膜片钳检查。结果:电针组小鼠的梗死体积及神经功能评分均明显低于针刺组小鼠(P<0.01),Bcl-xl的表达较针刺组小鼠明显增加(P<0.01);脑片膜片钳结果显示,电针组小鼠BKchannel的功能明显好于针刺组(P<0.01)。结论:电针百会穴能够降低小鼠脑梗死的体积并改善小鼠的神经功能,这种保护作用可能与电针刺激Bcl-xl的表达增加有关,也与神经元BK-channel离子通道的功能改善有关。     

祛瘀化痰二仙汤对老龄高尿酸血症大鼠阴茎海绵体NLRP3炎症小体的影响

目的：探讨祛瘀化痰二仙汤对老龄高尿酸血症大鼠阴茎勃起功能保护作用的可能机制。方法：将75只18月龄雄性SD大鼠分为正常组N组、模型组M组、祛瘀化痰二仙汤高、中、低剂量组Qh组、Qm组、Ql组，每组15只。除正常组外，其余各组大鼠均建立高尿酸血症大鼠模型，并采用APO（阿扑吗啡）实验筛选勃起功能障碍（ED）大鼠。N组和M组均给予蒸馏水（10mL ?kg-1?d-1），Qh、Qm、Ql组（1.296g?kg-1?d-1、0.648g?kg-1?d-1、0.324g?kg-1?d-1），每天给予药液灌胃1次，共12周。腹腔注射麻醉，检测大鼠阴茎海绵体ICP（阴茎海绵体内压）/MAP（平均动脉压）水平；处死大鼠后酶联免疫吸附法（ELISA）检测阴茎海绵体组织匀浆中NO、ET-1、IL-1β、IL-18含量，蛋白免疫印迹法检测大鼠阴茎海绵体组织匀浆中NLRP3、ASC、caspase-1蛋白含量。结果：与正常组比较，模型组大鼠阴茎海绵体组织NO、ICP/MAP表达水平显著降低（P<0.05），而UA、NLRP3、ASC、caspase-1、ET-1、IL-1β、IL-18、表达水平均显著升高（P<0.05）。与模型组比较，祛瘀化痰二仙汤高剂量组阴茎海绵体组织NO、ICP/MAP表达水平显著升高（P<0.05），而UA、NLRP3、ASC、caspase-1、ET-1、IL-1β、IL-18表达水平均显著降低（P<0.05）。结论：祛瘀化痰二仙汤可有效减轻高尿酸ED大鼠阴茎海绵体血管内皮功能损伤，改善勃起功能，其原因可能与其抑制阴茎海绵体组织NLRP3炎症小体介导的炎症反应有关。     

不同频率重复经颅磁刺激治疗缺血性脑卒中患者的疗效观察

目的 观察不同频率重复经颅磁刺激（rTMS）对缺血性脑卒中患者运动功能恢复的影响。 方法 采用随机数字表法将45例缺血性脑卒中偏瘫患者分为高频组、低频组及假刺激组,每组15例。3组患者均给予常规康复干预,高频组患者在此基础上针对患侧运动皮质M1区给予10 Hz高频rTMS治疗,低频组患者则针对健侧运动皮质M1区给予0.5 Hz低频rTMS治疗,假刺激组则针对患侧运动皮质M1区给予假磁刺激治疗。于治疗前、治疗3周后分别检测3组患者运动诱发电位（MEP）皮质潜伏期及中枢运动传导时间（CMCT）,同时采用Fugl-Meyer运动功能量表（FMA）、Berg平衡量表（BBS）及改良Barthel指数量表（MBI）对3组患者运动功能恢复情况进行评定。 结果 治疗后3组患者MEP皮质潜伏期、CMCT及FMA、BBS、MBI评分均较治疗前明显改善（P<0.05）,并且高频组、低频组上述疗效指标亦显著优于假刺激组水平（P<0.05）,同时低频组MEP皮质潜伏期、CMCT均较高频组明显缩短,组间差异均具有统计学意义（P<0.05）;治疗后低频组与高频组FMA、BBS及MBI评分组间差异仍无统计学意义（P>0.05）。 结论 低频及高频rTMS治疗均有利于缺血性脑卒中患者运动功能恢复,并且低频rTMS刺激健侧M1区较高频rTMS刺激病灶侧M1区能更显著改善病灶侧皮质兴奋性。     

电针足三里对功能性消化不良大鼠十二指肠半胱氨酸蛋白酶-1和消皮素D的影响

目的 探讨电针足三里对功能性消化不良（FD）大鼠十二指肠细胞焦亡的影响和可能的作用机制。 方法 将24只7日龄Sprague-Dawley（SD）大鼠按照随机数字表法分为空白组、模型组、电针组,每组8只。模型组和电针组采用多因素诱导法（碘乙酰胺灌胃法+夹尾刺激法）制备FD大鼠模型。造模成功后,电针组大鼠给予针刺“足三里”穴后连接韩式穴位神经刺激仪治疗2周,空白组和模型组不予任何干预。于基线期、造模后、电针干预7 d和14 d后记录3组大鼠的体重,于电针干预结束后检测3组大鼠的胃排空率和小肠推进率,并采用酶联免疫法（ELISA）检测其血清白介素-1β(IL-1β)和白介素-6（IL-6）的表达水平,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测3组大鼠十二指肠IL-1β和IL-6转录水平,采用免疫印迹法检测3组大鼠十二指肠半胱氨酸蛋白酶-1（caspase-1）p20和消皮素D（GSDMD）蛋白表达水平。 结果 造模成功后,模型组和电针组大鼠的平均体重与空白组造模成功后比较,差异均有统计学意义（P＜0.01）;电针干预7 d和14 d后,模型组和电针组大鼠的平均体重与空白组同时间点比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）,且电针组电针干预7 d和14 d后的平均体重与模型组同时间点比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。电针干预结束后,电针组大鼠胃内残留率和小肠推进率与模型组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01),而模型组大鼠胃内残留率和小肠推进率与空白组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01)。电针干预结束后,模型组和电针组大鼠血清中IL-1β和IL-6表达水平、十二指肠组织IL-1β和IL-6 mRNA的表达水平和十二指肠组织GSDMD、caspase-1 p20蛋白表达水平与空白组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01),且电针组大鼠血清中IL-1β和IL-6表达水平、十二指肠组织IL-1β和IL-6 mRNA的表达水平和十二指肠组织GSDMD、caspase-1 p20蛋白表达水平与模型组比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。 结论 电针足三里可显著降低FD大鼠十二指肠的细胞焦亡水平,改善十二指肠低度炎症,进而减轻FD临床症状,其作用机制可能与电针足三里可下调caspase-1 p20、GSDMD-N蛋白的表达水平,降低IL-1β和IL-6等炎性因子的表达水平,以及缓解FD大鼠十二指肠的低度炎症有关。     

白细胞介素-1对β淀粉样蛋白胞毒及基因表达的调节作用

目的:研究β淀粉样蛋白(β-amyloidprotein,Aβ)的神经元毒性作用及白细胞介素1(interleukin-1β,IL-1β)对神经细胞β淀粉样蛋白前体(β-amyloidprecursorprotein,APP)基因表达以及对Aβ细胞毒性的调节作用。方法:以PC12细胞作为体外神经细胞模型,应用四唑盐(MTT)法检测Aβ,IL-1β对细胞活性的影响,应用RT-PCR法半定量分析IL-1β对APP基因表达的影响。结果:Aβ具有直接的神经细胞毒作用,与浓度以及聚集状态相关,以20μmol/L孵育3h毒性最大(q=5.62,P<0.01),而孵育7d者几乎没有毒性。IL-1β(浓度为20μg/L)与Aβ25-35(浓度为20μmol/L孵育3h)共同作用于细胞时,Aβ25-35的细胞毒作用被扩大,细胞活性从36.7%降到了13.2%(q=3.8,P<0.05);当IL-1β(浓度为20μg/L)与Aβ25-35(20μmol/L孵育7d)共同作用时,细胞活性迅速下降,从93%降到了7.7%(q=4.83,P<0.01)。IL-1β可以刺激PC12细胞APP751、770mRNA表达增加,与对照组相比,20μg/L组APPmRNA表达增加约为2倍(q=4.76,P<0.01),此后增加不明显;APPmRNA的表达在IL-1β(20μg/L)刺激6h达高峰,约为对照组的2倍(q=4.92,P<0.01)。结论:Aβ具有直接细胞毒作用,与浓度以及聚集状态相关。IL-1β可以扩大Aβ的细胞毒性作用。IL-1β可以刺激PC12细胞APPmRNA表达增加,具有剂量及     

白细胞介素1受体拮抗剂对大鼠局灶性脑缺血再灌注神经细胞凋亡的影响

目的 探讨白细胞介素1受体拮抗剂（IL-1ra）对大鼠局灶性脑缺血再灌注神经细胞凋亡的影响。方法 取成年雄性SD大鼠24只，随机分为三组，每组8只：假手术组(Sham组)、局灶性脑缺血组(MCAO组)和脑缺血+ IL-1ra干预组。术后24 h断头取脑, 应用TUNEL染色法，检测梗死灶周围神经细胞凋亡情况，进行计数并进行统计学处理。结果 与假手术组相比，局灶性脑缺血组神经细胞凋亡显著增多(P<0.01); 与局灶性脑缺血组相比，IL-1ra干预组神经细胞凋亡显著减少(P<0.01)。结论 IL-1ra可抑制大鼠脑缺血梗死灶周围神经细胞凋亡.