鼻咽癌血清中EB病毒核抗原-1和核抗原-2抗体的研究

用抗补体免疫荧光法检测鼻咽癌患者和对照人群中EB病毒核抗原-1(EBNA-1)和EB病毒核抗原-2(EBNA-2)抗体的水平。鼻咽癌组中两种抗体滴度都升高,以EBNA-1抗体上升明显;且EBNA-1抗体与总EBNA抗体水平的变化趋势相一致。鼻咽增生性病变组中EBNA-2抗体略占优势,该组中EBNA-2抗体水平升高可能与潜伏状态的EB病毒激活或再感染的早期阶段有关。     

抗EB病毒口服液对EB病毒抗原表达的抑制作用及其细胞毒作用

目的 观察抗EB(Epstein-Barr)病毒口服液对EB病毒抗原表达的影响及对鼻咽癌CNE2细胞的细胞毒作用。方法 用间接荧光法测定抗EB病毒口服液对Raji细胞早期抗原(early antigen，EA)表达及B95-8细胞病毒壳抗原(virus capsid antigen，VCA)表达的影响；用MTT法测定其对鼻咽癌CNE2细胞的细胞毒作用。结果 抗EB病毒口服液在无毒的浓度下，对Raji细胞EB病毒EA抗原表达有较强的抑制作用，其IC50值为0．667mg／mL：对B95-8细胞EB病毒VCA抗原表达有较强的抑制作用。其IC50值为0．89mg／mL；对正丁酸钠激发的B95-8细胞EB病毒VCA抗原表达亦有较强的抑制作用，其IC50为1．1mg/mL。抗EB病毒口服液对人鼻咽癌细胞CNE2的IC50为7．57mg／mL。结论 抗EB病毒口服液能抑制EB病毒抗原的表达,在较高的浓度下对鼻咽癌细胞CNE2具细胞毒作用。     

EB病毒两种抗体联合检测在鼻咽癌诊断中的应用

目的 探讨EB病毒(epstein-ban virus,EBV)抗体在鼻咽癌早期诊断中的应用价值.方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定53例鼻咽癌患者、71例鼻部疾病患者和40例正常体检人群血清EBV相关抗体(EBV VCA-IgA和EA-IgA).结果 3组比较,鼻咽癌组血清VCA-IgA的阳性检出率为79.2%,EA-IgA阳性率为50.9%,与其余两组比较差异有统计学意义(P<0.01);鼻咽癌组和鼻部疾病组内VCA-IgA和EA-IgA的阳性率比较差异有统计学意义(P<0.01);检测鼻咽癌组两项指标的吸光度均值较另两组高;VCA-IgA单独检测及两项联合检测均具有较高的敏感性(79.2%),EA-IgA单独检测及两项联合检测均具有较强的特异性(93.8%).结论 联合检测鼻咽癌病人血清的VCA-IgA和EA-gA可兼具两者的性能优势,敏感性较高,特异性较强,对鼻咽癌的早期诊断具有重要的临床应用价值.     

鼻咽癌中EB病毒启动子Qp的突变及其功能学研究

【目的】 探讨鼻咽癌细胞中启动EB病毒核抗原1(EBNA1蛋白)表达的EB病毒Q启动子(Qp)的变异特征,比较有第62 225位点(g→a)和第62 422位点(g→c)两个点突变的Qp与原型Qp(B95.8型)的功能学差异及其生物学意义&#65377;【方法】 采用PCR的方法扩增29例鼻咽癌组织石蜡标本和14例健康成人外周血标本(总共43例)中的Qp序列,PCR产物测序后分析其突变情况,统计学分析Qp中的点突变与鼻咽癌的相关性&#65377;把突变型和原型Qp分别克隆到荧光素酶报告基因载体上,检测相对光强度(RLU),比较突变型与原型Qp启动转录的活性&#65377;使用染色质免疫共沉淀(ChIP)实验来比较突变型和原型Qp与Sp1蛋白的亲和力&#65377; 【结果】 通过PCR扩增和测序实验,证实Qp的突变与鼻咽癌有密切的相关性(P = 0.0395,< 0.05)&#65377;突变型Qp启动转录的活性明显高于原型(RLU之比约为2.5:1,P < 0.05),并且突变型Qp与Sp1的亲和力较原型Qp增强约1.52倍&#65377;【结论】 在鼻咽癌组织中,突变型Qp可能通过增强与Sp1亲和力的机制,使其启动转录的活性明显增强&#65377;Qp特定位点的突变在EB病毒对鼻咽上皮细胞的感染和转化过程中可能起了重要的作用&#65377;     

EB病毒壳抗原在大肠杆菌中的表达及纯化

本文报告对EB病毒壳抗原(VCA)带有抗原决定簇的蛋白质在大肠杆菌中的表达及其纯化。以纯化后的蛋白为抗原检测人血清中VCA/IgA抗体,鼻咽癌病人及某些急性EB病毒感染人群呈抗体阳性.而对照组呈阴性。这一结果提示VCA蛋白在鼻咽癌的普查中有应用价值。     

EB病毒四项抗体联合EB病毒DNA检测在鼻咽癌早期诊断中的应用价值

目的 探究EB病毒（Epstein-Barr virus,EBV）四项抗体联合EBV-DNA检测在鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC）早期诊断中的临床应用价值。方法 选取2021年1—12月三峡大学第一临床医学院（宜昌市中心人民医院）耳鼻咽喉头颈外科收治的鼻咽肿物患者71例,其中经鼻咽活检确诊为NPC的53例患者设为NPC组,确诊为非NPC的18例患者设为非NPC组,另选择同期健康体检者50例设为对照组。各组均行EBV四项抗体及EBV-DNA检测,分析联合检测对NPC的早期诊断价值。结果 NPC组衣壳抗原（VCA）-IgM阳性率高于对照组（P<0.05）;NPC组VCA-IgG、早期抗原（EA）-IgG、核抗原（NA）-IgG、EBV-DNA阳性率高于非NPC组及对照组（P<0.05）。随着肿瘤分期增高,NPC患者的EA-IgG、NA-IgG、EBV-DNA阳性率明显升高（P<0.05）,Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期患者的EA-IgG、EBV-DNA阳性率明显高于Ⅰ期患者（P<0.05）。EBV四项抗体与DNA联合检测诊断NPC的敏感度（96....     

EB病毒潜伏膜蛋白1与鼻咽癌关系的研究进展

鼻咽癌的发生发展与EB病毒密切相关。EB病毒潜伏膜蛋白1（LMP1）在细胞的恶性转化中起着重要的作用。本文就LMP1的结构、多态性、与鼻咽癌的相关性研究进行综述。     

聚合酶链反应检测EB病毒DNA在鼻咽癌诊断中的应用

流行病学、血清学和分子生物学的资源证实,爱泼斯坦－巴尔病毒（ＥＢＶ）感染与鼻咽癌（ＮＰＣ）有密切关系。血清ＥＢＶ－ＶＣＡ－ＩｇＡ,ＥＢＶ－ＥＡ－ＩｇＡ测定和聚合酶链（ＰＣＲ）检测组织中ＥＢＶ－ＤＮＡ已用于ＮＰＣ的临床诊断。本文评价上述方法在ＮＰＣ诊断中的实用价值。８５例病人双盲法测定血清ＥＢＶ－ＶＣＡ－ＩｇＡ（Ｉ）,ＥＢＶ－ＥＡ－ＩｇＡ（Ⅱ）;鼻咽活检组织用ＰＣＲ法检测ＥＢＶ－ＤＮＡ－（Ⅲ）和组织     

定量检测EB病毒VCA-IgA和EA-IgA抗体对EB病毒相关鼻咽癌的诊断意义

目的:评价EB病毒特异性VCA-IgA和EA-IgA抗体定量检测对EB病毒相关的鼻咽癌的诊断意义?方法:试验组为228例鼻咽癌血清标本,对照组为102例正常健康体检者血清标本?用ELISA法定量检测血清标本中EBV特异性VCA-IgA和EA-IgA抗体水平,以临床病理诊断为金标准,分析各血清检测指标的准确性?灵敏性?特异性及其cut-off值的设定?结果:正常健康人血清中EB病毒特异性VCA-IgA和EA-IgA抗体的平均水平分别为15 U/ml 和 11.5 U/ml,鼻咽癌患者血清中VCA-IgA和EA-IgA抗体的平均水平分别为56.5 U/ml 和 63.5 U/ml,鼻咽癌组抗体水平显著高于健康体检组?根据VCA-IgA?EA-IgA定量检测结果绘制ROC曲线图,曲线下面积分别为0.903 和 0.948,VCA-IgA?EA-IgA定量检测可用于鼻咽癌的准确诊断?根据ROC曲线图分析,cut-off值分别设定为30 U/ml 和23 U/ml?按此值设定时,VCA-IgA检测鼻咽癌的敏感性和特异性分别为84.9%和66.8%,EA-IgA检测鼻咽癌的敏感性和特异性分别为87.9%和91.1%?联合检测VCA-IgA和EA-IgA的敏感性为92%,特异性为91%?结论:以ELISA法定量检测VCA-IgA?EA-IgA的血清抗体水平对鼻咽癌具有诊断意义,尤其将两指标联合应用?     

siRNAs干扰EBNA1下调EBV阳性鼻咽癌细胞内ALOX12的表达

 【目的】 利用RNA干扰技术抑制C666-1细胞中EB病毒核抗原1(EBNA1)的表达,探索氧化应激与抗氧化相关基因的表达变化&#65377; 【方法】 采用蛋白质印迹证实了能有效抑制EBNA1表达的干扰序列,使用甲基噻唑基四唑(MTT)方法检测C666-1细胞的存活率,利用实时定量PCR芯片技术探索了氧化应激与抗氧化相关基因的转录谱变化,并通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹进行了验证&#65377;【结果】 EBNA1-1414和EBNA1-1437干扰序列转染C666-1细胞48 h后,分别可抑制59%和56%的EBNA1蛋白表达,细胞存活率分别降低了33%和24%&#65377;PCR芯片实验发现干扰EBNA1表达后48 h C666-1细胞中花生四烯酸盐12-脂氧合酶(ALOX12)蛋白表达有下调,谷胱甘肽还原酶(GSR)和过氧化物酶3(PRDX3)在转录水平表达上调&#65377; 【结论】 EBNA1或许能够通过上调ALOX12的表达间接地发挥促鼻咽癌作用&#65377;     

Epstein-Barr病毒RPMS1基因的克隆及其编码区序列分析

目的：克隆Epstein—Barr(EB)病毒的RPMS1基因，并分析其编码区序列的变异情况。方法：从7例高发区鼻咽癌组织中分别提取总RNA，以RT—PCR扩增出RPMS1基因编码序列，克隆入pGEM—T载体，构建重组质粒pGEM—T／RPMS1，重组质粒经PCR、BamHⅠ和HindⅢ双酶切鉴定，并进行序列测序。结果：成功克隆了高发区鼻咽癌的RPMS1基因，该基因编码序列第151nt发生G→A替换，导致相应第51位氨基酸由天冬氨酸变为天冬酰氨。该变异位于DNA第Ⅴ外显子的155849nt，变异频率为6／7。结论：高发区鼻咽癌EB病毒RPMS1基因的编码序列存在变异；RPMS1基因可能参与高发区鼻咽癌的发生。     

Diagnostic value of Epstein-Barr virus capsid antigen-IgA in nasopharyngeal carcinoma: a meta-analysis

Background Non-invasive nasopharyngeal carcinoma （NPC） screening usually involves serological testing for the presence of IgA antibodies to Epstein-Barr virus （EBV） capsid antigen （VCA）. The present meta-analysis determined the accuracy of VCA-lgA in the diagnosis of NPC.Methods A systematic review of studies was conducted and data on the accuracy of VCA-lgA concentrations in the diagnosis of NPC were pooled using random effects models. Receiver operating characteristic curves were used to summarize the overall test performance. Results Twenty studies met the inclusion criteria for the meta-analysis. The summary estimates for VCA-lgA in the diagnosis of NPC were： sensitivity 0.91 （95% confidence interval （Cl）： 0.90-0.92）, specificity 0.92 （95% Cl： 0.92-0.93）, positive likelihood ratio 31.65 （95% Cl： 10.99-91.15）, negative likelihood ratio 0.10 （95% Cl： 0.07-0.13） and diagnostic odds ratio 414.59 （95% Cl： 174.96-982.42）. The area under the summary receiver operating characteristic curves was 0.98.Conclusion The sensitivity and the specificity of serum VCA-lgA are very high, suggesting that the presence of VCA-lgA in peripheral blood is a valuable predictor for NPC.     

Epstein-Barr virus encoded latent membrane protein 1 induces TRAF1 expression to promote anti-apoptosis activity via NF-κB signaling pathway in nasopharyngeal carcinoma

Objectives To identify whether Epstein-Barr virus (EBV) encoded latent membrane protein 1(LMP1) can induce tumor necrosis factor receptor-associated factor 1 (TRAF1) expression and promote its anti-apoptosis activity via the NF-KB signaling pathway, and assess that LMP1 suppresses apoptosis in nasopharyngeal carcinoma (NPC).Methods A stable transfected cell line HNE2-LMP1 was established by introducing LMP1 cDNA into HNE2 cells. Transactivation of TRAF1 was determined by luciferase reporter assay, while expression of TRAF1 mRNA was detected by RT-PCR and expression of TRAF1 protein and caspase 3 by Western blot analysis. Apoptosis activity was observed through fluorescence staining.Results LMP1 induced TRAF1 expression in NPC cells and caused a decrease in apoptosis. This induction could be blocked by antisense LMPI. Moreover, LMPl-mediated induction of a TRAF1 promoter-driven reporter gene was significantly impaired when the KB site KB1 or KB5 was disrupted,whereas mutation of κB3 had only a minor effect on LMP1 dependent up-regulation of the reporter gene.Conclusion LMP1 induces TRAF1 expression and promotes its anti-apoptosis activity via the NF-κB signaling pathway, which may be one of the mechanisms that LMP1 uses to suppress apoptosis in NPC cells.     

酶联免疫吸附检测血清EB病毒VCA-IgA和EA-IgG诊断鼻咽癌

目的：评估采用酶联免疫吸附（ELISA）检测VCA－IgA和EA－IgD在鼻咽癌血清学诊断中的价值。方法：收集33例鼻咽癌患者和58例健康成年人的血清，用EISA检测VCA－IgA和EA－IgG，用免疫酶标法（IE）检测VCA－IgA和EA－IgA，并对两种检测方法的结果进行比较。结果：用ELISA和IE检测VCA－IgA的灵敏度均为0．9697。ELISA检测EA－IgG灵敏度（0．8788）高于IE检测EA－IgA（0．7879）。ELISA联合检测VCA－IgA和EA－IgG灵敏度（0．8485）高于IE联合检测VCA－IgA和EA－IgA（0．7879）。ELISA检测VCA－IgA和EA－IgG，33例鼻咽癌患者中，28例为双阳性，1例VCA－IgA阴性者EA－IgG阳性；4例EA－IgG阴性者VCA－IgA阳性。ELISA分别检测VCA－IgA和EA－IgG，9例无颈淋巴转移者与24例有颈淋巴结转移者两组均数之间均无统计学差异；19例临床早期患者（Ⅰ期和Ⅱ期）和14例晚期患者（Ⅲ期和Ⅳ期）两组均数之间亦均无统计学差异，结论：ELISA检测血清VCA－IgA和EA－IgG完全可以替代IE检测血清VCA－IgA和EA－IgA，获得更客观，有效的鼻咽癌血清学诊断，ELISA检测VCA－IgA和EA－IgG，这两个指标在鼻咽癌血清学诊断中具有互补作用，应联合应用，ELISA检测VCA－IgA和EA－IgG数值大小能反映鼻咽癌患者有无淋巴结转移及临床分期的早期。     

Epstein-Barr病毒RPMS1基因在鼻咽癌组织中的表达及其细胞内定位

目的:了解RPMS1基因在鼻咽癌组织中的表达特点,并明确该基因在上皮细胞中表达的亚细胞区域,为进一步研究其生物学功能提供依据. 方法:提取鼻咽癌组织及各细胞系的DNA和总RNA,以巢式PCR扩增W片段来检测Epstein-Barr病毒(EB病毒)的感染情况,RT-PCR检测RPMS1基因在鼻咽癌组织、细胞株中的表达,并克隆入pEGFP-C2真核表达载体,通过脂质体转染技术将其介导入人胚肾上皮(HEK293)细胞,以激光共聚焦显微镜观察其蛋白表达的亚细胞区域. 结果:除BJAB细胞株外,所有标本中均检测到EB病毒W片段;RPMS1 mRNA在鼻咽癌组织中的表达率为83.3%(45/54),在鼻咽非癌组织中则仅为4%(1/25),二者有显著性差异(P<0.001),鼻咽癌外周血淋巴细胞中未检测到RPMS1表达,RPMS1在SUNE1细胞中的表达高于Raji细胞,但不表达于B95.8细胞;RPMS1可稳定表达于HEK293细胞,其编码蛋白的表达以胞核为主. 结论:EB病毒RPMS1基因在高发区鼻咽癌组织中存在高水平转录,在体外可稳定表达于上皮细胞的胞核,提示RPMS1编码蛋白可能作为核转录因子通过调控细胞增殖相关的信息传递而参与上皮癌变过程.     

EB病毒Rta/IgG、EBNAl/IgA、VCA/IgA及EA/IgA抗体与鼻咽癌分期的关系

目的 探讨EB病毒Rta/lgG、EBNA1/IgA、VCA/IgA及EA/IgA抗体与鼻咽癌临床分期的关系.方法 收集211例未经治疗的鼻咽癌患者的血清,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测Rta/IgG、EBNA1/IgA抗体,用免疫酶法检测VCA/IgA及EA/IgA抗体,按92分期法进行分期,分别计算各T、N、M分期及临床分期的各抗体阳性率及抗体水平并进行统计学分析.结果 鼻咽癌各T、N、M分期及临床分期组Rta/IgG抗体rA值均无统计学差异(P>0.05).Tl期的EBNA1/IgA抗体rA值明显低于其它T分期,NO期明显低于其它N分期,临床I期明显低于其它临床分期(P<0.05).VCA/IgA、EA/IgA抗体滴度各N分期及临床分期间比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 EB病毒Rta/IgG抗体表达与鼻咽癌分期无关.EBNA1/IgA抗体在早期鼻嘲癌表达水平相对较低.而VCA/IgA、EA/IgA抗体水平与颈部淋巴结转移程度相关,对于评估鼻咽癌临床分期有一定的参考价值.     

Detection of Epstein-Barr virus DNA in plasma/serum: a useful serological indicator for diagnosis of nasopharyngeal carcinoma

Objective To compare the detection rates of Epstein-Barr virus (EBV) DNA in the serum/plasma between apparently healthy adults (AHAs) and nasopharyngeal carcinoma (NPC) patients in attempt to evaluate the efficiency of EBV DNA assay for serodiagnosis of NPC.Methods The plasma and serum were obtained from 58 AHAs and 66 untreated NPC patients. EBV DNA W-fragment was detected using nested ploymerase chain reaction (PCR). Immunoenzymatic assay for titration of IgA-VCA was also adopted. Results EBV DNA detection rate (84.85%) in the plasma/serum of 66 NPC patients was significantly higher than that (10.34%) in 58 AHAs. The sensitivity of plasma/serum EBV DNA assay (0.8485) was higher than that (0.8030) of titrating IgA-VCA (positive criterion≥1∶40) though the specificities of these two tests were the same (0.8966). The correct rate, predictive value of a positive test, and Odds ratio of dual positivity (0.8387, 0.9792 and 141.0, respectively) were higher than those of single positivity either to plasma/serum EBV assay (0.5242, 0.7333 and 1.1423, respectively) or to IgA-VCA≥1∶40 test (0.4839, 0.5385 and 1.0480, respectively). Conclusion The EBV DNA detection in the plasma/serum using nested PCR may be a useful indicator for serodiagnosis of NPC.     

鼻咽癌患者和EB病毒血清学阳性者外周血CD_4及CD_8细胞的变化

本文测定了鼻咽癌(NPC)患者和EB病毒(EBV)血清学阳性及阴性者T细胞亚群的变化。结果表明,这三组人群的CD_4~+细胞百分率分别为33.72±6.83,43.78±11.46和49.16±9.14;CD_8~+细胞百分率分别为31.26±5.64,43.88±10.69和35.74±8.53。各组之间相差有显著统计学意义。NPC患者和VCA-IgA抗体阳性者的CD_8/CD_4细胞比值下降。提示体内EBV激活和增殖与T调节细胞变化有关。