Snail基因慢病毒载体的构建及其促进结肠癌细胞上皮间质化的研究

【目的】 构建Snail基因慢病毒载体,研究Snail基因的表达与结肠癌细胞上皮间质化的关系。【方法】 利用Gateway Technology法构建Snail基因表达质粒和空白对照质粒,行慢病毒包装,成功构建Snail基因慢病毒载体后,在结肠癌细胞系caco2中转染Snail基因质粒及空白载体对照,构建稳转细胞株caco2- Snail和caco2-vc,并在LoVo细胞中瞬时转染上述质粒,对Snail及E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达进行检测,并用划痕、Tanswell实验对细胞的迁移侵袭能力进行研究。【结果】 成功构建Snail基因慢病毒载体并经测序证实：在转染Snail的细胞株中有明显的Snail基因及蛋白表达,其上皮标记E-cadherin的表达比转染空载体的对照组细胞明显下调,且其迁移侵袭能力要强于对照组细胞。【结论】 Snail基因慢病毒载体在宿主细胞中表达稳定可靠,可以作为研究上皮间质化很好的工具,Snail基因有明显促进结肠癌细胞上皮间质化的作用。     

转录因子FOXC1促进胶质瘤细胞系U87的侵袭能力

目的：探讨转录因子FOXC1对人脑胶质瘤细胞系U87侵袭的促进作用。方法：qPCR、Western blot检测胶质瘤细胞系U87、U251及正常星型胶质细胞中FOXC1 mRNA和蛋白表达水平。将FOXC1-siRNA转染至U87细胞中,分别用qPCR、Western blot检测FOXC1-siRNA的转染效率。细胞划痕实验和Transwell实验检测U87细胞转染FOXC1-siRNA后对细胞侵袭能力的影响,利用 Western blot检测U87细胞上皮间质化相关通路蛋白（Snail1、β-catenin、Twist1）、标记蛋白（N-cadherin、Vimentin、E-cadherin）表达水平。结果：U87细胞下调FOXC1表达后侵袭能力明显减弱,上皮间质化相关通路蛋白（Snail1、β-catenin、Twist1）表达水平下降,上皮细胞标记蛋白表达水平E-cadherin表达水平升高、间质细胞标记蛋白N-cadherin、Vimentin表达水平降低。结论：转录因子FOXC1通过上皮间质化促进胶质瘤细胞的侵袭。     

姜黄素对肝细胞癌耐药细胞上皮间质转化的影响及分子机制研究

目的探讨姜黄素对肝细胞癌耐药细胞HepG2/ADM上皮-间质转化（EMT）的影响及分子机制。方法取人肝细胞癌耐药细胞HepG2/ADM,以预实验确定的姜黄素合适浓度20μmol/L处理细胞。采用噻唑蓝溴化四唑法、划痕实验、Transwell实验分别检测姜黄素对细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响,Westernblot法检测姜黄素对EMT标志物及NF-κB/Snail通路相关蛋白表达的影响。结果相较于HepG2/ADM组,HepG2/ADM+姜黄素组细胞增殖、迁移和侵袭能力均明显减弱（均P＜0.05）,E-cadherin蛋白表达上调（P＜0.05）,N-cadherin、Vimentin、NF-κBp65、Snail蛋白表达均明显下调（均P＜0.05）。HepG2/ADM细胞过表达Snail后,由姜黄素诱导的E-cadherin表达上调、N-cadherin和Vimentin表达下调均被逆转（均P＜0.05）,细胞增殖、迁移和侵袭能力均明显增强（均P＜0.05）。结论姜黄素能够抑制HepG2/ADM细胞增殖、迁移和侵袭能力,并通过NF-κB/Snail通路抑制细胞的EMT过程。     

Hedgehog信号通路调控胰腺癌细胞上皮间质转化的作用机制

目的 观察特异性阻断hedgehog(Hh)信号通路对胰腺癌Panc-1细胞上皮间质转化(EMT)过程的影响,探讨其分子机制.方法 设计并合成针对Smoothened (SMO)基因特异性的RNA干扰靶点,运用慢病毒介导的RNA干扰技术沉默SMO基因表达以阻断人胰腺癌Panc-1细胞Hh信号通路.应用Matrigel/Transwell法检测阻断Hh信号通路后胰腺癌细胞侵袭能力的变化,应用实时PCR及Western印迹方法检测阻断Hh通路后Panc-1细胞EMT标志物E-cadherin、N-cadherin、β-catenin、Vimentin、Fibronectin等的表达变化;并检测EMT调控因子Snail、Slug等的表达变化.结果 稳定干扰SMO基因表达阻断Hh信号通路后,人胰腺癌Panc-1细胞侵袭能力明显降低,p=0.020;上皮表型标志物E-cadherin表达明显上调,而间质表型Vimentin、Fibronectin、N-cadherin等的表达水平显著下调,P值分别为0.020、0.001、0.031和0.022;与对照组相比,SMO干扰组细胞中转录因子Snail、Slug的表达水平均显著下调,P值分别为0.018和0.016.结论 应用慢病毒介导的RNA干扰技术特异性沉默SMO基因阻断人胰腺癌细胞中Hh通路活性,可显著抑制Panc-1细胞EMT过程,其机制与下调转录因子Snail及Slug表达有关.     

OAZ1基因稳定表达SCC15细胞株的构建及其对舌鳞状细胞癌上皮间质化的影响

目的 探索鸟氨酸脱羧酶抗酶(OAZ1)对舌鳞癌细胞株SCC15上皮间质化的影响及相关机制.方法 构建框移位点突变的OAZ1过表达慢病毒表达载体pLVX-Neo-OAZ1-IRES-ZsGreen,包装病毒并感染SCC15细胞,采用有限稀释法挑取荧光强度较高的单克隆细胞株;利用RT-PCR和Western blot检测OAZ1以及上皮间质化相关基因(E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、Zeb1、Snail、Twist1、TGF-β1、Smad1)的mRNA水平和蛋白水平.结果 成功构建了OAZ1基因稳定表达的SCC15细胞株,且OAZ1的过表达可以抑制Vimentin、N-cadherin、TGF-β1的mRNA和蛋白水平表达;此外,OAZ1可以促进Smad1的蛋白水平降低.结论 OAZ1可以抑制舌鳞癌细胞的上皮间质化,其机制可能涉及TGF-β1信号通路和Smad1信号通路的抑制.     

β-catenin在硬皮病皮损中的表达及其对人表皮角质形成细胞上皮-间质转化的影响

  目的  探讨β-连环蛋白(β-catenin)在系统性硬皮病(SSc)患者皮损中的表达及其对人表皮角质形成细胞上皮-间质转化(EMT)的影响。  方法  采用免疫组织化学SP法检测45例SSc患者皮损组织及20例健康成人皮肤组织中β-catenin、Snail1、上皮性钙黏附蛋白(E-cadherin)的表达情况。采用不同质量浓度Wnt10b〔0(空白对照)、2、4 ng/mL〕处理人表皮角质形成细胞HaCaT 48 h,免疫荧光实验检测β-catenin在HaCaT细胞中的定位;实时荧光定量PCR检测HaCaT细胞中Snail1、Snail2 mRNA水平;Western blot法检测HaCaT细胞中β-catenin、波形蛋白(Vimentin)、神经性钙黏附蛋白(N-cadherin)、E-cadherin蛋白表达。  结果  β-catenin、Snail1、E-cadherin阳性率在SSc患者皮损组织中依次为100%、88.89%和2.22%,在健康成人皮肤组织中依次为0%、10.00%和95.00%,两组比较差异均有统计学意义(P < 0.05)。与空白对照组比较,不同质量浓度Wnt10b(2、4 ng/mL)处理可诱导HaCaT细胞中β-catenin表达上调并促进β-catenin由细胞质向细胞核中转位,同时还可以提高HaCaT细胞中Snail1和Snail2 mRNA表达(P < 0.05),并上调Vimentin、N-cadherin蛋白表达和下调E-cadherin蛋白表达(P < 0.05)。  结论  SSc皮损中存在异常活化的Wnt/β-catenin信号通路及异常表达的EMT相关蛋白,且激活Wnt/β-catenin信号通路可促进HaCaT细胞EMT的发生。     

RhoGDI2调控TGF-β1对气道上皮-间质转化的研究

目的：探讨鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2(Rho guanosine diphosphate dissociation inhibitor 2, RhoGDI2)在气道上皮-间质转化(epithelial mesenchymal transformation, EMT)中的作用,以及可能的作用机制,有助于揭示气道重塑的分子生物学机制并提供新的治疗靶点。方法：构建RhoGDI2过表达气道上皮细胞(16HBE)模型。Western Blot检测RhoGDI2蛋白的表达。构建成功后,Western Blot检测细胞中E-cadherin、N-cadherin、Snail及转化生长因子β1(transforming growth factor-β1, TGF-β1)的表达;同时收集细胞培养上清液,双抗体夹心酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测上清液中TGF-β1的表达水平。在RhoGDI2过表达16HBE细胞模型中加入TGF-β1抑制剂,进一步明确TGF-β1在RhoGDI2调控EMT过程中的作用。结果：(1)Western Blot检测16HBE过表达组RhoGDI2表达水平较对照组明显升高(P＜0.01)。(2)过表达组16HBE中N-cadherin、Snail表达较对照组明显升高(P＜0.05、P＜0.01),而E-cadherin表达明显下降(P＜0.01);RhoGDI2过表达组细胞中、上清液中TGF-β1的表达水平亦较对照组明显升高(P＜0.05、P＜0.01)。(3)过表达组中加入TGF-β1抑制剂后,TGF-β1、N-cadherin、Snail表示水平下降,E-cadherin表达水平升高(P＜0.05)。结论：RhoGDI2可通过调控TGF-β1的表达促进人气道EMT过程。     

RhoA/ROCK通路调控前列腺增生细胞上皮间质转化

目的:通过研究RhoA/ROCK通路对转化生长因子-β(TGF-β)诱导的良性前列腺增生(BPH)上皮细胞发生的上皮-间质转化(EMT)的影响,提示BPH的可能发生机制,为治疗BPH提供新的靶点。方法:TGF-β处理BPH上皮细胞系(BPH-1),检测EMT相关分子和RhoA的mRNA表达。随后用ROCK抑制剂Y-27632和TGF-β共处理BPH-1,检测EMT相关分子和RhoA的mRNA和蛋白表达。结果:TGF-β诱导BPH-1细胞发生EMT,上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)表达降低,神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)表达升高,同时BPH-1细胞RhoA的mRNA表达上调。Y-27632能够逆转TGF-β诱导的BPH-1细胞E-cadherin、N-cadherin、vimentin的mRNA表达和E-cadherin、N-cadherin蛋白表达改变,差异具有统计学意义。结论:EMT在BPH的发生过程中可能有着重要作用,而RhoA/ROCK通路参与了TGF-β诱导的EMT的调控。     

西奥骨化醇抑制TGF-β1诱导的肝癌细胞SMMC-7721上皮-间质转化

目的 研究西奥骨化醇(seocalcitol,EB1089)对TGF-β1诱导肝癌细胞SMMC-7721上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transitions,EMT)的抑制作用.方法 用不同浓度维生素D类似物EB1089(1、10、100、1 000 nmol/L)作用于肝癌细胞SMMC-7721 6、12、24、48 h,筛选出具有统计学意义的作用浓度和时间.将肝癌细胞SMMC-7721分为4组(EB1089组、TGF-β1组、EB1089+TGF-β1组和空白对照组),分别干预48 h.用相差倒置显微镜观察细胞形态变化;通过实时RT-PCR和Western blot分别检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin的mRNA和蛋白表达情况;迁移实验和侵袭实验检测EB1089对肝癌细胞SMMC-7721侵袭和迁移能力的影响.结果 TGF-β1作用后肝癌细胞SMMC-7721呈现长梭形,并伸出较多触角,EB1089能明显改善这种形态变化;EB1089可有效升高TGF-β1所致的E-cadherin mRNA和蛋白低表达(P＜0.05),同时降低N-cadherin、Vimentin mRNA和蛋白表达(P＜0.05);EB1089对TGF-β1诱导的细胞侵袭、迁移具有抑制作用(P＜0.05).结论 维生素D类似物EB1089能有效抑制TGF-β1诱导的肝癌细胞SMMC-7721上皮-间质转化现象和侵袭、迁移能力.     

TGF-β1对胃癌细胞BGC-823侵袭性的影响

目的 研究转化生长因子β1(TGF-β1)对人胃癌细胞BGC-823侵袭性的影响.方法 将体外培养的人胃癌细胞BGC-823用外源性人重组TGF-β1干预后,用四甲基偶氮唑蓝比色法(MT法)检测TGF-β1对细胞增殖的影响;免疫细胞化学法、免疫荧光法、流式细胞术分别检测Snail、E-cadher-in及N-cadherin蛋白的表达;Transwell侵袭实验检测TGF-β1对细胞侵袭性的影响.结果 ①经过18 h的作用,低浓度(1、5和10ng/ml)的TGF-β1促进胃癌细胞的增殖,高浓度(20和50 ng/ml)的TGF-β1则抑制胃癌细胞的增殖,且呈剂量依赖性;选取不同时间段(18、42、66 h)检测细胞生长曲线,发现不呈时间依赖性;②在外源性TGF-β1作用下,胃癌细胞均不同程度地表达Snail、E-cadherin及N-cadherin,其中TGF-β1对Snail、N-cadherin表达有促进作用,而对E-cadher-in的表达有抑制作用,E-cadherin和N-cadherin的表达呈相反的趋势;③选取不同浓度的TGF-β1(1、10和20 ng/ml),发现10 ng/ml的TGF-β1明显促进胃癌细胞的侵袭性(P<0.05).结论 不同浓度的TGF-β1对胃癌细胞增殖的影响不同;TGF-β1有增加胃癌细胞侵袭性的作用,该作用可能是通过上皮间质转化而产生,钙黏蛋白表达的变化可能是重要的分子学机制之一.     

华支睾吸虫分泌排泄蛋白对肝癌细胞系HepG2细胞增殖、迁移和上皮间质转化的影响

目的探讨华支睾吸虫分泌排泄蛋白(CsESP)对肝癌细胞株HepG2增殖、迁移和上皮间质转化(EMT)的影响。方法采用CCK-8实验测定不同浓度的CsESP对肝癌细胞HepG2的活力、细胞增殖能力和细胞毒性作用的影响;细胞划痕实验检测在不同浓度(1、10、20、50、100和200μg/mL)CsESP的作用下(设PBS对照组),HepG2细胞迁移的变化;荧光定量PCR法(RT-qPCR)检测HepG2细胞的癌变相关因子(MMP2和p300)以及EMT基因如E-钙黏蛋白E(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和α-连环蛋白(α-catenin)mRNA的表达水平。结果 CCK-8实验结果显示,在CsESP浓度为10和20μg/mL时,细胞增殖明显,当CsESP浓度超过20μg/mL时,细胞活力降低。细胞划痕实验结果显示,在不同浓度CsESP的作用下,在0、24、48、72 h 4个时间点分别采集照片,并对其相对迁移面积进行统计分析,发现24和48 h 2个时间点,10和20μg/mL组的迁移能力明显高于PBS组和高浓度(50μg/mL)组,差异有统计学意义(P0.05)。RT-qPCR检测出癌变基因MMP2以及N-cadherin、Vimentin、α-catenin的mRNA水平高于PBS组,差异有统计学意义(P0.05),而癌变因子p300和E-cadherin水平并无明显变化。结论在CsESP的最适作用浓度下,CsESP可促进癌细胞增殖、癌变、迁移和上皮间质转化。     

IL-33介导M2巨噬细胞在口腔黏膜上皮-间充质转化中的相关作用机制

目的 探讨白细胞介素33（IL-33）介导M2巨噬细胞在口腔黏膜上皮-间充质转化（EMT）中的相关作用机制。方法 将25只雄性BALB/c小鼠分为口腔黏膜成纤维化（OSF）组（20只）和对照组（5只）。OSF组通过槟榔碱刺激建立OSF小鼠模型,对照组使用PBS注射液在相同部位给药。观察口腔黏膜组织巨噬细胞表型、IL-33以及转化生长因子-β1（TGF-β1）/Smad通路表达水平;培养人口腔黏膜细胞并与M2巨噬细胞相互作用体外模型,使用IL-33添加剂和TGF-β受体抑制剂,观察EMT标志物表达水平。结果 HE染色和Masson染色证实了口腔黏膜纤维化模型建立成功,与对照组比较,OSF组口腔黏膜组织中E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达水平降低,波形蛋白（Vimentin）表达水平升高（均P＜0.05）。此外,观察到IL-33和TGF-β水平升高以及TGF-β1/Smad通路激活,巨噬细胞在口腔黏膜组织中聚集且表型为M2巨噬细胞。与空白对照组比较,IL-33组E-cadherin水平降低,Vimentin的表达增高（均P＜0.05）;LY-2109761+IL-33组与IL-33组相比,E-cadherin的表达增高,Vimentin的水平降低（均P＜0.05）。Western blot检测TGF-β、p-Smad2和Smad2的表达水平提示,与IL-33组相比,LY2109761+IL-33组IL-33对TGF-β有促进作用（P＜0.05）;IL-33组与空白对照组相比,p-Smad2水平显著提高（P＜0.05）;LY-2109761+IL-33组与IL-33组相比,p-Smad2水平显著降低（P＜0.05）。结论IL-33通过介导M2巨噬细胞调控TGF-β1/Smad通路促进口腔黏膜上皮间质转化     

AMPK抑制TGF-β信号通路减轻EMT诱导膀胱癌转移机制研究

目的探讨AMPK抑制TGF-β信号通路减轻EMT诱导膀胱癌转移机制。方法采用Lipofectamine2000介导AMPKα1转染至人膀胱移行上皮癌BIU-87,噻唑蓝(MTT)比色法和AnnexinV-FITC/PI双染法检测shRNA对细胞增殖和凋亡的作用。细胞划痕实验、Transwell小室侵袭实验检测体外细胞迁移和侵袭能力。Western blot检测E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白的表达情况。结果转染后的C4-2 DN细胞生长速度明显慢于未转染的BIU-87细胞及转染空载体的C4-2 E细胞,且在24 h内的细胞凋亡率均明显高于转染空载体的C4-2 E,组间差异具有统计学意义(P0.05)。AMPK抑制TGF-β信号通路能够抑制人膀胱移行上皮癌BIU-87细胞的增殖和侵袭迁移(P0.05)。同时,AMPK抑制TGF-β信号通路下调N-cadherin和Vimentin蛋白水平,上调E-cadherin蛋白表达。结论 AMPK抑制TGF-β信号通路下调N-cadherin和Vimentin蛋白水平,上调E-cadherin蛋白表达,减轻EMT诱导膀胱癌转移。     

ORP8对结直肠癌DLD-1细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的 观察和分析氧化固醇结合蛋白相关蛋白8(ORP8)蛋白对人结直肠癌DLD-1细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,并初步探究其影响机制.方法 通过在结直肠癌DLD-1细胞中转染ORP8表达质粒或特异性沉默siRNA上调和下调ORP8的表达,采用CCK-8、Transwell实验检测干扰或过表达ORP8对DLD-1细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;采用Western blot检测了 ORP8对DLD-1细胞细胞外蛋白调节激酶(ERK1/2)的总蛋白及其磷酸化(p-ERK1/2)水平和上皮-间质转化(EMT)相关分子标志物蛋白上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达的影响.结果 干扰DLD-1细胞ORP8表达,细胞增殖、迁移和侵袭能力均升高(P＜0.01),EMT相关分子标志物中上皮标志物E-cadherin蛋白表达水平下降,间质标志物Vimentin和N-cadherin蛋白表达水平升高,ERK1/2蛋白的磷酸化水平也升高;相反,过表达ORP8,细胞增殖、迁移和侵袭能力均下降(P＜0.01,P＜0.01,P＜0.05),上皮标志物E-cadherin蛋白表达水平升高,间质标志物Vimentin和N-cadherin蛋白表达水平降低,p-ERK1/2水平也降低.结论 ORP8蛋白能够抑制结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与阻断EMT和抑制ERK1/2磷酸化有关.     

Runx3对人骨肉瘤143B细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制

目的探讨Runt域转录因子3（Runx3）对人骨肉瘤细胞143B细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法构建Ruxn3的RNA干扰（Ad-siRunx3）和过表达Runx3（Ad-Runx3）的重组腺病毒质粒;MTT和克隆形成实验检测143B细胞的增殖;划痕实验和Transwell小室实验分别检测143B细胞的迁移和侵袭;RT-qPCR和Western blot检测上皮-间质转化（EMT）关键分子E-cadherin、N-cadherin、Vimentin和Snail的表达;Western blot检测PI3K/AKT和丝裂原活化蛋白激酶（MAPKs）信号通路关键分子的表达。结果下调Runx3表达可促进143B细胞的增殖、迁移和侵袭,增强N-cadherin、Vimentin和Snail表达,但抑制E-cadherin表达;过表达Runx3则可抑制143B细胞增殖、迁移和侵袭,抑制N-cadherin、Vimentin和Snail表达,但促进E-cadherin表达;同时,下调Runx3表达可增加AKT、p38和ERK1/2磷酸化水平,而过表达Runx3则能够降低AKT、p38和ERK1/2的磷酸化水平。结论 Runx3能抑制143B细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与Runx3阻止EMT进程、抑制AKT信号以及p38和ERK1/2 MAPKs信号途径有关。     

肿瘤坏死因子受体相关因子6高表达对子宫内膜癌细胞侵袭、迁移及上皮间质转化的影响

目的:探究肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)高表达对子宫内膜癌细胞侵袭、迁移及上皮间质转化的影响。方法:将Ishikawa细胞随机分为三组：对照组(子宫内膜癌细胞Ishikawa未转染)、NC组(子宫内膜癌细胞Ishikawa转染空载质粒)和TRAF6高表达组(子宫内膜癌细胞Ishikawa转染TRAF6过表达质粒);实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹(WB)检测TRAF6 mRNA以及蛋白表达情况;Transwell实验、划痕实验以及裸鼠移植瘤实验检测细胞侵袭、迁移能力;WB检测上皮间质转化标志蛋白E型钙黏蛋白(E-cadherin)、闭合蛋白(Occludin)、N型钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达水平。结果:相较于人子宫内膜上皮细胞,子宫内膜癌细胞Ishikawa中TRAF6 mRNA和蛋白表达显著降低(均P<0.05)。相较于对照组和NC组,TRAF6高表达组的TRAF6 mRNA水平和蛋白表达显著升高,细胞侵袭、迁移能力和Vimentin、N-cadherin蛋白表达显著降低,Occludin、E-cadherin...     

IL-33通过TGF-β1/Smad3信号通路调控CES诱导细胞上皮-间质转化的机制研究

目的 探讨IL-33在烟草提取物(CSE)诱导细胞上皮-间质转化(EMT)形成过程中的作用机制。方法 将人支气管上皮细胞(16HBE)分为对照组、CSE组、CSE+Anti-IL-33组、CSE+IL-33组,按照实验分组分别给予PBS、5%CSE、5%CSE+Anti-IL-33(3μg/mL)、5%CSE+IL-33(40 ng/mL)刺激72 h。免疫荧光检测细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)荧光强度,Western blot检测细胞E-cadherin、Vimentin、肿瘤发生抑制蛋白2(ST2)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、母亲信号蛋白同源物(Smad3)、磷酸化Smad3(p-Smad3)蛋白表达。结果 与对照组比较,CSE暴露后干预各组细胞E-cadherin蛋白表达降低,Vimentin、ST2、TGF-β1、p-Smad3蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与CSE组比较,CSE+Anti-IL-33组E-cadherin蛋白表达升高,Vimentin、ST2、TGF-β1、p-Smad3蛋白表达降低,C...     

白藜芦醇对食管鳞癌Eca-109细胞侵袭迁移及EMT的影响

目的:研究白藜芦醇(RES)对食管鳞癌Eca-109细胞侵袭迁移及上皮间质转化(EMT)的影响.方法:用不同浓度(50和100 μmol/L)的RES处理Eca-109细胞,采用细胞划痕实验、Transwell小室实验检测细胞迁移侵袭能力,荧光定量PCR检测EMT蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin和MMP-2、MMP-9 mRNA的表达,Western blot检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、MMP-2和MMP-9蛋白表达.结果:与对照组比较,RES各浓度(50 μmol/L和100 μmol/L)组均可明显抑制Eca-109细胞侵袭迁移(P<0.01),下调N-cadherin、Vimentin、MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白表达(P<0.05~P<0.01),增加E-cadherin mRNA和蛋白表达(P<0.01).结论:RES抑制Eca-109细胞侵袭迁移能力,其机制可能通过下调MMP-2、MMP-9的表达,调控EMT蛋白(E-cadherin、N-cadherin和Vimentin)的表达、抑制上皮间质转化过程.     

上皮-间质转化胶质瘤细胞的干细胞样特性及白藜芦醇对其干细胞样特性的抑制作用

目的：探讨发生上皮-间质转化（EMT）的胶质瘤细胞的干细胞样特性,阐明白藜芦醇（Res）对其干细胞样特性的抑制作用。方法：采用TGF-β1诱导胶质瘤U87细胞发生EMT,倒置显微镜观察细胞的形态表现,Western blotting法检测细胞间质标志物N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）和诱导EMT的转录因子（Snail、Slug、Zeb1和Twist1）表达水平。确定胶质瘤细胞发生EMT后,实验分为对照组（U87细胞不做处理）、EMT组（TGF-β1诱导胶质瘤细胞发生EMT）和Res处理组（Res处理发生EMT的U87细胞）,检测各组胶质瘤U87细胞二代胶质球形成数和细胞中干细胞标志物（Bmi1和Sox2）表达水平。结果：经TGF-β1处理48 h的胶质瘤U87细胞表现出分散、拉长和类似成纤维细胞的外观。与对照组比较,不同浓度TGF-β1组胶质瘤细胞中N-cadherin、Vimentin、Snail、Slug、Zeb1和Twist1表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）,表明胶质瘤U87细胞发生EMT改变。与对照组比较,EMT组胶质瘤U87细胞二代胶质球形成数明显增多（P<0.01）,胶质瘤细胞中干细胞标志物Bmi1和Sox2表达水平升高（P<0.05或P<0.01）。与EMT组比较,Res处理组胶质瘤U87细胞二代胶质球形成数明显减少（P<0.01）,胶质瘤细胞中干细胞标志物Bmi1和Sox2表达水平明显降低（P<0.01）。结论：发生EMT的胶质瘤U87细胞呈现干细胞样特性,Res能抑制其干细胞样特性。     

LncRNA FEZF1-AS1调控特发性肺间质纤维化的机制研究

目的 探讨FEZ家族锌指1-反义RNA 1（LncRNA FEZF1-AS1）对肺间质纤维化细胞增殖、迁移、侵袭能力及上皮-间充质相互作用（EMT）的影响及其作用机制。方法 将转化生长因子-β₁（TGF-β₁）作用于A549细胞,诱导肺间质纤维化细胞模型,将其分为空白对照组（A549细胞组）和模型组。Western blotting检测细胞E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）及波形蛋白（Vimentin）表达,观察模型复制是否成功;实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测细胞LncRNA FEZF1-AS1和miR-200c-3p基因表达。根据实验目的和转染质粒不同,将A549细胞分为空白对照组（Blank组）、TGF-β₁ + Si LncRNA FEZF1-AS1 NC组、TGF-β₁ + Si LncRNA FEZF1-AS1组。CCK-8法检测细胞增殖能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell检测细胞侵袭能力。Western blotting检测细胞E-cadherin、N-cadherin及Vimentin蛋白表达;qRT-PCR检测细胞LncRNA FEZF1-AS1和miR-200c-3p基因表达。结果 模型组E-cadherin蛋白相对表达量较空白对照组降低（P <0.05）,N-cadherin及Vimentin蛋白相对表达量较空白对照组升高（P <0.05）;模型组LncRNA FEZF1-AS1 基因相对表达量较空白对照组升高（P <0.05）,miR-200c-3p 基因相对表达量较空白对照组降低（P <0.05）。与Blank组比较,TGF-β₁ + Si LncRNA FEZF1-AS1 NC组细胞增殖、迁移、侵袭能力升高（P <0.05）;与TGF-β₁ + Si LncRNA FEZF1-AS1 NC组比较,TGF-β₁ + Si LncRNA FEZF1-AS1组细胞增殖、迁移、侵袭能力降低（P <0.05）。与TGF-β₁ + Si LncRNA FEZF1-AS1 NC组比较,TGF-β₁ + Si LncRNA FEZF1-AS1组LncRNA FEZF1-AS1基因相对表达量及N-cadherin、Vimentin蛋白相对表达量降低（P <0.05）,E-cadherin蛋白相对表达量升高（P <0.05）;与TGF-β₁ + Si LncRNA FEZF1-AS1 NC组比较,TGF-β₁ + Si LncRNA FEZF1-AS1组和Blank组miR-200c-3p 基因相对表达量升高（P <0.05）。结论 LncRNA FEZF1-AS1通过抑制miR-200c-3p促进肺间质纤维化细胞增殖、迁移、侵袭及EMT过程。