人β防御素-2研究进展

内源性抗生素肽(endogenous antibiotic peptides)是动、植物天然免疫的重要介质,在哺乳动物(包括人)中,由于对革兰氏阳性菌、阴性菌、真菌、螺旋体、分枝杆菌及某些包膜病毒等均有很强杀伤活性,故将其命名为防御素(defensin).迄今为止,在人体中已发现的防御素共有两类(α、β)10种.其中β防御素家族共发现3种,分子量为4～5kD,含38～47个氨基酸残基阳离子,分别为人β防御素-1,2,3(human β-defensin-1,2,3. hBD-1,2,3).德国Harder J等[1]于1997年首先发现hBD-2,他们用大肠杆菌亲和柱结合高压液相层析法在牛皮癣病人皮肤中分离并纯化到约4.3kD的多肽,经氨基酸序列分析表明与牛的TAP(气管抗菌肽)、LAP(舌抗菌肽)及hBD-1同源,属于人β抗菌肽成员之一,命名hBD-2.已证实hBD-2是黏膜和上皮细胞抵抗微生物入侵的重要介质,在持续暴露在病原微生物的器官表面发挥重要的抗菌作用.     

β-防御素2在溃疡性结肠炎中的表达及意义

目的 研究β-防御素2在溃疡性结肠炎中的表达及其与病情严重程度的相关性,探讨β-防御素2在溃疡性结肠炎的诊断及严重程度判断中的临床意义.方法 应用免疫组织化学的方法检测60例溃疡性结肠炎粘膜组织标本,并根据病情严重程度分为3组,轻度26例、中度20例、重度14例,以及15例正常结肠粘膜组织标本中β-防御素2的表达.结果 正常结肠粘膜组织标本中β-防御素2表达较弱;β-防御素2在轻、中、重度溃疡性结肠炎粘膜组织中的阳性表达率分别为38.46%(10/26)、75.00%(15/20)及92.85%(13/14),并随病情严重程度增高而增高(P<0.05).结论 β-防御素2在溃疡性结肠炎中具有重要的意义.     

β-防御素2在溃疡性结肠炎中的表达及意义

目的 研究β-防御素2在溃疡性结肠炎中的表达及其与病情严重程度的相关性,探讨β-防御素2在溃疡性结肠炎的诊断及严重程度判断中的临床意义.方法 应用免疫组织化学的方法检测60例溃疡性结肠炎粘膜组织标本,并根据病情严重程度分为3组,轻度26例、中度20例、重度14例,以及15例正常结肠粘膜组织标本中β-防御素2的表达.结果 正常结肠粘膜组织标本中β-防御素2表达较弱;β-防御素2在轻、中、重度溃疡性结肠炎粘膜组织中的阳性表达率分别为38.46% (10/26)、75.00% (15/20)及92.85% (13/14),并随病情严重程度增高而增高(P<0.05).结论 β-防御素2在溃疡性结肠炎中具有重要的意义.     

人防御素α5、人防御素β2在不孕患者输卵管的表达及意义

目的 通过分析粘连、闭锁的输卵管伞和正常输卵管伞中人防御素α5(human α defensin-5,HαD-5)、人防御素β2(human β defensin-2,HβD-2)的相关性,初步探讨HαD-5和HβD-2在输卵管伞粘连发生中的作用与意义,为临床防治输卵管伞粘连闭锁引起的不孕提供新的思路.方法 收集临床手术切除的输卵管伞组织,将输卵管伞分为粘连组(30例)和非粘连组(30例),应用免疫组化SP法检测HαD-5 和HβD-2的表达情况,分析二者的相关性.结果 免疫组化染色结果显示HαD-5、HβD-2两种因子在粘连组的表达强于不粘连组,且差异有统计学意义(P<0.05).不粘连组中HαD-5和HβD-2的表达呈正相关(r=0.404,P<0.05).粘连组中HαD-5和HβD-2的表达无相关性(P=0.089).结论 HαD-5、HβD-2在炎症发生时表达明显增强,在正常情况下,两者存在相互促进的协同作用,这种协同作用的破坏可能是粘连形成的原因之一.     

白介素-22诱导肺泡上皮2型人β防御素表达的初步研究

目的:初步探讨对于直接或间接引起的肺内感染,炎症反应产生的白介素(IL)-22能否刺激肺泡Ⅱ型上皮细胞,并且诱导其生成?释放2型人β防御素(human β-defensin-2,HBD-2)发挥抗感染作用?方法:流式细胞术检测肺泡Ⅱ型上皮细胞细胞膜表面IL-22R表达水平?重组人IL-22(20 ng/ml)刺激肺泡Ⅱ型上皮细胞,RT-PCR检测不同时间(0?2?4?8?16?24 h)HBD-2表达情况?不同浓度的重组人IL-22(0?4?20?100?500 ng/ml)刺激肺泡Ⅱ型上皮细胞,RT-PCR检测HBD-2表达情况?结果:肺泡Ⅱ型上皮细胞膜表面IL-22R表达呈强阳性,阳性率达(99.90 ± 0.13)%?比较6个时间点HBD-2表达差异,发现HBD-2表达具有时间依赖性?比较不同浓度IL-22处理下HBD-2表达差异,IL-22 100 ng/ml为最佳干预浓度,且HBD-2表达与IL-22浓度具有依赖关系?结论:IL-22能显著诱导肺泡上皮细胞生成并释放HBD-2,且具有时间和剂量依赖性?     

人β防御素-2基因在SPC细胞中的转染表达

目的合成人β防御素-2(hum anβ-defensin-2,hBD-2)基因并构建其真核表达载体,转染SPC细胞,检测其表达,明确hBD-2重组载体的表达活性,为hBD-2基因转染和表达的研究奠定基础。方法根据Genebank中的hBD-2结构基因序列设计合成三条引物,用PCR延伸扩增的方法合成hBD-2基因,克隆入真核表达载体pLXSN;通过脂质体转染法将pLXSN-hBD-2导入SPC细胞,采用W estern-b lot法检测hBD-2的表达。结果经凝胶电泳及测序分析,证实合成的基因与原序列一致,并成功克隆到真核表达载体pLXSN上,所构建的真核表达重组载体pLX-SN-hBD-2转染SPC细胞后呈现有效表达。结论成功构建了PCR合成的hBD-2基因真核表达重组载体pLXSN-hBD-2,通过基因转染的方法导入SPC细胞并获得表达hBD-2,为进一步的动物转基因抗感染实验研究提供了依据。     

重组人β防御素2在膀胱上皮细胞中的表达及活性检测

目的探讨重组人β防御素2(hBD2)真核表达载体在人膀胱上皮细胞中的表达,并观察重组hBD2的体外抗菌活性。方法采用脂质体转染法将hBD2重组真核表达质粒pCAGG-hBD2导入无血清培养的人膀胱上皮细胞株T24细胞,利用RT-PCR法、Western blotting分别在核酸水平及蛋白质水平检测hBD2的表达。ELISA测定培养上清中hBD2的浓度,菌落计数法检测上清对尿路致病性大肠杆菌(UTI89)和克雷白杆菌(TOP52)的临床分离株的抗菌效果。结果 RT-PCR和Western blotting结果显示,转染后hBD2可在T24细胞中有效地表达。上清中hBD2的含量为(36.5±3.2)ng/106个细胞,菌落计数法显示,hBD2对UTI89和TOP52临床分离株有显著的杀菌作用。结论 hBD2重组真核表达载体脂质体法转染人膀胱上皮细胞后,可高效表达具抗菌活性的基因重组hBD2。     

β防御素2在中耳胆脂瘤上皮中的表达及意义

人β防御素2是细菌和前炎性因子刺激下合成表达的抗菌肽,主要分布在感染后的皮肤和黏膜组织中,构成机体抵御微生物的第一道化学屏障,在中耳胆脂瘤形成和发展的免疫学机制中发挥了重要作用。     

人β防御素-2抗唾液支原体活性研究

目的探讨人β防御素-2（hBD-2）在抗唾液支原体中的作用。方法用唾液支原体感染牙龈上皮细胞HQEC,ET—PCE检测hBD-2的表达情况;将培养的唾液支原体中加入不同浓度的hBD-2,检测其生长情况。结果唾液支原体能诱导HGEC表达hBD2,且hBD-2能明显抑制唾液支原体的生长。结论hBD-2可能在抗唾液支原体感染过程中起关键作用。     

β-防御素2研究进展

防御素是一类分子量约为4．0～5．0kMr、含有6个半胱氨酸残基、三对二硫键的阳离子多肽。防御素不仅通过直接杀菌作用抵御入侵机体的病原微生物，还在介导获得性免疫反应、调节机体的免疫炎症反应和创伤修复过程中起着重要作用。β-防御素2是人体中第一个被发现的可诱导性防御素，因此，β-防御素2的基因表达调控、生物学活性、与皮肤／肺部疾病发生发展相关性等方面的研究较为深入。采用重组DNA技术从原核表达体系、真核表达体系中获取具有生物学活性的β-防御素2多肽，并研究其在呼吸道细菌感染、脓毒症所致肺损伤／肺功能障碍发生发展中的保护作用，将有助于阐明β-防御素2在免疫相关疾病中的作用，有助于阐述肺损伤／呼吸功能障碍发生发展的机制与防治。     

β防御素-2和白细胞介素-1β在寻常型银屑病患者皮损中表达的研究

目的探讨β防御素-2（HBD-2）和白细胞介素-1β（IL-1β）在寻常型银屑病皮损中的表达及其共同作用对银屑病皮损形成的影响。方法采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测45例银屑病患者皮损区、非皮损区及15例正常人皮肤中HBD-2和IL-1β的表达情况,对其在皮损中的表达情况进行相关性分析,并将其与PASI评分进行相关性分析。结果与正常人皮肤组织和银屑病患者非皮损区相比,银屑病患者皮损区HBD-2和IL-1β的表达明显上调,非皮损区HBD-2和IL-1β的表达也高于正常人皮肤组织,差异均有统计学意义（均P〈0.05）。银屑病患者皮损中HBD-2和IL-1β的表达水平与PASI评分之间均存在正相关关系（P〈0.05）。结论HBD-2和IL-1β在寻常型银屑病皮损中的表达均升高,可能共同参与银屑病的发病过程。     

肠道病毒EV71型手足口病的临床观察及护理

目的总结98例肠道病毒EV71型手足口病患儿的病情观察及护理要点,以利早期发现重症病例,降低患儿的病死率,预防并发症。方法对收治的98例肠道病毒EV71型手足口病患儿,其中病情较重和危重的16例早期转院治疗,对82例予积极治疗和精心护理。结果82例患儿痊愈出院,无发生医院感染及死亡病例。结论系统的病情观察及精心的护理,可防止本病的传播,早期诊断、早期治疗可提高治愈率,防止并发症的发生。     

寻常痤疮皮肤人β防御素-2的表达及意义

目的：研究寻常痤疮患者皮肤B防御素-2（hBD-2）的表达情况及丹参酮治疗对其的影响。方法：用免疫组化方法检测40例寻常痤疮患者皮损及非皮损部位hBD-2的表达水平,观察其在丹参酮治疗前、后的变化,同时记录皮损情况及不良反应等,并与正常对照组进行比较。结果：丹参酮治疗寻常痤疮效果良好,副作用少。在寻常痤疮患者皮损处hBD-2的表达显著增强,与非皮损部位及正常对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）;丹参酮治疗后皮损好转,局部hBD-2表达减弱,但仍明显高于非皮损部位（P〈0．05）;治疗前、后非皮损部位hBD-2的表达水平没有明显变化,与正常对照组比较差异亦无统计学意义（P〉0．05）。结论：hBD-2在寻常痤疮皮损部位的表达显著增加,并随着炎症的减轻而下调,提示其参与痤疮的发病过程。     

EV71型重症手足口病患儿的临床特征及危险因素的相关性分析

目的探讨人肠道病毒71 型（EV71）重症手足口病（HFMD）患儿的临床特征及其感染发生的危险因素,为预防、临床诊治提供参考依据。方法回顾性分析2013 年1 月-2015 年12 月67 例重症手足口病患儿的病例资料,用描述性方法进行流行病学分析;同时对患儿的一般资料、症状、体征、辅助检查进行回顾性分析,收集患儿发生感染的部位、细菌种类、药敏实验结果,分别采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）方法对人肠道病毒普通型（EV）、EV71、柯萨奇病毒A16 型（A16）进行检测。结果67 例EV71 型重症HFMD 患儿以单一感染最多,占50.7％（34 例）;EV71 型的混合感染占49.3％（33 例）。继发感染最常见部位是下呼吸道（26.5%）。临床分离病原体46 株,其中革兰阳性菌11 株（23.9%）,革兰阴性菌35 株（76.1%）。对病原体进行药敏实验,头孢曲松、亚胺培南、头孢哌酮/舒巴坦普遍对G-性菌敏感,头孢唑林钠、哌拉西林、万古霉素普遍对G+性菌敏感。EV71 型重症HFMD以3 岁内的男性患儿多见,5 岁以上儿童发病率较低,春夏季为发病高峰期,患儿临床症状以高热、皮疹、嗜睡、易惊、肢体抖动、病理征阳性为主,常伴有胸片、头颅CT 异常,实验检查结果显示心肌酶谱、肝功能、白细胞、血糖升高、体液免疫及降钙素原等异常;3 岁以下的男性患儿、农村住宿条件差、不良卫生习惯、对该疾病不了解未采取预防措施的监护人的散居儿童为该疾病的高发人群,EV71 为其感染的常见病原体。结论四川部分地区重症HFMD患儿主要由EV71 及其混合型人肠道病毒感染引起,了解EV71型HFMD重症临床特征,掌握本地区EV71 型重症HFMD的高危因素对于HFMD防治具有重要意义。     

人β-防御素3的研究新进展及其与疾病的关系

防御素是近年来发现的一类内源性小分子多肽,人β-防御素-3(HBD-3)是在银屑病患者皮损组织中首先发现,HBD-3在人体上皮细胞和黏膜组织中广泛表达,分子结构稳定,具有广谱的抗微生物活性,能促进伤口愈合,发挥免疫调节及抗肿瘤等多种作用。HBD-3在呼吸系统疾病、消化系统疾病、囊性纤维化、肿瘤等疾病中发挥重要作用,应用前景广阔。     

可诱导性人β防御素-2抗肺炎球菌的活性研究

目的探讨人β防御素-2（hBD-2）在抗肺炎球菌感染中的作用。方法用肺炎球菌和白介素（IL）-1β刺激肺鳞状上皮细胞株EBC-1,RT-PCR检测hBD-2的表达情况;肺炎球菌感染预先加有hBD-2的EBC-1,检测hBD-2的抗菌情况。结果IL-1β和肺炎球菌能诱导EBC-1表达hBD-2,且hBD-2能明显抑制肺炎球菌的生长。结论hBD-2可能在保护肺炎球菌的生长过程中起关键作用。     

人β-防御素基因在女性生殖道及妊娠相关组织中的表达

目的 检测人β－防御素（HBDs)基因在女性生殖道各段组织及妊娠相关组织中的表达。方法 采用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）检测正常女性生殖道各段组织及怀孕妇女妊娠相关组织中HBD－1，HBD－2的表达情况，用内参照β－actin的特异引物作RT－PCR。结果 细胞株ME－180表达HBD－1 mRNA，而不表达HBD－2mRNA；正常女性阴道，子宫颈，子宫内膜，输卵管和卵巢5种组织中均发现有HBD－1 mRNA的表达，除阴道，卵巢外的其余组织中也有HBD－2 mRNA的表达；绒毛膜，绒毛，羊膜，胎盘和脐带5种妊娠相关组织中，HBD－1 mRNA在除羊膜外的各组织中均有表达，而HBD－2mRNA则在绒毛膜，绒毛及胎盘组织中表达。结论 HBDs在正常妇女生殖道及妊娠相关组织中广泛表达，提示其在维系正常妇女及孕妇生殖道内环境稳定，宿主天然抗感染中起着重要的作用。     

人β-防御素4基因在COS-7细胞中的转染表达

目的探讨人β-防御素4（HBD4）基因在真核细胞COS-7中表达的可能性。方法用脂质体转染法将实验室已构建的重组真核表达载体pcDNA3.1＋/HBD4导入COS-7细胞,采用RT-PCR、Western-blot法检测HBD4的mRNA和蛋白表达水平,并对表达的HBD4进行抗菌活性的初步研究。结果 pcDNA3.1＋/HBD4转染的COS-7细胞中检测到HBD4mRNA表达。Western blot分析显示,在pcDNA3.1＋/HBD4转染的COS-7细胞及细胞培养液中检测到了HBD4蛋白的表达。Kirby-Bauer纸片扩散法证实表达的HBD4蛋白对大肠杆菌ATCC25922具有较强的杀伤作用。结论在COS-7细胞中成功表达具有抗菌活性的HBD4多肽。     

EV71动物模型及其在疫苗研究中的应用

人肠道病毒71型(EV71)是引起手足口病(hand-foot-mouth disease,HFMD)的主要病原体之一,主要引起5岁以下婴幼儿手-足-口部疱疹,一般症状轻,但少数患儿出现无菌性脑膜炎、脑干脑炎等多种重症中枢神经症状,病程进展迅速,病死率