SAPK/JNK信号通路在鼻咽癌放疗群集耐受中的作用研究

目的 用CNE-2Z多细胞球(multicellular spheroids,MCSs)模拟实体瘤,探讨SAPK/JNK信号通路在鼻咽癌放疗群集耐受中的作用.方法 采用liquid overlay技术进行MCSs培养,Western blot法检测X射线照射后信号通路活性变化,SAPK/JNK信号通路特异阻断剂sp-600125作用前后Caspase-3蛋白表达变化;TUNEL法检测sp-600125作用前后、X射线照射后MCSs凋亡率变化.结果 X射线照射后MCSs中SAPK/JNK信号通路表现动态磷酸化过程,其中2h磷酸化水平最高;预先阻断信号通路X射线照射后,细胞凋亡率上调(P＜0.05),caspase-3蛋白表达增高(P＜0.05).结论 SAPK/JNK信号通路短暂激活可能传递生存信号而在鼻咽癌放疗群集耐受中发挥作用,特异性阻断其信号传递上调MCSs凋亡率,这可能与促进caspase-3蛋白表达有关.     

淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ对内皮细胞eNOS表达和NOS活性的影响

目的：用过表达表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor, EGFR）的猪动脉内皮细胞（porcine aorta endothelial, PAE）作为研究对象,探讨淫羊藿苷(icariin)和淫羊藿次苷Ⅱ(icarisideⅡ)对PAE中内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase, eNOS)表达和一氧化氮合酶(nitric oxide sythase, NOS)活性的影响及其可能机制。方法：利用PAE中转染EGFR并筛选稳定株, 分别用12.5 μmol/L的淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ处理PAE和PAE-EGFR细胞48 h,观察各组细胞eNOS的表达变化;另在淫羊藿苷或淫羊藿次苷Ⅱ处理PAE和PAE-EGFR细胞时,分别加入表皮生长因子（epidermal growth factor, EGF）共同处理细胞,观察各组细胞eNOS的表达变化;检测淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ处理前后PAE和PAE-EGFR细胞NOS的酶活性改变,并以西地那非作为对照。结果：Western blot显示PAE-EGFR细胞表达eNOS的基础值要比PAE细胞高,淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ处理时PAE和PAE-EGFR细胞株中都能引起eNOS表达增加,并且在PAE-EGFR稳定株中eNOS的表达量比PAE细胞明显提高(P<0.01);在表达EGFR的PAE-EGFR细胞中,当淫羊藿次苷Ⅱ的浓度达到10^-8 mol/L时,NOS活性增加到(15.37±1.49) u/mg ,比PAE细胞高4.66 u/mg。在药物浓度达到10^-7,10^-6和10^-5 mol/L时,淫羊藿次苷Ⅱ对PAE-EGFR细胞NOS活性的影响较PAE细胞显著增加(P<0.01);淫羊藿苷也能增加PAE和PAE-EGFR细胞的NOS酶活性,但是其效果比较淫羊藿次苷Ⅱ组平均低20%,而西地那非没有显著影响NOS酶活性。 结论：淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ可上调PAE和PAE-EGFR细胞eNOS的表达和提高NOS活性,对血管内皮细胞功能可能具有改善作用,而且淫羊藿次苷Ⅱ的效果优于淫羊藿苷,其作用机制可能与激活PAE细胞的EGF-EGFR信号通路有关。     

淫羊藿苷介导MAPK信号通路促进间充质干细胞株C3H10T1／2成骨分化的体外研究

目的：探索补肾中药淫羊藿有效成分淫羊藿苷对间充质干细胞株C3H10T1／2的促成骨分化作用,及该作用与丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）信号通路的相关性。方法：体外培养间充质干细胞株C3H10T1／2,给予淫羊藿苷（0、10^-7、10^-6、10^-5和10^-4mol／L）联合成骨诱导液干预26d后,碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）染色观察成骨分化情况。10^-5mol／L淫羊藿苷干预C3H10T1／2细胞2、8、24与48h后,实时荧光定量聚合酶链式反应法（polymerase chain reaction,PCR）检测p38、细胞外调节蛋白激酶（extracellular signal-regulated protein kinase,p42／44）mRNA的表达。10^-5mol／L淫羊藿苷干预C3H10T1／2细胞10、30、60和120min后,蛋白质印迹法检测p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 mitogenactivated proteinkinase,p38）、p42和p44,以及翼式转录因子氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase,JNK）及其磷酸化产物的蛋白表达情况。结果：10^-5mol／L淫羊藿苷联合成骨诱导液的促进C3H10T1／2细胞成骨分化能力最强。PCR结果显示,淫羊藿苷作用2h后p38基因表达显著下调（P〈0．01）;p42和p44mRNA水平在淫羊藿苷干预2h后均显著下调（P〈0．01）,而在淫羊藿苷干预48h后表达均上调（P〈0．05,P〈0．01）;其他时间点各通路基因表达情况均无显著变化（P〉0．05）。10^-5mol／L淫羊藿苷作用10min后,磷酸化p42／44蛋白表达减弱,磷酸化p38蛋白表达增强,并持续到30min,但对JNK蛋白的表达无明显影响。结论：淫羊藿苷促进间充质干细胞株C3H10T1／2向成骨细胞分化,其作用可能与激活p38和抑制ERK蛋白的表达有关。     

淫羊藿苷通过PERK/CHOP信号通路抑制视锥细胞内质网应激诱导的线粒体损伤的研究

目的 探讨在细胞内质网应激状态下，淫羊藿苷保护光感受器细胞的作用机制。方法 以毒胡萝卜素(0.2μmol/L)诱导小鼠视锥细胞(661W细胞)内质网应激模型，采用阿尔玛蓝染色法检测细胞活性，蛋白免疫印迹法检测未折叠蛋白效应相关蛋白——磷酸化蛋白激酶样内质网激酶(p-PERK)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)表达水平，荧光成像和钙比例法检测Ca²⁺含量，荧光染色法评价线粒体功能(线粒体通透性转换孔和膜电位)。以体外分子对接技术分析淫羊藿苷与内质网钙-ATP酶的结合及相互作用。结果 毒胡萝卜素可诱导661W细胞死亡；淫羊藿苷(2.22～20.00 nmol/L)能够抑制毒胡萝卜素引起的661W细胞死亡(P<0.01)。毒胡萝卜素促进661W细胞PERK磷酸化(P<0.01)、上调转录因子CHOP的蛋白表达(P<0.01);淫羊藿苷(2.0μmol/L)能够抑制模型组细胞CHOP蛋白表达(P<0.01),有抑制PERK(Thr980)磷酸化的趋势。毒胡萝卜素作用于661W细胞的10 min内，引起胞...     

淫羊藿苷通过核转录因子KappaB通路减轻大鼠椎间盘退变

【目的】探讨淫羊藿苷对椎间盘退变大鼠的治疗作用及机制。【方法】将50只大鼠采用纤维环穿刺法建立椎间盘退变模型。将存活的48只大鼠随机分为模型组、淫羊藿苷组、激动剂组、激动剂+淫羊藿苷组,每组12只,另取10只作为假手术组。激动剂+淫羊藿苷组给予淫羊藿苷6.0 g/kg灌胃、尾静脉注射脂多糖5 mg/kg,淫羊藿苷组给予淫羊藿苷6.0 g/kg灌胃,激动剂组给予尾静脉注射脂多糖5 mg/kg,每日1次,连续2周。给药过程中,激动剂组和激动剂+淫羊藿苷组各死亡1只大鼠。给药结束后,酶联免疫吸附分析（ELISA）检测血清白细胞介素（IL）-6、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量,苏木素-伊红（HE）染色法观察椎间盘组织病理学改变,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）法检测髓核细胞凋亡率,蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测椎间盘组织核转录因子kappaB(NF-κB)p65、p-p65、B淋巴细胞瘤2基因（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）的蛋白表达水平,免疫组织化学法检测椎间盘组织p-p65蛋白阳性表达。【结果】模型组大鼠椎间盘髓核与纤...     

淫羊藿苷对大鼠成骨细胞核结合因子α1、骨形成蛋白-2、骨形成蛋白-4 mRNA表达的影响

目的:研究淫羊藿苷对成骨细胞增殖、分化以及对核心结合因子α1(Cbfαl)、骨形成蛋白-2(BMP2)、骨形成蛋白-4(BMP4)mRNA表达的影响.方法:以酶序列消化法从新生大鼠颅骨分离、培养成骨细胞,采用碱性磷酸酶染色和钙结节茜素红染色法鉴定细胞.取第3-5代细胞,用CCK-8法检测经0 mol/L、10~(-8)mol/L、10~(-7)mol/L、10~(-6)mol/L、10~(-5)mol/L、10~(-4)mol/L的淫羊藿苷处理24、48、72 h后成骨细胞的增殖情况.分别用流式细胞技术和对硝基苯酚法检测上述各浓度的淫羊藿苷处理48 h后成骨细胞的增殖指数和碱性磷酸酶(ALP)活性.用real-timePCR法检测10～(-6)mol/L淫羊藿苷处理48 h后成骨细胞Cbfα1、BMP2和BMP4 mRNA表达的改变.结果:10~(-8)～10~(-4)moL/L的淫羊藿苷对成骨细胞均无增殖促进作用,但可促进成骨细胞的ALP活性;10~(-6)mol/L淫羊藿苷可以上调成骨细胞Cbfα1、BMP2和BMP4 mRNA的表达.结论:淫羊藿苷可能是通过上调Cbfα1、BMP2和BMP4 mRNA的表达而促进成骨细胞的分化.     

淫羊藿苷联合齐墩果酸对RAW264.7小鼠巨噬细胞迁移和M1极化的影响

【目的】探讨淫羊藿苷与齐墩果酸联合使用对RAW264.7巨噬细胞迁移及极化的影响,并探究雌激素受体在此过程中的作用。【方法】培养RAW264.7巨噬细胞,随机分为空白组[不加脂多糖(LPS)及药物]、LPS组(加入终浓度为20μg/L的LPS)、1.5μmol/L淫羊藿苷+1.5μmol/L齐墩果酸组、3.0μmol/L淫羊藿苷+3.0μmol/L齐墩果酸组、雌激素受体拮抗剂ICI182780(终浓度1×10-3 mmol/L)+1.5μmol/L淫羊藿苷+1.5μmol/L齐墩果酸组、ICI182780(终浓度1×10-3 mmol/L)+3.0μmol/L淫羊藿苷+3.0μmol/L齐墩果酸组。应用Transwell小室迁移实验观察淫羊藿苷与齐墩果酸联合使用对LPS诱导的巨噬细胞迁移效应的影响;应用流式细胞术观察淫羊藿苷与齐墩果酸联合使用对LPS诱导的巨噬细胞M1极化的抑制作用,并用雌激素受体阻断剂ICI183780观察雌激素受体在这个过程中的作用。【结果】Transwell小室迁移实验结果表明:与空白组比较,LPS组可显著促进RAW264.7巨噬细胞的迁移(P0.05);与LPS组比较,ICI182780+1.5μmol/L淫羊藿苷+1.5μmol/L齐墩果酸组、ICI182780+3.0μmol/L淫羊藿苷+3.0μmol/L齐墩果酸组均可显著抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞的迁移(P0.05),且ICI182780+3.0μmol/L淫羊藿苷+3.0μmol/L齐墩果酸组作用优于ICI182780+1.5μmol/L淫羊藿苷+1.5μmol/L齐墩果酸组(P0.05)。流式细胞术检测结果显示:与空白组比较,LPS组CD11c+表达显著升高(P0.05),说明20μg/L的LPS可以刺激RAW264.7巨噬细胞,使其向M1极化;与LPS组比较,1.5μmol/L淫羊藿苷+1.5μmol/L齐墩果酸组、3.0μmol/L淫羊藿苷+3.0μmol/L齐墩果酸组可协同LPS作用于RAW264.7巨噬细胞,使其向M1极化(P0.05);与LPS组比较,ICI182780+1.5μmol/L淫羊藿苷+1.5μmol/L齐墩果酸组、ICI182780+3.0μmol/L淫羊藿苷+3.0μmol/L齐墩果酸组均可显著抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞向M1极化(P0.05),且ICI182780+3.0μmol/L淫羊藿苷+3.0μmol/L齐墩果酸组作用优于ICI182780+1.5μmol/L淫羊藿苷+1.5μmol/L齐墩果酸组(P0.05)。【结论】淫羊藿苷与齐墩果酸联合使用可能通过雌激素受体产生促进RAW264.7巨噬细胞的迁移和M1极化的作用,并在雌激素受体受到抑制后产生相反的作用。     

淫羊藿苷对基因转染PC12细胞α-突触核蛋白过表达和泛素-蛋白酶体系统的影响

目的观察淫羊藿苷在体外试验中对α-突触核蛋白(α-synuclein,α-Syn)及相关蛋白表达的影响及其作用机制。方法 不同浓度的淫羊藿苷与转染α-Syn基因PC12细胞共孵育24h,应用RT-PCR法检测各组细胞α-Syn mRNA含量,Western免疫印迹法检测细胞中α-Syn、泛素化蛋白羧基端水解酶(Ubiquitin C-terminal hydrolase protein,UCH-L1)和Parkin蛋白的表达,观察淫羊藿苷对它们的影响。结果 淫羊藿苷浓度40～80μmol/L与转染α-Syn基因细胞孵育24h,能够明显减少模型细胞中α-SynmRNA含量,抑制Syn蛋白表达和聚集,增强UCH-L1和Parkin蛋白表达。结论 淫羊藿苷在体外对基因转染细胞的α-Syn过表达和聚集有明显抑制作用,其作用机制与抑制α-Syn合成和增强α-Syn降解有关。     

EGCG对人肝癌细胞株HepG2裸鼠移植瘤COX-2、VEGF和bFGF表达的调控

探讨表没食子儿茶素没食子酸脂EGCG对人肝癌细胞株HepG2裸鼠移植瘤生长和肿瘤血管生成的抑制作用及EGCG对移植瘤环氧合酶-2(COX-2)?血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维生长因子(bFGF)表达的调控?【方法】 将肝癌细胞HepG2种植至裸鼠背部皮下,10 d后开始用不同浓度EGCG治疗,38 d后处死?观测裸鼠移植瘤的体积和质量?并采用间接免疫流式细胞术和Western Blot法检测移植瘤COX-2?VEGF和bFGF的表达,用免疫组化法检测微血管密度(MVD)?【结果】 ①生理盐水组切除的移植瘤平均体积和质量分别是(1174.6 ± 793.5)mm3和(0.572 ± 0.138)g,EGCG 50 mg/kg组分别为(649.3 ± 100.8)mm3和(0.340 ± 0.066)g,两组比较差异有统计学意义(P < 0.05)?EGCG 50 mg/kg组抑瘤率为40.56%?②生理盐水对照组和EGCG 50mg/kg组的MVD值分别为23.24±1.76和14.27±1.25,两组差异有统计学意义(P < 0.01);间接免疫荧光流式细胞术和Western Blot检测结果提示EGCG呈浓度依赖性地抑制人肝癌细胞HepG2移植瘤中COX-2?VEGF和bFGF 的表达?【结论】 EGCG具有抑制人肝癌裸鼠移植瘤生长的作用;同时能抑制肝癌移植瘤内新生血管内皮细胞的生长,其机制可能与抑制COX-2的表达以及由此引起的VEGF和bFGF蛋白表达降低有关?     

淫羊藿苷对体外培养的成骨细胞骨形态发生蛋白-2表达的影响

目的:检测不同浓度淫羊藿苷(ICA)对体外培养的成骨细胞MC3T3-E1中骨形态发生蛋白-2(BMP-2)表达的影响。方法:分别用10、20、40ng/mL的淫羊藿苷作用MC3T3-E1细胞,观察细胞生长情况;MTT法测绘细胞生长曲线;FCM法测定细胞生长周期;免疫细胞化学方法和Western bloting测定细胞BMP-2蛋白表达情况。结果:淫羊藿苷组可使细胞的生长曲线明显上移,S期细胞百分率升高,G1期细胞百分率减少以及BMP-2蛋白表达量增加,其中20ng/mL组作用更为显著,各组间比较有显著差异(P(0.01)。结论:淫羊藿苷可以促进成骨细胞增殖,增加成骨细胞BMP-2的表达。     

淫羊藿苷对人卵巢癌细胞株的肿瘤恶性行为的抑制作用研究

目的 探讨淫羊藿苷对人卵巢癌细胞SKOV3及多药耐药细胞株SKVCR增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。 方法 以不同质量浓度淫羊藿苷溶液分别作用于SKOV3细胞和SKVCR细胞,CCK8实验检测其抑制率及半数抑制浓度（IC₅₀）;并以0.8倍IC₅₀质量浓度淫羊藿苷处理细胞,流式细胞仪检测对细胞增殖和凋亡的影响;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,免疫印迹法检测Caspase-3蛋白表达水平。 结果 淫羊藿苷抑制SKOV3及SKVCR细胞增殖,且在5~100 μg/mL质量浓度范围内呈量效正相关趋势;淫羊藿苷分别以19.5 μg/mL和48.4 μg/mL（0.8倍IC₅₀）质量浓度作用于SKOV3细胞及SKVCR细胞后,SKOV3及SKVCR细胞凋亡率均较对照组增加（P<0.05）;同时,与对照组相比,细胞增殖、迁移和侵袭能力均下降（P<0.05）,免疫印迹结果显示,淫羊藿苷可增加卵巢癌细胞Caspase-3蛋白表达（P<0.05）。 结论 淫羊藿苷能抑制人卵巢癌细胞SKOV3及多药耐药细胞株的增殖、迁移和侵袭能力,并上调Caspase-3蛋白表达,诱导细胞凋亡。     

淫羊藿苷通过调节PI3K/AKT/mTOR通路对小鼠黑色素瘤B16细胞生物学行为及作用机制研究

目的:研究淫羊藿苷对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖、凋亡、迁移等生物学行为的影响及作用机制。方法:小鼠黑色素瘤B16细胞经过不同浓度淫羊藿苷(0、10、20、50μmol/L)处理后,培养24 h,检测细胞增殖、形态、凋亡、迁移能力情况,并采用Western blot法检测细胞磷脂酰肌醇-3-羟激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Ak/mTOR)通路相关蛋白的表达情况。结果:小鼠黑色素瘤B16细胞经过淫羊藿苷处理后,随着给药浓度的增加,抑制率、凋亡率均显著增加(P<0.05)。经Hoechst 33258染色发现空白对照组(0μmol/L)细胞染色均匀且颜色较淡,而含有淫羊藿苷细胞细胞则颜色较浓,且淫羊藿苷浓度越高,染色质凝集程度越明显。B16细胞划痕愈合率、Transwell膜底面的细胞计数随着淫羊藿苷浓度增加均显著降低(P<0.05)。蛋白检测结果显示随着给药浓度的增加,基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9, MMP-9)、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases-9, MMP-2)、mTOR表达量显著降低,而PI3K/pPI3K、AKT/pAKT比值显著增加,组间比较差异显著(P<0.05)。结论:淫羊藿苷可有效抑制小鼠黑色素瘤B16细胞PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白表达,从而诱导肿瘤细胞凋亡,抑制细胞迁移功能,最终发挥抗肿瘤效果。     

淫羊藿甙诱导MSCs向成骨细胞分化过程中对Wnt信号通路的影响

【目的】探讨淫羊藿甙诱导骨髓间充质干细胞(MSCS)向成骨细胞分化过程中对Wnt信号通路的影响。【方法】采用密度梯度离心法获得人骨髓间充质干细胞,采用含40滋g/L淫羊藿甙诱导液诱导其向成骨细胞分化,通过Western blot方法检测Wnt通道相关蛋白表达水平,荧光定量PCR方法检测Wnt通道相关基因表达水平。【结果】原代MSCs呈梭形,淫羊藿甙诱导12 d后淫羊藿甙组见明显结节形成,经细胞碱性磷酸酶染色,可见细胞内蓝色颗粒,细胞聚集区成紫黑色;21 d后茜素红染色可见红色结节堆积。MSCs经淫羊藿甙诱导21 d后,Wnt3a、茁-catenin蛋白表达较对照组显著增高,Wnt3a、茁-catenin mRNA表达较对照组显著上调(均P0.05)。【结论】淫羊藿甙可通过促进Wnt3a/茁-catenin信号通路促进MSCs向成骨细胞分化。     

淫羊藿苷对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞上皮间质转分化的作用及机制

[目的] 观察淫羊藿苷对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肾小管上皮-间质转化的作用以及对Smad信号通路的影响。[方法] 将肾小管上皮细胞(HK-2)分为空白对照组、TGF-β1组、TGF-β1+淫羊藿苷(10、20、40 μmol/L)组。采用CCK-8法检测10、20、40 μmol/L的淫羊藿苷干预10 μg/L TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞的增殖影响; 使用实时定量聚合酶链式反应法检测检测上皮间质转化分管关键因子α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)mRNA的表达量; 采用Western blot检测α-SMA、E-cadherin、Smad2/3和p-Smad2/3蛋白表达量; 划痕实验和侵袭迁移小室法(Transwell小室)分别检测HK-2细胞的迁移和侵袭能力。[结果] 与空白对照组比较, TGF-β1组的HK-2细胞增殖、迁移和侵袭能力显著增高(P<0.05), α-SMA、vimentin蛋白和mRNA以及p-Smad2/3蛋白表达量显著增加(P<0.05), 而E-cadherin、Smad2/3蛋白和mRNA表达量显著降低(P<0.05)。与TGF-β1组比较, TGF-β1+淫羊藿苷(10、20、40 μmol/L)组的HK-2细胞增殖、迁移和侵袭能力显著降低(P<0.05), α-SMA、vimentin蛋白和mRNA以及p-Smad2/3蛋白表达量显著降低(P<0.05), 而E-cadherin、Smad2/3蛋白和mRNA表达量显著增加(P<0.05)。淫羊藿苷对TGF-β1诱导HK-2细胞抑制增殖、迁移和侵袭能力以及上皮间质转化无剂量依赖性。[结论] 淫羊藿苷可以抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞的上皮-间质转化的分化, 可能与抑制Smad信号通路有关。     

淫羊藿苷对阿尔茨海默症小鼠认知功能及孕激素膜受体表达的影响

目的观察淫羊藿苷对阿尔茨海默症(AD)小鼠认知功能的影响并探讨孕激素膜受体参与其中的机制。方法成年雄性C57BL/6小鼠随机分为空白对照组、AD模型组、安慰剂治疗组、淫羊藿苷治疗组,采用侧脑室注射A建立AD小鼠模型,淫羊藿苷组给予淫羊藿苷灌胃,安慰剂组给予等量的生理盐水灌胃。采用水迷宫实验检测小鼠认知能力的变化,Western blot检测海马区磷酸化tau蛋白、孕激素膜受体及其相关的信号分子ERK和c-Jun的表达变化。结果水迷宫隐蔽平台试验显示,与空白对照组相比,AD模型组和安慰剂治疗组小鼠第4、5天寻找平台的潜伏期明显延长(P0.05);与安慰剂治疗组相比,淫羊藿苷组小鼠第5天寻找平台的潜伏期明显缩短(P0.05)。空间探索试验显示,淫羊藿苷组停留在目的象限的时间明显多于AD模型组和安慰剂治疗组(P0.05),但较空白对照组相对减少(P0.05)。采用Western blot检测发现AD模型小鼠海马区磷酸化tau水平、孕激素膜受体及c-Jun表达升高(P0.05),ERK表达无明显变化;与AD模型组及安慰剂治疗组相比,淫羊藿苷组海马区磷酸化tau蛋白、孕激素膜受体及c-Jun表达降低(P0.05),而ERK表达无明显变化。结论淫羊藿苷可能通过孕激素膜受体介导c-Jun调控下游转录蛋白的表达,从而改善AD小鼠认知能力。     

石斛碱调节JNK信号通路对白血病细胞存活和上皮间质转化的影响

【目的】探讨石斛碱对体外培养的白血病细胞存活和转移特性的影响。【方法】用不同浓度石斛碱处理HuT-78细胞,选择无明显细胞毒性的浓度进行后续实验。以细胞计数盒8(CCK8)法测定细胞存活率;流式细胞术测定细胞凋亡水平;Transwell法测定细胞侵袭能力;蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测细胞增殖、凋亡、上皮间质转化及c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路蛋白表达水平。【结果】石斛碱浓度高于5μg/mL可对HuT-78细胞产生明显的细胞毒性;石斛碱剂量依赖性地抑制HuT-78细胞克隆数、上皮间质转化能力,促进细胞凋亡,并调节增殖、凋亡和上皮间质转化相关蛋白表达水平;且石斛碱能部分逆转JNK抑制剂SP600125对细胞增殖、凋亡和上皮间质转化相关蛋白表达水平的干预作用。【结论】石斛碱对白血病细胞存活和转移的抑制作用,与促JNK通路磷酸化激活有关。     

乙酰肝素酶反义寡核苷酸对裸鼠食管癌移植瘤组织中VEGF蛋白表达的影响

目的:探讨乙酰肝素酶反义寡核苷酸对裸鼠食管癌移植瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达的影响。方法:用4条乙酰肝素酶反义寡核苷酸及1条无关寡聚核苷酸(N-ODN)分别体外培养、转染食管癌EC9706细胞。用上述细胞注射到模型左前腿腹侧皮下,构建裸鼠食管癌动物模型,饲养5周后采用免疫组化SP法对裸鼠食管癌移植瘤组织中VEGF蛋白的表达进行了检测。结果:4条乙酰肝素酶反义寡核苷酸(20mol/L)影响裸鼠体内食管癌移植瘤中VEGF蛋白表达表现出不同程度的抑制作用,实验组中VEGF蛋白表达与N-ODN转染组、未经转染的空白对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:乙酰肝素酶反义寡核苷酸通过影响裸鼠食管癌移植瘤组织中VEGF蛋白表达,从而抑制肿瘤的浸润转移。     

EB病毒编码的LMP2A通过激活MTA1介导鼻咽癌上皮间质转化作用的机理研究

【目的】 研究转移性肿瘤抗原1 (MTA1)在鼻咽癌中的表达及其对鼻咽癌发生发展的影响;明确Epstein-Barr病毒编码的潜伏膜蛋白2A (LMP2A)和MTA1的关系及其机制。 【方法】 利用免疫组化检测鼻咽癌和正常鼻黏膜组织中的MTA1蛋白和EMT相关蛋白的表达情况,并结合临床病理特征和EMT相关蛋白进行相关性分析。构建MTA1过表达和干扰表达的鼻咽癌细胞系,蛋白质印迹和transwell实验检测MTA1对鼻咽癌细胞侵袭和EMT发生的影响。通过蛋白质印迹和免疫荧光检测Wnt通路和β-catenin核转位研究MTA1发挥功能的机制。以免疫组化检测鼻咽癌组织中LMP2A和MTA1的相关性,慢病毒技术构建LMP2A表达而MTA1缺失的细胞系,蛋白质印迹和transwell实验检测其侵袭能力和EMT的变化。进而建立裸鼠尾静脉注射和左心室注射模型,体内实验研究MTA1对鼻咽癌转移的影响。使用mTOR下游调控通路4EBP1的抑制剂INK-128和siRNA干扰c-myc表达,研究LMP2A激活MTA1表达的通路机制。 【结果】 免疫组化分析发现MTA1高表达与鼻咽癌TNM分期的N和M分期呈正相关。在鼻咽癌组织中MTA1高表达于癌巢和癌浸润发生部位。MTA1的高表达与E-cadherin表达呈负相关,和Vimentin的表达呈正相关。低表达MTA1的细胞系CNE-1过表达MTA1后,侵袭能力增强,EMT表型增加。高表达MTA1的细胞系CNE-2干扰其表达后,侵袭能力减弱,EMT表型减少。裸鼠左心室注射,CNE-1-MTA1细胞转移能力增强,CNE-2-siMTA1细胞转移能力下降。CNE-1的MTA1过表达促进了Wnt1的表达,促使β-catenin的入核。LMP2A和MTA1的过表达具有正相关性。LMP2A促进了CNE-1和CNE-2细胞系表达MTA1。在LMP2A表达的细胞系中,干扰MTA1的表达能抑制肿瘤侵袭和EMT的发生。动物模型亦显示CNE-1-LMP2A的MTA1表达干扰抑制了肿瘤转移的发生。过表达LMP2A的CNE-1细胞系中mTOR和4EBP1-eIF4E axis通路活化。与Rapamycin相比较,INK-128药物能特异性抑制4EBP1-eIF4E axis的活化,降低CNE-1-LMP2A的侵袭能力、β-catenin的入核及EMT的发生。对C-myc的干扰表达,能部分降低MTA1的表达及CNE-1-LMP2A的侵袭能力。 【结论】 MTA1通过Wnt1通路活化促进了鼻咽癌的转移和EMT发生;LMP2A能激活mTOR和GSK-3β通路,4EBP1-eIF4E axis的活化参与了MTA1 mRNA的稳定性等转录后调控,也参与C-myc对MTA1的转录调控,从而增强鼻咽癌侵袭转移能力并促进EMT发生。     

芍药苷对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移的影响及机制研究

【目的】观察芍药苷对人乳腺癌MCF-7细胞株增殖、侵袭和迁移的影响及相关机制。【方法】以不同浓度芍药苷(5、10、20μmol/L)作用于MCF-7细胞株。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测MCF-7细胞增殖能力;划痕实验检测MCF-7细胞的迁移能力;Transwell法检测MCF-7细胞侵袭能力;蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测MCF-7细胞增殖和转移相关蛋白Ki67、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)、p38、p-p38、热休克蛋白27(HSP27)、p-HSP27的表达水平;MCF-7细胞培养添加p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)通路抑制剂SB203580后,Western Blot法检测上述相关蛋白的表达水平。【结果】与空白对照组比较,芍药苷5、10、20μmol/L组细胞增殖倍数明显降低,划痕闭合程度明显降低,侵袭细胞数目显著减少,Ki67、PCNA、MMP-9、VEGF表达水平均显著降低,p-p38和p-HSP27表达水平均显著上升(均P 0.01),且随着芍药苷浓度的升高,效果越明显。添加SB203580后,MCF-7细胞p-p38和p-HSP27表达水平显著降低,Ki67、PCNA、MMP-9和VEGF表达水平均显著升高(均P 0.01);芍药苷与SB203580共同作用于MCF-7细胞后,p-p38和p-HSP27表达水平显著升高,Ki67、PCNA、MMP-9和VEGF表达水平均显著降低(均P 0.01)。【结论】芍药苷可抑制人乳腺癌MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭,其作用机制与调节p38MAPK信号通路的激活相关。     

淫羊藿苷通过Wnt/β-catenin信号通路对卵巢癌细胞CAOV3增殖的影响

目的 研究淫羊藿苷通过Wnt/β-catenin信号通路抑制卵巢癌细胞CAOV3的增殖。方法 通过四甲基偶氮唑盐(MTT)实验选择适当的淫羊藿苷浓度并探讨其对卵巢癌细胞CAOV3生长、增殖的影响,倒置显微镜观察细胞形态学变化,采用荧光实时定量PCR(RT-PCR)法检测β-catenin及Wnt信号通路靶基因c-myc和cyclinD1 mRNA的表达水平,利用Western blot法检测β-catenin、c-myc和cyclinD1的蛋白表达水平。结果 MTT结果显示,淫羊藿苷能显著抑制CAOV3的生长增殖;倒置显微镜下发现淫羊藿苷能使CAOV3细胞形态发生明显变化;RT-PCR检测结果表明淫羊藿苷可降低β-catenin的mRNA的表达以及抑制Wnt信号通路靶基因c-myc和cyclinD1 mRNA的表达;Western blot法检测结果表明淫羊藿苷可下调β-catenin、c-myc和cyclinD1的蛋白表达。结论 淫羊藿苷可以抑制人卵巢癌细胞CAOV3增殖,其机制可能是通过抑制Wnt/β-catenin信号通路来实现的。