高毒力碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌流行病学和分子生物学分析

目的 对沈阳市第四人民医院碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌（CRKP）的流行病学分析,并对其中高毒力碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌（CR-hvKP）的表型、耐药基因、荚膜血清和毒力因子进行探究,为深入了解CR-hvKP的耐药机制、进化途径以及鉴别依据提供参考。方法 收集2017—2019年我院住院患者临床样本中分离出的肺炎克雷伯菌（KP）,使用全自动微生物分析仪鉴定和药敏实验,再利用改良碳青霉烯灭活实验（mCIM）和EDTA-改良碳青霉烯灭活实验（eCIM）方法进行菌株表型检测,PCR方法进行碳青霉烯耐药基因检测。通过拉丝实验筛选CR-hvKP,采用PCR进行荚膜血清型和毒力因子检测。结果 本研究共收集到KP 1 531株,其中CRKP 160株（10.45%）,主要来源于痰液标本,占比53.13%。对头孢菌素类、青霉素类、美罗培南、亚胺培南完全耐药,对复方磺胺甲噁唑和替加环素敏感,耐药率分别为45%和10%。CRKP携带blaKPC 基因127株,blaNDM基因26株,同时携带2种基因3株,携带blaOXA-48基因2株,未检测出任何基因2株。mCIM对碳青霉烯酶检出率为95.56%, eCIM对丝氨酸酶检出率为93.18%,对金属β-内酰胺酶检出率为96.55%。拉丝实验初步筛选得到6株CR-hvKP,分离率3.75%,低于其他已报道医院检出率。除1株产K2型荚膜血清菌株来自血液标本外,其余5株来自痰标本,产K1型荚膜血清。6株CR-hvKP全部携带耐药基因blaKPC和4种毒力因子rmpA、rmpA2、iutA、iroN。结论 沈阳市第四人民医院CRKP检出率位于全国平均水平,CRKP对多种抗菌药物耐药,对替加环素敏感,主要产KPC类碳青霉烯酶。CR-hvKP检出率低于其他已报道医院,具有产K1型荚膜血清,携带blaKPC耐药基因和多种毒力因子的特点。当K1型产KPC类碳青霉烯酶CRKP同时携带毒力因子rmpA、rmpA2、iutA、iroN,可进化成为CR-hvKP,提示临床应注意鉴别并进一步加强监测,以防止高毒力耐药菌株的传播和流行。     

耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌耐药基因及毒力基因分析研究

目的 通过全基因组测序技术（whole genome sequencing,WGS）检测耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌（carbapenemresistant Klebsiella pneumonia, CRKP）的耐药基因及毒力基因,了解本院CRKP的分布及耐药情况,为临床治疗和预防耐药菌的产生提供理论依据。方法 收集甘肃省肿瘤医院2019年6月至2021年6月临床分离的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌,用全自动细菌鉴定仪进行细菌鉴定和抗菌药物敏感试验,用改良碳青霉烯灭活试验（mCIM）确认所筛选出的菌株是否产碳青霉烯酶,通过全基因组测序分析研究CRKP菌株的耐药基因种类和分布情况以及毒力基因类型和毒力基因位点。结果 23株CRKP分离自4个不同的临床科室,标本主要来源于痰液和血液,药敏结果显示所有菌株对碳青霉烯类、头孢菌素类、青霉素类及含β-内酰胺酶抑制剂类抗菌药物均耐药,对环丙沙星、阿米卡星和复方新诺明部分耐药。基因组测序分析显示：23株CRKP中,17株为ST11型,6株为ST23型。CRKP的荚膜型（KL）均为KL64,一致性均在99.9%以上。23株CRKP均携带bla KPC-2,此外还有...     

耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌耐药基因检测及其同源性分析

目的研究六安市人民医院耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌（CRKP）的耐药基因及同源性。方法收集2018年4-6月分离自临床标本的肺炎克雷伯菌40株,用法国梅里埃VITEK 2 COMPACT全自动细菌鉴定药敏仪进行鉴定和药敏。采用改良Hodge试验（MHT）和改良碳青霉烯灭活试验（mCIM）对40株菌进行碳青霉烯酶表型的筛选,采用PCR方法检测其是否携带已知的主要碳青霉烯耐药基因KPC、OXA-48、NDM-1。基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）对其进行同源性分析。结果40株CRKP多分离自ICU病房（占55%）,以呼吸道来源标本为主（占80%）,对常用抗生素头孢菌素类、氨基糖苷类以及大环内酯类的耐药率均在80.0%以上。MHT和mCIM试验中有33株菌二者均为阳性,2株菌均为阴性,剩下5株MHT试验阳性而mCIM试验结果为阴性。32株菌携带KPC基因,未检出OXA-48及NDM-1基因。同源性分析结果显示40株CRKP分为7个型别,其中A型34株（占85%）,B、C、D、E、F及G型各1株（各占2.5%）。结论分离的CRKP以携带KPC-2基因为主,共有7个型别,以A型为主,为有效治疗和预防CRKP感染提供了参考依据。     

mCIM、eCIM对碳青霉烯酶检测能力评估及CRE耐药特点分析

目的:评估碳青霉烯酶失活试验(modified carbapenem inactivation method,mCIM)、EDTA碳青霉烯酶失活试验(EDTAcarbapenem inactivation method,eCIM)及改良Hodge试验对肠杆菌科细菌不同基因型碳青霉烯酶的检测能力,分析碳青霉烯类耐药的肠杆菌科细菌(carbapenem-resistant Enterobacteriaceae,CRE)对临床常用药物最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC),便于临床合理选择用药。方法:收集华北理工大学附属医院2018年6月至12月临床标本中分离的CRE菌株40株,经VITEK 2 Compact全自动细菌鉴定/药敏系统进行鉴定及药敏试验,E-test法检测亚胺培南、美罗培南、替加环素、阿米卡星、左氧氟沙星、复方新诺明对CRE的MIC,微量肉汤稀释法检测多粘菌素的MIC。用mCIM、eCIM和改良Hodge试验检测CRE菌株产碳青霉烯酶的情况,用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测碳青...     

黑龙江地区耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌表型检测及同源性分析

目的：对黑龙江地区耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌（ carbopenems antibiotics resistance acinetobacter baumannii ,CRAB）表型检测及同源性分析,了解该地区耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的耐药机制及耐药菌株的克隆动向。方法采用改良Hodge试验,多底物-多抑制剂协同法分类检测碳青霉烯酶（carbapenem-hydrolyzing β-lactamases,CHBLs）;应用PCR扩增OXA-23、OXA-24、OXA-58、OXA-51等对收集的菌株进行分子分型,分析其耐药菌株之间的亲缘性关系。结果319株CRAB的临床分离株中,286株改良Hodge试验阳性即产碳青霉烯酶,其中187株CRAB产丝氨酸类碳青霉烯酶（SCHBLs）,无金属类碳青霉烯酶（ MCHBLs）。187株CRAB碳青霉烯类酶基因扩增显示OXA-51为阳性扩增,OXA-23基因阳性率为98％,OXA-24和OXA-58基因未扩增出特异条带。结论 OXA-23基因是在黑龙江地区流行的CRAB主要基因型。     

耐碳青霉烯大肠埃希菌分子特征和同源性分析

目的 研究耐碳青霉烯大肠埃希菌(CREC)的耐药特点、碳青霉烯酶基因型,并分析CREC的同源性。方法 收集安徽医科大学第一附属医院临床标本分离的6 092株大肠埃希菌,筛选出71株CREC,采用Vitek-2 Compact进行鉴定和药敏试验,改良Hodge试验(MHT)、改良碳青霉烯类灭活法(mCIM)和Carba NP试验进行碳青霉烯酶的表型确证。聚合酶链反应(PCR)检测bla_KPC、bla_NDM、bla_VIM、bla_IMP等碳青霉烯酶基因,将阳性菌株扩增产物进行测序,测序结果在Blast程序中进行比对。用肠杆菌科基因间重复一致序列PCR (ERIC-PCR)指纹图谱确定CREC不同菌株之间的克隆关系。结果 CREC主要分布在重症监护室(ICU)和烧伤科,标本来源以尿液为主。药敏结果显示CREC对环丙沙星、左氧氟沙星和复方新诺明的耐药率都在70%以上,仅对阿米卡星和妥布霉素的耐药率低于50%。71株CREC中MHT、mCIM和Carba NP实验阳性的菌株数分别为45株、67株和69株,阳性率...     

耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌耐药基因及分子特征研究

目的：探讨临床分离的耐碳青霉烯类抗菌药物肠杆菌科细菌的耐药基因和分子流行病学情况。方法：收集2018年1月—2019年3月临床分离的耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌（CRE）,采用VITEK-2 compact微生物鉴定仪进行菌种鉴定和药敏检测;改良Hodge和碳青霉烯酶灭活（m CIM）试验对菌株进行碳青霉烯酶表型检测;PCR检测β内酰类胺类（碳青霉烯酶、ESBL、Amp C酶）和喹诺酮类（PMQR）共19种耐药基因;多位点序列分析（MLST）对耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（CRKP）进行分子分型及同源性分析。结果：共收集CRE 134株,其中肺炎克雷伯菌125株,阴沟肠杆菌4株,大肠埃希菌3株,普罗威登菌2株;改良Hodge试验示114株阳性,碳青霉烯酶灭活（m CIM）试验示125株阳性;所有检测菌株均携带碳青霉烯类耐药基因;125株肺炎克雷伯菌中有118株携带blaKPC-2基因,另有5株携带blaNDM基因（4株携带blaNDM-1、1株携带blaNDM-5）和4株携带blaIMP-4基因,4株阴沟肠杆菌中3株携带blaNDM基因（2株携blaNDM-1、1株携带blaNDM-5）,1株...     

碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌耐药机制及分子流行病学研究

目的 分析耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌（CRKP）的耐药情况及耐药基因,为临床治疗提供依据。方法 收集并鉴定临床分离非重复CRKP 27株,采用VITEK-2 compact全自动微生物鉴定药敏分析仪鉴定和药敏试验,碳青霉烯酶抑制剂增强试验检测A类丝氨酸碳青霉烯酶和B类金属β内酰胺酶,聚合酶链反应（PCR）法和基因测序技术检测常见的耐药基因。使用肠杆菌科基因间重复一致序列PCR(ERIC-PCR)对菌株进行同源性分析。结果 27株肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类、头孢菌素类、喹诺酮类等抗生素的耐药率均>96%。碳青霉烯酶抑制剂增强试验显示,26株A类丝氨酸碳青霉烯酶阳性,1株B类金属β内酰胺酶阳性。PCR和基因测序结果显示,26株CRKP携带KPC-2基因,1株携带NDM-1基因。ERIC-PCR将27株CRKP分为8型,以Ⅰ型和Ⅱ型为主。结论 分离的CRKP对临床常用抗生素表现出高水平耐药,其耐药机制主要是该类细菌产KPC-2型碳青霉烯酶。     

碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌耐药机制及其控制

目的探讨碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌耐药机制及其控制方法。方法常规细菌鉴定,药敏试验筛选CRE菌株．琼脂稀释法测定抗菌药对CRE菌株的MlC,改良Hodge试验与PCR检测碳青霉烯酶。结果CRE菌株标本分离率以尿液、痰液较高;药敏试验84．44％菌株对亚胺培南、美罗培南及厄他培南同时耐药;琼脂稀释法分离CRE菌株大多数以对碳青霉烯类高度耐药：改良Hodge检测93．33％菌株为碳青霉烯酶产生株;改良Hodge试验检测碳青霉烯酶的灵敏度与特异度均明显高于PCR方法（P〈0．05）。结论细菌产生碳青霉烯酶是CRE菌株对碳青霉烯类药物耐药的主要机制之一,改良Hodge试验方法检测更为敏感。     

碳青霉烯耐药克雷伯菌耐药机制研究

目的:探讨天津医科大学第二医院分离得到的碳青霉烯耐药克雷伯菌的耐药机制。方法:2013-2014年度临床微生物实验室分离到36株碳青霉烯耐药克雷伯菌,改良Hodge试验、EDTA协同试验及 PCR法检测碳青霉烯酶耐药基因,PCR法检测ESBLs及Ampc酶耐药基因,PCR、实时荧光定量PCR（RT-PCR）法检测外膜蛋白基因Ompk35及Ompk36存在及表达情况。结果:9株改良Hodge试验阳性,EDTA协同试验均阴性,碳青霉烯酶耐药基因均阴性;36株碳青霉烯耐药克雷伯菌至少存在1种β内酰胺酶耐药基因;外膜蛋白基因无缺失,33株存在外膜蛋白表达量下降。结论: 分离的碳青霉烯耐药克雷伯菌耐药机制可能为ESBLs及Ampc酶表达合并外膜蛋白表达下降。     

广东某医院多重耐药细菌监测现状

目的 了解广东某三甲医院多重耐药细菌感染现状,为预防多重耐药细菌感染和治疗提供依据。方法 收集2019年1月—2020年6月住院患者分离的多重耐药菌株耐药性检测资料,并进行回顾性分析。结果 2019年1月—2020年6月共检出病原菌6 992株,其中多重耐药细菌2 458株,多重耐药率为35.15%。CRPA、CRABA、ESBLs、CRE、MRSA、VRE的检出率分别为44.5%（550/1 236）、70.5%（418/593）、33.9%（914/2 696）、3.4%（93/2 696）、61.7%（476/772）、1.2%（7/568）。ESBLs和VRE以中段尿标本检出为主,CRPA、CRABA、CRE和MRSA以痰标本检出为主。多重耐药细菌检出科室主要集中在ICU、神经外科、老年科、康复科、呼吸内科、泌尿外科。≥60岁患者1 662例（占67.6%）。MRSA和MSSA、 VRE和VSE、 CRE和CSE、ESBLs⁺和ESBLs^-、 CRPA和CSPA、CRABA和CSABA 对抗生素耐药率超过50%分别为58.8%（10/17）和5.9%（1/17）、84.6%（11/13）和30.8%（4/13）、 95.5%（21/22）和9.1%（2/22）、40.9%（9/22）和4.5%（1/22）、25.0%（3/12）和0%（0/12）、93.3%（14/15）和0%（0/15） （均 P<0.01）。结论 多重耐药细菌检出情况较严峻,为减少多重耐药细菌的产生,应加强临床抗菌药物的合理使用,对于ICU和老年患者居多的科室,应注意手卫生,减少医疗侵袭性操作,减少多重耐药细菌的产生,从而减少患者和医院的负担。     

儿童医院临床分离多重耐药菌的流行病学分析

目的 分析某儿童医院临床分离多重耐药菌的分布情况及耐药特点,为医院多重耐药菌的预防和治疗提供临床依据.方法 采用回顾性分析方法,收集2018年1月至2020年12月某儿童医院住院患者送检标本临床分离病原菌中排名前5位的多重耐药菌检出结果等资料,了解检出多重耐药菌的患儿年龄、性别、科室分布情况并进行耐药性分析.结果3 a...     

云南省多中心2017—2021年血流感染病原菌分布及耐药性分析

目的 分析云南省9所三级医院2017—2021年血流感染病原菌的分布及耐药演变特点,为临床合理选用抗菌药物提供可靠依据。方法 采用药敏纸片法或仪器法,对9所不同地区的三级医院按统一技术方案,进行细菌鉴定及药物敏感性试验,按2021年临床实验室标准研究所（Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI）折点标准判断结果,使用WHONET5.6进行数据统计分析。结果 2017—2021年血流感染标本共分离出病原菌12 003株,其中革兰阴性菌7 442株（62.0%）,革兰阳性菌4 562株（38.0%）,分离株数呈上升趋势;门诊分离出163株（1.4%）,住院11 840株（98.6%）;排名前三的革兰阴性菌依次大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌,其中耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae, CR-KPN）309株（4.2%）,耐碳青霉烯类大肠埃希菌29株（0.4%）,耐碳青霉烯类阴沟肠杆菌19株（0.3%）,CR-KPN检出数量呈逐年上升的趋势;排名前三的革兰阳性菌依次凝固酶阴性葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、屎肠球菌,其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA）检出213株,占27.7%,且由2017年的40.0%下降至2021年的23.4%,呈逐年下降的趋势。未发现对万古霉素耐药的葡萄球菌属及肠球菌属。结论 多中心血流感染病原菌5年检出率及构成变化不大,但各医院检出情况不同。耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌检出数逐年增加,应重点关注。     

2016—2017年滨州地区血流感染病原菌分布及其耐药性分析

目的 了解滨州地区血流感染病原菌分布及其主要病原菌对抗菌药物的耐药情况。方法 收集某院2016年1月—2017年12月住院患者送检血培养阳性且符合血流感染诊断的非重复标本。应用质谱仪、Vitek2 Compact全自动微生物鉴定及药敏仪对菌株进行鉴定和药敏分析,API系列手工鉴定和K-B法药敏试验作为补充,依据CLSI 2017年标准判定药敏试验结果;应用WHONET 5.6软件进行数据统计分析。结果 共收集非重复病原菌975株,其中革兰阴性菌631株(64.7%),革兰阳性菌321株(33.0%),真菌13株(1.3%),厌氧菌10株(1.0%)。未检出碳青霉稀类耐药的肠杆菌科细菌(CRE),大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌对哌拉西林他唑巴坦、头孢哌酮舒巴坦、阿米卡星的耐药率较低(<5%)。葡萄球菌属未发现对万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺耐药的菌株,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的检出率分别占各自分离菌株的18.8%、72.8%。未检出对万古霉素耐药的肠球菌(VRE)。结论 滨州地区住院患者血流感染以革兰阴性菌为主,菌种呈现多样性,对常用抗菌药物耐药情况不同,临床治疗应根据药敏试验结果合理选择抗菌药物。     

2 137例住院患者血液标本分离病原菌构成及其耐药性分析

目的 分析某院住院患者血液标本分离病原菌构成及其主要病原菌对抗菌药物的耐药情况。方法 收集某院2015年1月—2019年12月血培养阳性且符合血流感染诊断标准的非重复标本。应用质谱仪、API系列微生物鉴定板条对菌株进行鉴定, 药敏分析采用Vitek2 Compact全自动微生物药敏仪,K-B法和E-test法作为药敏试验的补充,依据CLSI 2019年标准判定结果。应用WHONET5.6软件进行数据统计分析。结果 共收集非重复分离病原菌2 137株,其中革兰氏阳性菌776株(36.3%),革兰氏阴性菌1 312株(61.4%),真菌29株(1.4%),厌氧菌20株(0.9%)。耐碳青霉稀类肠杆菌科细菌(CRE)检出率为0.3%(3/1 047)。产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肠杆菌科细菌检出率为45.5%(400/881)。葡萄球菌属未发现对万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺耐药的菌株,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的检出率分别占各自分离菌种的21.7%、78.5%。耐万古霉素的肠球菌(VRE)1株。真菌对伊曲康唑的耐药率为10.3%。厌氧菌对青霉素、四环素和克林霉素的耐药率分别为15.0%、50%、70%。结论 该院住院患者血液标本分离病原菌以革兰氏阴性菌为主,菌种多样,对常用抗菌药物耐药情况较复杂,临床应重视血培养,及时送检血培养标本,重视血培养结果,并根据药敏试验结果合理选择抗菌药物。     

新生儿科多重耐药菌的耐药相关因素分析及药物治疗

目的分析我院新生儿科多重耐药菌的耐药因素,为指导临床诊断及合理应用抗菌药物提供依据。方法采用回顾性分析方法,对我院2011年1月～2011年12月新生儿科送检分离的耐药菌株标本进行统计分析。结果我院新生儿科标本类型以痰液标本为主,占87.5%;新生儿重症监护病房(NICU)的耐药菌检出率高于普通病房;多重耐药菌以G-菌居多,占83.3%,G+菌占16.7%;耐药菌株数排在第1位的肺炎克雷伯菌占41.7%,第2位的大肠埃希菌占33.3%,第3位的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)占12.5%;碳青霉烯类药物如亚胺培南仍是对大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌作用最强的一类抗菌药物,其次为加β-内酰胺酶抑制剂的复方制剂和头霉素类药物。MRSA首选万古霉素治疗。结论应增强多学科、多部门协作,加强细菌耐药监测,并合理规范使用抗菌药物,以避免滥用抗菌药物所致的耐药菌株的增加。