甲真菌病患者多部位红色毛癣菌分离株的DNA分型

目的探讨甲真菌病患者多部位红色毛癣菌感染不同部位分离菌株基因型的差异。方法采用PCR扩增红色毛癣菌rDNA非转录间隔区(NTS)中Trs-1片段,检测基因多态性并比较。结果30株受试菌株按照PCR指纹图共分为3型,基因型分布与感染部位无相关。10例受试患者中,5例不同感染部位分离出的菌株基因型存在差异。结论甲真菌病患者多部位红色毛癣菌感染可能为多菌株引起,部分患者可能存在多菌株的混合感染。     

多部位红色毛癣菌感染分离菌株DNA分型研究

目的 探讨多部位红色毛癣菌感染不同部位分离菌株基因型的差异。方法 采用巢式PCR扩增真菌rDNA非转录间隔区(NTS)中Trs-1片段,检测基因多态性。并比较同一患者不同感染部位分离菌株的基因型差异。结果 受试36株菌株按照PCR指纹图共分为10型,基因型分布与感染部位关系不大。在17例受试患者中,8例不同感染部位分离得到的菌株基因型有差异,且与不同感染部位的病程差异无关。结论 多部位红色毛癣菌感染可能为多菌株引起,提示部分多部位皮肤癣菌感染患者不同部位皮肤癣菌感梁的传染源可能来源于外界,而与机体原已存在的感梁灶关系可能不大。     

须癣毛癣菌随机扩增DNA多态性分型研究

研究须癣毛癣菌的ＤＮＡ分型，了解ＤＮＡ型别与形态学分型，有性型型别，以及与菌种来源地区，与人体感染部位之间的关系。用氯化苄法提取ＤＮＡ，以随机扩增ＤＮＡ多态性方法对临床分离的须癣毛癣功４２株以及部分其它皮肤癣菌和我科保藏的菌种Ａｒｔｈｒｏｄｅｒｍａ８株进行分型。     

红色毛癣菌和须癣毛癣菌的PCR指纹分析

红色毛癣菌和须癣毛癣菌的传统鉴别主要依据培养形态、生理生化等方法,但红色毛癣菌的菌落产红现象受培养基类型、 pH、培养温度等因素的影响 [1],我们应用 PCR方法,以微小卫星 DNA引物,对这 2种癣菌的基因组 DNA进行扩增,可以在很短时间内把它们区分开来。 泳道 1为 Markerλ DNA/EcoRⅠ＋ HindⅢ,泳道 2、 7、 8、 9为红色毛癣菌,泳道 3～ 6为须癣毛癣菌 图 1 (GACA)4作引物的 PCR扩增结果 一、材料与方法 (一 )实验菌株：本研究采用红色毛癣菌临床分离株 23株 ,须癣毛癣菌临床分离株 11株。红色毛癣菌中 11株来自上海…     

红色毛癣菌的基因分型研究

目的 探讨探针与DNA印迹杂交法对红色毛癣菌的基因分型并分析其基因型与来源地区的相关性。方法 用溴化十六烷基三甲铵（CTAB）法提取DNA，以皮肤癣菌的特异性引物NS5[5′-AACTAAAGGAATTGACGGAAG-3′]与ITS4[5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′]为引物，以红色毛癣菌的标准菌株为模板，用PCR法扩增出其rDNA部分18S区，ITSI区，5.8S区和ITSⅡ区为探针，用随机引物法将探针标记^32P，用EcoRI酶切基因组DNA，采用DNA印迹的标准流程将酶切的基因组DNA与探针杂交；显示的不同带型，以此作为红色毛癣菌基因分型的依据。结果 所试49株红色毛癣菌（南京21株，大连26株，北京2株）分为20型（A-T型），其中A-C型占48.98%。南京株绝大多数为3条带，大连株大部分为4条带。结论 用ITS区域探针与DNA印迹杂交法对红色毛癣菌基因组分型敏感性强，分辨力高；南京与大连两地区红色毛癣菌DNA分型具有明显差异，DNA分型对红色毛癣菌病的流行病学，临床疗效的判定以及指导用药均具有重要价值。     

红色毛癣菌随机扩增DNA多态性分型研究

红色毛癣菌(Trichophyton rubrum)是皮肤癣菌中最常见的病原菌,我国大多数地区的检出率在30%以上^[1],传统的表型分型法将其分为五型,但是,由于红色毛癣菌大多数为不典型株,而且传代过程中表型特征可发生转变或丧失,因此,表型分型的不稳定性导致它不能准确反映红色毛癣菌的遗传特征。我们应用随机扩增DNA多态性(RAPD)分析法对46株分别从广州、香港、雅加达(印尼)3个城市浅部真菌感染患者获得的红色毛癣菌进行DNA分型,对三地红色毛癣菌的表型特征与基因型别关系进行了初步探讨。     

多发性红色毛癣菌病患者不同部位菌株的分子鉴定

目的 用形态学、生物化学和分子生物学方法鉴定和分析从一例多发性皮肤癣菌病患者6个患病部位分离的菌种和菌株相关性。方法 6个部位的分离株先用形态学和生化方法鉴定,再用PCR扩增ITS（内转录间隔区）经序列分析证实全为红色毛癣菌。利用红色毛癣菌特异的随机扩增多态性（RAPD）和串联重复亚单位1和2（Trs-1/Trs-2）的PCR扩增产物判断6菌株基因结构的异同。结果 RAPD可将6株红色毛癣菌分为5个带型。Trs-1扩增产物可将6株菌分为3个带型,并能区分RAPD未能区分的菌株。结论 用RAPD、Trs-1/Trs-2的PCR扩增发现此多发性红色毛癣菌病患者6个感染部位的菌株均不相同,提示同一患者感染的多源性和多克隆性。     

成人及儿童皮肤癣菌病患者红色毛癣菌的基因分型与药物敏感性分析

目的 探讨成人和儿童皮肤癣菌病临床分离菌株中红色毛癣菌基因型的差异，基因型与发病部位、基因型与药物敏感性的关系。方法 利用随机引物OPAA11 5′-ACCCGACCTC-3′，OPD18 5′-GAGAGCCAAC-3′分别对来自成人及儿童皮肤癣菌病的红色毛癣菌菌株进行任意引物PCR，根据产物电泳带型进行基因分型，采用微量液体稀释法对氟康唑、伊曲康唑、特比萘芬、酮康唑、利拉萘酯、布替萘芬、益康唑、联苯苄唑进行体外敏感性分析。结果 两组的主要致病菌都为红色毛癣菌，两种随机引物扩增出的红色毛癣菌不同株带型均稳定清楚，按随机引物 OPAA11的扩增结果，其基因型分为4型。成人中Ⅰa、Ⅲa型分别占41.94%，儿童中Ⅰa型为65.96%，基因型构成在两组人群中的差异有统计学意义（P < 0.05）；体癣、足癣中基因型的分布在两组间差异均有统计学意义（P < 0.01；P < 0.05）。甲癣和股癣中基因型的分布差异无统计学意义（P > 0.05）；各基因型对8种抗真菌药物的MIC值均较低，特比萘芬的MIC最低，氟康唑的MIC值相对较高，酮康唑和氟康唑对Ⅰa、联苯苄唑对Ⅱa的活性高于其他基因型，伊曲康唑对Ⅲa型的活性略低于其他基因型，差异有统计学意义（P < 0.01或P < 0.05）。结论 红色毛癣菌为南京及周边地区儿童及成人皮肤癣菌病的主要致病菌，成人感染以Ⅰa、Ⅲa型为主，儿童感染以Ⅰa型为主。8种抗真菌药物对各基因型均有较好的抗菌活性，但酮康唑、氟康唑、联苯苄唑、伊曲康唑、特比萘芬对各基因型的敏感性有差异。     

儿童、青少年甲真菌病临床特点及致病菌分析

目的:确定儿童、青少年甲真菌病的主要临床特征和致病菌的种类。方法:回顾性分析220例(年龄18岁)甲真菌病患者的临床特征和致病菌种类。结果:220例患者中男110例,女100例,年龄3个月~17岁,儿童、青少年甲真菌病最常见的感染类型是远端侧缘甲下型(50.45%)和白色浅表型(42.27%)。趾甲较指甲感染常见,共分离出病原菌228株(混合感染8例),其中皮肤癣菌199株(87.28%)、念珠菌属27株(11.84%)、曲霉菌属2株(0.88%)。在199株皮肤癣菌属中红色毛癣菌192株(96.48%),趾甲真菌病多为红色毛癣菌,指甲多为念珠菌属。结论:儿童、青少年甲真菌病中最常见的病原菌为红色毛癣菌,其次为念珠菌属。     

用聚合酶链反应进行红色毛癣菌种内分型

目的 建立一种快速且可重复的方法应用于红色毛癣菌的菌株区分。方法 PCR扩增20株红色毛癣菌核糖体基因的非转录间隔区内的两个串联重复亚单位trs-1,trs-2，克隆两段PCR产物，用PGEM-T载体构建重组质粒载体进行目的基因测序。结果 特异性扩增trs-1和trs-2区产生菌株特征的条带图，两个串联重复亚单位的基因测序结果说明了PCR指纹图差异的原因。结论 这种PCR方法产生的特征性的指纹图提供了一种快速，稳定的分子分型方法，可应用于红色毛癣菌感染的流行病学和致病性的进一步研究。     

从花斑糠疹皮损分离的马拉色菌随机扩增多态性DNA研究

目的 用随机扩增多态性DNA方法研究分离自花斑糠疹的马拉色菌种间和株间差异,了解随机扩增多态性DNA分析（RAPD）与生理生化方法在菌种分型上的差异及菌株DNA型别和菌种间的关系。方法 用氯化苄法提取马拉色菌标准株（10株7个种）和临床分离株（47株）的基因组DNA,其中临床株分离自34例花斑糠疹患者,经形态学和生理生化方法鉴定为5个种（合轴马拉色菌、糠秕马拉色菌、钝形马拉色菌、球形马拉色菌、限制马拉色菌）,用4种随机引物（S22、S24、S25、S33）对菌株DNA做PCR随机扩增,NTSYS软件自动生成树状分支图。结果 绝大多数标本均可被4种引物扩增而获得清晰条带,其中2种引物（S22、S24）的条带更为稳定、清晰。共82条DNA片段被扩增,所有菌株均可见种间和株间多态性。有4例患者皮损同时分离出不同种的菌株显示遗传相似性高,在树状图中归入一类。结论 来自同一宿主的不同菌株遗传趋同现象提示马拉色菌的种特异性、菌种演化与宿主间存在密切关系。     

Molecular strain typing of Trichophyton rubrum indicates multiple strain involvement in onychomycosis

BACKGROUND: Trichophyton rubrum is an important cause of onychomycosis. Molecular strain typing methods have recently been developed to address questions of epidemiology and source of relapse following treatment. OBJECTIVES: To determine whether T. rubrum nail infections are caused by one or more strains of this fungus. METHODS: Nail specimens from 10 patients with onychomycosis due to T. rubrum were cultured and five colonies per culture plate were selected for molecular strain typing. DNA was extracted from these isolates and subjected to a polymerase chain reaction-based typing method that analyses variations in numbers of repetitive elements in the non-transcribed spacer region of the ribosomal RNA gene repeats. RESULTS: In six of 10 specimens, there were two or more T. rubrum strain types present. CONCLUSIONS: This preliminary study suggests that in many cases of fungal nail infection by T. rubrum, multiple strains are involved. This has important implications for epidemiological studies and possibly for therapy.     

Genetic diversity among Trichophyton mentagrophytes isolates using random amplified polymorphic DNA method.

Trichophyton mentagrophytes is a common cosmopolitan dermatophyte species composed of two varieties: T. mentagrophytes var. interdigitale (anthropophilic form) and T. mentagrophytes var. mentagrophytes (zoophilic form). We used a random amplified polymorphic DNA (RAPD) method to study the genetic diversity of 46 clinical isolates of the T. mentagrophytes complex collected from 38 patients with different geographical origins (Europe, Africa, South America). The T. mentagrophytes were isolated either from a unique lesion for 31 patients, including two patients living together, or from at least two sites for seven patients. Only one primer of 15 primers tested showed DNA polymorphism in the isolates, producing 23 distinct patterns belonging to three clusters. There was no specific cluster grouping isolates from the same geographical origin. The same pattern is shared by all the four T. mentagrophytes var. mentagrophytes and 13 of 42 T. mentagrophytes var. interdigitale. An identity of strains responsible for several lesions in seven individuals suggests an homogeneous T. mentagrophytes population in the case of multiple lesions. In contrast, the dissimilarity of two strains recovered from two patients living together argues against person-to-person transmission in that case. This study indicates that RAPD can be successfully applied to show genetic diversity among T. mentagrophytes isolates.     

湖北地区须毛癣菌复合体的分子鉴定

目的 对分离自患者不同部位的须毛癣菌临床株进行种内分型研究,比较不同靶位对须毛癣菌复合体的鉴定效能。方法 选取武汉市第一医院皮肤科近3年临床分离的须毛癣菌48株,经形态学观察和尿素酶试验进行表型鉴定。分别以核糖体DNA（rDNA）的转录间隔区（ITS）和核糖体大亚基（28S rDNA）D1?D2区为靶位,PCR扩增ITS区和D1?D2区后对产物进行测序,联合应用Clustal X2和MEGA 6.0软件,采用最大似然度法进行序列分析并建立遗传进化树。结果 ITS树提示,受试菌株和趾间毛癣菌聚类在同一主支的概率为92%,D1?D2树无法有效区分癣毛癣菌昆克变种和趾间毛癣菌。趾间毛癣菌形态多变,可表现为羊毛型、绒毛型、乳皮型、粉末型和颗粒型。结论 ITS区可将须毛癣菌鉴定到种水平,其鉴定效能优于D1?D2区,形态学方法不能作为其种内鉴定的依据。     

新疆头癣紫色毛癣菌分离株的PCR-RFLP基因分型

目的 探讨新疆地区紫色毛癣菌的基因特点,为新疆儿童头癣致病菌的分子流行病学研究提供依据。 方法 用5种限制性内切酶HaeIII,Bgl I,MspI,DdeI 及MboI,采用PCR限制性片段长度多态性（RFLP）法对分离于新疆儿童头癣的30株紫色毛癣菌的rDNA非转录间隔（NTS）区进行基因分型,并与北京的9株、台湾的2株紫色毛癣菌做比较。结果 内切酶DdeI将全部41株菌分为12个基因型。新疆的30株菌分为10个基因型,其中17株菌分为D、F、G、H、I、J、K 7个基因型,与北京和台湾菌株间有明显基因差异,其余13株菌分3个基因型,与北京和台湾菌株有基因同源性。结论 新疆地区儿童头癣分离的紫色毛癣菌既有独特基因型,又与北京、台湾菌株有基因同源性,体现了新疆紫色毛癣菌的基因多态性。