枸杞多糖调节单核细胞功能探讨

目的观察枸杞多糖(LBP-X)调节单核细胞功能的机理。方法依据本课题前期的研究方法获得外周血单核细胞,并用不同浓度LBP-X(0.000、0.312、1.250、5.000 mg/mL)诱导培养。中性红和MTT实验分别分析LBP-X诱导单核细胞的吞噬和增殖作用;同时,LBP-X诱导单核细胞分泌溶菌酶、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-6(IL-6),并检测;用Western Blot法检测LBP-X诱导单核细胞抗原呈递分子人白细胞抗原DR(HLA-DR)表达。结果 LBP-X增强单核细胞的吞噬作用(P0.05,P0.01),且增加单核细胞溶菌酶、TNF-α和IL-6的分泌(P0.05,P0.01),但对单核细胞增殖没有影响(P0.05);LBP-X增强单核细胞HLADR的表达(P0.05,P0.01)。结论 LBP-X激活单核细胞,且可能增强单核细胞的抗原呈递功能。     

内毒素诱导正常人单核细胞活化中CD69、TNF-α、IL-6的表达变化及意义

目的探讨内毒素诱导正常人单核细胞活化时抗原分子CD69、肿瘤坏死因子-α．（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）的变化及意义。方法采集10例健康人外周静脉血20ml,经乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝。通过Fi—coll—Hvpaque联合PercoU分离液分离纯化单核细胞后体外培养,设未干预组为对照,实验组予内毒素分别刺激30min、1、2、4h后收集细胞与上清液。通过流式细胞术检测单核细胞表面CD69的阳性细胞百分比,Luminex方法检测上清液中TNF-α、IL-6的浓度。结果分离的单核细胞纯度达95．5％。单核细胞表面CD69的表达率在内毒素刺激2、4h分别为（25．1±1．8）％、（41．7±1．4）％,明显高于对照组[（22．1±1．4）％,P均〈0．05]。上清液中TNF-α在内毒素刺激2、4h分别为（453．6546±163．6168）pg／ml、（1633．7878±528．8399）pg／ml,明显高于对照组[（O．1191±0．2135）pg／m],P均〈0．051。内毒素刺激4h时IL-6为（1464．4510±488．3783）pg／m],明显高于对照组[（0．0539±0．0955）pg/ml,P〈0．051。结论CD69、TNF-α、IL-6的表达上调与内毒素诱导单核细胞的活化密切相关。     

解脲脲原体LAMPs激活核因子κB诱导人单核细胞表达诱导型一氧化氮合酶和前炎症因子

目的分析解脲脲原体（Uu）的脂质相关膜蛋白（LAMPs）对人单核细胞（THP-1）表达诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和前炎症因子白细胞介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素6（IL-6）的影响。方法用Uu的LAMPs刺激人单核细胞后,Western blot法检测核因子κB（NF-κB）的激活和iNOS基因的表达,格氏试剂测定NO,ELISA法测定IL-1β、TNF-α和IL-6的含量。结果Uu LAMPs通过激活NF-κB诱导人单核细胞表达iNOS,且能以时间和剂量依赖方式刺激人单核细胞产生NO,诱导表达前炎症因子（IL-1β、TNF-α和IL-6）;NF-κB抑制剂PDTC可抑制NF-κB的激活、iNOS的表达及NO的产生。结论Uu LAMPs通过激活NF-κB途径诱导人单核细胞表达iNOS和前炎症因子,可能是产生某些疾病的一个重要的因素。     

羟乙基淀粉对内毒素血症大鼠肝炎性反应的影响及其机制

目的：研究羟乙基淀粉（HES）对内毒素血症大鼠肝炎性反应的影响及其机制。方法：成年雄性Wistar大鼠48只，随机分为4组：HES治疗组[脂多糖（LPS）5mg／kg腹腔注射（ip）；HES 15ml／kg静脉注射（iv）]；等渗盐水（NS）治疗组（LPS 5mg／kg，ip；NS 60ml／kg，iv）；HES对照组（NS3ml／kg，ip；HES 15ml／kg，iv）；NS对照组（NS3ml／kg，ip；NS 60ml／kg，iv）。LPS 5腹腔注射2h后检测肝组织肿瘤坏死因子α（TNF-α）、活化蛋白1（AP-1）、核因子-kB（NF-kB）水平；3h后检测肝组织白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-6、IL-8、IL-10水平。结果：HES治疗组或NS治疗组肝NF-kB、AP-1的活性和TNF—α、IL-1β、IL-6、IL-8的表达，均明显高于HES对照组或NS对照组（P〈0．05）。其中，HES治疗组明显低于NS治疗组（P〈0．05）；HES对照组与NS对照组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：HES能下调炎性介质的表达，可能的机制是抑制NF-kB和AP-1的活性。     

人乳头瘤病毒16型E6蛋白高表达下调LPS诱导巨噬细胞分泌TNF-α和IL-1β

目的将人乳头瘤病毒16型（HPV 16）E6蛋白真核表达载体pcDNA3．1（-）／E6转染巨噬细胞，观察E6蛋白瞬时高表达对LPS诱导的THP-1巨噬细胞分泌TNF-α和IL-1β的影响，为进一步研究HPV16E6蛋白的致病机制奠定实验基础。方法将质粒pcDNA3．1（-）／E6通过SuperFectTM脂转染试剂转染巨噬细胞24h后，用LPS刺激巨噬细胞，利用Western-blotting鉴定E6蛋白在巨噬细胞中的表达，ELISA检测pcDNA3．1（-）／E6转染的巨噬细胞不同时间（12、24及48h）培养上清液中TNF-α与IL-1β的含量，统计软件SPSS12．0分析所得数据。结果Western-blotting结果显示pcDNA3．1（-）／E6能在巨噬细胞中表达约18kD的目的蛋白，即E6蛋白；pcDNA3．1（-）／E6＋LPS纽培养上清中TNF-α与IL-1β的量明显低于巨噬细胞＋LPS组和pcDNA3.1（-）＋LPS组。pcDNA3．1（-）／E6＋LPS组与巨噬细胞＋LPS组和pcDNA3.1（-）＋LPS组比较，差异具有显著性（P〈0．01）。结论 HPV16E6蛋白瞬时高表达下调LPS诱导的THP-1巨噬细胞分泌TNF-α与IL-1β。     

普伐他汀抑制C-反应蛋白诱导的HUVEC细胞合成TNF-α和IL-6

目的：观察C-反应蛋白（CRP）刺激对人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）分泌功能的影响。方法：体外培养HUVECs,检测细胞对CRP诱导的反应以及普伐他汀干预效应。酶联免疫吸附试验检测培养液上清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白介素-6（IL-6）的水平。电泳漂流技术（EMSA）检测细胞核提取物中NF-κB与DNA的结合活性。结果：TNF-α和IL-6的水平随CRP刺激浓度的升高而增加,呈剂量依赖性（0-100 mg/L）,在5 mg/L CRP时即可检测到TNF-α和IL-6表达,100 mg/L CRP时可见最大效应。50 mg/L CRP呈时间依赖性增加TNF-α和IL-6的表达（0-48 h）,24 h达高峰。普伐他汀有效抑制CRP诱导的NF-κB激活和炎症因子表达。结论：CRP剂量依赖性激活血管内皮细胞的炎症因子表达,其中NF-κB途径被激活,参与致动脉粥样硬化作用;他汀类药物能有效抑制该途径,发挥抗炎及抗动脉粥样硬化作用。     

灵孢多糖对脂多糖诱导的原代多巴胺能神经元变性的保护作用

 【目的】观察灵孢多糖对脂多糖诱导的原代多巴胺能神经元变性的保护作用。【方法】建立原代中脑多巴胺能神经元与胶质细胞的共培养，随机分为6组：对照组、脂多糖组（20ng／mL）；单纯灵孢多糖组、脂多糖＋灵孢多糖（50，100，300μg／mL）3组。通过免疫组化检测酪氨酸羟化酶，OX-42的阳性细胞数，以RT-PCR检测TNF-α mRNA和iNOS mRNA表达。【结果】灵孢多糖（100，300μg/mL）组的酪氨酸羟化酶阳性细胞数明显多于脂多糖组，分别为（30．1±3．1，34．2±3．2，23．4±2．8）。脂多糖组激活的小胶质细胞体积增大，细胞数量增多（30．6±4．5），TNF-α mRNA和iNOS mRNA表达增高，但经较大剂量灵孢多糖（100，300μg／mL）预处理后，小胶质细胞的激活被抑制，总的细胞数量显著减少（26．4±5．1，25．1±4．6），TNF-α mRNA和iNOS mRNA表达量降低（P〈0．01）。【结论】灵孢多糖预处理对脂多糖诱导的原代中脑多巴胺能神经元变性具有保护作用，可能是由于灵孢多糖的预处理阻断了由脂多糖诱导的小胶质细胞的激活，从而减少了TNF-α mBNA和iNOS mRNA的表达。     

EGCG通过ERK1／2途径抑制LPS诱导人单核细胞产生前炎性细胞因子

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）在体外对脂多糖诱导人单核细胞产生前炎症细胞因子TNF-α、IL-6和IL-1β的影响以及可能的调控机制。方法体外培养人单核细胞THP-1,将5～30μmolEGCG与之共同孵育后加入脂多糖刺激,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测TNF-α、IL-6和IL-1β的产生情况。提取刺激后的细胞总蛋白,Western blot检测ERK1／2的磷酸化情况。结果当THP-1细胞首先与EGCG处理后,能显著降低LPS诱导的TNF-α、IL-1β和IL-6产生,同时EGCG能抑制ERK1／2的磷酸化。细胞经ERK1／2特异性抑制剂U0126处理后,EGCG能进-步降低细胞因子的产生。结论EGCG能抑制LPS诱导人单核细胞产生前炎症细胞因子,可能是通过抑制ERK1／2的磷酸化而实现的。     

体外诱导培养健康成人外周血单核细胞源树突状细胞及鉴定

目的：建立体外从健康成人外周血单核细胞（Mo）诱导培养成熟的树突状细胞（DE）的方法。方法：采用连续贴壁法分离正常人外周血单核细胞,在GM-CSF和IL-4的完全培养基中培养。培养5天后收集细胞,重新铺板后继续在TNF-α的完全培养基中培养48小时后,收集细胞和上清液,采用流式细胞术检测DC表型CD80、CD83、CD40的表达;用ELISA法检测上清液中细胞因子IL-12的浓度;用倒置显微镜动态观察DC形态变化。结果：采用连续贴壁法和用GM—CSF、IL-4和TNF—α联合培养可以从人外周血诱导培养出大量的树突状细胞,且高表达CD80、CD83、CD40,表达率分别为84．29％、90．73％、92．38％。DC分泌的细胞因子IL-12浓度为38．52±11．34pg／ml。结论：采用连续贴壁法和用GM．CSF、IL-4和TNF-α联合培养可以从人外周血诱导培养大量的树突状细胞,检测表型CD80、CD83、CD40的表达率和细胞因子IL-12浓度可以鉴定树突状细胞。     

曲伐沙星经抑制NF-κB的激活调控LPS诱导的炎症反应

目的探讨曲伐沙星抗炎作用的分子机制。方法将分离的单核细胞预先用TVF孵育2h，随后用LPS刺激，ELISA检测TNF-α和IL-6的诱生情况，并用RT-PCR检测其mRNA的表达；提取核蛋白，Westem blot分析NF—κB激活情况。结果TVF能以剂量依赖方式抑制单核细胞产生TNF-α和IL-6，并抑制其mRNA的表达；同时TVF能抑制NF—κB的激活。结论TVF能抑制单核细胞产生TNF-α和IL-6，这可能是其抗炎症作用的方式之一，该效应可能与其抑制NF—κB的激活有关。