显微镜观察药敏检测技术检测结核分枝杆菌耐药性研究

目的建立快速测定耐药结核分枝杆菌(MTB)的显微镜观察药敏检测(MODS)技术,并评价其临床应用价值。方法采用24孔细胞培养板液体培养方法建立MODS技术,并对最佳检测条件进行探讨。应用该技术对192株MTB临床分离株进行利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素、氧氟沙星的药敏检测,并与传统绝对浓度法药敏结果进行比较,对两法检测结果不一致的菌株进行BACTEC-960测定。结果 MODS药敏检测时间中位数为6d。以绝对浓度法药敏结果为判断标准,MODS技术进行利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素、氧氟沙星药敏检测的敏感度分别为97.8%、98.7%、88.4%、93.2%、96.4%;特异度分别为98.0%、94.8%、94.3%、99.0%、95.6%;符合率分别为97.9%、96.4%、92.1%、96.4%、95.8%。结结论 MODS技术可作为MTB耐药性的快速检测方法。     

结核分枝杆菌链霉素耐药基因突变特征分析

目的 了解广东地区链霉素耐药结核分枝杆菌rpsL、rrs基因突变特征。方法 对137株链霉素耐药、166株链霉素敏感的结核分枝杆菌临床分离株应用聚合酶链式反应技术（PCR）扩增rpsL、rrs基因片段,并进行测序、分析比对。结果 137株链霉素耐药菌株中, 118株存在rrs或者rpsL基因突变,突变率86.13%;其中92株存在rpsL基因突变（突变率为67.15%）,主要分布在43位氨基酸（70株）与88位氨基酸（20株）,其中43位氨基酸突变类型为K→R（AAG→AGG,49.64%）和K→T（AAG→ACG,1.46%）,88位氨基酸突变类型为K→R（AAG→AGG,13.14%）、K→T（AAG→ACG,0.73%）和K→Q（AAG→CAG,0.73%）,并有2株存在39、43位氨基酸的联合突变,即T→T（ACC→ACT）联合K→T（AAG→ACG）突变（1.46%）; 47株存在rrs基因突变（突变率为34.31%）,包括8种核苷酸突变,主要分布在1401位A→G（13.14%）、514位A→C（8.76%）、517位C→T（6.57%）,2株存在514、1401位核苷酸A→C;A→G的联合突变;15株存在rpsL与rrs基因的同时突变;166株链霉素敏感菌株中,7株存在rpsL基因突变,13株存在rrs基因突变。结论 广东地区链霉素耐药结核分枝杆菌株的rpsL、rrs基因突变具有其自身特点,存在地域差异。     

345株结核分枝杆菌获得性耐药分析

目的：分析本院结核分枝杆菌对一线和二线药物的获得性耐药情况,为结核病防治工作提供参考依据。方法：采用WHO推荐的药敏比例法对577株结核分枝杆菌菌株进行鉴定及药物敏感试验,分析各类型结核分枝杆菌的获得性耐药情况。结果：577株结核分枝杆菌初始耐药232株(40.2％),获得性耐药345株(59.8％)。345株获得性耐...     

应用流式细胞术检测结核分枝杆菌药敏试验

目的建立流式细胞术检测结核分枝杆菌药敏试验的方法。方法利用结核分枝杆菌水解FDA的特点,选用FDA作为荧光染料,用流式细胞术检测H37Rv标准株,临床分离到的20株结核分枝杆菌对RFP、INH、SM和EMB的敏感性,根据细菌培养物在不同浓度药物作用后所检测到的平均荧光强度与阳性对照的比值,从而推断MIC值,并于传统的绝对浓度法检测结果进行比较。结果20株结核分枝杆菌的流式细胞术所得药敏试验结果与绝对浓度法基本一致。结论所建立的流式细胞术检测结核分枝杆菌药敏试验可以应用于临床,并有快速、准确、方便的优点。     

微生物法和高效液相色谱法测定注射用阿奇霉素含量的比较

目的　注射用阿奇霉素尚无部颁标准 ,比较高效液相色谱 (HPLC)法和微生物法测定阿奇霉素含量有无差异及哪一种方法更适于作质量标准。方法　采用微生物效价测定法 ,以短小芽胞杆菌为检定菌 [CMCC(B) 6 32 0 2 ],抗生素浓度范围为 5～ 10kU·L-1;同时采用HPLC法 ,以pH4 0的0 0 7mol·L-1磷酸二氢钾 乙腈 (2∶1)为流动相 ,检测波长为2 10nm ,柱温 5 0℃ ,对注射用阿奇霉素进行含量测定。结果　将上述两法测得的结果进行统计学分析 ,发现两种方法差异无显著性 ,而HPLC法测定较为简便。结论　建议测定阿奇霉素含量的质量标准采用HPLC法。     

结核分枝杆菌临床分离株分型及耐药性分析

目的分析结核分枝杆菌临床分离株菌型的鉴定及其对6种抗结核药物的药敏检测结果,为临床制订治疗方案提供依据。方法采用BacT/Alert 3D系统培养液体培养基,培养阳性标本接种在L-J药敏培养基,进行结核分枝杆菌菌型鉴定,并进行耐药结果分析。结果 92株结核分枝杆菌中,人结核分枝杆菌24例,牛结核分枝杆菌68例,分别对其做抗结核药物异烟肼(INH)、利福平(RFP)、乙胺丁醇(EMB)、链霉素(SM)、左氧氟沙星(LVFX)、丁胺卡那(AMK)的两种药物浓度的药敏试验。人结核分枝杆菌和牛结核分枝杆菌对各种药物耐药率比较,差异无统计学意义(P>0.05);低浓度药物的耐药率明显高于高浓度药物耐药率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。6种高浓度抗结核药的耐药率SM>INH>EMB>AMK>RFP>LVFX。结论 INH、RFP、EMB、SM、LVFX、AMK可作为常规抗结核药物,为临床医师根据常规抗结核药物药敏结果制定更加有效的抗结核治疗方案提供重要的借鉴。     

结核分枝杆菌两种方法测试药物敏感性分析

结核病是长期危害人类健康的慢性传染病,耐药菌株的出现成为结核病控制的重要不利因素之一。国内外关于耐药情况的报道很多,但由于药敏方法常有差异,耐药水平可比性仍存争议。我国30多年来结核分支杆菌药敏试验普遍采用绝对浓度法,与目前WHO推荐的1%比例法在药物临界浓度、试验方法和判别标准都     

结核分枝杆菌复合群及耐药基因突变检测试剂盒诊断结核分枝杆菌耐药效果研究

目的 评价结核分枝杆菌复合群及耐药基因突变检测试剂盒（GenoType MTBDRplus VER2.0,简称MTBDRplus 2.0）检测利福平和异烟肼耐药的灵敏度和特异度等效能指标,为提高结核分枝杆菌耐药性检测水平提供依据。方法 收集2022年1—12月云南省32个县（市、区）级结核病定点治疗医院分离培养的阳性菌株,经MTBDRplus 2.0检出结核分枝杆菌880株,进行最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）法药敏试验检测。结果 以MIC法为金标准,MTBDRplus 2.0检测异烟肼耐药的灵敏度为67.69%,特异度为98.40%,阳性预测值为77.19%,阴性预测值为97.45%,MTBDRplus 2.0和MIC法检测异烟肼耐药结果一致性中等,Kappa为0.701(P<0.001);检测利福平耐药的灵敏度为87.80%,特异度为99.40%,阳性预测值为87.80%,阴性预测值为99.40%,MTBDRplus 2.0和MIC法检测利福平耐药结果一致性较好,Kappa为0.872(P<0.001)。MTBDR...     

武汉市结核分枝杆菌耐药情况调查

目的:分析武汉市全球基金结核病项目筛查患者耐药情况,为制定全市耐药结核病控制措施提供科学依据。方法:对2006年10月至2014年6月武汉市全球基金结核病项目筛查的5 524例涂阳肺结核痰标本进行培养、菌型鉴定和抗结核药物敏感性试验,对可疑耐多药结核病(MDR-TB)患者药敏结果进行统计分析。结果:武汉市全球基金结核病项目纳入对象结核分枝杆菌总耐药率为33.4%(1 627/4 870),单耐药率、多耐药率和耐多药率分别为12.8%(624/4 870)、8.4%(410/4 870)和12.2%(593/4 870)。初治患者耐药率(25.9%)低于复治耐药率(42.9%),差异有统计学意义(χ2=157.30,P<0.001)。初治患者多耐药率(6.7%,182/2 715)低于复治患者(10.6%,228/2 155),差异有统计学意义(χ2=23.42,P<0.001);初治患者耐多药率(6.9%,188/2 715)低于复治患者(18.8%,405/2 155),差异有统计学意义(χ2=158.26,P<0.001)。在单耐药中以耐S、H、O最多,检出率为4.7%、3.6%、2.7%,在多耐药中,以耐HS最多,检出率为4.3%。在耐多药中,以同时耐HRS最多,检出率为4.2%。结论:武汉市全球基金结核病项目筛查的涂阳肺结核患者MDR-TB检出率较高,耐多药肺结核防控形势严峻,预防其产生至关重要。     

变性高效液相色谱分析检测人类糖皮质激素受体基因变异

目的：以变性高效液相色谱分析(DHPLC)检测糖皮质激素受体基因(NR3C1)在中国人群中的变异情况：方法：提取64例中国人基因组DNA，参照文献所报道的引物序列，PCR方法扩增糖皮质激素受体基因编码区(2～9α外显子)及其邻近的部分内含子序列，琼脂糖凝胶电泳鉴定产物后，以DHPLC检测PCR产物，对洗脱曲线异常者进行DNA测序。结果：经DHPLC分析和DNA测序证实，研究人群的NR3C1基因中存在8处变异，5处为新发现；其中有2组变异呈紧密连锁的单倍型，均为首次报道，它们在人群中的基因型频率达3．1％与14.1％；另一处变异出现频率相对较低。结论：成功地建立了以DHPLC检测NR3C1基因变异的方法及技术参数，证实在中国人群中NR3C1基因存在变异，其中2种频率较高的单倍型为新发现。     

变性高效液相色谱法检测CpG岛胞嘧啶甲基化

目的 建立一种新型的ＣpＧ岛胞嘧啶甲基化快速检测方法。方法 用亚硫酸氢钠处理ＤＮＡ,丙用链特异性聚合酶链反应（ＰＣＲ）对错配修复基因hＭＬＨ１启动子含ＣpＧ位点的靶序列进行扩增;利用变性高效液相色谱法（ＤＨＰＬＣ）在部分变性温度下测定靶序列的保留时间,并与亚硫酸氢钠－酶切法测定结果进行比较。结果 用ＤＨＰＬＣ对结肠癌细胞株ＲＫＯ和胃癌细胞株ＰＡＣＭ８２的hＭＬＨ１启动子进行测定,发现ＲＫＯ细胞ＰＣＲ产物的保留时间显长于ＰＡＣＭ８２细胞ＰＣＲ产物的保留时间（６．７min比６．２min）。ＲＫＯ细胞ＰＣＲ产物保留时间的延长是亚硫酸氢钠处理后的模板中胞嘧啶和鸟嘌呤含量较ＰＡＣＭ８２高所致。从此结果分析,可以判断出ＲＫＯ的hＭＬＨ１启动子已甲基化,而ＰＡＣＭ８２细胞未甲基化。此结果与酶切法结果完全一致。结论 新方法可以快速检测ＣpＧ岛胞嘧啶甲基化。     

80株结核分枝杆菌临床分离株耐药性特点

目的 分析结核分枝杆菌临床分离株对5种抗结核药物的药物敏感性。方法用改良罗氏培养法测定结核分枝杆菌临床分离株的耐药性（MIC）、耐药率。结果80株结核分枝杆菌临床分离株对INH、RFP、EMB、SM和LVFX的平均MIC分别为9．7μg／mL、30．1μg／mL、16．4μg／mL、38．7μg／mL和0．9μg／mL;耐药率分别是67．2％、35．0％、53．8％、63．8％和16．3％。总耐药率为83．75％;耐单药率为17．5％;耐多药率为66.3％;耐多药株占总耐药株的79．1％。结论80株结核分枝杆菌临床分离株耐药率和耐多药率都较高,结核病的防治将面临更大的困难。     

延安地区结核杆菌耐药性监测分析

目的 了解初治和复治肺结核病人对抗结核化学药物的敏感性.方法 收集2006-01～2008-01痰菌阳性标本,用改良罗氏培养基绝对浓度法试验,最终获取培养阳性标本144份,对全部培养阳性标本进行5种抗结核药物异烟肼(INH),利福平(RFP),链霉素(SM),乙胺丁醇(EMB),对氨基酸钠(PAS)的耐药性测定.结果 总耐药率为42.36%(61/144);初始耐药率为14.29%(9/63),初始耐多药率为9.52%(6/63);获得性耐药率为64.20%(52/81),获得性耐多药率为38.27%(31/81).对抗结核药物的耐受,主要是耐受RFP(36.11%,52/144)和INH(33.33%,48/144).结论 获得性耐药率高于初始耐药率,应进一步加强对结核杆菌药物敏感性监测.     

74例结核分枝杆菌耐药情况分析

目的了解遵义地区结核分枝杆菌耐药情况,并探讨其耐药特点,为耐药结核病的监测提供参考。方法采用比例法对我院门诊及住院的肺结核患者痰标本中分离到的74株结核分枝杆菌进行异烟肼、利福平、链霉素和乙胺丁醇4种一线抗结核药物的敏感性试验。结果 74例肺结核患者结核分枝杆菌对一线抗结核药的总耐药率为54.1%,耐多药率为12.2%。结论本地区结核分枝杆菌耐药情况严重,应进一步加强耐药结核的监测。     

高效液相色谱法测定小鼠脑组织中2,4 二羟基二苯甲酮

目的：建立和优化小鼠脑组织中2,4-二羟基二苯甲酮（2,4-dihydroxybenzophenone,BP-1）的测定方法。方法：采用正交试验设计优化样品预处理条件,Waters Symmetry^®C18（4.6 mm×250 mm,5 μm）色谱柱分离,等度洗脱,流动相为含3%（体积分数）乙酸的甲醇-水（体积比为3∶1）,pH为3.40,流速为1.0 mL/min,紫外检测器检测,检测波长为290 nm,高效液相色谱法测定小鼠脑组织中BP-1,保留时间定性,以内标法定量。结果：在优化的实验条件下,BP-1在0.2~10.0 mg/L浓度范围内线性关系良好,相关系数为0.999 8;BP-1的加标回收率为96.8%~104.5%;日内和日间精密度分别为3.5%~5.7%和4.5%~6.4%;低、中、高3种浓度BP-1的提取回收率分别为90.5%、89.5%和97.7%;低、中、高3种浓度BP-1的基质效应分别为102.9%、102.7%和90.9%。结论：该方法简便、准确,适用于小鼠脑组织中BP-1的测定。     

安徽地区结核分枝杆菌对一线抗结核药物耐药情况分析

目的了解结核分枝杆菌分离株对一线抗结核药物的耐药情况。方法统计2007年至2011年间4 248株结核分枝杆分离株药物耐受性结果。结果 4 248株结核分枝杆菌中耐药1 919株,耐药率45.17%;耐多药结核(MDR-TB)1 044株,MDR-TB发生率24.58%。从2007年到2011年耐药率、MDR率逐年降低,但耐药株数、MDR-TB株数逐年增加。1 919株耐药株中有1 362株来源于复治患者,557株来源于初治患者。复治患者耐药率及MDR率分别32.06%、19.97%,均高于初治患者的13.10%、4.61%。结论结核分枝杆菌耐药情况在复治患者中更严重。需要加强初治患者的结核控制,以减少由于结核病反复治疗及不规范使用抗结核药物产生的耐药株。     

噬菌体裂解法在肺结核分枝杆菌耐药性检测中的应用

目的探讨噬菌体裂解法在基层结核病防治机构实验中的应用价值。方法应用噬菌体裂解法检测临床108例痰标本中结核分枝杆菌对利福平（R）、异烟肼（H）、链霉素（S）、乙胺丁醇（E）的耐药性,并与比例法比较。结果以比例法检测结果为标准,噬菌体裂解法检测利福平（R）、异烟肼（H）、链霉素（S）、乙胺丁醇（E）耐药性的敏感性、特异性及准确性分别为100.0%、96.0%和96.3%,87.5%、95.7%和94.4%,76.2%、100.0%和95.4%,75.0%、96.0%和94.4%。噬菌体裂解法检测利福平（R）、异烟肼（H）、链霉素（S）、乙胺丁醇（E）药敏结果与比例浓度法检测药敏结果符合率分别为96.3%、94.4%、95.4%、94.4%。结论噬菌体裂解法检测痰标本中结核分枝杆菌对利福平（R）、异烟肼（H）、链霉素（S）、乙胺丁醇（E）的耐药性具有较高的敏感性、特异性和准确性,与比例法比较,具有较高的符合率,且简便快速。     

高效液相色谱法测定血清叶黄素和玉米黄素

目的:建立C30-高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)内标法测定血清叶黄素、玉米黄素和β-胡萝卜素。方法:应用Develosil C30-UG色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相A为乙腈∶甲醇(体积比60∶40),流动相B为甲基叔丁基醚,梯度洗脱。流速1 mL/min,检测波长450 nm,进样量20μL,柱温25℃。内标物为全反式-β-阿扑-8'-胡萝卜醛。结果:血清叶黄素、玉米黄素和β-胡萝卜素的分离效果良好,保留时间分别为9.9min、10.3 min和21.2 min,日内相对标准差分别为3.22%、3.81%和1.60%。血清叶黄素、β-胡萝卜素在0.012 5～12.5 mg/L(r=0.999 5、r=0.999 7),玉米黄素在0.005～5.0 mg/L(r=1)范围内呈良好线性关系。58名正常老年人(年龄50岁)血清叶黄素、玉米黄素和β-胡萝卜素的平均浓度分别为0.410μmol/L、0.054μmol/L和0.128μmol/L。结论:该C30-HPLC内标法是定量分析血清叶黄素、玉米黄素和β-胡萝卜素的可靠方法之一。