超声波诱导人肝癌多药耐药细胞株HepG2/ADM凋亡的实验研究

【目的】探讨治疗超声对人肝癌多药耐药细胞株HepG2/ADM凋亡的影响及其可能机制。【方法】研究对象分为4组,分别为对照组、阿霉素组、超声波组(10 min)、阿霉素 超声波组。以频率为800 KHz,声强为3.0 W/cm2,时间10 min的脉冲式超声波作用于细胞。荧光显微镜观察细胞形态变化;DNA片段化分析检测染色体断裂情况;原位末端标记(TUNEL)和流式细胞仪检测细胞凋亡。【结果】经超声波作用10 min后,HepG2/ADM细胞死亡具有细胞凋亡的形态学特征;阿霉素组和超声波组(10 min)细胞凋亡的比例明显高于对照组;阿霉素 超声波联合治疗显著增加细胞凋亡率,为30.1%。【结论】治疗超声照射10 min可诱导HepG2/ADM人肝癌细胞株凋亡,联合阿霉素治疗,可显著增加细胞凋亡比例。     

人鼻咽癌多药耐药细胞株CNE2/ADM的建立及生物学特性研究?

目的：建立人鼻咽癌多药耐药细胞株 CNE2/ADM,并研究其生物学特性。方法以人鼻咽癌细胞株 CNE2为亲本细胞,采用阿霉素(ADM)浓度梯度递增法诱导建立多药耐药细胞株 CNE2/ADM。通过观察细胞形态学变化,药物敏感性试验,测定生长曲线、群体倍增时间、细胞周期及 P-糖蛋白(P-gp)功能和表达情况,评价CNE2/ADM 的生物学特性。结果与 CNE2细胞相比,CNE2/ADM 耐药细胞异形明显,并对 ADM 在内的4种化疗药物产生了耐药性,增殖速度减慢,群体倍增时间延长(P <0.05),G0/G1期细胞增多,S 期、G2/M 期细胞减少(P <0.05),P-gp 的药物泵出功能增强、表达水平升高。结论成功建立了人鼻咽癌多药耐药细胞株 CNE2/ADM,其具有典型的多药耐药表型,可作为进一步研究鼻咽癌多药耐药机制及筛选逆转剂较为理想的细胞模型。     

多药耐药(MDR1)基因治疗对中晚期肝癌小鼠生存率的影响

目的 :探讨恶性肿瘤MDRl基因治疗以保护骨髓造血细胞 ,从而加大化疗剂量 ,提高中晚期肝癌小鼠生存率。方法 :用培养的H2 2腹水型肝癌细胞注入Balb/c小鼠制成肿瘤模型 ,同种骨髓造血细胞经浓缩病毒上清法转染MDRl基因后 ,移植入预先照射亚致死剂量60 Co -γ射线的荷瘤小鼠 ,再经大剂量化疗 ,实验分为对照组及阿霉素 5mg/kg(最大剂量 )组、10mg/kg(2×最大剂量 )组、2 0mg/kg(4×最大剂量 )组 3个剂量组 ,分别在化疗 3天后观察小鼠白细胞的变化情况 ,取骨髓造血细胞做P -糖蛋白免疫组化以观察MDRl基因的表达情况 ;测定小鼠死亡率。结果 :化疗第 1、2周实验组白细胞明显高于对照组(P <0 .0 1) ,第 1周各剂量组之间无明显差别 (P >0 .0 5 ) ,第 2周 2 0mg/kg(4×最大剂量 )组比其它两组白细胞数偏低 (P <0 .0 5 )。 10mg/kg和 2 0mg/kg组死亡率明显低于对照组 (P <0 .0 1)。实验组免疫组化阳性率为 8.6 3%± 0 .36 % ,而对照组为零。结论 :MDR1基因转染骨髓造血干细胞后 ,使其对阿霉素的耐受性增加。     

野生型P53基因诱导人肝癌HepG2/5-Fu耐药细胞株凋亡的研究

目的 探讨野生型P53基因与人肝癌耐药的相关性，为肝癌的临床治疗提供新的依据。方法 以IONP—PLL纳米颗粒为基因转运载体，将wtp53基因转入HepG2／5-Fu耐药性细胞株，MTT法、台盼兰拒染实验和Hochest33258染色等分析5-Fu对转染有wtp53基因的HepG2／5-Fu细胞的杀伤效应。结果 转染wtp53基因的HepG2／5-Fu细胞对5-Fu呈剂量依赖性杀伤效应和时间依赖性杀伤效应，在5-Fu作用下，能发生明显的凋亡效应。结论 以wtp53基因为靶点的肝癌基因治疗有望成为治疗晚期肝癌的一种新的治疗策略。     

膀胱癌多药耐药细胞株Pumc-91/ADM的建立及其生物学特性评价

目的 多药耐药(multidrug-resistance,MDR)是肿瘤治疗的主要障碍.为探讨体外肿瘤MDR的方法,本研究建立膀胱移行上皮癌多药耐药细胞株Pumc-91/ADM,并研究其生物学特性.方法 以人膀胱移行上皮癌细胞株Pumc-91为研究对象,应用阿霉素(ADM)浓度梯度递增法体外诱导建立人膀胱移行上皮细胞癌Pumc-91细胞的多药耐药细胞株Pumc-91/ADM.观察细胞的生长规律,用MTT法检测多药耐药性,流式细胞仪检测其生长周期及细胞内药物ADM荧光强度,反转录RT-PCR半定量检测耐药相关基因的mRNA表达量.结果 Pumc-91/ADM与亲本细胞Pumc-91相比其生长速度减慢,倍增期延长,细胞异型性明显,巨细胞增多.MTT法检测显示Pumc-91/ADM较Pumc-91细胞对ADM的耐受度提高了10倍,且对氨甲蝶呤、顺铂、表阿霉素、长春新碱均有不同程度的交叉耐药性.流式细胞术检测细胞内荧光强度Pumc-91/ADM较Pumc-91细胞明显降低,细胞周期中S期细胞减少,G1、G2期细胞增多.RT/PCR检测耐药相关基因结果显示耐药细胞株谷胱甘肽-S-转移酶基因表达明显高于亲本细胞.结论 耐药株Pumc-91/ADM具有典型的多药耐药特点,可以为膀胱癌的多药耐药研究提供一个较好的体外研究模型.     

MIF对耐ADM人乳腺癌细胞MCF-7/ADM体内外耐药逆转作用

目的：采用动物体内外结合方法探讨米非司酮（mifepristone, MIF）对耐阿霉素（adriamycin,ADM）人乳腺癌细胞MCF-7/ADM耐药逆转作用。方法：四甲基偶氮唑蓝法检测5 μmol/L MIF对 MCF-7/ADM体外耐药逆转作用。MCF-7/ADM接种裸鼠皮下构建裸鼠移植瘤模型,空白对照组（NS组）为0.2 mL生理盐水腹腔注射+0.5 mL食用油灌胃;ADM组为5 mg/kg ADM腹腔注射+0.5 mL食用油灌胃;MIF组为30 mg/kg MIF灌胃+0.2 mL生理盐水腹腔注射;ADM+MIF组为5 mg/kg ADM腹腔注射+30 mg/kg MIF灌胃。观察各组裸鼠移植瘤情况。结果：（1）5 μmol/L MIF对MCF-7/ADM细胞的抑制率小于5%,与未用MIF组的抑制率比较差异无统计学意义（P>0.05）。（2）ADM对MCF-7/ADM细胞的半抑制率为17.21 mg/L,而对非耐药乳腺癌细胞MCF-7细胞的半抑制率为0.42 mg/L,ADM对MCF-7/ADM细胞的半抑制率明显高于MCF-7的半抑制率（P＜0.05）。（3）5 μmol/L MIF与ADM联合处理MCF-7/ADM细胞后,MCF-7/ADM半抑制率为1.96 mg/L,明显低于单用ADM组的半抑制率（P＜0.05）。逆转ADM耐药倍数为8.78。（4）ADM+MIF组瘤体积［（232.5149±309.2377）mm3］均低于NS组的瘤体积［（962.2309±261.1313 ）mm3］（均P＜0.05）,也低于MIF组的瘤体积［（778.2846±42.6919）mm3］,还低于ADM组的瘤体积［（508.9648±16.2609） mm3］（均P＜0.05）。MIF+ADM组的瘤质量抑制率为78.0%。结论：MIF对耐阿霉素的人乳腺癌细胞MCF-7/ADM体内外均有逆转耐药性的作用。     

蝎毒对耐药肝癌细胞株Bel-7404/ADM逆转作用研究

目的:研究蝎毒(BMK)对耐药肝癌细胞株Bel-7404/ADM耐药逆转的的机理.方法:采用免疫组化检测细胞表面P糖蛋白(P-gp)的表达,荧光定量PCR法检测多药耐药基因MDR1 mRNA水平.结果:50 mg/L蝎毒处理Bel-7404和Bel-7404/ADM后,细胞表面P-gp表达分别由原来的4.20±0.05、68.49±3.07下降到4.05±0.07、37.15±2.03,差异均有统计学意义(u=3.025 3,P=0.002 5).多药耐药基因MDR1 mRNA表达分别由原来的1.73±0.35、9.51±1.82下降到2.35±0.18、4.58±0.22,差异无统计学意义(u=1.603 6,P=0.108 8).结论:BMK在非细胞毒剂量水平具有下调MDR1 mRNA、P-gp的表达的作用.     

人肝癌HepG2/5-Fu耐药细胞株多药耐药与凋亡关系的研究

目的探讨耐药株人肝癌细胞HepG2/5-Fu的耐药机制及耐药与细胞凋亡的关系。方法检测HepG2/5-Fu细胞株对不同抗肿瘤药物的敏感性,流式细胞仪分析HepG2/5-Fu细胞在5-Fu作用的凋亡情况以及对5-Fu的耐受分析,RT-PCR分析HepG2/5-Fu细胞株中凋亡相关基因p53、bcl-2、bcl-xl、bax等基因的表达情况。结果HepG2/5-Fu细胞与HepG2细胞相比除对5-Fu耐药外,对其它几种常用化疗药均有不同程度的耐药性。HepG2细胞中未经5-Fu处理的对照组、30μmol/L5-Fu组及150μmol/L5-Fu组的凋亡指数与对照组相比,凋亡分别增加了1.2倍和2.1倍,差异具有显著性(P<0.05)。而经同样浓度5-Fu处理的HepG2/5-Fu细胞与其对照组相比,细胞凋亡变化不明显。经30μmol/L和150μmol/L5-Fu处理后,HepG2细胞与其对照组相比,呈现明显的G0/G1期增加,S期、G2/M减少,而HepG2/5-Fu细胞与其对照组相比细胞周期未见改变。PCR分析发现:与HepG2细胞相比,HepG2/5-Fu细胞耐药株bcl-xl、bcl-xs和bax的表达增高,而p53和cpp32的表达减少,特别是p53基因,表达明显减少。在人肝癌细胞HepG2和HepG2/5-Fu细胞mRNA水平均没有检测到bcl-2的表达。结论wtp53基因的突变与肝癌细胞的细胞周期的改变、耐药性的产生相关,是肝癌细胞HepG2/5-Fu产生多药耐药性的机制之一。     

多药耐药细胞系A549/ADM的建立及部分特性

目的建立多药耐药细胞系A549/ADM和初步探讨人肺腺癌细胞多药耐药的发生。方法对肺腺癌细胞A549采用持续低浓度和逐渐增加阿霉素浓度间歇诱导,建立多药耐药细胞系;使用流式细胞仪器分别检测敏感细胞系和耐药系的P-gp和MRP的表达;采用MTT法检测其对多种常用化疗药物的耐药程度。结果与母细胞系相比,耐药细胞系A549/ADM对ADM的耐药程度增加了14.29倍,对VCR、DDP、VP-16均有不同程度的耐药,对5-FU无耐药性;耐药细胞系A549/ADM表面P-GP、MRP表达分别为74.8%和61.2%(P<0.01)。结论A549/ADM对多种常用肿瘤化疗药物表现有不同程度的耐药,其耐药性可能与P-GR和MRP高表达有关。     

白血病细胞株HL60和HL60/DNR的多药耐药性

目的研究白血病细胞的多药耐药性（ＭＤＲ）。方法用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测ＨＬ６０，ＨＬ６０／ＤＮＲＭＤＲ１的ｍＲＮＡ表达，用流式细胞仪分析单抗ＵＩＣ２标记的细胞株Ｐ糖蛋白（Ｐｇｐ）的表达，了解它们摄取和滞留荧光素Ｒ１２３的功能。结果ＨＬ６０／ＤＮＲ在ｍＲＮＡ水平高度表达ＭＤＲＩ，在蛋白质水平高度表达Ｐｇｐ，功能性试验中细胞内Ｒ１２３最终浓度ＨＬ６０为ＨＬ６０／ＤＮＲ的５０倍。结论ＨＬ６０／ＤＮＲ为典型的表达ＭＤＲ１的细胞株     

肿瘤多药耐药机制的研究进展

肿瘤的多药耐药（MDR）是肿瘤化疗失败的主要原因之一，其机制复杂，为多因素作用的结果，故克服肿瘤耐药性也是十分棘手的课题。本文就MDR的不同机制作一综述，以期为更进一步的研究逆转肿瘤MDR作一指导。     

两种分化诱导剂对人肝癌细胞株丝氨酸蛋白激酶的影响

１０μｍｏｌ／Ｌ视黄酸（ＲＡ）或０．５ｍｍｏｌ／Ｌ双丁酰环磷酸腺苷（ｄｂ－ｃＡＭＰ）在体外都可使ＳＭＨＣ－７７２１人肝癌细胞株生长抑制，使增殖指标γ－谷氨酰转肽酶活力下降；而分化指标碱性磷酸酶（ＡＬＰ）活力上升，故这两类化合物都是ＳＭＭＣ－７７２１细胞的分化诱导剂。ＲＡ处理１～３ｄ可引起胞液中蛋白激酶Ａ（ＰＫＡ）上升，而膜性ＰＫＡ下降；但５ｄ后相反，胞液ＰＫＡ明显下降，而膜性ＰＫＡ显著上升，可能与ＰＫＡ在细胞内转位有关。ＲＡ处理１～５ｄ尚可使胞液和膜性蛋白激酶Ｃ活力下降，两亚细胞组分的下降程度接近，提示未发生ＰＫＣ的转位作用。但ｂｄ－ｃＡＭＰ处理１～５ｄ，胞液或膜性的ＰＫＣ均未见明显变化，提示ＲＡ和ｄｂ－ｃＡＭＰ使细胞分化的机制不同，前者可能与ＰＫＣ有关。     

REVERSION OF MULTIDRUG RESISTANCE IN THE P-GLYCOPROTEIN POSITIVE BREAST CANCER CELL LINE（MCF-7／ADR） BY INTRODUCTION OF HAMMERHEAD RIBOZYME

A hammerhead ribozyme which slte-specifically cleaved the GUC position in codon 880 of the mdrl mRNA was designed. The target site was chosen between the two ATP binding sites, which may be impottant for the function of the P-C-p as an ATPodependent pump. A DNA sequence encoding the riboxyme gene was then incorporated into a eukaryotic expression vector (pH 0 Apt-1 neo) and transfeeted into the breast cancer cell line MCF-7/Adr, which is resistant to adrlamycin and expresses the MDR phenmype. The ribozyme was stably expressed in the cell line by the RNA dot blotting assay. The result of Northern blot assay showed that the expressed ribozyme could decrease the level of mdrl mRNA expression by 83.5%; and the expressed ribozyme could inhiblte the formation of P-glycoprotein detected by immuno-cytochemistry assay and could reduce the cell‘‘s resistance to adrimycin; this means that the resistant cells were 1 000-fold mcre resistant than the parental cell line(MCF-7), whereas those cell clones that showed ribozyme expression were only 6-fold more resistant than the parental cell line. These results show that a potentially useful tool is at hand which may inactivate MDR1 mRNA and revert the multidrug resistance phenotype.     

外源性神经节苷脂GM_3对人肝癌细胞生长的抑制作用

为了解神经节苷脂（ＧＭ_３）是通过何种途径来调节细胞生长的。运用ＲＮＡ和蛋白质含量的测定及免疫组化法，结果发现：ＧＭ_３（１０ｍｇ／Ｌ）可明显抑制人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１细胞增殖，抑制率达到２８．８１％；同时能降低细胞内平均ＲＮＡ和蛋白质含量，以ＧＭ_３处理细胞３ｄ时最为明显。ＧＭ_３能使ｃ－ｆｏｓ蛋白量在短时间内剧增，ＧＭ_３处理３０ｍｉｎ时增加了２．８５倍；而ｃ－ｍｙｃ蛋白量在短时间内明显减少，ＧＭ_３处理４５ｍｉｎ时抑制率达到８１．３１％。以上结果提示ＣＭ_３抑制细胞增殖可能与抑制ＲＮＡ、蛋白质合成及影响某些癌蛋白的表达有关。     

EXPRESSION OF MULTIDRUG RESISTANCE-ASSOCIATED PROTEIN IN HUMAN GASTRIC AND RENAL CARCINOMAS

R6sume0bjectiIPouretudierlasigni/icationcliniquedel,eopressiondeprotdineavecrdsistanceauxmddicamentsmultiPles(MRP)chezlessujetsaveccancergastriqueetrdnal.MdthodesExPressiondeMRPdtaitdtudideavecLSABimmunohistochimiechez52maladesaveccancergastriqueet2Omaladesaveccancerrdnal.RdsuItatsL,exPressiondtaitpositivede38.5?nslecancergastriqueet6OO/odanslecancerrdnal.L,exPressionpositiveavaitunchopeplusdlevedanslecancergastriqueetrdnalavancd(60O/et88.9O/oresPectivement)quelecancerprdcoce(18.5%…     

β－胡萝卜素对人体肝癌细胞株N－ras基因表达的抑制作用

ＳＭＭＣ－７７２１人肝癌细胞株经β－胡萝卜素（４６．５－μｍｏｌ／Ｌ）体外作用９６小时后，采用流式细胞仪分析该株癌细胞的生长周期，并对细胞的总ＲＮＡ分别作ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ及ＤｏｔＢｌｏｔ以定性、定量分析Ｎ－ｒａｓ基因的表达水平。结果为β－胡萝卜素处理之细胞Ｓ期百分率仅为１７％，而对照组Ｓ期百分率为２７％，以及Ｎ－ｒａｓｍＲＮＡ表达水也受到明显的抑制，比对照组抑制１２０倍左右。上述结果表明β－胡萝卜素除能在体外阻断肝癌细胞株生长周期外，还能明显地抑制Ｎ－ｒａｓ基因的表达。     

流式细胞术对人脑胶质瘤多药耐药膜糖蛋白测定的临床意义

目的：探讨流式细胞术对人脑胶质瘤多药耐药膜糖蛋白（P－gp）测定的临床意义。方法：采用流式细胞术直接免疫荧光染色法检测新鲜脑胶质瘤和正常脑组织标本中P－gp的表达。结果：不同性别、年龄、肿瘤大小之间P－gp表达阳性率无明显差异（P＞0．05），不同恶性程度之间P－gp表达阳性率差异有显著性（P＜0．05）。相同级别胶质瘤中复发与原发者P－gp表达差异有显著性（P＜0．05）。结论：P－gp表达与病人性别、年龄、肿瘤大小无关，与肿瘤恶性程度呈正相关，P-gp测定可判断胶质瘤对化疗药物敏感性，指导临床应用多药耐药逆转剂，制订化疗方案，亦对判断预后有指导作用。     

原发性肾癌组织中MDR1和MRP基因的表达

①目的　研究肾癌组织中多药耐药 (MDR1)基因和多药耐药相关蛋白 (MRP)基因的mRNA表达及其临床意义。②方法　应用定量逆转录聚合酶链反应 (RT PCR) ,检测 2 0例原发性肾癌组织、10例正常人肾脏组织新鲜标本MDR1和MRP基因的mRNA表达水平。③结果　正常肾脏组织和肾癌组织均有MDR1和MRP基因表达 ,肾癌组织MDR1基因表达水平低于正常肾脏组织 ,MRP基因表达水平高于正常肾脏组织 ,差异有显著性 (t=2 .2 93,2 .96 8,P <0 .0 5 ,0 .0 1)。MDR1和MRP基因的表达与肾癌的病理类型、病理分期和组织学分级无关 ,与肾癌病人的无进展生存期无关 ,正常肾脏组织的MDR1基因和MRP基因的表达呈高度正相关关系 (r =0 .932 ,P<0 .0 1) ;肾癌组织MDR1基因和MRP基因的表达无明显相关关系。④结论　MDR1基因和MRP基因复合表达与肾癌固有的多药耐药现象有关     

红霉素对人类白血病细胞系CCRF-CEM/VLB100耐药性逆转作用的研究

本文报告,亲脂性抗生素红霉素在体外培养条件下,成功地逆转了人类淋巴细胞白血病细胞系CCRF-CEM/VLB100对长春花碱的耐药性。免疫荧光检测证实,耐药细胞膜上有P-糖蛋白高表达,阳性率为94％;敏感细胞则无P-糖蛋白表达。耐药细胞经红霉素作用后,P-糖蛋白阳性半降至30％以下。据此认为,红霉素使耐药细胞膜上P-糖蛋白表达降低,阻断了耐药细胞泵出药物的功能,可能是其逆转耐药性的基础。我们首次将红霉素用于人类白血病细胞系,对耐药性逆转作用的实验研究及临床应用均有积极的意义。