姜黄素调控TLR4/mTOR信号通路对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的作用

目的：分析姜黄素影响肝癌（LC）细胞系BEL-7402体外侵袭、转移与增殖及其潜在分子机制。方法：对BEL-7402细胞实施浓度不等的姜黄素（0、30、60μmol/L）干预,经由四甲基偶氮唑蓝（MTT）技术对细胞的增殖情况展开测定,Transwell法对细胞侵袭与迁移活性展开测定;用姜黄素（60μmol/L）处理BEL-7402细胞,Western blot法检测细胞内Toll样受体4(TLR4)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）表达情况。结果：MTT实验显示,在BEL-7402细胞增殖能力上,相较空白对照组,姜黄素1组、2组皆显著偏低（P<0.05）。Transwell侵袭和迁移实验结果显示,相较于空白对照组,姜黄素1组和姜黄素2组BEL-7402细胞侵袭能力和迁移能力均显著降低（P<0.05）。Western blot结果表明,姜黄素2组BEL-7402内mTOR、TLR4蛋白表达量显著下调（P<0.05）。结论：对于LC细胞BEL-7402的增殖、转移与侵袭,姜黄素具抑制功能,其机制和下调信号途径TLR4/mTOR可能相关。     

CircDONSON靶向miR-4458对肝癌Huh-7细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的:探讨CircDONSON对肝癌Huh-7细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其可能的作用机制。方法:qRT-PCR法检测肝癌组织中CircDONSON、miR-4458表达量;肝癌细胞Huh-7分为si-NC组、si-CircDONSON组、miR-NC组、miR-4458组、si-CircDONSON+anti-miR-NC组、si-CircDONSON+anti-miR-4458组;CCK-8法、平板克隆形成实验、划痕实验与Transwell实验分别检测细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭情况;双荧光素酶报告实验检测miR-4458与CircDONSON靶向的关系;Western blot检测MMP-2、MMP-9蛋白表达量。结果:肝癌组织中CircDONSON表达量较癌旁组织升高(4.82±0.38比1.00±0.12,P<0.05),miR-4458表达量较癌旁组织降低(0.34±0.04比1.00±0.07,P<0.05);抑制si-CircDONSON或过表达miR-4458降低肝癌细胞活力、划痕愈合率和MMP-2、MMP-9蛋白水平(P<0.05)减少,细胞克隆...     

环状RNA0007841靶向miR-557影响肝癌MHCC97H细胞增殖、迁移和侵袭的机制

目的:探讨环状RNA 0007841(circ_0007841)靶向微小RNA(miR)-557对肝癌细胞MHCC97H生物学行为的影响。方法:肝癌组织及癌旁组织取自2017年1月至2018年12月郑州大学第一附属医院确诊并接受手术治疗的47例肝癌患者。实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测circ_0007...     

SOCS1调控JAK/STAT通路传导抑制肝癌细胞增殖、侵袭、迁移的机制研究

目的 探讨SOCS1在肝癌进展过程中的功能及其分子机制.方法 采用qRT-PCR和Western bolt检测人正常肝细胞和肝癌细胞系中SOCS1的表达.构建SOCS1过表达及干扰表达载体,转染肝癌细胞,MTT检测肝癌细胞增殖,细胞划痕实验检测细胞迁移情况,transwell实验检测细胞侵袭性变化.qRT-PCR检测J...     

ASF1B通过调控P53相关信号通路促进前列腺癌迁移和增殖的研究

目的研究组蛋白伴侣抗沉默功能1B（ASF1B）对前列腺癌（PCa）迁移和增殖能力的影响,探索ASF1B调控P53相关信号通路的具体分子机制。 方法根据TCGA数据库中的数据分析ASF1B在前列腺癌患者中的生存预后情况,使用细胞小干扰RNA（SiRNA）敲低ASF1B表达后,通过Transwell细胞迁移实验比较细胞的运动能力,通过CCK8实验和平板克隆实验比较细胞的增殖能力,使用细胞凋亡实验比较细胞的凋亡率,通过转录组二代测序比较敲低ASF1B后各个信号通路的改变情况,通过Western-Blot实验及Q-PCR实验比较P53相关信号通路分子的蛋白质和mRNA水平变化,以阐明ASF1B对前列腺癌细胞的迁移及增殖能力的影响。 结果SiRNA敲低ASF1B表达后,DU145和PC3细胞的运动能力降低,相同时间内穿过小室的细胞数减少。敲低ASF1B表达后,DU145和PC3细胞的细胞活力和集落形成个数及大小降低,细胞增殖能力下降。敲低ASF1B表达后,DU145和PC3细胞的凋亡率增加。敲低ASF1B表达后,PC3细胞的转录组二代测序结果提示P53信号通路受到调控（P<0.01）。敲低ASF1B表达后,PC3细胞内P53相关通路的P21、IGFBP3、BBC3表达量上升,Cyclin D、Snail、Slug表达量下降。 结论ASF1B以非P53依赖的形式通过P53相关信号通路调控前列腺癌细胞的迁移及增殖,ASF1B有望成为前列腺癌的诊断及治疗的新型靶点。     

PTBP1通过PTEN/Akt通路调节结肠癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移

目的 ：探讨多聚嘧啶区结合蛋白1(PTBP1)通过蛋白激酶B(Akt)/磷酸酶与张力蛋白同源物（PTEN）通路调节结肠癌（CRC）细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。方法：将SW620细胞分为SW620组、si-NC组、si-PTBP1组、bp V(PTEN抑制剂)组、si-PTBP1+bpV组;检测SW620细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭情况及PTBP1、PTEN/Akt通路蛋白、凋亡蛋白、自噬蛋白表达;检测正常的结肠上皮细胞（FHC）以及SW620、SW480、HT29细胞PTBP1、PIK3、Akt、PTEN蛋白水平。结果：与FHC细胞相比,SW620、SW480、HT29细胞PTBP1、p-PI3K/PIK3、p-Akt/Akt蛋白水平显著上调,PTEN蛋白显著下调;与SW620组、si-NC组相比,si-PTBP1组PTBP1、p-PI3K/PIK3、p-Akt/Akt、Bcl-2蛋白水平、48 h吸光度值、细胞迁移和侵袭数量显著降低（P<0.05）,细胞凋亡率、Bax、cleaved-Caspase-3、Beclin1、LC3-II/I、PTEN蛋白水平显著升高（P<...     

circSIPA1L1对肾癌细胞增殖、迁移、侵袭的作用及机制研究

目的探讨环状RNA信号诱导增殖相关基因1(circSIPA1L1)对肾癌细胞增殖、迁移、侵袭的作用及相关机制。方法该研究于2019年1—12月完成。采用实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测天津市第四中心医院55例肾癌患者肾癌、癌旁组织,以及正常肾细胞KiMA和肾癌细胞A498、OSRC2中circSIPA1L1、miR-22-3p的表达;采用脂质体法将circSIPA1L1干扰载体阴性对照(si-NC组)、circSIPA1L1干扰载体(si-circSIPA1L1组)、si-circSIPA1L1+miR-22-3p抑制载体质粒阴性对照(anti-miR-NC组)、si-circSIPA1L1+miR-22-3p抑制载体质粒(anti-miR-22-3p组)分别转染至A498、OSRC2细胞;双荧光素酶报告基因实验验证靶向关系;克隆形成实验、Transwell实验检测细胞的增殖、迁移和侵袭。将稳定转染sh-circSIPA1L1和sh-NC的A498细胞按照2×10⁶个/0.2 ml接种于裸鼠背部皮下建立移植瘤模型,分别为sh-circSIPA1L1组和sh-NC组,行裸鼠成瘤实验检测肿瘤的形成能力。结果肾癌组织中circSIPA1L1表达量(3.89±1.35)高于癌旁组织(1.09±0.44),miR-22-3p表达量(0.44±0.19)低于癌旁组织(1.02±0.30),肾癌组织和癌旁组织中circSIPA1L1和miR-22-3p表达量的差异均有统计学意义(P<0.05)。肾癌细胞A498、OSRC2中circSIPA1L1的表达量(4.61±0.33、3.86±0.23)高于正常肾细胞KiMA细胞(1.00±0.13),miR-22-3p的表达量(0.34±0.05、0.40±0.04)低于KiMA细胞(1.00±0.08),差异均有统计学意义(P<0.05)。si-circSIPA1L1组A498、OSRC2细胞克隆数量[(130.67±15.04)、(99.00±14.80)个]低于si-NC组[(314.33±29.57)、(234.67±21.50)个];细胞迁移数量[(108.33±17.01)、(85.67±11.93)个]低于si-NC组[(265.00±20.00)、(210.33±18.58)个];细胞侵袭数量[(84.00±12.00)、(66.00±10.15)个]低于si-NC组[(210.33±18.58)、(173.00±17.52)个],差异均有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果显示circSIPA1L1靶向负调控miR-22-3p表达。si-circSIPA1L1+anti-miR-22-3p组A498、OSRC2细胞克隆数量[(234.20±21.90)、(185.06±20.72)个]高于si-circSIPA1L1+anti-miR-NC组[(134.65±26.55)、(106.14±16.38)个];细胞迁移数量[(187.02±23.54)、(117.86±15.09)个]高于si-circSIPA1L1+anti-miR-NC组[(110.59±12.12)、(91.70±14.83)个];细胞侵袭数量[(168.23±11.69)、(103.70±9.23)个]高于si-circSIPA1L1+anti-miR-NC组[(90.46±11.53)、(61.35±9.10)个],差异均有统计学意义(P<0.05)。sh-NC组、sh-circSIPA1L1组第35天裸鼠肿瘤体积分别为(578.65±68.67)mm3和(242.56±42.35)mm3;裸鼠肿瘤重量分别为(0.68±0.06)g和(0.38±0.04)g,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论circSIPA1L1在肾癌组织中高表达,可促进癌细胞增殖、迁移、侵袭和肿瘤生长,其作用机制与直接靶向负调控miR-22-3p相关。     

miR-597调控FOSL2抑制乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的研究

目的 探讨miR-597对乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响,及其与FOS样抗原2(Fos-related antigen 2,FOSL2)的靶向关系.方法 选取乳腺癌细胞株T-47D,SK-BR-3,MDA-MB-231,MCF7及BT-474,正常乳腺细胞株MCF10A为研究对象,分别转染miR-597(miR-59...     

miR-184靶向AGO2调控AKT/mTOR信号通路对膀胱癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

目的 研究miR-184在膀胱癌发生、发展过程中的作用及其相关机制。方法 收集2015年1月至2017年1月南阳市中心医院87例膀胱癌患者的手术切除标本,采用qRT-PCR检测膀胱癌及癌旁组织中miR-184的表达;通过生物信息学方法预测miR-184的靶基因并采用双荧光素酶实验及免疫荧光进行验证。在人膀胱癌细胞系T24中转染miR-184过表达质粒,MTT、Transwell侵袭和划痕实验检测细胞增殖、侵袭和迁移能力,Western blot检测AKT/mTOR通路蛋白的表达。结果 miR-184在膀胱癌组织中的相对表达水平1.238±0.026明显低于癌旁组织2.601±0.054,差异有统计学意义(t=22.57,P0.01);且其表达水平与膀胱癌患者的TNM分期(t=-5.61,P0.001)、淋巴结转移(t=-2.35,P=0.011)及组织学分级存在明显相关(t=2.171,P=0.033)。生物信息学预测及双荧光素酶报告基因实验证实miR-184能直接靶向结合AGO2基因3′-UTR。体外实验结果表明,转染miR-184模拟物后,膀胱癌细胞T24中AGO2mRNA和蛋白的表达水平明显下调,细胞增殖、迁移及侵袭能力降低,p-mTOR、p-AKT蛋白表达降低(P0.05)。结论 miR-184在膀胱癌组织中低表达,上调miR-184表达可抑制细胞的增殖、侵袭和迁移能力,其作用机制可能与AKT/mTOR信号通路的调节有关。     

Notch信号通路参与肝癌细胞侵袭迁移的机制分析

目的:探讨Notch信号通路在肝癌细胞侵袭迁移过程中的相关机制。方法:体外培养肝癌细胞系Hep G2、Huh-7和正常非肿瘤肝细胞系HL-7702,利用Transwell小室检测细胞的侵袭迁移能力,Western blot方法检测Notch1、Snail、E-cadherin、MMP-2、MMP-9的蛋白表达。采用1μmol/L和5μmol/L的DAPT(γ-分泌酶抑制剂)阻断Notch信号通路,与对照组(空培养基)比较对细胞的侵袭迁移能力以及Snail、E-cadherin、MMP-2、MMP-9表达量的影响。结果:Notch1、Snail、E-cadherin、MMP-2、MMP-9参与了肝癌细胞侵袭迁移过程,DAPT能显著上调E-cadherin和下调Snail、MMP2、MMP-9的表达(P0.05)。结论:Notch信号通路在肝癌细胞侵袭迁移过程中起着非常重要的作用,其机制初步认为与Snail、E-cadherin、MMP-2、MMP-9的表达有关。     

miRNA-126通过调节notch-1/Akt信号通路调控甲状腺癌细胞SW579增殖、凋亡及迁移

目的:探索miRNA-126对甲状腺癌SW579细胞增殖、凋亡及迁移的影响,并进一步探索其机制。方法:体外培养甲状腺癌SW579细胞,利用qPCR检测人甲状腺正常Nthy-ori3-1细胞和SW579细胞miRNA-126的表达;将细胞分为空白对照组、实验组及阴性对照组,分别不做任何处理、空质粒载体进行转染、转染miR...     

NORE1基因在肾透明细胞癌细胞迁移侵袭和血管生成中的作用及相关机制的研究

目的探讨NORE1基因过表达对肾透明细胞癌细胞迁移侵袭及血管生成的影响及其分子作用机制。方法利用NORE1过表达质粒和对照组质粒,分别转染人肾透明细胞癌786-O和ACHN细胞,Western blot检测细胞转染效率,Transwell细胞迁移实验和侵袭实验检测细胞迁移和侵袭的能力,体外血管生成实验观察其血管生成能力,Western blot检测NORE1基因过表达后肾癌细胞中基质金属蛋白酶(MMPs)的蛋白表达水平。结果转染NORE1过表达质粒后,肾透明细胞癌786-O、ACHN细胞中NORE1表达量增加。NORE1基因过表达后肾透明细胞癌细胞迁移及侵袭能力减弱,血管生成能力减弱,差异均具有统计学意义(P0.001)。NORE1过表达组肾透明细胞癌细胞中MMP-9表达较对照组显著下降,而两组间MMP-2表达水平无显著性差异。结论肾透明细胞癌细胞中NORE1基因可以通过调节MMP-9的表达影响细胞的迁移侵袭及血管生成。     

miR-30a对人乳腺癌细胞系增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的 :探讨miR-30a在人乳腺癌细胞系中的表达,及其对乳腺癌细胞系增殖、迁移和侵袭的影响,并寻找作用靶基因。方法:用q RT-PCR法检测miR-30a在人乳腺癌细胞系(MCF-7、MDA-MB-231、SK-BR3、MDA-MB-468、MDA-MB-453、T47D)和人乳腺正常上皮细胞(HBL-100)中的表达。构建miR-30a过表达的人乳腺癌细胞系MCF-7-miR-30a、MDA-MB-231-miR-30a,分别用CCK8法、transwell法检测过表达miR-30a对于乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。通过Western印迹法检测靶蛋白的表达,并通过Luciferase双荧光素酶报告系统验证其抑制作用。结果:与乳腺正常上皮细胞相比,miR-30a在人乳腺癌细胞系中均呈低表达(P<0.05)。在MCF-7、MDA-MB-231乳腺癌细胞系中过表达miR-30a后,乳腺癌细胞系的增殖、迁移和侵袭能力均有不同程度的抑制(P     

miR-124靶向调控Notch 1通路影响肝癌细胞的增殖和迁移

[摘 要] 目的 探索微小RNA-124（miR-124）通过Notch1信号通路对肝细胞性肝癌（HCC）细胞增殖和迁移的影响。方法 将肝癌细胞HepG2和人正常肝细胞HL7702作为受试对象。采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测细胞中miR-124的表达。HepG2细胞转染miR-124模拟物（miR-124 mimic）后,CKK-8法检测细胞增殖活性,Transwell法检测细胞迁移能力。Western blotting检测Notch1信号通路表达。结果 在HepG2细胞中,miR-124表达低于人正常肝细胞HL7702[（1.00±0.00） vs （21.32±1.02）;P < 0.05];与对照组（无处理的HepG2细胞）相比,miR-124 mimic转染组中Hep G2细胞增殖明显降低[（0.44±0.01） vs（0.21±0.01）;P < 0.05],细胞迁移能力也降低[（12.00%±2.00%） vs （5.67%±1.52%）;P < 0.05];miR-124过表达可以明显抑制Hep G2细胞内Notch1信号通路蛋白表达[（100.00%±0.00%） vs （36.46%±2.36%）;P <0.05]。结论 本研究显示,miR-124可靶向抑制Notch1表达,进而抑制HCC的增殖和迁移。     

Talin-1与原发性肝癌的侵袭和迁移

目的探讨Talin与不同来源人肝癌细胞侵袭及迁移的关系,进而为进一步研究Talin与肝癌的侵袭和迁移的可能机制提供理论基础。方法体外培养人高转移肝癌细胞株(MHCC-97H细胞株)、人低转移肝癌细胞株(MHCC-97L细胞株)、人肝癌SMMC-7721细胞株、人肝癌Be L-7402细胞株、人肝癌He PG-2细胞株及人正常肝脏细胞株(LO2细胞株),RT-PCR技术检测各细胞株中Talin-1的mRNA表达水平,Western-blot技术检测各细胞株中Talin-1的蛋白表达水平,Transwell侵袭和迁移实验及细胞划痕实验检测各细胞株侵袭及迁移能力,软琼脂集落形成实验检测各细胞株增殖和克隆能力。结果五种人肝癌细胞株中Talin-1的mRNA表达水平不同(P0.05),五种人肝癌细胞株中Talin-1蛋白表达水平不同,MHCC-97L细胞株中Talin-1的蛋白表达比LO2细胞株高(P0.05);五种人肝癌细胞株的侵袭能力不同(P0.05),五种人肝癌细胞株的迁移能力不同(P=0.0000),与正常人肝脏细胞相比,五种人肝癌细胞株的增值和克隆能力不同(P=0.00017)结论 Talin-1与肝癌的侵袭和迁移能力相关;高表达Talin-1的原发性肝癌的侵袭和迁移能力低,恶性度低,低表达Talin-1的原发性肝癌的侵袭和迁移强,恶性度高,Talin-1可作为原发性肝癌恶性度的预测指标之一。     

肝癌细胞迁移过程中Notch信号通路的作用效果

目的:探讨Notch信号通路在肝癌细胞迁移过程中的作用及相关机制。方法:体外培养正常非肿瘤肝细胞系HL-7702,肝癌细胞系HepG2、Huh-7。利用Transwell小室检测细胞的迁移能力,Western blot检测Notch、Snail、E-cadherin蛋白的表达。分别采用1μmol/L DAPT、5μmol/L DAPT阻断Notch信号通路,比较不同浓度下对细胞迁移能力的影响以及对肝癌细胞中Snail和E-cadherin蛋白表达的影响。结果:肝癌细胞系的侵袭迁移能力明显高于正常非肿瘤肝细胞(P0.05),肝癌细胞HepG2的侵袭迁移能力稍高于Huh-7,但差异未见统计学意义(P0.05)。采用Western blot蛋白印记方法检测细胞Notch、Snail、E-cadherin的蛋白表达量,肝癌细胞中Notch、Snail的表达高于正常细胞,E-cadherin的表达显著低于正常细胞。采用1μmol/L DAPT和5μmol/L DAPT阻断Notch信号通路,与对照组比较,1μmol/L DAPT和5μmol/L DAPT均能明显下调Snail的表达,上调E-cadherin的表达,且随着浓度的增加作用加强(P0.05)。结论:Notch信号通路在肝癌细胞侵袭迁移过程中发挥着重要作用,初步认为与Snail、E-cadherin的表达有关。     

LncRNA PCAT19调控miR-137影响前列腺癌细胞增殖、细胞周期、迁移及侵袭

目的 探讨LncRNA PCAT19对前列腺癌细胞增殖、细胞周期、迁移、侵袭的影响及其对miR-137的调控作用.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测前列腺癌组织与癌旁组织中PCAT19、miR-137的表达水平;体外培养人前列腺癌细胞DU145,分别将PCAT19小分子干扰RNA(si-PCAT...     

染料木黄酮对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制

本研究拟探讨染料木黄酮对前列腺癌细胞LNCaP和CWR22RV1的增殖、迁移和侵袭能力的影响。一、材料与方法1.材料:前列腺癌细胞株LNCaP和CWR22RV1(中国科学院上海生命科学研究院);Genistein(天津科瑞泰科技有限公司);RPMI 1640、胎牛血清(FBS)、胰蛋白酶(美国Gibco公司);E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin,Abcam公司);聚氰基丙烯酸正丁酯(BCA)试剂盒、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)上样缓冲液(×5)及蛋白质印迹法(Western blot)试剂盒(上海市碧云天生物公司);2.实验方法:采用噻唑蓝(MTT)实验、划痕实验和Transwell实验检测Genistein对细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。采用Western blot检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、CD44和Oct-4的表达水平。     

Notch信号通路在小鼠肝癌细胞H22增殖凋亡中的作用及意义

目的 观察Notch信号通路在小鼠肝癌细胞H22增殖和凋亡中的作用,并探讨其可能的机制.方法 培养小鼠肝癌细胞株H22,将细胞随机分为A、B、C组,分别加入Notch信号激活剂rhNF-κB、抑制剂DAPT及PBS共培养48 h.用MTT法检测细胞吸光度值(A值)观察细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,应用免疫组化法检测各相关处理过的细胞株,RT-PCR、Western blotting法分别检测H22细胞中的Notch1、Hes1、Bcl-2 mRNA及其蛋白.结果 培养24、48、72、96 h后,A、B组与C组比较,细胞增殖差异明显(P均<0.05).A、B、C组细胞凋亡率分别为25.52％±2.13％、0.91％±0.18％、8.91％±1.50％,A、B组与C组比较差异明显(P均<0.05).与C组比较,A组细胞中Notch1、Hes1、Bcl-2 mRNA及其蛋白表达量均显著增加(P均<0.05),B组细胞中Notch1、Hes1、Bcl-2 mRNA及其蛋白表达量均显著降低(P均<0.05).结论 Notch1信号通路在抑制小鼠肝癌细胞株H22增殖、促进其凋亡中发挥了重要的调控作用,其机制可能与调节靶基因Hesl、Bcl-2表达有关.