多发性骨髓瘤增殖与凋亡的研究

目的了解多发性骨髓瘤（multiplemyeloma，MM）中瘤细胞凋亡与增殖之间的关系及最终造成浆细胞数目异常增多，形成MM的发病机制。方法运用末端脱氧核着酸转移酶介导的脱氧尿毒三磷酸缺口末端标记（TUNEL）技术，结合HE形态和免疫组化结果，半定量分析12例MM中瘤细胞的凋亡与增殖的情况。结并MM瘤细胞增殖水平低，凋亡水平也低于常见人类肿瘤的平均凋亡水平，在瘤细胞聚积成给节或弥漫浸润时，给节中无TUNEL阳性标记细胞，瘤细胞的凋亡与增殖之间呈正相关（P＜0.05）。结论在MM中，造成瘤细胞数量异常增多形成肿瘤的重要原因是凋亡的减少。     

PD153035对人多发性骨髓瘤细胞XG-1的诱导凋亡作用及机制

目的研究表皮生长因子受体(EGFR)在多发性骨髓瘤细胞增殖与生存中的作用及机制.方法采用EGFR抑制剂PD153035对多发性骨髓瘤细胞XG-1上的EGFR进行阻断.采用3H掺入法、MTT法和Annexin V染色检测细胞的增殖与凋亡情况,同时采用Western blot方法分析PD153035对STAT3磷酸化的影响.结果 PD153035可以使XG-1细胞增殖能力下降,并诱导XG-1细胞凋亡.而且PD153035还可以阻断HB-EGF诱导的STAT3的磷酸化,但对IL-6诱导的STAT3的磷酸化无阻断作用.结论 PD153035可以通过特异性阻断STAT3分子磷酸化,切断EGFR活化的转导通路,导致骨髓瘤细胞的增殖能力下降,并诱导其凋亡.     

苦参碱对多发性骨髓瘤细胞的体外作用机制研究

目的:阐明苦参碱对多发性骨髓瘤(MM)细胞的作用和内在机理。方法:MTT法检测苦参碱对多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226和多发性骨髓瘤原代细胞增殖的影响;根据中效原理分析苦参碱联合亚砷酸对RPMI8226细胞株的联合作用;应用DAPI染色检测细胞凋亡。结果:M1TT比色法检测结果显示,苦参碱对RPMI8226细胞及MM原代细胞均有生长抑制作用,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。体外联合亚砷酸作用RPMI8226细胞抑制率>50%时联合指数(CI)<1。DAPI荧光染色,荧光显微镜下观察苦参碱以终浓度2.0g/L作用于RPMI8226细胞12h后可见明显的凋亡小体出现。结论:苦参碱对RPMI8226细胞和MM原代细胞均有生长抑制作用,体外联合亚砷酸作用MM细胞株RPMI8226细胞,抑制率>50%时呈协同作用。苦参碱通过诱导细胞凋亡抑制RPMI8226细胞的增殖。     

中电导钙激活性钾通道在人多发性骨髓瘤细胞增殖中的作用

目的 探讨中电导钙激活性钾通道(intermediate-conductance Ca2+-activated K+channels,IKCa1)在人多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞增殖中的作用.方法 通过台盼蓝拒染法检测IKCa1阻滞剂CLO对MM细胞株RPMI 8226和U266生存活力的影响,应用流式细胞仪检测CLO作用于RPMI 8226和U266细胞后细胞周期分布及细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)变化.结果 CLO以浓度依赖方式显著抑制RPMI 8226和U266细胞生长,10 μmoL/L CLO作用48 h后,RPMI 8226细胞和U266细胞周期明显被阻滞于G0/G1期,S期显著减少.10 μmol/L CLO作用1min后,RPMI 8226和U266细胞内Fluo-3/AM荧光强分别为(448.3 ±32.8)和(675.9 ±45.8),分别与对照组(56.5±7.2)和(31.8±4.5)相比具有显著差异(P＜0.05).结论 钙激活性钾通道阻断剂克霉唑抑制MM细胞增殖,其机制可能与CLO通过调节细胞内钙水平引起细胞周期阻滞于G0/G1期有关.     

熊果酸对多发性骨髓瘤细胞株U266的凋亡作用及机制

目的 探讨三萜类化合物熊果酸（ursoIic acid,UA）对多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）细胞株U266的凋亡诱导作用及分子机制.方法 用熊果酸处理U266细胞,Cell Counting Kit-8法检测细胞增殖抑制情况;用20μmol/L熊果酸处理U266细胞24 h,瑞氏法染色后在光学显微镜下观察细胞凋亡的形态学变化;Annexin-V标记,在流式细胞仪上检测细胞凋亡率变化;用实时荧光定量PCR方法及Western blot方法检测FGFR3、Bcl-2、CCND1、MYC及p53的表达变化.结果 经熊果酸处理后,U266细胞的增殖受到抑制,光学显微镜下可观察到细胞形态不规则样改变,胞膜小泡状形成,细胞质内空泡增多,细胞核染色质浓缩、固缩;流式细胞术检测Annexin-V阳性细胞比例随用药浓度增加及用药时间延长而增加;细胞内FGFR3、Bcl-2、CCND1、MYC的mRNA和蛋白质表达随用药浓度增加及用药时间延长呈显著下降趋势,而p53的mRNA及蛋白表达逐渐增高.结论 熊果酸可抑制U266细胞的增殖并诱导其凋亡,体外有抗多发性骨髓瘤细胞作用,为多发性骨髓瘤选择新的靶向治疗方案提供实验依据.     

含吡柔比星与多柔比星方案治疗多发性骨髓瘤的效果对比研究

目的探讨含吡柔比星与多柔比星方案治疗多发性骨髓瘤的对比效果。方法 120例多发性骨髓瘤患者分为实验组和对照组,实验组给予含吡柔比星化疗方案,对照组给予含多柔比星化疗方案。结果 （1）实验组CR率和有效率略好于对照组,但无显著性差异（P〉0.05）。（2）毒副反应方面：实验组在脱发（x2=4.349,P〈0.05）,心肌酶谱改变（x2=17.811,P〈0.01）和肝功能损害（x2=7.745,P〈0.01）等方面发生率显著少于对照组。结论含吡柔比星方案治疗多发性骨髓瘤患者,可以显著减少并发症,保证治疗效果,值得临床应用推广。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂NaBut抑制多发性骨髓瘤细胞增殖促进凋亡的机制研究

目的分析组蛋白去乙酰化酶抑制剂NaBut抑制多发性骨髓瘤细胞增殖促进凋亡的机制。方法利用0.1、0.2、0.5、1.0及2.0μmol/L丁酸钠(NaBut)对U266细胞株48 h进行处理,使用0.5μmol/L丁酸钠对细胞8、16、24、36、48 h进行处理,使用1μmol/L M344、0.5μmol/L LBH589、6μmol/L NaBut、6μmol/L VPA对细胞48 h进行处理,另在对照组中加入同等剂量的溶剂,使用MTT法对细胞存活率进行检测,对其检测结果进行比较。结果 (1)与对照组比较,不同浓度丁酸钠处理细胞48 h后细胞存活率逐渐降低,差异显著(P0.05);丁酸钠浓度越高,细胞存活率则越低。(2)与对照组比较,0.5μmol/L丁酸钠处理细胞16、24、36、48 h后细胞存活率逐渐下降,差异显著(P0.05);处理花费时间越长,细胞的存活率则越低。(3)与对照组比较,1μmol/L M344、0.5μmol/L LBH589、6 mmol/L NaBut及6 mmol/L VPA处理48 h后细胞存活率逐渐下降,差异显著(P0.05)。结论组蛋白去乙酰化酶抑制剂NaBut有效的抑制了多发性骨髓瘤细胞增殖促进凋亡,在抗癌方面有着良好的应用前景。     

雷公藤红素对多发性骨髓瘤细胞株LP-1凋亡的诱导作用

目的研究雷公藤红素对多发性骨髓瘤细胞LP-1凋亡的诱导作用及可能机制。方法通过雷公藤红素体外作用于多发性骨髓瘤LP-1细胞,研究其对于细胞增殖及细胞凋亡的影响。采用EnoGeneCell TM细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)研究雷公藤红素对LP-1多发性骨髓瘤细胞体外增殖的影响,采用膜联蛋白Ⅴ(AnnexinⅤ)-增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)荧光染色法定性检测及流式细胞术定量检测雷公藤红素对LP-1多发性骨髓瘤细胞株凋亡的诱导作用,采用级联酶底物显色法检测雷公藤红素对LP-1多发性骨髓瘤细胞Caspase-3酶原活化状态的影响。结果雷公藤红素能明显抑制LP-1多发性骨髓瘤细胞体外增殖,其半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)为0.881 7μmol/L。雷公藤红素可诱导LP-1细胞发生细胞凋亡,此效应具有剂量依赖性,雷公藤红素60.0μmol/L作用于LP-1细胞24h可诱导细胞凋亡百分率达到80.7%。雷公藤红素可引起LP-1细胞Caspase-3酶原活化。结论雷公藤红素可抑制多发性骨髓瘤细胞株增殖,诱导其凋亡,此作用可能通过Caspase-3酶原活化途径而实现。     

骨髓基质细胞保护药物诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡的机制研究

目的研究原代正常骨髓基质细胞对多发性骨髓瘤细胞的保护作用及其内在机制。方法脂质体介导Notch1特异性小干扰RNA转染多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞与骨髓基质细胞共培养,采用细胞形态学观察和流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹检测Notch1及NF-κB p65蛋白表达变化。结果多发性骨髓瘤细胞与基质细胞共培养增加了Notch1活化形式(N1-ICD)蛋白的表达;共培养组与悬浮培养组药物诱导的细胞凋亡率分别为(15.30±2.21)%、(32.88±3.27)%;小干扰RNA有效的下调Notch1蛋白的表达;干扰共培养组与控制共培养组细胞的凋亡率分别为(41.47±4.01)%和(24.89±3.68)%;下调Notch1后NF-κB p65蛋白表达没有改变。结论骨髓基质细胞保护药物诱导的多发性骨髓瘤细胞的凋亡,该保护作用通过激活Notch1通路实现。下调Notch1共培养恢复药物诱导的凋亡作用不是通过NF-κB通路,可能存在其他机制。     

白色念珠菌分泌物对人类多发性骨髓瘤细胞作用机制的初步研究

目的：探讨白色念珠菌（ID16VI）分泌物对人类多发性骨髓瘤细胞（ARH-77）的作用。方法：荧光染色观察对照组和实验组细胞形态变化；FCM检测凋亡细胞百分率。结果：荧光显微镜下观察到白色念珠菌分泌物处理组的凋亡细胞增多；FCM检测实验组凋亡细胞百分率上升。结论：白色念珠菌分泌物能促进ARH-77细胞凋亡。     

2-甲氧基雌二醇对复发难治性骨髓瘤患者骨髓瘤细胞作用的实验研究

目的探讨2-甲氧基雌二醇（2-ME）对复发性难治性骨髓瘤患者骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法对复发性难治性骨髓瘤细胞进行分离、培养,用不同剂量的2-ME处理不同的时间,然后用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞活力和流式细胞分析细胞周期分布和细胞凋亡率。结果随着2-ME剂量的增加和作用时间的延长,细胞抑制率和凋亡率增加;G0/G1期细胞比例增加,而S期细胞减少,各组之间差异有显著性（〈0.05）。结论2-ME对复发难治性骨髓瘤患者的骨髓瘤细胞具有抑制细胞增殖、促进细胞凋亡的作用。     

小白菊内酯对多发性骨髓瘤细胞的生长抑制及其凋亡诱导作用

目的探讨小白菊内酯(parthenohde,VTL)对多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞的体外作用及其机制。方法培养人MM细胞系PRMI8266,在不同浓度的PTL作用不同时间后,以四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)及台盼蓝拒染检测细胞增殖及活性,用AO／EB染色荧光显微镜及Wright-Giemsa染色观察细胞形态学改变,应用膜联蛋白V(Annexin V)和碘化丙啶(PI)染色流式细胞仪检测细胞凋亡率,酶底物法测定细胞半胱氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)活性。结果(1)1- 10μmol／L的PTL对MM细胞生长曲线和活性有明显抑制作用,并呈时间和剂量依赖性,5μmol／L作用48 h,可达到接近50％的活性抑制;(2)5μmol／L PTL作用48 h后可见到细胞出现明显形态学改变,细胞形态变小、胞质减少、胞体胞核固缩、出现凋亡小体;(3)2μmol／L、5μmol／L、10μmol／L的PTL作用48 h后MM细胞的凋亡率分别为17．1％±2．6％、33．6％±3．8％、40．9％±3．1％,与对照组5．6％±1．2％相比,差异有显著统计学意义(均P<0．01);(4)PTL作用48 h后,MM细胞caspase-3活性明显增强,且呈浓度依赖性(P<0．01)。结论。PTL能明显抑制MM细胞体外生长及活性,其作用机制为增强caspase-3活性而诱导MM细胞凋亡;PTL作为新的MM细胞凋亡诱导剂,其作用靶点及体内效应值得深入研究。     

2-甲氧基雌二醇对骨髓瘤细胞作用机制的实验研究

目的 探讨2-甲氧基雌二醇（2-ME）对骨髓瘤细胞作用的机制.方法 对1例复发性和难治性骨髓瘤细胞进行分离、培养,予0、1、2、4、8和16 μmol/L的2-ME对骨髓瘤细胞处理48h（以0 μmol/L的2-ME作为对照组）.后采用酶联免疫法检测培养上清中的血管内皮细胞生长因子（VEGF）和IL-6的表达水平,同时采用免疫组化法检测c-myc和bcl-2蛋白阳性表达的骨髓瘤细胞.结果 随着2-ME浓度的增加,培养上清中VEGF和IL-6的表达水平均较对照组明显降低（均P〈0.01）,且骨髓瘤细胞中c-myc和bcl-2蛋白表达阳性率均较对照组明显降低（均P〈0.01）.结论 2-ME对难治性骨髓瘤患者骨髓瘤细胞具有抑制VEGF、IL-6分泌和C-myc、bcl-2蛋白表达水平的作用.     

Altered gene expression reveals molecular mechanisms underlying oridonin-induced apoptosis of multiple myeloma LP-1 cells

Objective: To investigate the effect of oridonin on proliferation and invasion of human multiple myeloma LP-1 cells and the underlying mechanism. Methods: LP-1 cells in culture medium in vitro were treated with oridonin at the different concentration. Cell proliferation was measured by Microwave Theory and Techniques (MTT) assay and cell apoptotic rate was detected by flow cytometry. Morphology of cell apoptosis was observed by transmission electron microscope. Expressions of Bax, Bcl-2, Caspase-3, NF-κB as well as I-κB mRNA were detected by real-time PCR. Results: The MTT assays and flow cytometry revealed that oridonin could inhibit the growth of LP-1 cells and cause apoptosis significantly; the suppression was both in time- and dose-dependent manner. Marked morphological changes of cell apoptosis were found under a transmission electron microscope after the cells were treated with oridonin at 25 μmol/L for 24 h. Along with the apoptotic process, Bcl-2, Caspase-3,NF-κB gene expressions were down-regulated (P<0.05). On the contrast, the Bax and I-κB gene expressions were up-regulated (P<0.05). Conclusion: Oridonin could inhibit the proliferation of LP-1 cells via inducing apoptosis. We concluded that oridonin induces apoptosis in LP-1 cells via activation of caspase-3 as well as down-regulation of Bcl-2 and up-regulation of Bax expression. The results suggested that oridonin could induce apoptosis of LP-1 cells through mitochondria- and caspase3-dependent pathways. Meanwhile, the inhibition of NF-κB and the activation of I-κB indicate pro-apoptotic stimuli. In one word, oridonin might be an important potential anti-myeloma reagent.     

MiR-17-3P对多发性骨髓瘤细胞增殖的影响

目的:探究miR-17-3P对多发性骨髓瘤(MM)细胞增殖的影响。方法:通过实时荧光定量聚合酶链反应测定miR-17-3P在MM细胞系RPMI 8226、U266和KM3及正常人骨髓细胞中的表达情况。合成miR-17-3P模拟物和抑制物,分别转染U266细胞,采用MTT法测细胞活力,PI染色流式细胞仪测细胞周期,观察U266细胞增殖情况。结果:MM细胞株RPMI8226、U266、KM3中miR-17-3P相对表达量均明显高于正常人骨髓细胞;利用模拟物上调miR-17-3P后,U266的细胞活力较对照组明显提高,48h时作用效果最为显著;相反,下调miR-17-3P后,U266的细胞活力降低;上调miR-17-3P后,G1期细胞比例较对照组有所减少,S期细胞比例明显增多;相反,下调miR-17-3P后,细胞多被阻滞在G1期。结论:Mi R-17-3P可能促进多发性骨髓瘤细胞增殖。     

康莱特对小鼠肝癌细胞Hepa1-6增殖和凋亡的影响

目的：探讨不同浓度、不同作用时间康莱特（KLT）注射液对小鼠肝癌细胞Hepa1-6增殖和凋亡的影响。方法：采用MTT比色法观察不同浓度KLT对小鼠肝癌细胞Hepa1-6增殖抑制作用。HE染色光镜下观察细胞结构的改变。流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果：KLT对小鼠肝癌细胞Hepa1-6有明显的抑制效应,呈时间、浓度依赖性（P〈0.01）。光镜下可见细胞形态趋向良性分化。流式细胞仪检测,KLT作用Hepa1-6细胞48 h后,均出现凋亡峰,凋亡率呈浓度依赖性（P〈0.01）。结论：KLT可通过抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡来抑制小鼠肝癌细胞Hepa1-6的生长。     

负向调控p21对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响

探讨AU 结合因子1（AUF1）调控p21对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法 采用qRT-PCR和Western blot分别检测AUF1在骨肉瘤组织mRNA和蛋白表达水平。在骨肉瘤U2OS和HOS细胞中分别转染sh-NC和sh-AUF1后,CCK8检测细胞增殖情况;qRT-PCR检测增殖相关分子PCNA的表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot检测凋亡相关分子Cleaved-caspase-3的表达水平。RNA结合蛋白免疫沉淀实验和RNA半衰期实验检测AUF1调控p21的机制。结果 AUF1 mRNA和蛋白的表达水平在骨肉瘤组织中明显高于癌旁正常组织（P＜0.05）,AUF1 mRNA的表达水平在骨肉瘤伴转移的患者中明显高于骨肉瘤不伴转移的患者（P＜0.05）。在U2OS和HOS细胞中分别转染sh-NC和sh-AUF1,AUF1 mRNA和蛋白的表达水平在转染sh-AUF1组较sh-NC组明显下降（P＜0.05）。低表达AUF1能够明显抑制U2OS和HOS细胞的增殖和增殖相关分子PCNA的表达（P＜0.05）,促进细胞凋亡和凋亡相关分子Cleaved-caspase-3的表达（P＜0.05）。低表达AUF1能够明显促进U2OS和HOS细胞中p21 mRNA和蛋白的表达水平（P＜0.05）。AUF1蛋白能够与p21 mRNA结合,同时低表达AUF1能够明显抑制p21 mRNA的降解速度（P＜0.05）。结论 AUF1在骨肉瘤组织和细胞中明显高表达,低表达AUF1能够抑制p21 mRNA 降解,增加p21蛋白的表达,进而抑制骨肉瘤细胞增殖和促进细胞凋亡     

多发性骨髓瘤的免疫表型特征及其意义

目的探讨多发性骨髓瘤(MM)的细胞免疫表型特征及意义。方法应用多参数流式细胞术(MPFCM)测定多发性骨髓瘤30例和反应性免疫球蛋白增高症患者15例(对照组)骨髓细胞的免疫表型。结果 MM组CD138和CD38阳性率均为100%,CD56阳性率86.67%,CD117阳性率33.33%,CD19阳性率仅3.33%;对照组CD38、CD138阳性率均为100%,CD19阳性率93.33%,CD56阳性率6.67%,CD117不表达。MM组浆细胞比例及CD138、CD56、CD117表达率均高于对照组(P<0.01),CD19表达率低于对照组(P<0.01)。结论应用MP-FCM同时检测细胞表面CD38、CD138、CD19、CD56、CD117等抗原表达情况,可方便区分骨髓瘤细胞与良性浆细胞,是多发性骨髓瘤的重要诊断依据。     

多发性骨髓瘤CD38及CD56表达的研究

目的研究CD38及CD56在多发性骨髓瘤（Multiple myeloma，MM）细胞上的表达。方法采用三色免疫荧光直接标记法及多参数流式细胞术分析13例多发性骨髓瘤的免疫表型。结果13例MM标本的CD38均为强阳性；70％（9／13）骨髓瘤标本CD56和CD38双阳性。结论CD38及CD56有助于对MM的诊断，并且为MM亚型的分类提供重要的依据。