SPAG5通过影响JAK2/STAT3信号通路磷酸化促进乳腺癌细胞的增殖和侵袭

目的：探究人类精子相关抗原5（sperm?associated antigen 5,SPAG5）对乳腺癌细胞增殖和侵袭的影响及分子机制。方法：采用qRT?PCR和Western blot筛选相应SPAG5高表达细胞株和低表达细胞株;分别设计并构建重组SPAG5敲减/过表达质粒（siRNA?SPAG5/OE?SPAG5）,通过慢病毒表达质粒系统,制备敲减/过表达SPAG5的稳定细胞株;采用CCK?8增殖实验和裸鼠成瘤实验,检测乳腺癌细胞增殖能力的变化;采用细胞划痕实验、Transwell细胞实验检测乳腺癌细胞迁移、侵袭能力的变化;采用qRT?PCR和Western blot检测JAK2/STAT3通路和下游蛋白的变化;采用WP1066抑制JAK2/STAT3通路,检测细胞增殖和侵袭能力的变化。结果：相较于各自对照组,SPAG5敲减的 si1?MDA?MB?231组细胞SPAG5 mRNA 和蛋白水平显著降低,SPAG5过表达的OE?MCF?12A组细胞SPAG5 mRNA 和蛋白水平显著升高（P＜0.05）;同时,si1?MDA?MB?231组细胞的增殖、迁移、侵袭能力受到抑制,OE?MCF?12A组细胞得到增强（P＜0.05）;si1?MDA?MB?231组细胞的JAK2/STAT3通路磷酸化水平和下游蛋白表达受抑制（P＜0.05）,OE?MCF?12A组细胞的JAK2/STAT3通路磷酸化水平和下游蛋白表达水平提高（P＜0.05）;抑制JAK2/STAT3通路后SPAG5对乳腺癌细胞增殖和侵袭的促进作用消失（P＜0.05）。结论：SPAG5通过JAK2/STAT3信号通路增强乳腺癌细胞的增殖和侵袭能力。     

黄芪多糖通过JAK2/STAT3通路调控人膝骨关节炎软骨细胞增殖与凋亡

目的 研究黄芪多糖(APS)对人膝骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡及JAK2/STAT3通路的影响.方法 无菌分离人膝骨关节炎软骨细胞,设空白对照组,APS低、中、高剂量(25、50、100mg/L)组和塞来昔布(20mg/L)组.药物干预48h后,MTT法检测细胞增殖活力,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋...     

HUVEC-EVs通过JAK2/STAT3通路促进乳腺癌细胞增殖和迁移

目的: 探讨人脐静脉内皮细胞来源胞外囊泡(human umbilical vein endothelial cell-derived extracellular vesicles, HUVEC-EVs)对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响及其作用机制。方法: 采用不同浓度(0、10、20、40 μg/mL) HUVEC-EVs分别处理乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞24 h,通过MTT实验和平板克隆形成实验检测乳腺癌细胞增殖能力,Transwell实验检测乳腺癌细胞迁移和侵袭能力,划痕实验检测乳腺癌细胞迁移能力,蛋白质印迹实验检测乳腺癌细胞JAK2/STAT3信号通路相关蛋白的表达。结果： 与0 μg/mL HUVEC-EVs空白对照组相比,10、20、40 μg/mL HUVEC-EVs处理组乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞增殖能力明显提高(P<0.05),平板克隆形成能力、迁移和侵袭能力也明显增强(P<0.05),总JAK2、STAT3蛋白无明显变化(P>0.05),而p-JAK2、p-STAT3蛋白表达升高(P<0.05)。结论： HUVEC-EVs可能通过JAK2/STAT3信号通路的磷酸化促进乳腺癌细胞增殖及迁移。     

蟛蜞菊内酯通过抑制JAK2/STAT3信号通路诱导人肺腺癌A549细胞凋亡

目的 探讨蟛蜞菊内酯对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响及作用机制.方法 不同浓度蟛蜞菊内酯(0、5、10、20、40μmol/L)作用于A549细胞12、24、48 h,M T T检测细胞的增殖情况.将细胞分为对照组,甲氨蝶呤组(2μg/mL甲氨蝶呤),蟛蜞菊内酯组(20μmol/L蟛蜞菊内酯).流式细胞术检测细胞凋亡和...     

ALG3通过JAK/STAT通路促进三阴性乳腺癌增殖、侵袭和迁移

目的 探讨ALG3对乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移以及JAK/STAT信号通路的影响。方法 Western blot检测正常人乳腺上皮细胞HBL-100和乳腺癌细胞株SKBr3、MCF-7、MDA-MB-231中ALG3的表达情况。Western blot检测过表达和敲减序列的转染效率。先将实验分为control组(Lip 2000)、NC-KD组(Lip 2000+si-NC)和ALG3-KD组(Lip 2000+ALG3-siRNA),CCK-8,集落克隆和体内裸鼠成瘤实验检测乳腺癌细胞增殖能力;划痕实验和Transwell实验检测乳腺癌细胞侵袭和迁移能力;Western blot检测JAK/STAT通路相关蛋白JAK2/p-JAK2、STAT3/p-STAT3、MMP2、Cyclin D1、Bax表达情况。再将实验分为NC-OE组(Lip 2000+mimic-NC)、ALG3-OE组(Lip 2000+ALG3-mimic)和ALG3-OE+WP1066组(Lip 2000+ALG3-mimic+通路抑制剂WP1066),Western blot检测WP1066对JAK/STAT通...     

小檗胺通过抑制JAK2/STAT3信号通路改善小鼠溃疡性结肠炎

目的：观察小檗胺（BBM）对葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的溃疡性结肠炎（UC）小鼠的干预作用及其可能机制。方法：(1)采用RAW264.7巨噬细胞炎症模型,考察BBM对其细胞活力、一氧化氮（NO）释放、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、IL-6和诱导型NO合酶（iNOS）炎症基因表达的影响。(2)雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、BBM组（50 mg/kg）和柳氮磺胺吡啶（SASP）阳性药组（250 mg/kg）,每组8只。建立DSS诱导的UC小鼠模型,连续9 d灌胃给予相应药物。记录小鼠的体质量、脾脏系数、结肠长度及表观,评估疾病活动指数,HE染色观察结肠病理损伤;RT-qPCR检测小鼠结肠中炎症基因TNF-α、IL-1β、IL-6、iNOS的表达;Western blot检测小鼠结肠中紧密连接蛋白Claudin-4、Occludin及JAK2/STAT3通路蛋白的表达。结果：(1)BBM对RAW264.7细胞活力没有明显影响（P>0.05）,但能呈剂量依赖性地减少细胞中NO的释放量（P<0.05,P<0.01）及炎症基因TNF-...     

银杏叶提取物通过JAK2/STAT3信号通路调控食管癌细胞EC9706增殖、凋亡、侵袭、迁移的研究

目的 探讨银杏叶提取物对食管癌细胞EC9706增殖、凋亡、侵袭、迁移的影响及机制。方法 食管癌细胞EC9706分为对照组（不做任何处理）、不同浓度银杏叶提取物组（100 mg/L、200 mg/L、400 mg/L银杏叶提取物）、银杏叶提取物+白细胞介素-6(IL-6)组（20 ng/ml IL-6和400 mg/L银杏叶提取物）。采用CCK-8法检测各组细胞的光密度（OD）值;采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率;Transwell实验检测各组细胞的迁移和侵袭;Western blotting检测细胞增殖核抗原Ki-67、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cleaved-caspase-3)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、磷酸化酪氨酸激酶2(p-JAK2)、磷酸化信号转导和转录激活因子3(p-STAT3)蛋白相对表达量。结果 对照组,100 mg/L、200 mg/L、400 mg/L银杏叶提取物组,银杏叶提取物+IL-6组细胞OD值比较,差异有统计学意义（P <0.05）;与对照组相比,不同浓度银杏叶提取物组EC9706细胞OD值均降低（P ...     

胃泌素通过JAK2/STAT3信号通路调控胃癌细胞上皮间质转化

目的：观察外源性17肽胃泌素（gastrin-17, G-17）对人胃癌SGC-7901细胞E-钙黏素（E-Cadherin）及N-钙黏素（N-Cadherin）表达的影响并对相关机制进行初步探究。方法：体外培养胃癌SGC-7901细胞,使用G-17与胃泌素受体（cholecystokinin2 receptor,CCK2R）特异性抑制剂YM022处理胃癌细胞24 h后,Western blot检测E-Cadherin和N-Cadherin的表达;分别转染针对CCK2R的siRNA和过表达质粒,观察G-17处理对E-Cadherin和N-Cadherin表达的影响;Western blot检测G-17/CCK2R对JAK2/STAT3信号转导通路的活化情况;在分别使用JAK2特异性抑制剂AG490抑制JAK2/STAT3信号转导通路的激活或降低STAT3表达后,观察G-17对E-Cadherin和N-Cadherin表达的影响。结果：Western blot显示外源性G-17处理能降低SGC-7901胃癌细胞E-Cadherin的表达并上调N-Cadherin的表达,同时活化JAK2/STAT3信号转导通路,且这种效应能够被CCK2R特异性抑制剂YM022或siRNA所阻断,提示上述效应是由CCK2R所介导的。当使用AG490抑制JAK2/STAT3信号转导通路或下调STAT3表达后,G-17诱导的E-Cadherin下调以及N-Cadherin上调效应会部分被逆转。结论：外源性G-17可通过作用于胃癌SGC-7901细胞的CCK2R,进而激活JAK2/STAT3信号转导通路,下调E-Cadherin蛋白表达,上调N-Cadherin蛋白表达,诱导胃癌SGC-7901细胞的上皮间质转化。     

普鲁卡因通过抑制JAK2/STAT3通路缓解神经病理性疼痛

目的 探讨普鲁卡因减轻双侧大鼠坐骨神经压迫模型(CCI)神经病理性疼痛(NPP)的作用及其可能机制。方法 随机将18只SD大鼠分成对照组、CCI组及CCI+普鲁卡因组。将大鼠鞘内注射普鲁卡因预处理,然后经坐骨神经慢性压迫损伤(CCI)制成NPP大鼠模型,并进行行为学测试以分析机械,热和冷刺激下的疼痛评分。通过qRT-PCR和western blot检测酪氨酸激酶2(JAK2)和转录激活因子3(STAT3)在脊髓的表达。结果 普鲁卡因预处理降低了模型大鼠机械、热和冷刺激下的疼痛评分,模型建立后第15天出现最佳效果。普鲁卡因抑制了JAK2和STAT3的mRNA和蛋白质水平的表达。结论 普鲁卡因可缓解NPP,其机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路的传导有关。     

二甲双胍可能通过Hippo-YAP通路抑制HER-2阳性乳腺癌细胞的增殖和促进凋亡

目的 观察二甲双胍对HER-2阳性乳腺癌细胞株SKBR3增殖、凋亡的影响,并探讨其可能的机制。方法 分别用0、20、40、60、80、100、120 μmol/L二甲双胍处理乳腺癌细胞株SKBR3,CCK-8法检测其对细胞增殖的影响;结晶紫染色观察其对细胞集落形成的影响;计算IC50值。以该浓度二甲双胍处理细胞,与空白对照相比,流式细胞术检测细胞凋亡和周期的改变;实时荧光定量 PCR（qRT-PCR）检测 YAP、TAZ、EGFR、CTGF、CYR61、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin 及 Fibronectin 等关键基因的mRNA水平表达;Western blotting 实验检测YAP、TAZ蛋白水平的表达;免疫荧光观察二甲双胍对SKBR3细胞中YAP/TAZ核易位的改变。结果 CCK-8和细胞克隆实验显示二甲双胍对SKBR3细胞增殖活力具有明显的抑制作用（P<0.05）,呈浓度和时间依赖性。与对照组相比,二甲双胍处理后的SKBR3细胞凋亡明显增加;G1期细胞比例增多,而G2/M期细胞比例减少。N-cadherin、Vimentin和Fibronectin的表达降低,而E-cadherin的表达上调（P<0.05）。qRT-PCR和Western blotting检测结果显示,二甲双胍处理后YAP、TAZ、EGFR、CTGF和CYR61的表达明显下调（P<0.05）。免疫荧光实验显示：实验组较对照组的YAP或TAZ,其荧光的定位更多地聚集于胞浆,而细胞核中荧光的量明显的减少。结论 二甲双胍能抑制HER-2阳性乳腺癌细胞SKBR3的增殖,促进其凋亡和上皮－间质转化,其机制可能与抑制YAP/TAZ的表达和核定位有关。     

AGEs通过JAK2/STAT3信号通路诱导结肠癌SW480细胞增殖、侵袭及上皮间质转化

目的 观察糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)对结肠癌SW480细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移及上皮间质转化的影响,并探讨其相关机制.方法 将结肠癌SW480细胞分为对照组、AGEs组(200 μg/mL AGEs)、AGEs(200 μg/mL)+AG490(50 μmol/L)组,CCK-8检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞周期、凋亡,Transwell实验检测细胞体外侵袭能力,划痕实验检测细胞体外迁移能力.不同浓度(0、50、100、200 μg/mL) AGEs和200 μg/mL AGEs、50 μmol/L AG490单独处理及二者联合处理SW480细胞后,Western blot检测上皮间质转化相关分子标志物E-cadherin、N-cadherin、Vimentin及JAK2/STAT3信号通路相关分子的变化.结果 与对照组比较,AGEs能明显促进结肠癌SW480细胞的增殖,减少G1/S期阻滞,抑制凋亡,增强体外的侵袭、迁移能力(P＜0.05).与AGEs组比较,AGEs+ AG490组结肠癌SW480细胞增殖减少,G1/S期阻滞增加,凋亡增加,侵袭、迁移能力降低,差异有统计学意义(P＜0.05).Western blot检测结果显示,AGEs处理结肠癌SW480细胞后E-cadherin表达降低,N-cadherin、Vimentin、p-STAT3、p-JAK2表达升高,而AG490可逆转AGEs对结肠癌SW480细胞的作用.结论 AGEs能够通过JAK2/STAT3信号通路促进结肠癌SW480细胞的增殖,抑制凋亡,增强侵袭、迁移能力,促进上皮间质转化.     

沉默HE4对结肠癌细胞增殖、侵袭、凋亡和JAK/STAT3信号通路的影响

目的 探讨沉默人附睾蛋白4(HE4)对结肠癌细胞增殖、侵袭、凋亡和JAK/STAT3信号通路的影响.方法 选取124例结肠癌患者和40例健康人.用Western blot和免疫组织化学染色法检测结肠癌组织和癌旁组织中HE4的表达水平.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测结肠癌患者和健康人血清中HE4的表达水平.Weste...     

TTX通过JAK2/STAT3通路活化SOD减轻心肌细胞凋亡

目的:研究JAK2/STAT3信号通路在河豚毒素(Tetrodotoxin,TTX)心脏停搏液心肌保护中的作用.方法:24只Wistar大鼠随机均分为对照组、TTX组和TTX+AG490组,每组8只.对照组:开胸取左心室肌作为缺血前对照.TTX组:建立离体心脏Langendorff-Neely灌注模型,预灌注K-H缓冲液30rain后,灌注4℃ TTX心脏停搏液,停搏心脏并低温维持60 min,复灌K-H缓冲液60 min后,取左心室肌备用.TTX+AG490组:操作同℃组,但预灌和复灌时均在K-H缓冲液中加入JAK2抑制剂AG490(5μmol/L).分别采用免疫组化法、比色法和TUNEL法测定心肌组织中p-STAT3、SOD活性和MDA含量.以及心肌细胞凋亡指数(Apoptosis index,AI),并比较组间的变化.结果:与对照组相比,TTX组和TTX+AG490组p-STAT3表达量均明显增加(P<0.05);予以AG490处理后,p-STAT3表达量较TTX组明显下降(p<0.05 )与对照组相比,TTX组和TTX+AG490组SOD活性和MDA含量均明显增加(P<0.05);予以AG490处理后,SOD活性较TTX组显著降低(P<0.05),MDA含量却明显增加(P<0.05 ).经历缺血再灌注后,TTX组和TTX+AG490组心肌细胞AI明显高于对照组(P<0.05);与TTX组相比,TTX+AG490组AI显著增加(P<0.05).结论:JAK2/STAT3信号通路通过增强SOD活性,减轻膜脂质过氧化损伤,减少心肌细胞凋亡,介导TTX心脏停搏液对缺血心肌的保护作用.     

川芎嗪通过Akt信号通路影响前列腺癌PC3细胞的增殖和凋亡

目的 研究盐酸川芎嗪对前列腺癌PC3细胞增殖和凋亡的影响及作用机制.方法 0、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 mg/mL盐酸川芎嗪处理雄激素非依赖性前列腺癌PC3细胞,MTT法检测各组细胞的增殖能力,荧光显微镜观察细胞核形态学改变,Western blot检测Akt以及下游相关蛋白mTOR、p70S6蛋白及蛋白磷酸化的表达,以及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达.结果 盐酸川芎嗪能有效抑制前列腺癌PC3细胞增殖,且显示浓度时间依赖性(P＜0.05).1.5、2.5 mg/mL的盐酸川芎嗪能够降低Akt和p-Akt的表达,进而下调mTOR、p-mTOR、p70S6及p-p70S6的表达(P＜0.05);同时下调Bcl-2、上调Bax蛋白的表达(P＜0.05).结论 Akt及其下游信号通路介导了盐酸川芎嗪抑制前列腺癌PC3细胞增殖及促凋亡作用.     

JAK2/STAT3通路在肝癌细胞侵袭及血管生成拟态中的作用

目的 探讨JAK2/STAT3通路在肝癌细胞QGY-7701侵袭及血管生成拟态中的作用.方法 JAK2抑制剂AG490(5、10 μmol/L)处理肝癌细胞48 h,Transwell小室、体外成管实验分别检测各组细胞的体外侵袭能力和成管能力,RT-PCR检测Twist1及MMP-2 mRNA表达差异,Western blot检测STAT3、p-STAT3、Twistl和MMP-2蛋白表达差异.结果 与对照组相比,Transwell小室穿膜细胞数减少,形成管道结构数目减少,Twist1及MMP-2 mRNA表达减少,Twist1、MMP-2和p-STAT3蛋白表达减少,差异均有统计学意义(P＜0.05),STAT3蛋白表达无差异(P＞0.05).结论 AG490能有效抑制肝癌细胞侵袭及成管的能力,JAK2/STAT3通路在肝癌细胞侵袭及血管生成拟态中起促进作用.