右美托咪定对口腔鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨右美托咪定对口腔鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制。方法 实验一：选用人口腔鳞癌细胞系HN6和CAL27,根据右美托咪定浓度不同随机均分为六组：阴性对照组(NC组)、右美托咪定1 nmol/L组(D1组)、右美托咪定10 nmol/L组(D2组)、右美托咪定100 nmol/L组(D3组)、右美托咪定1μmol/L组(D4组)和右美托咪定10μmol/L组(D5组)。培养24、48 h后分别采用CCK-8法、划痕实验和Transwell实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力。实验二：利用转录组测序技术筛选右美托咪定1μmol/L处理HN6细胞12 h后差异表达的基因。采用慢病毒转染细胞，建立稳定敲低细胞色素P450 1B1(CYP1B1)的HN6细胞株。将细胞随机分为四组：shCtrl组(C组)、shCYP1B1组(CYP组)、shCtrl+右美托咪定组(CD组)和shCYP1B1+右美托咪定组(CYPD组)。采用划痕实验和Transwell实验检测HN6细胞迁移和侵袭能力。结果 实验一：与NC组比较，D2组、D3组、D4组和D5组HN6和CAL27细胞迁移率均明显升高，基质胶内...     

右美托咪定对胃腺癌SGC-7901细胞生长和转移的影响

目的观察不同浓度右美托咪定对胃腺癌SGC-7901细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法人胃腺癌SGC-7901细胞接种于培养板培养24h,随机分为五组:对照组(C组)、右美托咪定312.5μg/ml组(D1组)、右美托咪定625μg/ml组(D2组)、右美托咪定1 250μg/ml组(D3组)和右美托咪定2 500μg/ml组(D4组)。分别用不同浓度右美托咪定处理胃癌SGC-7901细胞48h后,采用CCK-8法、Transwell法检测细胞增殖、侵袭和迁移。结果与C组比较,D1、D2、D3和D4组SGC-7901细胞活力差异无统计学意义。D1、D2、D3和D4组SGC-7901细胞迁移能力明显高于C组(P0.05或P0.01),且呈剂量依赖性;D1、D2、D3和D4组SGC-7901细胞侵袭能力明显高于C组(P0.05或P0.01),且呈剂量依赖性。结论右美托咪定可促进人胃癌细胞SGC-7901侵袭和迁移,对其增殖无明显影响。     

右美托咪定对MCF-7乳腺癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的探讨右美托咪定对MCF-7乳腺癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法将MCF-7乳腺癌细胞分为六组,右美托咪定组(D1组、D2组、D3组、D4组、D5组)和对照组(C组)。D1、D2、D3、D4、D5组加入右美托咪定,终浓度分别为1 000、100、10、1、0.1 ng/ml,C组加入等容积的生理盐水。通过噻唑蓝(MTT)法观察右美托咪定对MCF-7乳腺癌细胞增殖的影响,通过划痕实验观察右美托咪定对MCF-7乳腺癌细胞迁移的影响,应用凋亡试剂盒结合流式细胞仪检测右美托咪定对MCF-7乳腺癌细胞凋亡的影响。结果与C组比较,D1、D2、D3、D4、D5五组乳腺癌细胞增殖率、迁移距离和凋亡率差异均无统计学意义。结论右美托咪定对MCF-7乳腺癌细胞的增殖、迁移和凋亡无明显影响。     

右美托咪定对大鼠单肺通气后肺损伤中细胞凋亡及CHOP的影响

目的评价右美托咪定对大鼠单肺通气(OLV)后肺损伤中细胞凋亡及CCAAT增强子结合蛋白(C/EBP)同源蛋白(CHOP)的影响。方法成年雄性SD大鼠40只,随机分为四组(n=10):对照组、OLV组、生理盐水处理组(OLV+生理盐水组)、右美托咪定处理组(OLV+右美托咪定组)。实验结束后处死大鼠,留取左肺组织以测定肺组织湿/干重比(W/D);光镜下观察肺脏组织的形态学改变;电镜下观察肺组织超微结构的改变;采用原位末端标记(TUNEL)法检测肺组织细胞凋亡指数(AI);采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、CHOP mRNA和蛋白表达水平的改变。结果与对照组和OLV+右美托咪定组比较,OLV组和OLV+生理盐水组肺组织W/D和AI明显升高(P<0.01),GRP78、CHOP mRNA和蛋白表达均明显上调(P<0.01)。与OLV组和OLV+生理盐水组比较,OLV+右美托咪定组肺组织结构损伤明显减轻。结论右美托咪定预处理对大鼠单肺通气时的肺脏具有保护作用,其作用机制可能与其减轻细胞凋亡、抑制CHOP有关。     

右美托咪定对小鼠内毒素性急性肾损伤时细胞焦亡的影响及其与miRNA-223-3p的关系

目的评价右美托咪定对小鼠内毒素性急性肾损伤时细胞焦亡的影响及其与miRNA-223-3p的关系。方法清洁级健康雄性ICR小鼠32只, 8～12周龄, 体重20～25 g, 采用随机数字表法分为4组(n=8):对照组(C组)、LPS组(L组)、LPS+右美托咪定组(LD组)和LPS+右美托咪定+阿替美唑组(LDT组)。腹腔注射LPS 400 μg/kg, 8 h后腹腔注射LPS 10 mg/kg制备小鼠内毒素性急性肾损伤模型。LD组造模后30 min时腹腔注射右美托咪定40 μg/kg, 每2 h 1次, 共3次;LDT组于造模结束即刻腹腔注射阿替美唑750 μg/kg, 30 min后腹腔注射右美托咪定40 μg/kg, 每2 h 1次, 共3次;C组腹腔注射等容量生理盐水。造模后24 h时经心脏取血, 检测血清Cr和BUN浓度。处死小鼠取左侧肾脏组织, HE染色后光镜下观察病理学结果, 采用Western blot法及qRT-PCR法检测caspase-1 p20、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、ASC及其mRNA表达水平, 采用ELISA法测定IL-1β和IL-1...     

右美托咪定减轻丙泊酚诱导的发育期大鼠学习记忆障碍

目的 探讨右美托咪定预给药对丙泊酚诱导的发育期大鼠学习记忆功能的影响,以及可能参与的炎症机制.方法 健康新生SD大鼠48只,7日龄,体重12～20 g.采用随机数字表法分为四组:对照组(C组)、丙泊酚组(P组)、右美托咪定组(D组)和右美托咪定预给药组(DP组),每组12只.C组腹腔注射生理盐水0.1 ml;P组腹腔注...     

右美托咪定预先给药对脂多糖诱导乳鼠原代小胶质细胞炎性介质释放的影响

目的 评价右美托咪定预先给药对脂多糖诱导乳鼠原代小胶质细胞炎性介质释放的影响.方法 培养乳鼠原代小胶质细胞,采用随机数字表法,将其分为3组:对照组(C组)、脂多糖组(L组)和右美托咪定预先给药组(D组),每组10孔.C组去血清细胞培养液培养,L组加入脂多糖(终浓度1 μg/ml),D组加入右美托咪定(终浓度1 ng/ml),1h后加入脂多糖(终浓度1μg/ml).作用24h后采用Griess法测定培养上清液一氧化氮(N0)浓度,采用酶联免疫吸附法测定培养上清液前列腺素E2(PGE2)、IL-1β和TNF-α浓度,采用RT-PCR法测定细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA的表达.结果 与C组比较,L组和D组细胞iNOS mRNA表达上调,上清液NO、PGE2、IL-1β和TNF-α浓度升高(P＜0.01);与L组比较,D组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 右美托咪定预先给药对脂多糖诱导乳鼠原代小胶质细胞炎性介质释放无明显影响.     

不同浓度右美托咪定对大鼠肠系膜动脉平滑肌细胞BKCa通道的影响

目的 评价不同浓度右美托咪定对大鼠肠系膜动脉平滑细胞大电导钙激活钾通道(BKCa)的影响.方法 SD大鼠,雌雄不拘,体重180～220 g,经两步法酶消化分离肠系膜动脉平滑肌细胞.选取10个肠系膜动脉平滑肌细胞,采用单通道内面向外式膜片钳技术进行记录,钳制电压为40 mV,游离钙离子浓度为10-7 mol/L,采用浓度累积法加入右美托咪定,分别于0(基础值)、10-9、10-8、10-7、10-6、10-5 mol/L右美托咪定时记录BKCa开放概率(NPo)、电流幅度(Am)、平均开放时间(To)和平均关闭时间(Tc).结果 与基础值比较,10-7、10-6、10-5 mol/L右美托咪定时NPo升高,且呈浓度依赖性,10-9、10-8、10-7、10-6、10-5 mol/L右美托咪定时Tc缩短(P＜0.05或0.01)；与10-9mol/L右美托咪定比较,10-8mol/L右美托咪定时Tc缩短(P＜0.05),不同浓度右美托咪定时Am和To 差异无统计学意义(P＞0.05).结论 10-7、10-6、10-5 mol/L右美托咪定可呈浓度依赖性地激活大鼠肠系膜动脉平滑肌细胞BKCa通道,是其降压作用的机制之一.     

右美托咪定预防大鼠创伤后应激障碍的效果及其对海马ERK活性及ARC表达的影响

目的 评价右美托咪定预防大鼠创伤后应激障碍(PTSD)的效果及其对海马细胞外信号调节激酶(ERK)活性及活动调节骨架蛋白(ARC)表达的影响.方法 成年雄性SD大鼠68只,体重250～280 g,采用随机数字表法,将大鼠分为4组(n=17)∶生理盐水组(NS组)、右美托咪定0.3 μg/kg组(D1组)、右美托咪定3.0μg/kg组(D2组)和右美托咪定9.0μg/kg组(D3组).于PTSD模型制备前30 min,NS组腹腔注射生理盐水2 ml,D1组、D2组和D3组分别腹腔注射右美托咪定0.3、3.0和9.0μg/kg.采用应激增强恐惧学习法制备PTSD模型.于模型制备第1天A室电击处理后15 min时采用Western blot法检测海马ERK、磷酸化ERK(p-ERK)的表达水平;第1天A室电击处理后30 min时采用Western blot法检测海马ARC的表达水平.结果 与模型制备第2天比较,3组大鼠模型制备第3天木僵率升高(P＜0.05);与NS组比较,D2组和D3组模型制备第3天木僵率均下降,海马p-ERK和ARC表达降低(P＜0.05),D1组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);D2组和D3组上述指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).4组大鼠海马ERK表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 右美托咪定对大鼠PTSD有一定预防作用,且与剂量有关,该作用机制与抑制海马ERK活性,下调ARC表达有关.     

右美托咪定对免疫低下幼鼠细胞免疫的影响

目的评价右美托咪定对脾切除幼鼠外周血T淋巴细胞增殖及T细胞亚群的影响。方法健康雄性SD大鼠24只,6周龄,体重130~150g,随机分为四组:生理盐水组(S组)、右美托咪定组(D组)、生理盐水组+脾切除(SN组)和右美托咪定组+脾切除(SD组),每组6只。S、D组不做外科处理,SN、SD组制备脾切除模型。喂养1周后S组和SN组腹腔注射生理盐水10ml/kg,D组和SD组腹腔注射右美托咪定50μg/kg。给药后2h,取血样,采用MTT法检测外周血T淋巴细胞增殖能力,采用流式细胞术检测T细胞亚群即CD4~+、CD8~+细胞含量,计算CD4~+/CD8~+值。结果与S组比较,SN组T淋巴细胞增殖能力降低,CD4~+、CD8~+含量及CD4~+/CD8~+值降低,D组T淋巴细胞增殖能力明显降低(P0.05);与D组比较,SD组T淋巴细胞增殖能力明显降低,CD4~+、CD8~+含量及CD4~+/CD8~+值明显降低(P0.05);与SN组比较,SD组T淋巴细胞增殖能力明显降低(P0.05)。结论右美托咪定对正常幼鼠和免疫低下幼鼠细胞免疫均有一定抑制作用,且对免疫低下幼鼠的抑制作用更强。     

miR-181a-5p通过HOXB4抑制骨肉瘤细胞HOS增殖和迁移

目的：研究miR-181a-5p对HOS骨肉瘤细胞增殖、周期和迁移的影响及其机制。方法 ：采用实时定量PCR检测hFOB1.19成骨细胞和HOS、U2OS、MG63骨肉瘤细胞系中miR-181a-5p及HOXB4的表达情况。利用Lipofectamine 2000将miR-181a-5p mimics和miR-181a-5p inhibitor分别转染至人骨肉瘤HOS细胞中（分别为过表达组和抑制剂组）,并设置miR阴性对照组;CCK-8法检测各组细胞的增殖能力变化,流式细胞术检测各组细胞的细胞周期变化,划痕愈合实验以及Transwell迁移实验检测各组细胞的迁移能力变化。Targetscan网站预测miR-181a-5p的靶向基因,并通过双荧光素酶报告基因系统及Western blot验证靶向关系。结果：与成骨细胞hFOB1.19相比,miR-181a-5p在骨肉瘤细胞HOS、U2OS和MG63中低表达（P<0.05）,而HOXB4在骨肉瘤中高表达（P<0.05）。与阴性对照组相比,过表达miR-181a-5p抑制骨肉瘤HOS细胞的增殖和迁移能力,并且处于细胞周期S期的细胞...     

microRNA-139-5p及其靶基因Notch1在结直肠癌中的作用

目的：探讨microRNA-139-5p（miR-139-5p）在结直肠癌中的表达及其对结直肠癌细胞转移和侵袭的影响。 方法：用荧光定量PCR方法检测miR-139-5p在结直肠癌组织与不同结直肠癌细胞株中的表达变化;用Boyden小室分析和伤口愈合实验检测miR-139-5p转染及miR-139-5p抑制对结直肠癌细胞转移和侵袭能力的影响;生物信息学方法预测miR-139-5p的靶基因,并采用荧光素酶报告基因实验验证,Western blot方法检测miR-139-5p转染对靶基因表达的影响。 结果：与各自的正常对照组比较,结直肠癌组织与结直肠癌细胞系中miR-139-5p表达均明显降低（P<0.05）。结直肠癌DLD1细胞和HCT116细胞转染miR-139-5p后,转移与侵袭能力均明显降低（均P<0.05）,而miR-139-5p抑制剂处理后,两种细胞的的侵袭能力均明显增强（均P<0.05）。生物信息学预测显示,Notch1是miR-139-5p的靶基因,且得到荧光素报告实验结果证实。Western blot结果显示,转染miR-139-5p后,结直肠癌DLD1细胞和HCT116细胞中Notch1蛋白表达均明显下调（均P<0.05）。 结论：miR-139-5p可能通过调节Notch1的表达而抑制肿瘤细胞的转移和侵袭,而下调的miR-139-5p可能在结直肠癌的发生发展中起了重要作用。     

上调lncRNA SNHG12与miR-199a-5p/FZD6轴对肝细胞癌细胞增殖、侵袭和上皮-间质转化的影响

背景与目的:肝细胞癌(HCC)是临床上常见的恶性肿瘤之一,侵袭、转移和术后复发是导致HCC患者死亡的主要原因.目前认为长链非编码RNA (lncRNA)的失调可能与各类癌症的发生和转移有关.有研究显示lncRNA SNHG12在HCC组织表达明显上调,但其具体功能尚不清楚.故本研究探讨lncRNA SNHG12在HCC...     

反义miR-30a-5p对人脑胶质瘤细胞U251生长的抑制作用

目的 观察敲低microRNA(miR)-30a-5p表达对人脑胶质瘤U251细胞生物学特征的影响.方法 用脂质体介导转染寡聚核苷酸抑制物(miR-30a-5p inhibitor)于人脑胶质瘤U251细胞.采用实时聚合酶链反应(real-time PCR)检测转染后U251细胞的miR-30a-5p表达水平以鉴定抑制效果;噻唑蓝(MTT)比色法评价miR-30a-5p inhibitor抑制U251细胞生长的作用;Transwell实验检测细胞侵袭能力变化;流式细胞术检测细胞周期变化;Annexin V法检测细胞早期凋亡.结果 real-time PCR检测结果 显示转染miR-30a-5p inhibitor后,肿瘤细胞miR-30a-5p表达下降,细胞增殖活性降低,细胞侵袭能力明显受到抑制,细胞周期阻滞在G0/G1期及早期凋亡增加.结论 miR-30a-5p可能是癌微RNA(oncomiR)之一,有望成为人脑胶质瘤基因治疗的候选靶点.

Abstract：

Objective To investigate the effect of knock-down of miR-30a-5p on the biological characteristics of U251 glioblastoma cells. Methods miR-30a-5p inhibitor, mediated by Lipofectamine 2000, was transfected to U251 cells for knocking down miR-30a-5p. Real-time polymerase chain reaction (PCR) was conducted to detect the expression of miR-30a-5p in transfected cells. The cell proliferation rate was detected by methyl thiazol tetrazolium (MTT) assay, and cell cycle kinetics was examined by flow cytometry. The cell invasive ability was evaluated by Transwell assay and apoptosis detected by Annexin V assay. Results The expression of miR-30a-5p in the miR-30a-5p inhibitor group was significantly down-regulated. The cell proliferation activity and invasive ability were reduced. Cells were arrested in G0/G1 phase, and apoptosis was induced in cells transfected with miR-30a-5p inhibitor as compared to those of the cells transfected with scramble siRNA and control cells, so suppression of miR-30a-5p expression rendered the glioma cells harboring less aggressive phenotype. Conclusion miR-30a-5p is one of oncomiRs. It may be a candidate target miRNA for gene therapy of gliomas.     

miR-3126-5p靶向 LASP1抑制结直肠癌细胞的增殖和迁移的机制探讨

目的探讨微小RNA(miRNA)-3126-5p抑制靶基因LIM和SH3蛋白1(LIM and SH3 protein 1.LASP1)对结直肠癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测结直肠癌细胞株(HT-29、HCT116、LoVo、SW480)和正常肠黏膜上皮细胞(HIEC)中miR-3126-5p的表达水平。选择表达水平最低的细胞株作为实验对象,实验分为2组:阴性对照组(转染miR-NC)和miR-3126-5p组(转染miR-3126-5p),转染48 h后收集各组细胞。qRT-PCR法检测各组细胞miR-3126-5p的表达水平。采用MTS法和划痕愈合实验分别检测各组细胞的增殖水平和迁移能力。采用生物信息学软件microRNA.org和双荧光素酶报告基因实验分别预测和验证miR-3126-5p的靶基因。采用qRT-PCR和Western blot检测各组细胞靶基因的表达水平。计量资料以均数土标准差(Mean±SO)表示,两两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析结果与正常肠黏膜上皮细胞(HIEC)相比,结直肠癌细胞株miR-3126-5p的表达水平显著降低(P<0.05),表达水平最低的细胞株是HCT116细胞(P<0.01)。阴性对照组和miR-3126-5P组HCT116细胞中miR-3126-5p的表达分别为(1.05±0.16)和(7.91±1.26),差异具有统计学意义(t=5.40,P<0.01)。与阴性对照组相比,miR-3126-5p组HCT116细胞的增殖能力显著降低(P<0.05),迁移能力显著下降(t=4.52,F<0.01)。microRNA.org显示miR-3126-5p与LIM和SH3蛋白1(LASP1)基因mRNA存在互补结合位点。miR-3126-5p和L4SP/mRNA能够靶向结合(P<0.01)。与阴性对照组相比,miR-3126-5p组H CT116细胞中L4SP/基因表达显著降低(t=4.56,P<0.01)。结论结直肠癌细胞株中miR-3126-5p呈低表达,miR-3126-5p能够通过抑制靶基因LASP1降低结直肠癌HCT116细胞的增殖和迁移能力。     

miR-7856-5p通过靶向作用3对结直肠癌细胞SW480迁移和增殖的影响

目的探索微小RNA(miRNA,miR)-7856-5p对EPH受体A3(EPHA3)基因表达的调控作用及对结直肠癌细胞SW480迁移和增殖的影响。方法实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测结直肠癌组织和细胞系中miR-7856-5p的表达。脂质体转染法分别将miR-7856-5p模拟物和miR-NC转入结直肠癌细胞SW480,分别定义为miR-7856-5p组和miR-NC组。Real-time PCR检测转染效果。Transwell实验和CCK-8实验检测转染后细胞迁移和增殖能力。生物信息学软件预测和双荧光素酶报告基因系统验证miR-7856-5p的靶基因。Real-time PCR和Western blot检测转染后细胞中EPHA3的表达。符合正态分布的计量资料以均数±标准差(Mean±SD)表示,组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果miR-7856-5p在结直肠癌组织的表达明显低于癌旁组织(P<0.01)。miR-7856-5p在结直肠癌细胞系的表达明显低于正常肠黏膜上皮细胞(P<0.05),在SW480细胞中表达最低(P<0.01)。miR-7856-5p组miR-7856-5p的表达明显高于miR-NC组,差异有统计学意义[(9.49±1.09)比(1.06±0.18),P<0.01]。miR-NC组和miR-7856-5p组迁移细胞数量分别为(125.70±14.05)个和(42.01±8.98)个,miR-7856-5p组细胞迁移能力明显下降(P<0.01)。与miR-NC组比较,miR-7856-5p组细胞增殖能力明显降低(P<0.05)。生物信息学软件显示miR-7856-5p的靶基因是EPHA3。双荧光素酶报告基因系统证实miR-7856-5p可靶向结合EPHA3基因(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-7856-5p组SW480细胞中EPHA3的表达明显降低(P<0.05)。结论miR-7856-5p可通过靶向调控EPHA3的表达,抑制结直肠癌细胞SW480的迁移和增殖能力。     

miR-150-5p抑制肝癌细胞的迁移和侵袭及其机制

目的:探讨mi R-150-5p在肝细胞癌(HCC)细胞迁移与侵袭中的作用及其调控机制。方法:用荧光定量PCR测定mi R-150-5p在正常肝细胞系L02及HCC细胞系Hep G2中的表达;将Hep G2细胞分成两组,分别转染mi R-150-5p(mi R-150-5p组)与随机序列(对照组),转染后,分别用细胞划痕实验、Transwell小室基质渗透实验检测细胞的迁移和侵袭能力,用Western blot检测细胞基质金属蛋白酶2(MMP2)和基质金属蛋白酶9(MMP9)的蛋白表达。结果:mi R-150-5p的表达量在Hep G2细胞系中明显降低,为L02细胞系的0.26倍(P0.01)。转染后,mi R-150-5p组的mi R-150-5p水平明显升高,为对照组的9.53倍(P0.001);mi R-150-5p组的细胞划痕愈合率明显低于对照组(54.63%vs.87.51%,P0.01),细胞侵袭数明显少于对照组(138个vs.452个,P0.01);MMP2与MMP9蛋白表达量均明显低于对照组(0.78 vs.1.75;0.82 vs.1.85,均P0.05)。结论:mi R-150-5p在HCC细胞中表达降低,升高mi R-150-5p的表达可抑制HCC细胞的迁移和侵袭,机制可能与其下调MMP2和MMP9表达有关。     

Circ_0000069 contributes to the growth,metastasis and glutamine metabolism in renal cell carcinoma (RCC) via regulating miR-125a-5p-dependent SLC1A5 expression

BackgroundCircular RNAs (circRNAs) have emerged as critical mediators in various cancers, including renal cell carcinoma (RCC). In the present research, the functions of circ_0000069 in RCC were explored.MethodsQuantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR) assay, western blot assay and immunohistochemistry (IHC) assay were performed for the expression of circ_0000069, microRNA-125a-5p (miR-125a-5p) and solute carrier family 1 member 5 (SLC1A5). Cell Counting Kit-8 (CCK-8) assay and 5′-ethynyl-2′-deoxyuridine (EdU) assay were performed for cell proliferation. Flow cytometry assay was manipulated for cell apoptosis. Transwell assay and wound-healing assay were utilized for cell invasion and migration. Glutamine metabolism level was evaluated by examining glutamine consumption, α-ketoglutarate production and glutamate production. Dual-luciferase reporter assay was used to analyze the relationships of circ_0000069, miR-125a-5p and SLC1A5. Murine xenograft model assay was conducted to analyze the function of circ_0000069 in vivo.ResultsCirc_0000069 level was abnormally upregulated in RCC tissues and cells. Knockdown of circ_0000069 inhibited the proliferation, invasion, migration and glutamine metabolism and promoted the apoptosis in RCC cells in vitro and restrained tumor growth in vivo. Circ_0000069 served as the sponge for miR-125a-5p. MiR-125a-5p inhibition ameliorated the effects of circ_0000069 knockdown on RCC cell malignant behaviors. SLC1A5 was identified as the target gene of miR-125a-5p. Moreover, miR-125a-5p overexpression repressed the progression of RCC cells, while SLC1A5 elevation abrogated the effect.ConclusionCirc_0000069 knockdown inhibited the carcinogenesis of RCC by regulating miR-125a-5p/SLC1A5 axis.     

miR-195-5p通过靶向ROCK1抑制肾癌细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化

目的探讨miR-195-5p对肾癌细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化的影响。方法通过转染miR-195-5p mimics或inhibitors分别过表达或抑制肾癌细胞中miR-195-5p的表达,转染靶向Rho相关螺旋蛋白激酶1(ROCK1)的小干扰RNA敲低肾癌细胞中ROCK1的表达量,利用细胞划痕实验和Transwell小室实验分别检测肾癌细胞的迁移和侵袭能力。通过双荧光素酶报告实验验证miR-195-5p对ROCK1的靶向调控作用,利用免疫印迹试验检测ROCK1及上皮-间质转化相关蛋白的表达水平。结果过表达miR-195-5p可显著抑制肾癌细胞的迁移、侵袭和上皮-间质转化,而抑制miR-195-5p的表达可明显促进肾癌细胞的迁移、侵袭和上皮-间质转化(P<0.05)。miR-195-5p可通过靶向ROCK1调控其在肾癌细胞中表达。敲低ROCK1后可部分抵消miR-195-5p inhibitors对肾癌细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化的影响。结论miR-195-5p可通过靶向ROCK1抑制肾癌细胞的迁移、侵袭和上皮-间质转化。