TaqMan PCR反应在非小细胞肺癌EGFR基因突变检测中的应用

目的 研究一种快速,敏感,高通量的方法来检测非小细胞肺癌患者是否存在EGFR基因突变,以指导吉非替尼的分子靶向治疗。方法 收集94例非小细胞肺癌标本,先做EGFR基因测序,序列比对,然后用TaqMan PCR反应检测EGFR基因突变。比较两种检测结果的一致性。结果 94例患者中,除1例以外,应用TaqMan PCR反应的检测结果和直接基因测序的结果完全一致。这一例外的患者经直接测序,没有探测到EGFR基因突变,而利用TaqMan PCR反应却检测到了一种突变。该患者对吉非替尼化疗敏感。结论 应用TaqMan PCR反应检测EGFR基因突变是一种快速,敏感,高效的方法,对于判断非小细胞肺癌的患者是否要用吉非替尼有重要的指导价值。     

组织芯片和基因突变检测在肺癌及乳腺癌石蜡组织中的应用

目的:探讨利用石蜡包埋的人类肿瘤组织开展病理新技术临床应用的可能性和可行性。方法:存档肺癌、乳腺癌的石蜡组织,分别进行组织芯片的制备和基因突变的检测。结果:组织芯片用于常规切片染色和免疫组化等分子病理学研究;存档石蜡组织切片可用于基因突变检测。肺癌FFPE中的DNA经PCR扩增后,核酸电泳显示结果良好。结论:运用分子病理学技术和病理科存档蜡块,可以广泛应用于大宗病例的回顾性研究,为人类肿瘤研究提供良好的基础,也可以为临床肿瘤诊疗提供分子病理学依据。     

数字PCR技术在体液中检测恶性肿瘤的研究进展

恶性肿瘤的诊断与治疗已经日渐趋向个体化医疗阶段,要求临床工作者对恶性肿瘤多变的生长进化过程和复杂的内部分子结构以及耐药的产生要有综合全面的把握。基于体液检测的数字PCR技术,因为其取材方便,可有效规避组织活检带来的有创损伤以及较高的检测灵敏度和特异性,所以能够在体液样本中检测到恶性肿瘤的相关基因,有望成为恶性肿瘤分子检测的可靠工具之一。本文就数字PCR技术在体液中检测恶性肿瘤的研究进行综述。     

微流控芯片技术在生命科学领域的研究进展

经过十几年的发展,微流控芯片技术已经成为21世纪最为重要的前沿技术之一,现已广泛应用于生命科学、环境监测、食品分析等领域,与传统检测方法相比,其具有高灵敏度、高通量、样品和试剂耗量小等优点。本文将微流控芯片技术在生命科学领域的研究进展从基因检测、蛋白质组学研究和细胞分析三方面做一综述。     

基于纸基微流控的核酸分子快速检测技术研究进展

核酸分子具有丰富的遗传信息,对疾病诊断具有关键价值。传统核酸检测技术受限于耗时长、需大型仪器设备等局限,严重制约了其在大规模、突发性疾病检测中的应用。纸基微流控具有便携、自驱动等优势,在整合等温扩增技术后,为核酸分子快速、准确的检测提供可能。本文从纸基微流控的设计出发,综述纸基微流控在核酸分子检测中的研究进展,分析影响其检测灵敏度、稳定性等的干扰因素,为推动纸基微流控向临床转化提供重要参考。     

数字PCR技术的发展和应用

 数字PCR(digital PCR,dPCR)技术作为一种全新的核酸检测方法,通过把反应体系均分到大量反应单元中独立地进行PCR,并根据泊松分布和阳性比例来计算核酸数量。目前dPCR主要分为微滴式和芯片式两种。与传统PCR技术相比,dPCR具有高灵敏度、高精确度、高耐受性和绝对定量的优点。因此,dPCR技术在近年来得到了迅速的发展,广泛地应用于稀有突变检测、拷贝数变异分析和复杂样本基因表达检测等方面。     

微流控芯片对血管紧张素原基因多态性的研究

目的：以微流控芯片为平台,以激光诱导荧光为检测手段,旨在探索AGT基因[G（-6）A]位点基因多态性在沈阳地区人群中的分布及与原发性高血压的关联,并为大规模人群基因多态性分析提供一高效、快速和灵敏的检测技术。方法：采用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性（PCR-RELP）的方法,分别运用微流控芯片电泳与琼脂糖凝胶电泳对沈阳地区汉族人群103例正常人与123例高血压患者AGT基因（-6）位点的多态性进行分析。结果：（1）微流控芯片能在250s内对AGT基因PCR产物酶切片段进行芯片电泳分析;（2）沈阳地区正常对照组与高血压组中AGT基因（-6）位点A等位基因均有较高的发生频率（0.7038,0.7073）,突变位点多态性无统计学差异（χ^2=0.024,P〉0.05）。结论：（1）微流控芯片同琼脂糖凝胶电泳相比,分析速度比凝胶电泳快,耗样量少,检测灵敏度高;（2）沈阳地区汉族人群中AGT基因核心启动子区域-6位点等位基因A有较高的分布频率,但G/A的基因变异EH发病不相关联,此位点可能仅仅是一个基因多态性标志。     

浙江省非小细胞肺癌血液EGFR基因突变检测专家共识

肺癌是目前我国发病率及死亡率最高的肿瘤,早期诊断、精准治疗、监测复发和转移,对提高肺癌的整体治疗水平和治疗效果尤为重要。非小细胞肺癌(NSCLC)约占所有肺癌的80%~85%,以表皮生长因子受体(EGFR)为靶点的小分子酪氨酸激酶抑制剂(TKI)为晚期NSCLC的治疗带来了新的曙光;而EGFR基因突变状态是决定EGFR-TKI疗效最重要的预测因子,     

微流控芯片技术在中药研究领域的应用进展研究

<正>微流控芯片技术是一种利用微通道处理或操纵微小流体的技术,具有体积轻、反应速度快、能耗低、样品及试剂用量少的特点和优点^[1]。微流控芯片技术已成为备受关注的前沿分析技术之一,在医药、生化分析以及化学合成等领域具有广阔的应用前景^[2]。 微流控芯片技术在中药研究领域具有巨大的发展空间,在中药萃取与富集、分离检测、机制作用研究以及质量评价等方面,能显著提高研究效率,并为中药研究提供新的思路和方法,是一种极具潜力和前景的研究技术。     

基因芯片技术在肺癌研究中的应用

基因芯片技术是一项新的生物学技术,该技术以其迅速、高通量、大规模等特点在恶性肿瘤的分子生物学研究中具有广泛用途。本文综述了新近用基因芯片技术在肺癌基因表达及基因功能、基因诊断等研究方面的应用。     

肺癌p53基因突变的临床意义

目的：研究肺癌ｐ５３基因突变的临床意义，方法：运用聚合酶链反应（ＰＣＲ）－单链构象多态性分析方法（ＳＳＣＰ），检测原发性肺癌约ｐ５３基因的第５￣８外显子点突变。结果：８例肺良性疾病均无点突变发生，４０例肺癌中１９例（４７．５％）有点突变发生，点突变发生与临床分期和淋巴结果及状态相关（Ｐ〈０．０２）。结论：证实ｐ５３基因点突变在肺癌的发生和进展中起着相当重要的作用。     

液相芯片技术检测非小细胞肺癌多基因突变

目的 建立基于高通量液相芯片技术、可同时检测p53、p16、视网膜母细胞瘤(Rb)和表皮生长因子受体(EGFR)基因热点突变的方法,并探讨其在非小细胞肺癌(NSCLC)分子诊断中的意义.方法 针对p53、p16、Rb和EGFR基因热点突变位点,分别设计正常序列和突变序列探针,将探针固定于标记不同比例荧光物的微球上.分别提取65例NSCLC患者(Ⅰ期23例,Ⅱ期20例,Ⅲ期22例)癌组织标本和其中20例患者癌旁正常组织标本基因组DNA,PCR扩增p53、p16、Rb和EGFR基因.将PCR产物与含寡核苷酸探针的微球混合后用Luminex 100多功能流式点阵仪进行流式荧光检测分析.结果 单独检测p53、p16、Rb和EGFR基因突变时,NSCLC标本突变检出率分别为53.8%(35/65)、20.0%(13/65)、7.7%(5./65)和35.4%(23/65);癌旁正常组织标本为5.0%(1/20)、5.0%(1/20)、0和0.而四基因联合检测,敏感性为81.5%(53/65),特异性为90.0%(18/20),准确性为83.5%(71/85);Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期NSCLC标本突变检出率分别为78.3%(18/23)、80.0%(16/20)和86.4%(19/22).结论 成功建立了具有较高敏感性和特异性、可同时检测临床NSCLC标本多基因突变的液相芯片检测方法,该方法有助于提高NSCLC分子诊断的效率,并可能有助于NSCLC的早期诊断.     

早期非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因突变分布

目的探索早期非小细胞肺癌（NSCLC）表皮生长因子受体（EGFR）基因突变状况。方法以上海市胸科医院2003年6月1日--2011年6月1日期间早期NSCLC患者为研究对象,收集NSCLC根治术后原发灶标本,采用PCR扩增和直接测序方法检测EGFR突变;EGFR敏感突变和非敏感突变患者之间临床病理特征比较采用x。检验。采用Logistic回归法分析EGFR敏感突变与临床病理特征的相关性。结果共入组165例NSCLC患者,其中EGFR野生型93例（56．36％,93／165）,EGFR突变72例（43．64％,72／165）,敏感突变56例（19del33例和21L858R23例）,占总人群33．94％（56／165）,占所有突变77．78％（56／72）;单因素分析发现,腺癌、不吸烟、原发灶直径〈5cm和EGFR荧光原位杂交（FISH）扩增阳性患者突变概率较高;Logistic回归分析显示,病理类型及原发灶大小是早期NSCLC患者EGFR敏感突变的独立预测因子,腺癌、肿瘤直径〈5cm患者的EGFR突变概率分别是非腺癌、肿块直径≥5cm患者的4．435倍（95％CI1．209～16．273,P：0．025）、4．343倍（95％CI1．393～13．540,P=0．011）。结论在早期NSCLC患者中,腺癌、不吸烟、原发灶直径〈5em和EGFRFISH扩增阳性患者的敏感突变概率高;病理类型及肿瘤大小是早期NSCLC患者EGFR敏感突变的独立预测因子。     

Novel mutations of PRSS1 gene in patients with pancreatic cancer among Han population

Background  A high mortality rate of pancreatic cancer becomes a bottleneck for further treatment with long-term efficacy. It is urgent to find a new mean to predict the early onset of pancreatic cancer accurately. The authors hypothesized that genetic variants of cationic trypsinogen (PRSS1) gene could affect trypsin expression/function and result in abnormal activation of protease activated receptor-2 (PAR-2), then lead to pancreatic cancer. The aim of this study was to elaborate some novel mutations of PRSS1 gene in the patients with pancreatic cancer.

Methods  Totally 156 patients with pancreatic cancer and 220 unrelated individuals as controls were enrolled in this study. The mutations of PRSS1 gene were analyzed by direct sequencing. K-ras Mutation Detection Kit was used to find the general k-ras gene disorder in the pancreatic cancer tissue. Then the clinical data were collected and analyzed simultaneously.

Results  There were two patients who carried novel mutations which was IVS 3 +157 G>C of PRSS1 gene in peripheral blood specimens and pancreatic cancer tissue. What’s more, it was surprising to find a novel complicated mutation of exon 3 in PRSS1 gene (c.409 A>G and c.416 C>T) in another young patient. The complicated mutation made No.135 and No.137 amino acid transfer from Thr to Ala and Thr to Met respectively. No any mutation was found in the normal controls while no mutations of k-ras gene were detected in the three patients.

Conclusion  Mutations of PRSS1 gene may be an important factor of pancreatic cancer.

     

基因芯片在嗜铬细胞瘤患者基因突变检测中的作用

目的 应用基因芯片技术检测与嗜铬细胞瘤患者相关的基因突变.方法 采用上海市高血压研究所开发的基因突变检测芯片(包含与嗜铬细胞瘤相关的SDHB、SDHD、VHL和RET4个基因的87个突变位点),在35例嗜铬细胞瘤患者已测序证实的DNA样本中,验证基因芯片检测的符合率.结果 91.4%的基因芯片杂交与基因测序结果一致.基因测序证实的29例突变样本用基因芯片技术检出26例;在6例无突变的样本中,两种方法的检测结果一致.结论 基因芯片可快速、准确地识别嗜铬细胞瘤相关的基因突变,可应用于临床诊断为嗜铬细胞瘤患者的基因突变筛查.     

数字PCR在肿瘤诊疗中的应用进展

数字PCR是一种新兴的核酸检测技术,具有灵敏度高、可定量分析的特点。基于数字PCR的液态活检,可用于极微量核酸样本及稀有突变位点的检测,尤其适用于肿瘤治疗过程中需多次反复取样的情况,实现动态监测,为肿瘤诊断、复发提供及时的基因信息。     

NSCLC患者基因突变与其临床病理特征的相关性

目的 探讨非小细胞肺癌（NSCLC）患者表皮生长因子受体（EGFR）、Runx3和间质上皮转化因子(Met)突变与其病理分型、TNM分期及生存期的相关性。方法 收集2014年2月～2016年8月我院经手术途径留取新鲜肿瘤标本96例。对新鲜肿瘤样本采用免疫组化法检测EGFR、Runx3和Met表达,并通过二代测序技术(NGS)检测组织样本中EGFR、Runx3和Met基因突变情况。生存期随访时间从病例确诊至2019年12月31日。研究NSCLC患者EGFR、Runx3和Met表达、突变情况与其病理分型、TNM分期及生存期的相关性。结果 Runx3表达与分期、复发转移有关（P<0.05）;Met表达与分期、组织学分型有关（P<0.05）。EGFR突变与组织学分型、生存时间有关（P<0.05）;Runx3突变与患者组织学分型、分期、复发转移、生存时间有关（P<0.05）;EGFR、Runx3突变均与患者生存时间呈正相关（P<0.05）;Runx3的表达及突变与患者复发转移呈正相关（P<0.05）;Met突变情况与患者组织学分型、分期、复发转移、生存时间、病理分化均无相关性（P>0.05）。结论 EGFR突变可与Runx3、Met突变共存,Met突变率较低。EGFR与Runx3的突变有望成为NSCLC患者组织学分型、判断预后的潜在指标,为实施精准治疗提供理论支撑。     

肺癌CEAmRNA表达的荧光定量PCR检测研究

目的　运用荧光定量聚合酶链反应 (FQ -PCR)定量研究CEAmRNA在非小细胞肺癌表达情况。方法　采用荧光定量PCR方法检测 5 1例非小细胞肺癌原发灶和 2 3例良性病灶的CEAmRNA表达。结果　 5 1例非小细胞肺癌中CEAmRNA总表达率为 82 4 % ,其中鳞癌为 6 9 2 % ,腺癌为 86 8% ,而良性病灶CEAmRNA检出率为8 7% ,CEAmRNA诊断肺癌的敏感度是 79 2 % ,特异度是 92 0 %。肺癌组织CEAmRNA的平均水平为 9 4 0± 0 93。结论　荧光定量PCR可以敏感且特异性地检测出肺癌CEAmRNA表达 ,CEAmRNA是一个较好的肺癌肿瘤标记物     

Detection of ATM gene mutations in young lung cancer patients: a population-based control study

BACKGROUND: Ataxia-telangiectasia (A-T) is an autosomal recessive disease characterized by neurological and immunological symptoms, radiosensitivity, and cancer predisposition. Heterozygous carriers of risk mutations in the A-T gene are predisposed to epithelial cancers. We initiated a study to elucidate the frequency and clinical relevance of ATM gene mutations in lung cancer patients of the young (LUCY) and compared the results with population-based control subjects from southwest Germany (KORA=Cooperative Health Research in the Region of Augsburg). METHODS: In this study, the clinical relevance of ATM gene mutations (S707P; 1066-6T-->G; 2250G-->A, 7630A-->C, E1978X, R2443X, 3801delG, S49C, and D2625E&A2626P, L1420F, P1045R) in 183 young lung cancer patients (<50 years) is evaluated. The control population was comprised of 200 cancer-free subjects from the KORA study. RESULTS: A total of 25 heterozygous carriers of ATM in the LUCY, respectively; 32 heterozygotes in the KORA group were identified. The observed allele frequencies in the LUCY cases were within the range detected for the control subjects (KORA). Multiple analyses of lung cancer patients who carried at least one risk allele of the ATM did not show significantly elevated or reduced risks. CONCLUSIONS: In this study, 16% of the German control subjects had ATM variants. ATM variants were detected in about 14% of the lung cancer patients and did not differ significantly from the control subjects. In comparison to young lung cancer patients, ATM gene mutations had no detectable relevant modifying effect on lung cancer risk.