干细胞源外泌体及改良外泌体在治疗急性心肌梗死中的研究进展

干细胞疗法可缩小急性心肌梗死的梗死面积,而干细胞源外泌体可能是干细胞发挥心肌保护作用的主要载体,外泌体内包含脂质、蛋白质、信使RNA、微RNA等,是细胞间传递信息的重要载体,可通过抗凋亡、抗纤维化、抗炎、促进内皮细胞增殖和血管生成在急性心肌梗死中发挥生物学作用.近年来通过各种方法改良干细胞源外泌体,提高了体内移植后外泌...     

外泌体在肝癌诊断与治疗中的研究进展

肝细胞肝癌( hepatocellular carcinoma,HCC)是一种最常见的原发性肝脏恶性肿瘤,全世界每年约有84万例新增病例和78万例死亡病例;在全球范围内,肝癌是癌症相关病死率的第四大主要原因[1-2].尽管近些年HCC 在诊断、预防、化疗等方面取得了重大进展,但由于其隐匿性较强,多数患者确诊时已处于中晚...     

外泌体及其在干细胞中的研究进展

外泌体是在细胞间交流中起重要作用的小分泌囊泡,可由多种类型的细胞分泌,在细胞间起着质膜交换及转运蛋白质、mRNA、microRNA和细胞器等生命活性物质的作用.外泌体可通过改变基因调控网络或表观遗传重组来调控正常的生理过程.最近的研究发现,干细胞分泌的外泌体可以有效转运mRNA、microRNA和蛋白质,在调控组织再生方面发挥重要作用.该文对外泌体的生成及其在干细胞中的研究进展进行综述.     

骨髓间充质干细胞源外泌体对软骨细胞迁移、增殖和凋亡的影响

目的 探讨大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)分泌的外泌体(BMSC-Exo)对原代软骨细胞迁移、增殖和凋亡的影响。方法 超速离心结合超滤浓缩法提取BMSC-Exo,通过透射电镜和Western blot法鉴定外泌体。分别使用浓度为25、50和100μg/ml的BMSC-Exo处理软骨细胞,划痕实验检测软骨细胞的迁移,CCK-8法检测软骨细胞的增殖,流式细胞术检测软骨细胞的凋亡。为模拟骨关节炎(OA)病理状态,同时设置IL-1β(10ng/ml)对照组。结果 与细胞培养基对照组比较,BMSC-Exo作用使软骨细胞的划痕愈合率显著升高(12h,P＜0.05;24h,P＜0.01),细胞增殖速度明显加快(P＜0.01),细胞凋亡比例显著降低(P＜0.01),且均存在时间和剂量依赖性。IL-1β刺激可抑制软骨细胞的迁移和增殖,促进软骨细胞的凋亡,而BMSC-Exo可显著削减IL-1β的作用效果。结论 BMSC-Exo可促进软骨细胞的迁移运动和增殖能力,抑制软骨细胞发生凋亡,可对软骨细胞的生长发挥重要的调控作用。     

深度烧伤痂脂肪干细胞源性外泌体蛋白组学差异的初步研究

目的:分析不同脂肪组织来源干细胞源性外泌体(ADSC-Exos)蛋白质组学差异,为深度创面修复提供理论依据。方法:取烧伤痂组织与正常皮下脂肪组织,分离脂肪干细胞(ADSC),通过光镜观察、Western blot(WB)、成骨分化、成脂分化鉴定ADSC。差速离心方法收集脂肪干细胞外泌体(ADSC-Exos),通过电镜观察、WB法、Nanosight分析仪鉴定ADSC-Exos;通过非标记定量蛋白质谱(LFQ)技术分析两组患者ADSC-Exos蛋白质表达水平差异。结果:成功分离ADSC,光镜下呈纤维状,WB显示细胞稳定表达CD29及CD105,成骨诱导分化细胞内见红色密集钙结节、成脂诱导分化细胞内存在折光性好的透亮脂滴。成功分离ADSC-Exos,电镜下呈双膜性结构,WB显示外泌体可稳定表达表面标志物CD63及CD81,Nanosight显示外泌体均匀对称分布,直径30～150 nm。两组表达水平差异蛋白质184种,差异倍数显著上调前10种蛋白：丝裂原活化蛋白激酶3、丝裂原活化蛋白激酶1、转化生长因子β-1前蛋白、细胞凋亡调节因子BAX、热休克蛋白HSP 90α、微管蛋白α-1B链、腺病...     

干细胞外泌体心肌保护作用的研究进展

由于各种致病因素(心肌缺血、缺氧、感染等)的存在,导致心肌收缩、舒张功能发生障碍,影响心脏功能。心肌细胞自身恢复其功能相对比较困难。干细胞移植用于心肌保护存在争议,而其外泌体可发挥有效作用,主要表现在促进新生血管形成、发挥抗凋亡和抗纤维化作用。本文就干细胞外泌体在心肌保护方面的研究展开综述。     

胶质瘤细胞外泌体通过miR-125b对细胞增殖凋亡的影响

目的探索胶质瘤细胞来源的外泌体对细胞增殖凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法高速离心法提取胶质瘤细胞U251外泌体,通过电镜及纳米粒径分析外泌体形态,Western blot检测外泌体特征性蛋白表达。在U251细胞培养基中分别加入浓度为100μg/ml的外泌体悬液30μl(外泌体组)或等量不含外泌体培养基(对照组),通过双荧光染色法验证外泌体能否进入U251细胞;CCK-8及流式细胞法检测细胞增殖凋亡的变化。通过RT-PCR法筛选U251外泌体与人星型胶质细胞外泌体中差异性表达的miRNAs。最后,将miR-NC、miR-125b mimics或miR-125b inhibitor转染U251细胞,重新提取外泌体后加入细胞培养基,采用CCK-8及流式细胞法检测U251细胞增殖凋亡变化。结果 U251细胞分离的外泌体为圆形或卵圆形囊泡状小体,直径范围约100 nm,富含CD63和CD9蛋白。在U251细胞培养基中加入外泌体悬液后,外泌体能够被U251细胞吞噬。CCK-8及流式细胞法显示:外泌体组细胞增殖活性高于对照组,凋亡比例低于对照组。RT-PCR显示:U251细胞外泌体miRNA-12...     

星形胶质细胞分泌的外泌体对神经干细胞活力的影响研究

  目的  探讨小鼠星形胶质细胞外泌体对神经干细胞活力的影响。  方法  分离培养小鼠星形胶质细胞,收集细胞上清后超离出外泌体并予以鉴定。取原代培养的第2～6代神经干细胞,分别以0、20、40、60 μg/mL外泌体的条件培养基处理,CCK-8法筛选出培养神经干细胞的最佳外泌体质量浓度（40 μg/mL）。实验分为实验组（40 μg/mL外泌体处理的神经干细胞）和对照组（加入同等体积PBS处理的神经干细胞）,干预72 h后,EdU试剂盒标记阳性干细胞数。利用Transwell模型,通过4',6-二脒基-2-苯基吲哚（4',6-diamidino-2-phenylindole, DAPI）染色,荧光显微镜下分别统计出Transwell下室的实验组和对照组的细胞核个数。  结果  ①星形胶质细胞外泌体的鉴定:通过电镜、蛋白免疫印迹实验、外泌体浓度粒径等技术鉴定细胞上清超离出的外泌体;②CCK8实验检测:随着外泌体质量浓度的增加,促进原代神经干细胞的增殖作用逐渐增强,且与对照组相比,40 μg/mL、60 μg/mL外泌体组对神经干细胞均有显著增殖作用,但此两组间比较无明显差异,所以选择40 μg/mL为最佳干预质量浓度;③EdU检测:实验组EdU标记阳性细胞数高于对照组（P<0.05）;④Transwell模型中,实验组处理的神经干细胞从Transwell膜上层迁移到下层的细胞个数高于对照组（P<0.05）。  结论  小鼠星形胶质细胞外泌体可提高神经干细胞的生存活力。     

肝癌细胞来源的外泌体对正常肝细胞的影响研究

目的:探讨肝癌HepG2细胞系外泌体与正常肝细胞LO2共培养对其增殖、侵袭、迁移能力的影响.方法:采用外泌体提取试剂盒收集肝癌HepG2细胞外泌体;采用透射电镜和纳米颗粒跟踪分析仪鉴定外泌体形态和粒径分布特征;采用CCK-8、流式细胞术、transwell侵袭和迁移等实验方法,检测外泌体对LO2细胞增殖、凋亡、侵袭、迁...     

肿瘤样干细胞来源的外泌体促进人脐带间充质干细胞的增殖和侵袭

目的探讨Piwil2诱导肿瘤干细胞（Piwil2-iCSC）来源的外泌体对人脐带间充质干细胞（hucMSCs）肿瘤样生物学行为的影 响。方法超速离心法提取Piwil2-iCSCs外泌体,透射电镜、粒径分析、Western blot及外泌体摄入实验检测外泌体形态、直径、标 志蛋白表达及作用途径。将hucMSCs 分为对照组、PBS干预组和外泌体干预组（Exo）,CCK-8、细胞划痕实验、Transwell 和 Western blot检测各组hucMSCs的增殖、迁移、侵袭能力以及基质金属蛋白酶（MMPs）MMP2和MMP9蛋白的表达水平。细胞 染色体核型分析检测经Piwil2-iCSCs外泌体长期干预的hucMSCs的染色体结构。结果透射电镜可见Piwil2-iCSCs外泌体大 小均匀,直径在50~100 nm,呈形态较规则的圆形或椭圆形囊泡状小体,粒径分析显示外泌体直径分布集中在在100~200 nm; Western blot显示外泌体标志性蛋白CD9、CD63和piwil2蛋白阳性表达;外泌体摄入实验表明外泌体进入细胞发挥作用。与对 照组和PBS干预组相比,Exo组细胞增殖数量明显增多（P<0.05）,划痕愈合速度加快（24 h,P<0.05;48 h,P<0.01）,侵袭细胞数目 显著增加（P<0.01）。经Piwil2-iCSCs外泌体干预后的hucMSCs细胞MMP2（P<0.05 vs PBS干预组,P<0.01 vs 对照组）、MMP9 蛋白水平表达增高（P<0.05）,但染色体核型仍是46XY,无异常。结论肿瘤样干细胞Piwil2-iCSC外泌体能促进hucMSCs的增 殖、迁移及侵袭,但是未出现肿瘤样异质性改变。     

肝星状细胞对肝癌SMMC-7721细胞增殖、侵袭的影响及作用机制研究

目的观察人肝星状细胞LX-2对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、侵袭能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法人肝星状细胞LX-2条件培养基（HSC-CM）与肝癌SMMC-7721细胞共培养,设为HSC-CM组;人正常肝细胞LO2条件培养基(LO2-CM)与肝癌SMMC-7721细胞共培养,设为LO2-CM组（阴性对照）;1%FBS培养基与肝癌SMMC-7721细胞共培养,设为1%FBS组（空白对照）。采用CCK-8法检测3组肝癌SMMC-7721细胞增殖能力;Transwell侵袭实验检测培养48h后细胞侵袭能力;Westernblot检测增殖细胞核抗原（PCNA）、血管内皮生长因子（VEGF）、核因子资B（NF-资B）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）蛋白表达水平。结果HSC-CM组、LO2-CM组、1%FBS组肝癌SMMC-7721细胞增殖能力、侵袭能力、PCNA、VEGF、NF-资B、基质金属蛋白酶２（MMP-2）蛋白表达水平比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）;与LO2-CM组、1%FBS组比较,HSC-CM组肝癌SMMC-7721细胞增殖能力、侵袭能力均增强（均P＜0.05）;PCNA、VEGF、NF-资B、MMP-2蛋白表达水平均上调（均P＜0.05）。结论肝星状细胞可促进肝癌SMMC-7721细胞增殖、侵袭等生物学行为,其作用机制可能与上调PCNA、VEGF、NF-资B、MMP-2表达水平有关。     

汉防己甲素对肝癌耐药细胞抑制作用机制研究

目的:应用汉防己甲素(tetrandrine,TET)作用于肝癌耐药细胞系,探讨TET及其联合抗癌药物抑制肝癌耐药细胞系增殖的可能机制。方法:肝癌耐药细胞株BEL-7402/DOX经TET或联合多柔比星(doxorubicin,DOX)处理后,MTT法检测肝癌耐药细胞抑制率,荧光分光光度计测定的D值计算细胞内DOX的浓度,Fura-2/AM方法测细胞内Ca2+的浓度。结果:TET对BEL-7402/DOX细胞的增殖有一定的抑制作用,并可增加DOX对BEL-7402/DOX细胞的抑制作用,且呈剂量相关性。不同浓度的TET与DOX合用均可显著增加BEL-7402/DOX细胞内的DOX浓度(P<0.05～0.01)。浓度为5.0 mg/L、10.0 mg/L的TET均可显著降低BEL-7402/DOX细胞内的Ca2+浓度(P<0.05,P<0.01)。结论:TET及其联合抗癌药抑制肝癌耐药细胞系增殖的机制,可能与其降低细胞内Ca2+浓度,阻抑信息传递,提高细胞内DOX浓度有关。     

EGFR抑制剂吉非替尼对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)抑制剂吉非替尼对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖和凋亡的影响,为原发性肝癌的分子靶向治疗提供实验依据.方法应用免疫组化法检测SMMC-7721细胞中EGFR的表达,不同浓度吉非替尼处理SMMC-7721细胞48 h后,MTT法检测细胞对该药物敏感性,流式细胞仪检测细胞凋亡变化.结果SMMC-7721细胞中EGFR呈强阳性表达,吉非替尼明显下调EGFR表达,抑制SMMC-7721细胞生长,呈剂量时间依赖性,8 mmol/L吉非替尼组细胞凋亡率为(58.58±2.95)%,显著高于对照组(0.11±0.04)%,(P＜0.01).结论吉非替尼能够通过诱导细胞凋亡抑制SMMC-7721细胞生长,因而有望为肝癌的分子靶向治疗提供新的有效途径.     

敲低BCLAF1对肝癌SMMC-7221细胞增殖、侵袭及耐药性的影响

目的:探讨敲低BCLAF1对肝癌SMMC-7221细胞增殖、侵袭及耐药性的影响。方法:构建shRNA-BCLAF1载体,按照空白对照组、shRNA-NC(阴性对照)组、shRNA-BCLAF1组转染SMMC-7221细胞;分别采用qPCR及Western blot鉴定干扰效果;MTT法检测各组细胞增殖活性;Transw...     

肿瘤源性外切体负载的间充质干细胞抗肿瘤活性的实验研究

目的:分离并纯化BALB/c小鼠肝癌恶性腹水来源的外切体及同基因小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs);将外切体负载经γ干扰素(IFN-γ)刺激活化的间允质干细胞,探讨其抗肝癌细胞活性改变.方法:利用超滤及密度梯度离心法分离并纯化BALB/c小鼠肝癌恶性腹水来源的外切体;利用贴壁培养联合免疫磁珠阴性分选法体外培养同基因小鼠骨髓间充质干细胞;外切体负载活化的间充质干细胞与小鼠肝癌H22细胞共孵育,72 h后观察H22细胞增殖状态.结果:外切体负载的IFN-γ刺激活化的间允质干细胞与小鼠肝癌H22细胞共孵育72 h后,活化组H22细胞增殖速度明显低于对照组.结论:负载肿瘤源性外切体的间充质干细胞抗肝癌细胞活性明显增强,间充质干细胞联合肿瘤源性外切体有可能成为一种更为有效的外切体疫苗诱导抗肿瘤效应.     

miR-185对肝癌细胞生长增殖及侵袭迁移的影响

目的 探讨miR-185对人肝癌细胞HepG2和SMMC-7721生长增殖、侵袭迁移能力的影响.方法 构建miR-185过表达载体、合成miR-185反义寡聚核苷酸(antisense oligonucleotide,ASO),经脂质体转染肝癌细胞HepG2和SMMC-7721.利用CCK-8和Transwell小室实验检测细胞的增殖、侵袭和迁移能力;生物信息学数据库预测结合基因芯片结果确定miR-185的候选靶基因NRl D1;利用实时荧光定量PCR技术和Western blot检测miR-185对细胞中NRlD1基因表达水平的影响;荧光报告载体实验验证miR-185对靶基因的调控作用.结果 miR-185在人肝癌细胞中的mRNA表达水平显著低于正常肝细胞(P＜0.01);过表达miR-185使人肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力降低,下调肝癌细胞中NRl D1基因的mRNA和蛋白的表达水平(P＜0.01);荧光报告载体实验证明miR-185可以通过作用于NRlDl mRNA的3’端非翻译区(untranslated region,UTR)下调其表达水平(P＜0.05).结论 miR-185能抑制肝癌细胞的增殖、侵袭迁移能力,NRlD1是miR-185的直接靶基因.     

间充质干细胞来源外泌体在组织修复中的研究进展

<正>组织修复是临床治疗中极为重要的环节,伴随着组织细胞的再生、增殖、分化和迁移,炎症水平调节,活性氧（ROS）含量的回归稳态,伤面消肿愈合等过程。目前有关组织修复方面的临床治疗方法很多,但效果不尽人意。通过对外泌体的研究,我们发现其在促进组织修复方面有着重要的作用。本文拟对间充质干细胞（MSC）来源外泌体促进组织修复方面的研究进展进行综述,现报道如下。1 MSC的旁分泌机制MSC是一种来源于中胚层,具有自我更新和多方向分化能力的多能干细胞,     

桩蛋白表达对裸鼠肝癌细胞增殖的影响

目的探讨裸鼠体内桩蛋白(PXN)表达对肝癌细胞增殖的影响。方法将24只裸鼠随机分为对照组、短发夹RNA(shRNA) PXN阴性对照组和shRNA PXN组,每组8只。3组裸鼠背部分别植入正常SMMC-7721细胞、转染shRNA PXN空质粒的SMMC-7721细胞和转染shRNA PXN的SMMC-7721细胞,观察3组裸鼠体内肿瘤的生长状况;于7周末采血并处死裸鼠,切取肿瘤组织称质量,并用甲醛固定、石蜡包埋。采用免疫组织化学法检测3组裸鼠肿瘤组织中PXN、黏着斑激酶(FAK)蛋白表达,反转录聚合酶链反应检测3组裸鼠肿瘤组织中PXN、FAK mRNA表达,酶联免疫吸附试验法检测3组裸鼠血清PXN、FAK水平。结果 shRNA PXN组裸鼠肿瘤质量低于对照组和shRNAPXN阴性对照组(P <0. 05),对照组与shRNA PXN阴性对照组裸鼠肿瘤质量比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。shRNA PXN组肿瘤组织中PXN和FAK蛋白表达显著低于对照组和shRNA PXN阴性对照组(P <0. 05),对照组与shRNA PXN阴性对照组肿瘤组织中PXN和FAK蛋白表达比较差异均无统计学意义(P> 0. 05)。shRNA PXN组裸鼠肿瘤组织中PXN和FAK mRNA表达显著低于对照组和shRNA PXN阴性对照组(P <0. 05),对照组与shRNA PXN阴性对照组裸鼠肿瘤组织中PXN和FAK mRNA表达比较差异均无统计学意义(P> 0. 05)。shRNA PXN组裸鼠血清PXN和FAK水平显著低于对照组和shRNA PXN阴性对照组(P <0. 05),对照组与shRNA PXN阴性对照组裸鼠血清PXN和FAK水平比较差异均无统计学意义(P> 0. 05)。结论下调PXN表达可以抑制裸鼠肝癌细胞的增长,FAK表达量随PXN的下调而减少,联合检测PXN和FAK的表达有望成为肝癌防控的新靶点。