miR-19 b对HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的研究miR-19b对HepG2细胞增殖和凋亡的影响。方法根据前期miRNA芯片结果提示丹皮酚处理后人肝癌HepG2细胞的miR-19b表达增加,采用qRT-PCR验证丹皮酚处理 HepG2细胞的 miR-19b表达改变;将 hsa-miR-19b mimics瞬时转染HepG2细胞,采用qRT-PCR验证转染效率,MTT比色法检测转染后细胞体外增殖抑制率,TUNEL染色和流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 qRT-PCR验证62.5 mg/L丹皮酚处理人肝癌HepG2细胞24 h后miR-19b差异表达明显。过表达miR-19b可以抑制HepG2细胞增殖和促进其凋亡。结论丹皮酚作用可以引起肝癌细胞miR-19b表达出现差异性表现。过表达 miR-19b可能是丹皮酚抑制HepG2细胞增殖和促进凋亡作用的部分机制。     

HBx基因下调miR-192对人肝癌细胞株HepG2周期的影响

目的 探讨HBx基因通过调节miR-192的表达影响人肝癌细胞株HepG2周期进展的机制.方法 流式细胞仪分析以下3组细胞的周期变化:HepG2/HBx细胞(HepG2细胞稳定转染HBx基因)、HepG2/pcDNA3.1细胞(HepG2细胞稳定转染空载体pcDNA3.1)以及HepG2细胞.3组细胞中miR-192的...     

HCV核心蛋白对HepG2细胞增殖的影响

目的 利用腺病毒表达系统,研究丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)核心蛋白对HepG2细胞增殖、Wnt1以及microRNA152(miR-152)表达水平的影响.方法 通过HEK293细胞扩增腺病毒获得高滴度的Ad-EGFP和Ad-HCV core,分别感染HepG2细胞后,通过RT-PCR和Western blot证实HCV核心蛋白在HepG2细胞中高效表达.MTT法、细胞周期测定和克隆形成实验检测HCV核心蛋白对HepG2细胞增殖的影响.SYBR探针荧光定量PCR和Western blot检测的HepG2-HCV core细胞中Wnt1和miR-152表达的变化.用miR-152 inhibitor转染HepG2细胞后,SYBR探针荧光定量PCR、Western blot检测HepG2细胞中Wnt1 mRNA和蛋白表达水平变化.结果 Ad-GFP和Ad-HCV core腺病毒经HEK293扩增后滴度分别为1.5×109 pfu/mL和1.6×1010pfu/mL.Ad-HCV core腺病毒感染HepG2细胞后,HCV核心蛋白高效表达.感染48 h后,与HepG2-Mock细胞相比,Ad-HCV core可显著促进HepG2细胞增殖(P＜0.05),加快G1/S细胞周期进展(P＜0.05),并促进细胞克隆形成(P＜0.05).Ad-HCV core腺病毒感染可在显著上调HepG2细胞中Wnt1 mRNA和蛋白表达量(P＜0.05)的同时下调miR-152表达水平.同时,miR-152 inhibitor可显著上调Wnt1 mRNA和蛋白水平.进一步生物信息学分析显示,Wnt1基因mRNA 3'-UTR含有miR-152结合位点.结论 HCV核心蛋白可能通过抑制miR-152而减弱其对Wnt1 mRNA的降解及翻译阻碍作用,进而达到上调Wnt1致Wnt信号通路激活,促进肝癌细胞增殖的效应.     

人肝癌HepG2细胞miR-26a对其活性和Wnt信号通路的作用机制

【摘要】 目的 探讨人肝癌HepG2细胞miR-26a对其活性和Wnt信号通路的作用机制。 方法 将人肝癌细胞株HepG2细胞分为肝癌组（无干预的HepG2细胞）、miR-26a组（HepG2细胞转染miR-26aminmics）（模拟物）、miR-26a-NC组（HepG2细胞转染miR-26a-NC）（空转）,多种方法检测HepG2生物活性,免疫印迹和PCR分别检测β-catenin、Wnt3蛋白水平和mRNA表达。结果 miR-26a-NC组与肝癌组HepG2细胞侵袭数量、HepG2细胞迁移率、HepG2细胞凋亡率,两组比较差异无统计学意义(P＞0.05）,miR-26a组HepG2细胞侵袭数量、HepG2细胞迁移率、HepG2细胞凋亡率,与miR-26a NC组相比差异有统计学意义（P＜0.05）;miR-26a-NC组与肝癌组HepG2细胞中β-catenin、Wnt3蛋白水平比较差异无统计学意义(P＞0.05）,miR-26a组HepG2细胞β-catenin、Wnt3蛋白水平与miR-26a-NC组比较差异有统计学意义（P＜0.05）;miR-26a-NC组与肝癌组HepG2细胞中β-catenin、Wnt3mRNA水平比较差异无统计学意义(P＞0.05）,miR-26a组HepG2细胞β-catenin、Wnt3mRNA水平与miR-26a-NC组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论miR-26a抑制HepG2细胞活性,促使其凋亡,其作用机制可能与抑制β-catenin、Wnt3表达相关。     

miR-199a对肝癌HepG2细胞增殖的影响及机制

目的：探讨miR-199a对肝癌HepG2细胞增殖的影响及机制。方法：使用DNA重组技术,将含有miR-199a的基因片段克隆人带有EGFP的慢病毒载体pLV-GFP-puro,DNA测序鉴定阳性克降,并用脂质体介导法将慢病毒包装系统和带miR-199a的质粒共转染293T细胞包装病毒,纯化后感染肝癌HepG2细胞。用荧光显微镜观察感染效率;MTT法检测细胞增殖活性;Westernblot检测HepG2细胞miR-199a和NF-kB相关抗凋亡基因（TRAF2、cIAP2、Bfl-1和cFLIP）的表达情况。结果：成功构建了miR-199a重组慢病毒载体,并对其包装、纯化及浓缩后测定病毒滴度为1.08×108TU/mL;感染后HepG2细胞高表达miR-199a,抑制HepG2细胞增殖,并证实过表达miR-199a有效稳定IkBa表达,抑制NF-kB活性,进一步抑制NF-kB相关抗凋亡基因TRAF2、cIAP2\Bfl-1和cFLIP表达。结论：miR-199a重组慢病毒过表达载体有效感染HepG2细胞,并抑制HepG2细胞增殖,其机制可能与miR-199a抑制NF-kB活性及其相关抗凋亡基因表达有关。     

索拉非尼诱导HepG2细胞凋亡过程中Mcl-1与bFGF-2的表达及意义

目的观察索拉非尼体外诱导人肝癌细胞HepG2的凋亡效应,以及对髓样细胞白血病-1蛋白质(Mcl-1)及人碱性成纤维细胞生长因子-2(bFGF-2)的表达的影响。方法采用不同浓度梯度的索拉非尼作用于人肝癌细胞株HepG2,CCK-8试剂盒测定细胞杀伤效应,流式细胞术检测肝癌细胞凋亡率,采用Western blot测定Mcl-1表达,ELISA法检测细胞培养液中bFGF-2的水平。结果与对照组相比,索拉非尼能诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡,呈一定的浓度时间效应(P<0.05),Mcl-1及bFGF-2表达均减少。结论索拉非尼可抑制人肝癌细胞株HepG2增殖,诱导其凋亡,Mcl-1及bFGF-2可能在肝癌细胞的增殖分化中起着重要的作用。     

索拉非尼联合顺铂对肝癌HepG2细胞的抑制作用

目的 探讨索拉非尼联合顺铂(DDP)对肝癌细胞HepG2的抑制作用及其可能分子机制.方法 单独及联合给药后以MTT法测定HepG2细胞的增殖,用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,用Western blotting观察ERK及pERK蛋白的表达.结果 索拉非尼及DDP单药对HepG2均有抑制作用,两药联合具有协同或相加作用(P＜0.05).索拉非尼及DDP分别主要使细胞阻滞于G1及G2期.两药联用后同时阻滞于G1及G2期.联合组凋亡率明显比单药组高(P＜0.05).单用及联合用药对HepG2细胞ERK表达无明显影响,索拉非尼及联合用药减少pERK的表达.结论 索拉非尼和DDP对肝癌HepG2细胞有增殖抑制及促凋亡作用,两药联合表现为协同或相加作用,其机制可能与细胞周期的双重阻滞及细胞增殖通路Raf/MEK/ERK的抑制有关.     

miR-98对肝癌 HepG2细胞增殖、凋亡以及侵袭、迁移能力的影响

目的：研究 miR-98对肝癌 HepG2细胞增殖、凋亡和侵袭、迁移能力的影响及其可能机制。方法将 miR-98mimics、mimics-NC、miR-98inhibitor、inhibitor-NC 瞬时转入肝癌 HepG2细胞内,应用噻唑盐( MTT)法、流式细胞仪、Tr-answell 小室实验检测 miR-98对肝癌 HepG2细胞增殖、凋亡以及侵袭、迁移能力的影响,进一步用 Western blot 法检测各组 Bcl-2蛋白的表达水平。结果 MTT 实验表明 miR-98过表达后,肝癌细胞的增殖能力明显低于对照组;Annexin V-FITC / PI 凋亡实验证实上调 miR-98表达后,细胞的凋亡率较对照组升高;Transwell 小室实验表明上调 miR-98可使肝癌细胞的侵袭、迁移能力减弱。而当 miR-98被抑制后,肝癌HepG2细胞的增殖及侵袭、迁移能力则明显增强,凋亡率则下降。 Western blot 实验检测发现 miR-98过表达后,Bcl-2的表达降低。结论 miR-98可能在肝癌的发生、发展中发挥着抑癌基因的作用;miR-98可能通过下调 Bcl-2的表达,促进肝癌 HepG2细胞凋亡。     

miR-122a对肝癌细胞HepG2化疗药物敏感性的影响及其机制研究

目的:探究过表达miR-122 a是否可提高肝癌细胞HepG2对化疗药物的敏感性,并阐明其提高化疗药物敏感性的部分机制.方法:构建过表达miR-122 a的HepG2细胞系(miR-122a肿瘤细胞组),并与HepG2细胞(肿瘤细胞组)置于含不同浓度顺铂的培养液中,CKK-8法观察miR-122a上调对HepG2细胞存活率的影响,Annexin V-PE/7-AAD双染法观察miR-122a上调对HepG2细胞凋亡率的影响;Western blot检测miR-122a肿瘤细胞组和肿瘤细胞组中bcl-2和p53蛋白的表达水平.结果:低铂浓度顺铂条件下,miR-122 a肿瘤细胞组细胞的存活率低于肿瘤细胞组细胞的存活率,miR-122 a肿瘤细胞组24 h细胞的凋亡率高于肿瘤细胞组(P<0.05);Western blot法检测bcl-2和p53蛋白结果显示,在低浓度顺铂溶液中,miR-122a肿瘤细胞组bcl-2表达量低于肿瘤细胞组(P<0.05),miR-122a肿瘤细胞组p53表达量高于肿瘤细胞组(P<0.05).结论:过表达miR-122a能上调p53蛋白表达、下调bcl-2蛋白表达,增加HepG2细胞对顺铂敏感性,为肝癌患者提供基因治疗和降低肿瘤细胞耐药提供了理论和实验基础.     

姜油酮联合索拉非尼对人肝癌HepG2细胞迁移和侵袭的抑制作用

目的：探讨姜油酮联合索拉非尼对人肝癌HepG2细胞迁移和侵袭的影响,并阐明其相关作用机制。方法：采用不同浓度姜油酮和索拉非尼单独或联合对人肝癌HepG2细胞进行干预,MTT法检测细胞增殖率,根据其结果选择姜油酮和索拉非尼的适合浓度。实验分为对照组（DMSO）、姜油酮组（30μmol·L^-1）、索拉非尼组（3 μmol·L^-1）和联合组（姜油酮30 μmol·L^-1+索拉非尼3μmol·L^-1）,采用细胞划痕实验检测各组HepG2细胞划痕愈合率,Transwell实验检测各组HepG2细胞穿膜细胞数,Western blotting法检测各组HepG2细胞中基质金属蛋白酶2（MMP-2）和基质金属蛋白酶9（MMP-9）蛋白表达水平。结果：MTT实验,与对照组比较,姜油酮组和联合组细胞增殖率明显降低（P<0.01）。细胞划痕实验,与对照组比较,姜油酮组和索拉非尼组HepG2细胞划痕愈合率降低（P<0.05）;与姜油酮组和索拉非尼组比较,联合组HepG2细胞划痕愈合率明显降低（P<0.01）。Transwell实验,与对照组比较,姜油酮组和索拉非尼组HepG2细胞穿膜细胞数减少（P<0.05）;与姜油酮组和索拉非尼组比较,联合组穿膜细胞数明显降低（P<0.01）。Western blotting法检测,与对照组比较,姜油酮组和索拉非尼组HepG2细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达水平降低（P<0.05）;与姜油酮组和索拉非尼组比较,联合组HepG2细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。结论：姜油酮可通过降低HepG2细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达来抑制人肝癌细胞迁移和侵袭能力,且与索拉非尼联用效果更佳。     

抗人胸腺细胞单克隆抗体2G_2B_2和2G_2C_2的制备及特性鉴定

用杂交瘤技术制备２株单克隆抗体（单抗）２Ｇ２Ｂ２、２Ｇ２Ｃ２。经研究发现,它们主要与胸腺细胞、脐血及ＰＨＡ激活的外周血单个核细胞等反应;免疫组化显示其主要作用于皮质胸腺细胞;与造血系统中分化早期的瘤细胞、骨髓瘤细胞等反应阳性率较高。生物学特性鉴定结果提示,单抗均属免疫球蛋白ＩｇＧ１亚类,腹水效价达１：１２８０００,所识别抗原分子量为４５／４６ＫＤａ,无抗原调变作用。故２Ｇ２Ｂ２、２Ｇ２Ｃ２是类似ＯＫＴ１０的抗ＣＤ３８单抗,但竞争抑制结果表明三者分别作用于不同的抗原决定簇,即２Ｇ２Ｂ２、２Ｇ２Ｃ２是两个抗ＣＤ３８新单抗。     

CHADS_2/CHA_2 DS_2-VAS_C评分的应用

临床上CHADS2评分和CHA2DS2-VASC评分主要用来对非瓣膜性心房颤动(房颤)血栓栓塞的风险进行评估。由于CHA2DS2-VASC评分系统更为全面,并能筛选出不需要抗凝治疗的"真正的低危患者",因此现多应用此评分系统。然而,两种评分系统所包含的危险因素同样适用于其他心血管疾病,两者也可以被用来对房颤风险、左心房功能进行评估,同时也可对非房颤患者进行预后评估。     

评价房颤CHADS2评分及其衍生评分对冠心病及其严重程度的预测价值

目的：探讨房颤评分系统CHADS2(欧洲)评分及其衍生评分对冠心病及其严重程度的预测价值。方法纳入2013年1月1日-2013年12月1日就诊于本院心血管内科怀疑冠心病并行冠状动脉造影检查的连续病例429例,根据其造影结果分为对照组(n=51)及冠心病组(n=378)。根据患者的临床资料计算其CHADS2、CHA2DS2-VASc和CHA2DS2-VASc-HSF评分,根据其冠状动脉造影结果计算Gensini积分评价其病变严重程度,并对3种评分的冠心病预测能力进行评价。结果 CHADS2、CHA2DS2-VASc和CHA2DS2-VASc-HSF评分与病变支数(r=0.317,P＜0.01;r=0.332,P＜0.01;r=0.330,P＜0.01)及Gensini积分均有一定相关性(r=0.240,P＜0.01;r=0.274,P＜0.01;r=0.295,P＜0.01)。截断点分析显示, CHA2DS2-VASc-HSF评分≥3对冠心病的预测价值最高,其灵敏度、特异度、曲线下面积分别为0.860、0.804、0.832(95%CI：0.766~0.898)。结论 CHADS2及其衍生评分对冠心病有一定的预测价值,尤其是CHA2DS2-VASc-HSF评分≥3对冠心病有较高的预测价值。     

论互补性在医护关系中的核心作用

医生和护士无论在职业特点还是在工作内容上都是两个独立的职业,相互不能替代,在医疗过程中也都不能缺少。但医护工作分工不分家,如何处理好医护关系,则要求护士与医生之间既分工又合作,协调配合,相互帮助,相互尊重,从而体现了互补性在医护关系中的核心作用。１互...     

Li_2O-Na_2O-Al_2O_3-SiO_2系玻璃中的Na~+自扩散

应用放射性同位素法,研究了xLi_2O·(31.8-x)Na_2O·5.8Al_2O_3·62.4SiO_2(mol%)系玻璃中的Na~+自扩散温度范围为250～450℃。从实测数据,用数值法与图解法求得Na~+的自扩散系数D_(Na)~*。根据玻璃的组成和扩散温度,D_(Na)~*值变化于8.8×10~(-8)～1.1×10~(-11)cm~2s~(-1)。随着玻璃中Na_2O含量的减少,D_(Na)~*逐渐降低,显示明显的双碱效应。由不同碱离子的Dietzel场强之差,讨论了这种双碱效应。D_(Na)~*随温度指数上升,符合Arrhenius方程。据此方程,应用最小二乘法,获得扩散活化能E和指数前项D_o,E值约为79～91kJ/mol。     

HgI_2-Ag_2S-As_2S_3硫系玻璃离子选择电极

研究了适合作为离子选择电极的HgI_2-Ag_2S-As_2S_3和HgS-Ag_2S-As_2S_3系统的玻璃形成区。通过对这些玻璃性质与结构分析,发现xHgI_2·(100-x)(0.5Ag_2S·0.5As_2S_3]系列玻璃是很好的传感膜材料。采用该系列玻璃制成了对Ag~+离子10~(-6)～10~(-1)mol/L浓度范围具有能斯特响应斜率60mV/mol·L~(-1)和对Hg~(2+)离子10~(-6)～10~(-1)mol/L浓度具有能斯特斜率30mV/mol·L~(-1)的电极。这些电极具有优良的电化学性能。结合非晶态固体电解质的离子迁移模型,提出了这类硫系玻璃屯极的响应机理。     

过氧化氢对人肝癌细胞株HepG2增殖的促进作用

目的:探讨低剂量过氧化氢(H2O2)对人肝癌细胞株HepG2的促增殖作用及该作用与NF-κB和细胞周期的关系. 方法: 不同剂量H2O2直接作用于培养的HepG2细胞;20 μmol/L NF-κB抑制剂(PDTC)预处理细胞2 h, 50 μmol/L的H2O2作用HepG2细胞;50 μmol/L H2O2分别作用于G1, G2/M, S期细胞,MTT法测定细胞增殖活性. 结果: 50 μmol/L的H2O2具有明显的促进HepG2细胞生长的作用,此作用可以被PDTC抑制;50 μmol/L的H2O2可以明显的促进G1期HepG2细胞生长. 结论: 低剂量H2O2可诱导HepG2细胞增殖,该过程可能包含依赖NF-κB的信号途径的参与;H2O2诱导HepG2细胞增殖在细胞周期的不同时相效应敏感性不同,主要诱导G1期细胞增殖.     

紫檀芪抗H2O2诱导H9C2心肌细胞肥大

目的 探讨紫檀芪（pterostilbene,PTE）对H2O2诱导H9C2心肌细胞肥大的影响。方法 培养H9C2心肌细胞,使用50μmol/L的H2O2诱导心肌肥大,随机将其分为对照组（control组,C组）、心肌肥大组（hypertrophy组,H组）和心肌肥大+PTE组（H+PTE组）。干预48h后,采用细胞免疫荧光法检测H9C2心肌细胞表面积,采用蛋白免疫印迹法检测p62和p-mTOR蛋白表达。结果 与C组比较,H组心肌细胞的表面积显著增大,p62表达显著升高,p-mTOR/mTOR表达显著降低（P<0.05）。与H组比较,H+PTE组心肌细胞的表面积显著减小,p62表达显著降低,p-mTOR/mTOR表达显著升高（P<0.05）。结论 PTE通过抑制mTOR信号通路调节自噬进而减轻H2O2诱导的H9C2心肌细胞肥大。     

2－（2－甲氧基苯氧）乙胺的合成

２－（２－甲氧基苯氧）乙胺Ⅰ是合成某些抗高血压药物的重要中间体，本研究探索二种途径制备。一是以２－甲氧基苯酚为起始原料，经相应的苯氧乙酸、苯氧乙酰胺，再用ＺｎＣｌ２－ＫＢＨ４－ＴＨＦ－Ｃ６Ｈ５－ＣＨ３体系还原，得目的物，并将Ⅰ转变成盐酸盐Ⅱ。二是通过Ｇａｂｒｉｅｌ反应制备目的物。结果表明第一种途径总收率（５８．１％）高于其他路线，并有原料易得、操作简便的优点