TLR4的表达与急性胆道梗阻时内毒素致小鼠肝脏损伤的关系

目的探讨急性胆道梗阻时内毒素损伤小鼠肝脏的机制及其与TLR4表达的关系。方法雄性C57BL/10J(WT)小鼠42只,随机分为生理盐水组(NS组,n=21)、内毒素处理组1(LPS1组,n=21),C57BL/10ScnJ(TLR4-/-)小鼠21只,为内毒素处理组2(LPS2组)。3组均行胆总管结扎术,LPS1、LPS2组小鼠于胆总管内注射LPS(8ng/μL,10ng/g体重),NS组注射同等剂量的生理盐水,术后6、12、24h采集标本,RT-PCR检测肝脏组织TLR4mRNA的表达情况,全自动生化分析仪检测血清ALT、TBIL、DBIL水平,ELISA法检测血清TNF-α、IL-6的水平。病理观察肝脏损伤情况,免疫组织化学染色观察肝脏NF-κB的表达。结果 LPS1组与NS组比较肝脏组织TLR4mRNA在6h时表达已有升高,于24h达高峰,ALT、TBIL各时点均明显升高(P0.01),TNF-α、IL-6表达亦增高(P0.01),LPS1病理损伤程度较NS组重,免疫组化显示术后24小时NF-κB在LPS1组可见肝细胞明显的核表达。LPS2组与LPS1组比较各血清学指标均明显下降,病理损伤减轻,24h时肝细胞NF-κB核表达较少。结论在急性胆道梗阻时LPS可以加重肝脏组织损伤和机体炎症反应,可能与TLR4的表达增高及NF-κB的表达有关。阻断LPS-TLR4信号通路可以减轻LPS引起的机体损伤。     

芪归益肾方通过调控TLR4相关信号通路对急性肾损伤的保护作用

目的:探讨芪归益肾方通过调控TLR4相关信号通路对急性肾损伤的影响及机制。方法:小鼠右侧肾切除、左侧肾动脉夹闭25 min后恢复动脉血流引起肾缺血再灌注损伤。18只C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组,芪归益肾方组(50 g/kg)。术后24 h内留取小鼠血清以及肾组织标本。HE染色观察肾小管间质损伤情况,western blot检测TLR4、NF-κB以及c-Jun表达。RT-PCR检测IL-6、TNF-α的mRNA水平。结果:模型组和芪归益肾方组小鼠血清肌酐明显高于假手术组(P 0.05),芪归益肾方组血肌酐值低于模型组(P 0.05)。HE染色显示假手术组肾组织结构正常;模型组及芪归益肾方组出现肾小管上皮细胞肿胀变形、肾间质炎症细胞浸润以及充血,芪归益肾方组病理损伤较模型组减轻(P 0.05)。模型组与芪归益肾方组TLR4、NF-κB及c-Jun蛋白水平表达较假手术组有显著升高(P 0.05),芪归益肾方组TLR、NF-κB、c-Jun蛋白水平较模型组下降(P 0.05); RT-PCR结果显示模型组与芪归益肾方组肾组织炎症因子的mRNA水平较假手术组升高(P 0.05),芪归益肾方组炎症因子表达水平较模型组下降(P 0.05)。结论:在缺血再灌注引起的急性肾损伤小鼠模型中,芪归益肾方可通过调控TLR4的表达抑制下游NF-κB及JNK炎症相关信号通路,从而减少肾组织TNF-α及IL-1等炎症介质的产生,并达到保护肾组织的作用。     

转化生长因子β1对脂多糖刺激大鼠腹膜间皮细胞上调表达促炎症因子的影响

目的 观察转化生长因子β1（TGF-β1）对脂多糖(LPS)刺激大鼠腹膜间皮细胞上调表达促炎症因子的影响，并探讨其可能的机制。 方法 把原代培养的第2代大鼠腹膜间皮细胞（RPMCs）分成对照组、LPS刺激组（1 mg/L）、TGF-β1刺激组（5 μg/L）及LPS+TGF-β1刺激组。RT-PCR和ELISA方法检测肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素6（IL-6） mRNA及蛋白的表达。蛋白印迹方法检测磷酸化核因子（p-NF）-κB/NF-κB值的变化。 结果 (1)LPS可刺激RPMCs上调TNF-α和IL-6表达。LPS刺激24 h后，p-NF-κB/NF-κB值升高。(2)TGF-β1可拮抗LPS刺激大鼠腹膜间皮细胞上调TNF-α和IL-6表达，同时，也降低p-NF-κB/NF-κB值。 结论 在体外培养的大鼠腹膜间皮细胞，TGF-β1可拮抗LPS的致炎作用，其作用机制可能是通过抑制NF-κB的活化而介导。     

核因子-κB反义寡核苷酸对肝纤维化小鼠肝组织核因子-κB活性和病理改变的影响

目的 应用核因子(NF)-κB反义寡核苷酸(ASON)治疗肝纤维化小鼠模型,观察NF-κB p65 ASON对小鼠肝组织NF-κB活性和肝纤维化程度的影响,探讨NF-κB p65 ASON治疗肝纤维化的可能机制.方法 实验小鼠分组:正常组(8只)、肝纤维化模型组(8只)、反义寡核苷酸(NF-κB p65 ASON)治疗组(8只)、正义寡核苷酸(SON)治疗组(8只)、错义寡核苷酸(MSON)治疗组(8只)、NF-κBp65 ASON对照组(8只)、SON对照组(8只)和MSON对照组(8只);采用凝胶迁移率变动分析(EMSA)检测NF-κB DNA结合活性;病理切片(Masson染色)评价肝纤维化小鼠模型肝纤维化程度.结果 NF-κB p65 ASON治疗组小鼠肝组织NF-KB活性(12411.75±502.78)、肝纤维化病理积分(1.13±0.64)比模型组(16 346.88 ±449.05、2.88±0.64)明显降低,差异有统计学意义(P<0.01).soN治疗组(16460.38±575.26、2.75±1.17)和MSON治疗组(15 959.25±746.27、3.00±0.53)的NF-κB活性、肝纤维化病理积分与模型组比较差异无统计学意义(P>0.01).结论 NF-κB p65 ASON能显著抑制小鼠肝组织的NF-κB活性,降低肝纤维化程度.     

拮抗Toll样受体4的表达对内毒素血症小鼠肾脏损伤的保护作用

目的观察拮抗Toll样受体4（TLR4）的表达对内毒素血症小鼠肾脏损伤的保护作用以及对细胞核因子-κB（NF-κB）p65的影响。 方法采用内毒素（LPS）诱导的小鼠急性肾功能衰竭模型,并应用TLR4单克隆抗体进行干预,观察TLR4单克隆抗体对内毒素血症小鼠的肾脏组织学、血清肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）、胱抑素C、白细胞介素（IL）-1β、IL-6水平以及肾组织中TLR4及NF-κB水平的影响。 结果与模型组比较,TLR4单克隆抗体能够明显改善内毒素血症小鼠肾脏组织病理学损害;降低血清中Cr、BUN、胱抑素C、IL-β和IL-6水平（t = 7.20、7.86、9.99、8.79、3.92,P均< 0.05）,并且降低肾组织中TLR4及NF-κB p65水平（t = 20.94、11.21,P均< 0.05）。 结论TLR4单克隆抗体能够保护内毒素血症小鼠肾脏组织损伤,其作用机制可能与调节TLR4/NF-κB信号转导通路有关。     

右美托咪定对脂多糖诱导的脓毒症大鼠全身炎症反应和肺损伤的影响

目的观察脂多糖(LPS)对大鼠血浆和肺组织中的炎性因子和Toll样受体4(TLR4)表达的影响及右美托咪定的干预作用。方法雄性SD大鼠40只,250~300g,随机分为四组。Control组(n=10)生理盐水1ml·kg~(-1)·h~(-1)大鼠尾静脉泵注6h;DEX组(n=10)右美托咪定(负荷量6.5μg·kg~(-1)·h~(-1),10min;5μg·kg~(-1)·h~(-1)维持)大鼠尾静脉泵注6h;LPS组(n=10)经大鼠尾静脉注射7.5mg/kg的LPS后继续生理盐水泵注6h;LPS+DEX组(n=10)经大鼠尾静脉注射7.5mg/kg的LPS后泵注右美托咪定6h。以6h为实验终结点,并于此时行右心室取血和肺组织标本的制备。采用ELISA法检测血浆IL-1、IL-6、TNF-α浓度,Western blot法检测肺组织TLR4、髓样分化因子88(MyD88)、NF-κB蛋白含量;检测大鼠肺组织湿/干比(W/D);并用Murakami法评测肺损伤程度。结果与Control组比较,LPS组大鼠血浆IL-1、IL-6和TNF-α浓度明显升高,肺组织中的TLR4、MyD88、NF-κB蛋白含量明显升高(P0.01),肺W/D明显升高;LPS+DEX组上述指标差异均无统计学意义。Control组和DEX组未见明显肺损伤,LPS组肺间质水肿、炎性细胞浸润明显,LPS+DEX组肺损伤程度明显减轻(P0.01)。结论 LPS的刺激可以明显升高大鼠血浆中炎性因子以及肺组织中TLR4的表达水平,右美托咪定的干预可以减轻这一趋势,缓解大鼠的全身炎症和肺水肿的程度。     

组蛋白预处理对胆道梗阻大鼠肝功能影响的实验研究

【摘要】〓目的〓探讨组蛋白预处理对胆道梗阻大鼠肝功能的影响。方法〓104只大鼠随机分成4组:正常组(A组)、假手术组(B组)、胆管结扎组(C组)和His预处理组(D组,胆管结扎前24 h腹腔注射组蛋白(200 μg/kg)。设A组为0时相,B、C、D组分为术后12、24、48、72 h 4个时相,每个时相8只。留取血样和肝组织标本,检测血清ALT、DB、TB水平,观察肝组织病理学改变。ELISA检测血清IL-6和TNF-α水平,RT-PCR方法检测Kupffer细胞TLR4 mRNA表达水平。结果〓C组各时相肝组织病理评分高于A和B组(P<0.01)和D组(P<0.05)的相应时相。C组血清IL-6和TNF-α水平术后逐渐升高,高于B组相应时相(P<0.01);D组各时相血清IL-6和TNF-α水平低于C组,(P<0.05)。C组Kupffer细胞Toll-样受体4 mRNA(TLR4 mRNA)表达术后逐渐升高,高于A和B组相应时相(P<0.01);D组各时相Kupffer细胞TLR4 mRNA表达低于C组(P<0.05)。结论〓对胆道梗阻大鼠给予组蛋白预处理,可以减轻肝功能损害;通过激活Kupffer细胞TLR4减少炎症介质IL-6、TNF-α产生,抑制局部及全身的炎症反应。     

二硫代氨基吡咯烷预先给药对内毒素诱发大鼠心肌损伤的影响

目的 评价二硫代氨基吡咯烷预先给药对LPS诱发大鼠心肌损伤的影响.方法 成年Wistar大鼠72只,体重200～250 g,雌雄各半,随机分为3组(n=24):对照组(C组)、LPS组和二硫代氨基吡咯烷组(PDTC组).LPS组腹腔注射LPS 8 mg/kg;PDTC组尾静脉注射二硫代氨基吡咯烷120 mg/kg,30 min后腹腔注射LPS 8 mg/kg;C组注射等量生理盐水.分别于注射LPS后1、3/6、12 h时,腹腔注射2%戊巴比妥钠40 mg/kg麻醉大鼠,下腔静脉取血样后处死,开胸取心脏,采用ELISA法测定血清肌钙蛋白T(cTnT)浓度,免疫组化法检测心肌组织Toll样受体4(TLR4)的表达和NF-κB p65的活性;光镜下观察心肌组织病理学结果.结果 与C组比较,LPS组和PDTC组各时点血清cTnT浓度升高,心肌组织TLR4表达上调,NF-κB p65活性升高(P＜0.01);与LPS组比较,PDTC组各时点血清cTnT浓度下降,心肌组织NF-κB p65活性降低,注射LPS后6、12 h时心肌组织TLR4表达下调(P＜0.01),病理学损伤减轻.结论 二硫代氨基吡咯烷可减轻LPS诱发大鼠心肌损伤,其机制可能与抑制心肌组织NF-κB的活性和TLR4的表达有关.     

雌激素对大鼠肝切除肝缺血再灌注损伤中核因子-κB/IκB传导通路的影响及保护作用

目的 观察雌激素对大鼠肝切除肝缺血再灌注损伤中核因子-κB(NF-κB)/抑制蛋白(IκB)传导通路影响.方法 制作肝切除肝缺血再灌注损伤动物模型,雄性SD大鼠随机分为3组:假手术组(Sham组);肝切除肝缺血再灌注组(I/R组);肝切除肝缺血再灌注+雌激素组(I/R+ E2 组).分别在缺血再灌注后1、3、6h光镜下观察肝组织病理学改变,检测血清天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)的水平和肝组织丙二醛(MDA)的含量及超氧化物岐化酶(SOD)的活性,免疫组织化学法测定肝组织NF-κB的表达,Western blot检测NF-κB抑制蛋白(IκB-α)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 再灌注后I/R组在各时相血清ALT、AST均显著高于I/R +E2组,并于6h达到峰值(P＜0.05).与I/R+E2组和Sham比较,I/R组肝细胞凋亡率显著升高(P＜0.01);肝组织中IκB-α表达降低,而NF-κB表达增高(P＜0.05);ICAM-1 和MDA的结果变化和NF-κB表达水平变化类似,SOD呈相反变化.在光镜下观察,I/R组肝小叶结构紊乱,肝窦淤血,肝细胞水肿变性,肝细胞片状坏死,在Sham组和I/R +E2组上述病理学变化明显改善.结论 雌激素对肝切除肝脏缺血再灌注损伤有显著保护作用,其作用机制可能与雌激素影响NF-κB/IκB传导通路、减轻脂质过氧化反应、减少炎症介质释放及抑制细胞凋亡有关.     

游离脂肪酸激活HaCaT细胞表面TLR对NF-ΚB信号转导通路的影响

目的：观察长链游离脂肪酸对体外培养的角质形成细胞的作用,探讨其对TLR及NF—KB信号转导通路的影响。方法：①体外培养Hacat细胞,实验分为N、PA、SA、LPS四组,N组为正常对照组,软脂酸（Palmitic Acid,PA）750μmol／L、硬脂酸（Stearic Acid,SA）750μmol／L、脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）500ng／L和Macat细胞共培养72h组分别为N组、PA组、SA组、LPS组;②LPS、SA与角质形成细胞共培养72h检测LPS、SA对Hacat细胞NF—KB、p-IκBα、IκBα表达的影响。通过免疫印迹法（Weston blot）检测SA、LPS对Hacat细胞TLR2、TLR4、NF—κB、p-IκBα、IκBα表达的影响;Real Time PCR方法检测对Hacat细胞内NF—κB、TNF—α mRNA表达的影响。结果：SA、LPS激活细胞表面TLR后可以明显促进细胞表面TLR2、TLR4表达及细胞内NF—κB、TNF-α等促炎症因子的表达。PA促进Hacat细胞内NF—κB、p-IκBα、IκBα表达无明显影响（P〉0．05）结论：SA可促进角质形成细胞分泌NF-κB、TNF-α等因子表达促进炎症反应;其机制可能为：SA可能通过TLR及NF—κB信号传导通路促进细胞释放NF—κB、TNF—α等促炎因子。     

TLR4/NF-κB信号通路在多次七氟烷麻醉致新生大鼠远期认知功能障碍中的作用

目的评价Toll样受体4(TLR4)/核转录因子κB(NF-κB)信号通路在多次七氟烷麻醉致新生大鼠远期认知功能障碍中的作用。方法 SPF级健康新生SD大鼠75只, 6日龄, 体质量12～20 g, 雌雄不拘, 采用随机数字表法分为3组(n=25):对照组(C组)、多次七氟烷麻醉组(S组)和TLR4抑制剂+多次七氟烷麻醉组(I+S组)。S组和I组大鼠于出生后6、7和8 d时吸入3%七氟烷麻醉2 h。I组大鼠于每次吸入七氟烷麻醉前即刻腹腔注射TLR4抑制剂TAK-242 10 mg/kg。于出生后29 d时行旷场实验评估自发活动能力, 于出生后30～34 d时行Morris水迷宫实验评估认知功能。行为学测试结束后采集腹主动脉血标本, 然后深麻醉下处死大鼠分离海马组织, 采用ELISA法检测血清S100β、神经元特异性烯醇化酶(NSE)及海马IL-1β、IL-6和TNF-α的水平, 采用Western blot法测定TLR4、NF-κB p65和磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)的表达, 计算p-NF-κB p65/NF-κB p65比值, HE染色后观察海马CA1区病理学...     

表面活性蛋白A调节肾小管上皮细胞巨噬细胞炎症蛋白2的表达及其机制的探讨

目的 研究表面活性蛋白A(SP-A)对肾小管上皮细胞的巨噬细胞炎症蛋白2(MIP-2)表达和NF-κB活性的影响，探讨SP-A在肾组织炎症中的作用。方法 体外培养大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)，经同步化后分别在低血清条件下经不同浓度的SP-A(0~80 μg/ml)共培养，用RT-PCR和ELISA法分别检测脂多糖(LPS，10 μg/ml)刺激的MIP-2 mRNA和蛋白的表达水平，并用电泳迁移率变动分析法(EMSA)检测NF-κB活性。结果 在LPS刺激下，NRK-52E细胞有明显的MIP-2表达。SP-A浓度达5 μg/ml以上时可显著降低上清液中的MIP-2的浓度；当达10 μg/ml以上时可显著下调MIP-2 mRNA的表达。LPS刺激使NRK-52E细胞的NF-κB活性升高，SP-A以剂量依赖方式降低LPS诱导的NF-κB活性。结论 SP-A可以下调趋化因子MIP-2在肾小管上皮细胞的表达，其作用可能与抑制NF-κB活性有关。SP-A可能在肾组织炎症反应时发挥重要的调节作用。     

血管紧张素Ⅱ诱导Toll样受体4在腹膜间皮细胞的表达及其对脂多糖诱导CD40表达的影响

目的 观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对原代培养大鼠腹膜间皮细胞（RPMC）Toll样受体4（TLR4）表达的影响及其在脂多糖（LPS）诱导的核转录因子κB （NF-κB）活化及CD40表达中的作用。 方法 分离及培养RPMC。用不同浓度AngⅡ（10－9、10－8、10－7、10－6 mol/L）刺激细胞及用10-7 mol/L AngⅡ刺激细胞不同时间（mRNA为1、2、4、8、12、24、48 h和蛋白为6、12、24、36、48 h），观察血管紧张素1型受体（AT1R）阻滞剂洛沙坦（10－5 mol/L）和血管紧张素2型受体（AT2R）阻滞剂PD123177（10-5 mol/L）对AngⅡ诱导TLR4表达的影响。将细胞随机分为下列4组：对照组、AngⅡ (10－7 mol/L)组、LPS(1 mg/L)组、AngⅡ (10－7 mol/L)+LPS(1 mg/L)组，观察AngⅡ对LPS诱导的NF-κB激活和CD40表达的影响。RT-PCR检测TLR4、CD40 mRNA表达；Western印迹检测TLR4、IκBα、磷酸化IκBα（p-IκBα）、NF-κB p65、磷酸化NF-κB（p-p65）蛋白表达；免疫荧光检测细胞NF-κB p65亚单位的表达及分布。 结果 (1)10－9、10－8、10－7、10－6 mol/L AngⅡ作用RPMC 12 h，TLR4 mRNA表达分别增加70.5%、89.5%、102.9%和121.9%；作用24 h TLR4蛋白表达分别增加12.1%、27.7%、51.2%和41.6%。AngⅡ（10－7 mol/L）作用RPMC不同时间，TLR4 mRNA表达高峰为8 h和12 h（P < 0.01），蛋白表达高峰为12 h和24 h（P < 0.01）。(2)洛沙坦阻断后，AngⅡ诱导的TLR4表达与未阻断组比较，下调33.5%（P < 0.05）。PD123177对AngⅡ诱导的TLR4表达无显著影响（P > 0.05）。(3) 与正常对照组比较，LPS作用60 min p-IκBα/IκBα、p-p65/p65表达分别上调362.6%（P < 0.01）和67.4%（P < 0.05）；作用4 h CD40 mRNA表达上调299.9%（P < 0.01）；与LPS组比较，AngⅡ预刺激24 h加LPS作用60 min，p-IκBα/IκBα、p-p65/p65表达分别上调49.1%（P < 0.01）和29.3%（P < 0.05）；作用4 h CD40 mRNA表达上调56.8%（P < 0.01）。(4)免疫荧光结果显示正常对照组与AngⅡ组细胞中，p65信号定位于细胞胞质；LPS作用60 min，p65信号从胞质进入胞核；AngⅡ+LPS组NF-κB p65胞核信号显著增强。 结论 AngⅡ呈浓度、时间依赖性诱导RPMC TLR4表达，并显著增强LPS诱导NF-κB激活及CD40的表达。提示腹膜组织局部产生的AngⅡ可能对LPS诱导的腹膜组织炎性反应具有放大作用。     

镧对内毒素/脂多糖诱导的巨噬细胞核因子KB活化的抑制作用

目的了解稀土元素镧对内毒素/脂多糖(LPS)诱导的小鼠腹腔巨噬细胞(Mφ)核因子κB(NF-κB)活化的影响,并探讨其机制。方法分离培养小鼠腹腔 Mφ,分为:空白对照组,无刺激因素;LPS 组,用1μg/ml LPS 刺激30 min;镧离子(La~(3 ))组,用2.5 μmol/L La~(3 )刺激30 min;La~(3 ) LPS 组,先后用2.5μmol/L La~(3 )、1μg/mI LPS 各刺激30 min;La~(3 )/LPS 组,2.5μmol/L La~(3 )刺激30 min 后,洗涤细胞,再加入1μg/ml LPS 刺激30 min。采用细胞免疫荧光染色法观察 NF-κB在各组细胞中的分布与表达;酶联免疫吸附测定(ELISA)法捡测胞核中 NF-κB/p65蛋白活性;蛋白质印迹法检测细胞核内 NF-κB/p65蛋白及胞质中核因子抑制蛋白α(IκBα)的表达量。ELISA 法测定各组细胞培养上清液中肿瘤坏死冈子α(TNF-α)的含量。结果 (1)免疫荧光染色显示,空白对照组、La~(3 )组、La~(3 ) LPS 组和 La~(3 )/LPS 组 Mφ绿色荧光多分布于胞质,胞核荧光强度分别为42±7、73±30、48±11和67±19;LPS 组绿色荧光集中于胞核,荧光强度为116±14,明显高于其余4组(P<0.01)。(2)胞核 NF-κB/p65蛋白活性:LPS 组吸光度值为0.435±0.066.与空白对照组(0.048±0.027)、La~(3 )组(0.062±0.049)、La~(3 ) LPS 组(0.066±0.031)、La~(3 )/LPS 组(0.108±0.017)比较,明显偏高(P<0.01)。(3)LPS 组 Mφ胞核 NF-κB/p65蛋白表达水平明显高于其余4组,胞质 IκBα蛋白表达水平明显低于其余4组。(4)TNF-α含量:La~(3 )组培养上清液中 TNF-α含量低于试剂盒检测下限(25 pg/ml)及空白对照组(P<0.05),La~(3 ) LPS 组和 La~(3 )/LPS 组低于 LPS 组(P<0.01),但高于空白对照组。结论 LPS 可激活小鼠腹腔 MφNF-κB/p65核移位,并使胞核中 NF-κB/p65的表达量和活性升高、胞质 IκBα蛋白表达下调,导致 TNF-α分泌增多。镧可抑制上述效应。     

miRNA-146调控TLR4/NF-κB通路促进滋养层细胞增殖和迁移

目的 探讨miRNA-146是否通过调控Toll样受体4/核因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路促进滋养层细胞HTR-8/SVneo增殖和迁移，以期为不明原因复发性流产(uRSA)的发病机制研究和防治提供参考。方法 (1)细胞研究：将转染后的胎盘滋养层细胞HTR-8/SVneo分成miRNA-146抑制剂组、抑制剂对照组、miRNA-146模拟物组、模拟物对照组，检测各组HTR-8/SVneo细胞生长的活力、增殖、凋亡、迁移情况，通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测各组TLR4、NF-κB、肿瘤坏死因子(TNF-α)和白介素-6(IL-6)的mRNA和蛋白相对表达水平。(2)动物研究：建立Dicer酶敲除的uRSA小鼠模型，将正常妊娠小鼠作为对照组，通过qRT-PCR检测胎盘组织的miRNA-146 mRNA表达情况，采用免疫组织化学法检测胎盘组织的TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-6蛋白表达情况。结果 (1)细胞研究：与模拟物对照组比较，miRNA-146模拟物组HTR-8/SVneo细胞克隆形成率、增殖能力及迁移能力显著增加(P<...     

右美托咪定对反复缺血-再灌注脑损伤小鼠学习记忆能力的影响

目的探讨右美托咪定对反复缺血-再灌注(IR)脑损伤小鼠学习记忆能力的影响。方法无特定病原体(SPF)级成年C57BL/6J小鼠60只,按照随机数字表法分为四组:右美托咪定25μg/kg组(L组)、右美托咪定50μg/kg组(H组)、缺血-再灌注组(IR组)和假手术组(Sham组),每组15只。L组和H组小鼠分别经腹腔注射右美托咪定25μg/kg、50μg/kg,30min后采用双侧颈总动脉夹闭术,建立反复IR脑损伤模型;IR组小鼠建立反复IR脑损伤模型;Sham组小鼠只分离双侧颈总动脉,但不夹闭。Sham组和IR组小鼠于缺血前30min分别经腹腔注射等容量的生理盐水。采用Morris水迷宫试验测试小鼠术前及术后的学习记忆能力,随后处死小鼠,留取海马组织并测定其湿/干重比(W/D)和总含水量(TCW),采用伊文斯蓝(EB)法检测血脑屏障的通透性。采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)测定海马组织Toll样受体4(TLR4)、核调节因子-κB(NF-κB)mRNA表达水平,采用Western blot测定海马组织TLR4、NF-κB蛋白含量。结果术后3、7dIR组小鼠逃避潜伏期及游泳距离均明显长于Sham组,L组和H组小鼠的逃避潜伏期及游泳距离明显短于IR组(P0.05)。IR组小鼠海马组织W/D、TCW和脑组织EB含量明显高于Sham组,L组和H组小鼠海马组织W/D、TCW和脑组织EB含量明显低于IR组(P0.05)。IR组小鼠海马组织NF-κB mRNA、TLR4mRNA和蛋白表达水平明显高于Sham组,L组和H组小鼠海马组织NF-κB mRNA、TLR4mRNA和蛋白表达水平明显低于IR组,H组小鼠海马组织NF-κB mRNA、TLR4mRNA和蛋白表达水平明显低于L组(P0.05)。结论腹腔注射25μg/kg、50μg/kg的右美托咪定均可改善反复IR脑损伤小鼠的学习记忆能力,其机制可能与其抑制海马组织TLR4和NF-κB表达、减轻脑损伤有关。     

血管紧张素Ⅱ1型受体在急性肺损伤小鼠肺核因子κB和激活蛋白1活化中的作用

目的 了解血管紧张素Ⅱ1型(AT1)受体在LPS诱导的急性肺损伤(ALI)小鼠肺脏NF-κB和激活蛋白1(AP-1)活化中的作用.方法 应用随机数字表法将88只BALB/c小鼠分为对照组8只、LPS组40只、LPS+AT1受体拮抗剂ZD7155组40只.3组小鼠均行气管穿刺.LPS+ZD7155组小鼠腹腔注射ZD7155(10 mg/kg),对照组和LPS组小鼠腹腔注射等体积生理盐水.30 min后,将1 mg/mL LPS分别滴入LPS组和LPS+ZD7155组小鼠气管中(2 mg/kg),对照组小鼠以等体积生理盐水替代LPS经气管滴入.于滴注LPS后1、3、6、12、24 h,留取LPS组和LPS+ZD7155组小鼠肺组织标本;对照组小鼠于滴注后24 h取肺组织标本.采用蛋白质印迹法检测肺组织AT1受体的表达,用凝胶电泳迁移率变化分析法检测肺组织NF-κB和AP-1活性.对各实验结果进行单因素方差分析.结果 LPS组小鼠各时相点肺组织AT1受体蛋白相对表达量较对照组(0.69±0.28)明显升高(F=9.356,P值均小于0.01),6 h时达高峰(3.44±0.90);LPS+ZD7155组各时相点均低于LPS组(F=9.356,P值均小于0.01).LPS组小鼠各时相点肺组织NF-κB活性较对照组(5.47±0.08)显著升高(P=26.443,P值均小于0.05),3 h时达高峰(52.33±3.25);LPS+ZD7155组各时相点肺组织NF-κB活性均明显低于LPS组(F=26.443,P值均小于0.05).LPS组小鼠各时相点肺组织AP-1活性较对照组(2.5±0.4)显著升高(F=34.685,P值均小于0.05),其中6 h时达高峰(73.3±9.5),LPS+ZD7155组各时相点肺组织AP-1活性均明显低于LPS组(F=34.685,P值均小于0.05).结论 AT1受体通过激活NF-κB和AP-1,参与LPS诱导的AL1发生.     

二甲双胍对血管紧张素Ⅱ诱导的ApoE~(-/-)小鼠腹主动脉瘤形成的影响

目的:研究二甲双胍对血管紧张素Ⅱ诱导的ApoE基因敲除小鼠腹主动脉瘤形成的炎性机制的影响。方法:8~10周龄雄性ApoE~(-/-)小鼠随机分为Control组,AAA组,AAA+MET3组,采用皮下埋置AngⅡ胶囊渗透压泵的方式构建小鼠腹主动脉瘤动物模型。28d后取材,检测腹主动脉最大直径以及AAA发生率。HE以及免疫组织化学染色分析炎症细胞浸润情况,qPCR技术检测腹主动脉中ICAM-1表达,WesternBlot技术检测腹主动脉中NF-κB表达变化。结果:AAA+MET组腹主动脉最大直径以及AAA发生率均低于AAA组;AAA+MET组炎症细胞以及巨噬细胞浸润少于AAA组;应用二甲双胍后,小鼠腹主动脉瘤动物模型中ICAM-1表达以及NF-κB表达均显著降低。结论:二甲双胍可以抑制组织中NF-κB信号通路激活,下调ICAM-1的表达,并进一步抑制巨噬细胞聚集,减轻血管壁炎症反应,从而抑制AAA发展。     

PS-341对小鼠重症急性胰腺炎核因子-κB活化的影响

目的观察PS-341对重症急性胰腺炎(SAP)小鼠胰腺组织核因子-κB(NF-κB)活化的影响,阐明PS-341对SAP的作用机制。方法采用连续7次腹内注射雨蛙素(每次间隔1h)及脂多糖制作小鼠SAP模型,将60只ICR雌性小鼠随机分为PS-341治疗组(注射脂多糖前0.5h腹内注射0.5mg/kgPS-341),模型对照组(注射脂多糖前0.5h腹内注射50%DMSO),空白对照组(生理盐水制模)。最后一次注射雨蛙素后2h麻醉小鼠,取血检测血淀粉酶,光镜下观察小鼠胰腺和肺脏的病理形态,测定胰腺组织中髓过氧化物酶水平,实时荧光定量PCR测定胰腺组织中黏附分子(ICAM-1)的含量,免疫印迹法(Westernblotting)检测胰腺组织中IκBα的表达,电泳迁移率实验(EMSA)测定NF-κB活性。结果 PS-341治疗组和模型对照组比较,胰腺组织中I-κB降解减少,NF-κB活性显著下降,血清淀粉酶、MPO、胰腺组织中细胞黏附分子ICAM-1的表达都明显降低(P<0.05)。胰腺和肺脏组织病理学有明显的改善(P<0.05)。结论 PS-341通过抑制胰腺内NF-κB活化而抑制炎症反应。PS-341可能是治疗SAP的一个新措施。     

脑死亡时猪肝脏功能及组织学改变的研究

目的 观察脑死亡对猪肝脏功能、形态的影响并探讨核因子κB(nuclear factor κB,NF-κB)在脑死亡发生机制中的作用.方法 健康长白猪12头,随机分为2组:对照组6头,仅行麻醉维持24 h;脑死亡组6头,建立猪脑死亡模型并维持脑死亡状态24 h.脑死亡后(对照组持续麻醉后)6、12、24 h取血标本及开腹取同一部位肝组织,检测血清中丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(espartate aminotransferase,AST)水平;ELISA法检测血清白细胞介素1β(intedeukin-1β,IL-1β)水平;实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,real-time PCR)法检测肝组织NF-κB mRNA变化;免疫组织化学法观察肝组织NF-κB p65蛋白表达情况.结果 脑死亡组长白猪各时间点血清ALT、AST、IL-1β水平、肝组织NF-κB mRNA转录水平及肝组织NF-κB p65蛋白表达水平均较对照组高,两者相比差异有统计学意义(P<0.05).脑死亡组脑死亡后12 h肝细胞轻度浊肿;24 h细胞水肿,肝细胞疏松化.结论 脑死亡导致猪肝脏出现功能与形态学的损伤性变化.其机制可能是脑死亡引起肝细胞NF-κB mRNA 转录和蛋白翻译水平升高,进而导致机体炎症介质合成与释放.