丹参酮ⅡA对HeLa宫颈癌细胞凋亡的影响

目的探讨丹参酮ⅡA（TanⅡA）诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用及可能的机制。方法 MTT法检测不同浓度（0.5、1、2、4、8 mg/L）TanⅡA处理24、48、72 h对HeLa细胞的抑制率;免疫印记法（Western blot）测定Cx43及skp2表达。结果 MTT实验显示TanⅡA对宫颈癌hale细胞的生长具有明显抑制作用,其作用强度随药物作用时间及浓度的增加而增强;免疫印记法显示丹参酮ⅡA上调cx43,同时降低skp2表达。结论丹参酮ⅡA能明显抑制人宫颈癌HeLa细胞的增殖,其机制可能与上调cx43的表达,抑制skp2的表达有关。     

miR-133过表达对结肠癌细胞SW480凋亡、增殖和裸鼠成瘤的影响

目的:探究miR-133过表达对结肠癌细胞SW480凋亡、增殖和裸鼠成瘤的影响。方法:将miR-133 mimic转染至SW480细胞,将细胞分为3组:对照组、Scramble组和miR-133 mimic组。RT-PCR检测miR-133表达水平;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western 印迹检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9、c-Myc蛋白表达水平;CCK-8法检测细胞增殖倍数;克隆形成实验检测细胞克隆形成率;裸鼠右侧腋窝处皮下注射SW480细胞悬液建立裸鼠移植瘤模型,检测肿瘤重量,RT-PCR检测肿瘤组织miR-133表达水平,免疫组化检测Caspase-3、Ki67阳性细胞数。结果:与对照组相比,miR-133 mimic组miR-133表达升高（F=136.70,P＜0.05）,细胞凋亡率升高（F=59.995,P＜0.05）,Bax/Bcl-2、cleaved Caspase-3/Caspase-3、cleaved Caspase-9/Caspase-9表达升高（F=726.85、138.76、55.85,均P＜0.05）,c-Myc蛋白表达水平降低（F=88.98,P＜0.05）,细胞活力降低（F=48.50,P＜0.05）,克隆形成率降低（F=42.63,P＜0.05）,肿瘤重量降低（t=1.788,P＜0.05）,肿瘤组织miR-133表达水平升高（t=1.043,P＜0.05）,Caspase-3阳性细胞数升高（t=1.167,P＜0.05）,Ki67阳性细胞数降低（t=1.557,P＜0.05）。结论:miR-133过表达诱导SW480细胞凋亡,抑制SW480细胞增殖和裸鼠肿瘤的形成。     

miR-378对骨髓增生异常综合征细胞凋亡及增殖的影响

目的 研究miR-378对骨髓增生异常综合征SKM-1细胞凋亡和增殖的影响.方法 我们分别用miR-378重组慢病毒和阴性对照病毒感染SKM-1细胞.然后采用CCK-8检测miR-378对SKM-1细胞生长的影响,流式细胞仪检测各实验组细胞凋亡和周期情况,并用Western blot检测凋亡过程中的关键因子cleaved-caspase-3蛋白的表达.用生物信息学方法预测miR-378可能的靶基因,用PCR和Western blot进行初步验证.结果 miR-378慢病毒转染组的细胞增殖活性明显降低,流式细胞术检测miR-378组的细胞凋亡率为(12.90±3.72)％,明显高于阴性对照病毒转染组和空白对照组[(3.21±1.91)％、(2.78±1.04)％,P＜0.01];miR-378组的G0/G1期细胞增多,S期细胞减少.同时,Western blot结果显示miR-378过表达引起了cleaved-caspase-3的表达升高.用生物信息学方法预测抗凋亡蛋白基因BCL2L2为miR-378潜在的靶基因,并发现miR-378可以抑制BCL2L2蛋白的表达.结论 miR-378可以通过引起细胞凋亡和细胞周期阻滞来抑制SKM-1细胞的增殖,并降低BCL2L2蛋白的表达.     

半枝莲对人结肠癌细胞SW620增殖和凋亡的影响

目的探索半枝莲对人结肠癌细胞株SW620增殖和凋亡的影响。方法用不同浓度（0、12.5、25、50、75μg/mL）的半枝莲氯仿极性部位提取物（ECSB）干预SW620细胞后,MTT法检测细胞活力,DAPI染色观察SW620细胞的凋亡,流式细胞术检测SW620细胞的周期,蛋白质印迹法（Western blot）检测SW620细胞中PCNA、Survivin的表达。结果ECSB显著抑制了SW620细胞的活力（P<0.01）,并呈剂量性依赖;DAPI染色显示ECSB处理SW620细胞24 h后出现明显的细胞核固缩,核碎裂形成,提示ECSB促进SW620细胞的凋亡;流式细胞术检测结果显示在50μg/mL ECSB干预SW620细胞48 h后,S期明显增高,提示ECSB抑制SW620细胞的增殖;Western blot检测结果显示各浓度的ECSB均能显著抑制SW620细胞的PCNA表达,75μg/mL ECSB能显著抑制SW620细胞的Survivin表达。结论 ECSB促进人结肠癌细胞株SW620的凋亡,抑制其增殖,其可能机制是通过下调PCNA、Survivin的表达。     

miR-378通过靶向RAB11A促进乳腺癌细胞系的增殖和迁移

目的 探究miR-378在乳腺癌细胞系中的表达及作用机制。方法 利用TargetScan分析miR-378的作用靶基因RAB11A。利用RT-PCR检测乳腺癌细胞系中miR-378和RAB11A的mRNA水平表达。转染MCF-7和MDA-MB-231细胞miR-378,NC(normal control)对照,采用MTT法和Transwell法检测乳腺癌细胞增殖和迁移能力的变化;采用RT-PCR和Western blot检测RAB11A的表达。荧光素酶报告分析miR-378与靶基因RAB11A之间的信号。结果 miR-378在乳腺癌细胞MCF-7,MDA-MB-231中表达上调;RAB11A在乳腺癌细胞MCF-7,MDA-MB-231中表达下调;在MCF-7,MDA-MB-231细胞中敲降miR-378后,乳腺癌细胞增殖和迁移能力与对照组相比被显著抑制,RAB11A的mRNA和蛋白表达水平明显增加,荧光素酶活性增加。结论 在乳腺癌细胞中,miR-378可通过靶向RAB11A促进乳腺癌细胞的增殖和迁移。     

丹参酮ⅡA联合顺铂对Hela细胞的凋亡作用

目的研究丹参酮ⅡA(Tan ⅡA)联合顺铂(DDP)在体外对宫颈癌Hela细胞的凋亡作用及凋亡蛋白Bax与Bcl-2表达水平的变化。方法采用苏木素-伊红染色法观察细胞的形态学变化;流式细胞仪检测药物作用后的细胞凋亡情况;Western Blot测定Bax与Bcl-2蛋白在Hela细胞中的表达水平。结果对照组细胞未见凋亡,而两药单用组及联合组均可见凋亡细胞;除对照组外其他各组均可检测到细胞亚二倍体凋亡峰,Tan ⅡA+DDP组凋亡率高于两药单用组凋亡率,差别均有统计学意义(P<0.05);Bcl-2蛋白在各组中均有表达,但表达水平变化不明显(P>0.05);Bax蛋白在对照组中几乎不表达,而在各药物处理组中均有表达,且两药联合组中表达水平高于两药单用组,差别均有统计学意义(P<0.05)。结论Tan ⅡA与DDP二者联合可以增加Hela细胞凋亡率,其中通过增加Bax蛋白的表达,使Bax/Bcl-2比值升高,可能是其诱导细胞凋亡的机制之一。     

丹参酮ⅡA下调凋亡抑制蛋白XIAP诱导人肝癌细胞凋亡的研究

目的:探讨丹参酮ⅡA对肝癌细胞中凋亡抑制蛋白XIAP的影响。方法:通过MTT实验、流式细胞术、细胞形态观察检测丹参酮ⅡA对细胞增殖和凋亡的影响,通过蛋白免疫印迹的方法检测丹参酮ⅡA对细胞中凋亡抑制蛋白XIAP、凋亡蛋白caspase-3以及PARP蛋白的影响。结果:MTT、细胞形态结果显示丹参酮ⅡA对SMMC-7721细胞的生长抑制作用成时间和剂量依赖性,免疫印迹结果显示,0.5μg/mL丹参酮ⅡA作用肝癌细胞24 h后,caspase-3前体、凋亡抑制蛋白XIAP表达明显下调,活化的caspase-3、剪切形式的PARP含量显著增加。结论:丹参酮ⅡA下调凋亡抑制蛋白XIAP,活化caspase-3,促进PARP剪切诱导肝癌细胞凋亡。     

丹参酮ⅡA对瘢痕成纤维细胞增殖及凋亡的影响

目的　研究天然药物丹参酮ⅡA对瘢痕成纤维细胞的作用 ,以期寻找新的治疗增生性瘢痕的有效药物。方法　以四甲基偶氮唑 (MTT)法和特异性荧光染色及原位末端标记技术检测丹参酮ⅡA对成纤维细胞增殖及凋亡的影响。结果　丹参酮ⅡA对成纤维细胞的增殖具有显著的抑制作用 ,且呈浓度和时间依赖性。采用荧光染色和TUNEL法检测凋亡指数 ,均呈剂量依赖性增高 (P <0 0 1)。结论　丹参酮ⅡA对瘢痕成纤维细胞的增殖具有显著的抑制作用 ,并且能够诱导其发生凋亡 ,为寻找有效治疗增生性瘢痕的药物提供了新的思路。     

丹参酮ⅡA对U251胶质瘤细胞的增殖抑制作用

目的探讨丹参酮ⅡA组分对胶质瘤细胞株（U251细胞株）的抑制作用。方法应用MTT法,观察丹参酮ⅡA对人胶质细胞瘤株U-251的细胞毒作用、量效关系等,并与VM-26进行比较。结果丹参酮ⅡA对人胶质瘤细胞有明显的抑制作用,其24小时的IC50为5．12mg／ml,且呈良好的量效关系。结论丹参酮ⅡA能有效抑制胶质瘤细胞株的生长,抑制作用与浓度呈正相关,与VM-26相比较,丹参酮ⅡA是有效的、能抑制胶质瘤细胞生长的药物。     

丹参酮ⅡA联合5-Fu诱导人乳腺癌细胞系MCF-7凋亡的影响

目的 研究丹参酮Ⅱ A 联合5-Fu 诱导人乳腺癌细胞系MCF-7 凋亡的影响.方法 应用MTT 法分析细胞增殖抑制作用,瑞氏- 吉姆萨染色法观察细胞形态学变化,流式细胞术测定细胞周期和凋亡率,Western blot 法检测Bcl-2、bax 蛋白的表达.结果 丹参酮ⅡA 与5-Fu 均可抑制乳腺癌MCF-7 细胞的增殖及阻滞周期于G0/G1 期,并能诱导MCF-7 的凋亡,而当这两药联合时,以上作用得到明显加强,凋亡率显著升高;两药均可使Bcl-2 表达下调及bax 表达上调,当两药联合时这种作用更明显.结论 丹参酮ⅡA 与5-Fu 联合具有协同抑制乳腺癌MCF-7 细胞增殖及诱导其凋亡的作用.     

丹参酮ⅡA诱导人小细胞肺癌细胞凋亡及其分子机制

目的 了解丹参酮ⅡA对人小细胞肺癌细胞（H446细胞）的凋亡诱导作用,并探讨其可能的分子机制。方法 采用MTT法检测不同浓度丹参酮ⅡA对人小细胞肺癌H446细胞增殖的影响结果;Hoechst 33258法检测不同浓度丹参酮ⅡA对人小细胞肺癌H446细胞凋亡的影响;qPCR法检测不同浓度丹参酮ⅡA对人小细胞肺癌H446细胞凋亡基因的影响;Westen blot法检测不同浓度丹参酮ⅡA对人小细胞肺癌H446细胞凋亡的影响。结果 不同药物浓度的丹参酮ⅡA （0.3、0.6、1.25、2.5、5和10μg/ml）抑制人小细胞肺癌H446细胞增殖且呈浓度和时间依赖性;随着药物浓度的提高,人小细胞肺癌H446细胞凋亡小体的形成数量增加,高浓度组差异有统计学意义（P<0.05）;高浓度组丹参酮ⅡA促进凋亡基因（Bax,caspase-9、caspase-3）的表达,抑制凋亡抑制基因（Akt,Bcl-2）的表达且差异有统计学意义（P<0.05）;高浓度组丹参酮ⅡA促进凋亡蛋白（Bax,caspase-9,caspase-3）的表达,抑制凋亡抑制蛋白（Akt,Bcl-2）的表达且差异有统计学意义（P<0.05）。结论 丹参酮ⅡA可能是通过Akt-Bax/bcl-2-caspase9-caspase3信号通路诱导人小细胞肺癌H446细胞的凋亡。     

丹参酮ⅡA对白血病 K562 细胞的体外诱导凋亡作用研究

目的研究丹参酮ⅡA对人急性白血病 K562 细胞的诱导凋亡作用及其作用机制。方法以不同浓度的丹参酮ⅡA (10～50 μmol/L) 作用于体外培养的 K562 细胞 24、48、72 h,应用 MTT 法检测细胞生长抑制率,流式细胞术 (FCM) 检测细胞凋亡率,并对 50 μmol/L 的药物作用不同时间后亚 G1 期细胞进行检测。应用免疫印迹法 (Western blotting) 检测 Caspase-3 及其裂解底物多聚 ADP-核糖聚合酶 (PARP) 的表达水平,并对凋亡调节蛋白 Fas、Bax、Bcl-2、Bak、Bid 的表达水平进行检测。结果20 μmol/L 以上的丹参酮ⅡA可显著抑制 K562 细胞的生长、诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系;FCM 检测结果表明 50 μmol/L 丹参酮ⅡA 作用不同时间后,亚 G1 期细胞 (凋亡细胞) 逐渐增多。20 μmol/L 以上的丹参酮ⅡA 作用 48 h 后 Caspase-3 逐渐被活化出现 17 000 的亚单位,Caspase-3 的作用底物 PARP 被活化裂解出现 89 000 的亚单位片段,而且 Caspase-3 的激活以及 PARP 的裂解可被 Caspase-3 的特异性抑制剂 z-DEVD-FMK 所阻断,促凋亡蛋白 Fas 以及 Bax 的表达水平明显升高,而凋亡抑制蛋白 Bcl-2 及其他促凋亡蛋白 Bak 和 Bid 的表达水平则无明显变化。结论丹参酮ⅡA可以通过诱导白血病 K562 细胞凋亡而发挥体外抗白血病作用,上调促凋亡蛋白 Fas 和 Bax 的表达水平及激活 Caspase-3 可能是丹参酮ⅡA诱导白血病 K562 细胞发生凋亡的重要作用机制之一。     

丹参酮ⅡA与5-FU抑制HeLa细胞生长及诱导细胞凋亡的研究

目的 探讨丹参酮ⅡA与5-氟尿嘧啶(5-Fu)对宫颈癌HeLa细胞增殖抑制及诱导细胞凋亡的影响.方法 采用MTT方法 、荧光染色、流式细胞仪及电镜技术等研究丹参酮ⅡA与5-Fu对HeLa细胞增殖抑制及诱导细胞凋亡作用.结果 丹参酮ⅡA对宫颈癌HeLa细胞增殖有明显抑制作用,并呈现浓度和时间的依赖性.与5-Fu合用后细胞增殖抑制率明显增强.8.0μg/mL丹参酮ⅡA作用72h后,电镜下出现细胞核固缩,形成凋亡小体.流式细胞仪检测丹参酮ⅡA 4.0和8.0μg/mL作用HeLa细胞72 h后细胞凋亡率为34.13%、45.84%,在浓度增至32.0μg/mL时细胞凋亡无明显增加.结论 丹参酮ⅡA具有直接抑制宫颈癌HeLa细胞增值作用且在一定浓度范围内诱导细胞凋亡,同时具有增强5-Fu的抗肿瘤作用.     

丹参酮ⅡA诱导NB4细胞凋亡时Caspase3活性变化

目的：研究Caspase3在丹参酮ⅡA(TanⅡA)诱导NB4细胞凋亡过程中的变化及与凋亡的关系。方法：通过细胞形态学、DNA含量分析及DNA片段比率，证实TanⅡA是否可诱导NB4细胞凋亡，用荧光分光光度仪检测Caspase3活性及N-乙酰-天冬氨酸-谷氨酸-颉氨酸-天冬氨酸-7氨基-4甲基-香豆素(AC-DEVD-AMC)行Caspase3抑制试验探讨细胞凋亡与Caspase3间的关系。结果：TanⅡA可诱导NB4细胞凋亡，并伴有Caspase3活性增高。AC-DEVD-乙醛(AC-DEVD-CHO)可抑制TanⅡA诱导NB4细胞凋亡。结论。TanⅡA诱导NB4细胞凋亡可通过激活Caspase3而实现。     

丹参酮ⅡA抑制Hela细胞生长及诱导凋亡的体外实验研究

目的探讨丹参酮ⅡA对宫颈癌细胞生长抑制及诱导细胞凋亡作用的研究。方法采用体外宫颈癌细胞培养方法取0～8．0μg／mL浓度的丹参酮ⅡA作用Hela细胞，72h后，观察细胞生长抑制情况，电镜观察细胞凋亡的形态学变化。流式细胞仪检测不同浓度丹参酮ⅡA对细胞凋亡的影响。结果丹参酮ⅡA作用于Hela细胞后，对该细胞有明显的抑制作用，72h后0．5、1．0、2.0、4．0和8．0μg／mL不同浓度的丹参酮ⅡA对细胞生长的抑制率分别为17．23％、24．27％、31．75％、39．37％和55．45％。与对照组比较差异有显著性。电镜显示：核皱缩、核碎裂、形成凋亡小体。流式细胞仪测定72h后不同丹参酮ⅡA浓度与细胞凋亡率分别为0．5、1．0、2．0、4．0和8．0μg／mL；12．37％、25．81％、27．98％、34．13％和45．84％。与对照组比较，0μg／mL；2．09％差异均有显著性。结论丹参酮ⅡA对宫颈癌细胞生长有明显的抑制作用并诱导宫颈癌细胞凋亡。     

丹参酮ⅡA与三氧化二砷联合诱导MR2细胞凋亡的研究

目的 研究丹参酮ⅡA(Tanshinone ⅡA,TanⅡA)联合三氧化二砷(As2O3)对耐维甲酸的急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞(MR2)诱导凋亡的协同效应,探讨其对MR2细胞P糖蛋白(Pgp)表达的作用. 方法以0.5、2.0、5.0 μmol/L As2O3单独及联合1.0 μg/mL TanⅡA 作用于MR2细胞,应用MTT比色法检测细胞的增殖活性,Annexin V/PI标记法观察细胞的凋亡效应,免疫组化法观察细胞Pgp表达. 结果临床剂量(0 5、2.0 μmol/L)As2O3联合 TanⅡA 作用下,随着作用时间延长,对MR2细胞增殖抑制作用逐步增强,药物作用168 h两组的细胞增殖抑制率分别为(90.67±5.52)%和(86.70±3.04)%,均分别高于单用相应剂量As2O3组(P<0.01);诱导MR2细胞凋亡也逐步增强,168 h两组的细胞凋亡率分别为(81.52±7.23)%和(90.75±6.44)%,均分别高于单用相应剂量As2O3组(P<0.01).同时As2O3 和TanⅡA单用及联合用药均能明显降低MR2细胞Pgp表达(P<0.01).结论 TanⅡA联合As2O3对MR2细胞诱导凋亡有协同作用,同时下调Pgp的表达.     

丹参酮ⅡA抗人黑素瘤A875细胞作用

目的 观察丹参酮ⅡA在体外对人皮肤恶性黑素瘤A875细胞的影响.方法 体外培养A875细胞,0 μg/ml、4 μg/ml、8 μg/ml、16 μg/ml、32 μg/ml丹参酮ⅡA作用A875细胞24 h、48 h,用MTT法检测丹参酮ⅡA对A875细胞增殖的影响;倒置显微镜观察细胞形态;Western blot法检测Caspase-3蛋白表达水平变化.结果 丹参酮ⅡA有抑制A875细胞增殖作用,并且呈明显的浓度、时间相关性;随药物作用时间延长,Caspase-3蛋白表达量逐渐升高.结论 丹参酮ⅡA促进Caspase-3高表达,诱导A875细胞凋亡,从而抑制细胞增殖.     

丹参酮ⅡA对人肝癌细胞HepG2生长的抑制及诱导凋亡的研究

目的研究丹参酮ⅡA对人肝癌细胞HepG2生长的抑制作用及诱导其凋亡的作用,探讨丹参酮ⅡA抑制肿瘤的作用机制。方法将丹参酮ⅡA配制成0．5μg／L、1．0μg／L、2．0μg／L、5．0μg／L、10．0μg／L的浓度,0μg／L为阴性对照。将肝细胞在不同浓度的丹参酮ⅡA中培养24h、48h、72h,采用MrITI’法检测丹参酮ⅡA对肝癌细胞HepG2的抑制情况,流式细胞仪检测细胞的周期和凋亡情况。结果相同的浓度．随着时间延长,吸光度逐渐下降,而同一时间,随着浓度的增加,吸光度也逐渐下降。相同浓度,随着时间的延长．丹参酮ⅡA对肝癌细胞HepG2生长的抑制率逐渐增加,相同时间,随着浓度的增加,丹参酮ⅡA对肝癌细胞HepG2生长的抑制率也逐渐增加。随着丹参酮ⅡA浓度的增加,G0／G1的比例逐渐升高（2．0μg／mL、5．0μg／mL、10．0μg／mL）,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。随着丹参酮ⅡA浓度的增加,细胞凋亡率逐渐升高．与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论丹参酮ⅡA对肝癌细胞HepG2的生长具有抑制作用,且具有时间和浓度依赖性,对凋亡的诱导作用具有浓度依赖性。