氯喹对内毒素血症小鼠的保护作用以及对细胞因子的影响

目的　探讨氯喹对内毒素血症小鼠的保护作用以及抑制内毒素引起的细胞因子释放情况。方法　清洁级昆明小鼠 40只 ,随机分为LPS、氯喹、氯喹 +LPS和对照组 ,每组动物 10只。LPS组 ,给予 10mg kg的LPS ;氯喹组 ,给予 2 0mg kg的氯喹 ;LPS +氯喹组在给予 2 0mg kg氯喹后 ,立即给予 10mg kg的LPS ;对照组给予注射用水 ,注射体积为 2 0 0 μl 2 0g。观察尾静脉给药后 7h内小鼠的死亡率。体外培养小鼠ANA 1细胞 ,观察培养体系中预先加入氯喹 3h后 ,不同浓度的LPS引起的TNF α、IL 6的释放情况。结果　氯喹可降低内毒素引起的小鼠死亡 ,死亡率由 10 0 %降低为 5 0 % (P <0 0 5 ) ;培养体系中预先加入氯喹后LPS引起的TNF α、IL 6的释放显著降低 ,尤其以IL 6的下降最明显 ,在LPS(4 0 μg ml)刺激组IL 6降幅可达 68倍之多。结论　氯喹对内毒素血症小鼠具有显著保护作用 ,可明显抑制内毒素引起的细胞因子释放 ,提示氯喹可能是治疗内毒素血症的有效药物     

LPS受体及作用机制研究进展

内毒素系大肠杆菌等G-细菌细胞壁结构成分之一,为脂多糖(lipopolysaccharide,LPS),由亲水性的多糖(O特异性多糖,核心多糖)及疏水性的类脂LipidA构成。其中LipidA由2个葡萄胺、磷酸盐和一定量的脂肪酸构成,是LPS结构中最稳定的部分,无种属特异性,是LPS的主要生物活性成分。众多研究表明,脂多糖(LPS)是介导革兰氏阴菌脓毒症的重要启动因子,通过其结合受体或调节蛋白的作用,诱导宿主多种细胞因子的合成和释放,触发机体一系列病理生理过程。近年来,这一领域的研究取得了突破性进展,即认识到脂多糖结合蛋白(LBP)及脂多糖的受体CD14系统…     

视网膜小胶质细胞活化模型的建立

目的: 建立视网膜小胶质细胞培养、纯化和鉴定的方法,以观察视网膜小胶质细胞活化后的形态和功能变化,探讨活化的小胶质细胞在糖尿病视网膜病变时的可能作用. 方法: 以细菌内毒素脂多糖(LPS)活化小胶质细胞,通过免疫细胞化学及con-focal显微镜技术、流式细胞术、MTT、ELISA等方法观察视网膜小胶质细胞形态、数量和功能的变化. 结果: 视网膜小胶质细胞纯度在96%以上,LPS激活的小胶质细胞发生形态改变,CD11b表达上调,释放细胞因子TNF-α,而细胞数量无明显改变. 结论: 从细胞免疫表型、纯度、形态学和分泌功能等方面都证明,本方法是一种稳定、高效的小胶质细胞分离纯化方法.     

细胞凋亡与内毒素性肝损伤

内毒素(endotoxin)是革兰阴性细菌细胞壁外层成分,其主要化学成分并对机体产生毒性作用的成分是脂多糖(lipopolysaccharide,LPS).LPS可刺激几乎所有的真核细胞发生形态、代谢和基因表达变化,导致宿主细胞因子失控性表达,介导严重感染,多脏器损伤,内毒素血症,内毒素性休克等多种疾病的发生发展.     

TET2上调IRAK-M表达促进巨噬细胞内毒素耐受

目的：研究TET2蛋白（ten-eleven translocation 2）对巨噬细胞白介素-1受体相关激酶-M（interleukin-1 receptor-asso－ciated kinase-M,IRAK-M）表达的影响,探讨细菌内毒素（endotoxin/lipopolysaccharide,LPS）刺激诱导TET2表达的上游信号通路。方法：用LPS刺激小鼠巨噬细胞系RAW264.7诱导内毒素耐受,qPCR和Western blot检测LPS刺激不同时间点和内毒素耐受时IRAK-M和TET2表达;用siRNA干扰TET2表达,qPCR和Western blot检测对IRAK-M表达的影响;用促分裂原活化的蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）信号通路抑制剂预处理细胞,再用LPS刺激,qPCR和Western blot检测对TET2表达的影响。结果：TET2蛋白和IRAK-M在LPS刺激RAW264.7细胞诱导内毒素耐受后仍持续表达,且表达模式都和细胞因子表达模式相反;干扰TET2表达抑制IRAK-M mRNA（P=0.000）和蛋白水平表达;抑制MAPK信号通路抑制TET2表达。结论：巨噬细胞炎症反应过程中MAPK信号通路上调TET2表达,TET2通过促进IRAK-M表达促进内毒素耐受。     

LPS所介导的信号转导通路研究进展

LPS是革兰氏阴性细菌的细胞壁主要组成成分，对LPS的识别与信号转导是机体自身防御反应的重要环节，同时也是导致内毒素性休克、全身炎症反应综合征和多器官功能衰竭等疾病的重要机制。LPS可通过LPS-LBP-sCD14三联复合物作用于TLR4并激活MyD88，活化的MyD88可聚集并结合IRAK1和IRAK2，然后作用于肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6），进一步激活MAPK和NF-κB信号转导通路。活化的MAPK和NF-κB信号转导通路是LPS所导致的细胞反应与炎症细胞因子如TNF-α，IL-6和1L-8等产生的重要分子机制。     

中药抗炎作用与细胞因子

抗炎中药有抗炎、改善血液循环及免疫调解功能,这与抑制炎性细胞产生炎性细胞因子有关;对炎细胞合成分泌细胞因子有双向调解作用;显著抑制由内毒素（脂多糖,LPS）诱导或未经LPS诱导的人巨噬细胞（MΦ）释放炎性细胞因子;具有稳定溶酶解,抑制脂质过氧化反应及减少肿瘤坏死因子（TNF）释放的作用,尚可通过影响内钙离子浓度,减少细胞因子的分泌合成达到抗炎目的。     

多粘菌素B拮抗内毒素的体外作用研究

目的探讨多粘菌素B(PMB)对内毒素(LPS)的亲合、中和能力,以及体外抑制LPS作用的时效和量效关系.方法应用鲎试剂动态浊度法测定PMB对LPS的中和能力;应用生物传感器技术测定PMB与Lipid A的亲和力;并测定PMB对LPS刺激的人PBMC释放TNF-α、IL-6的抑制作用.结果PMB具有较强的LPS中和能力,其IG50约为4.35±0.91μmol/L;与Lipid A具有很高的亲和力,其解离平衡数(kinetic dissociation constant,KD)=1.11×10-8mol/L;10μg/ml的PMB能够明显抑制100ng/ml LPS刺激的人PBMC释放TNF-α、IL-6的释放(P＜0.05),并具有明显的量效关系;在LPS刺激PBMC前应用PMB,细胞因子释放的抑制率达95%以上,但在LPS刺激后10min,PMB即失去了对细胞因子的抑制作用(P＞0.05).结论PMB具有较强的内毒素结合及中和能力,并呈剂量和时间依赖性地抑制内毒素刺激的人PBMC释放炎性介质.     

杂志信息

解放军第三军医大学西南医院烧伤研究所府伟灵等,为探讨因细菌内毒素释放入血引起的体内系列细胞因子和介质高水平表达,及其引发休克和多器官衰竭的致病过程与防治措施,在动物实验基础上,对墙抗内毒素脂A制剂的临床应用进行了研     

内毒素致急性肺损伤发病机制研究进展

内毒素(LPS)是临床上引起急性肺损伤和急性呼吸窘迫综合征的重要原因。它直接损伤肺泡细胞是特殊机制;它激活机体导致肺部损伤引起炎性细胞在肺部聚集以及释放各种炎性介质与细胞因子是关键的发病机制;而LPS引起的肺部凝血与纤溶系统失衡均是重要的发病机制。近年来一些新分子的发现,进一步阐明LPS介导急性肺损伤的发病机制。     

金盏花苷E通过ROS介导的JAK1-stat3信号途径抑制LPS诱发的炎症反应

目的探讨金盏花苷E对脂多糖（LPS）诱导炎症反应的抑制作用及可能的分子机制。方法CCK-8实验检测不同浓度（0、 2、4、6、8、10、20、25、30 μg/mL）的金盏花苷E对RAW264.7 细胞活力的影响;不同浓度的金盏花苷E（0、6、8、10 μg/mL）预处理 RAW264.7细胞2 h,然后用LPS（100 ng/mL）刺激细胞特定的时间,ELISA检测炎症因子TNF-α、IL-1β释放;Western blotting检 测iNOS、COX-2的表达水平及JAK-stats、MAPKs及NF-кB信号途径的磷酸化;ROS检测试剂盒检测RAW264.7 细胞内ROS含 量;激光共聚焦实验检测转录因子stat3的核转位。结果CCK-8结果显示,金盏花苷E浓度在低于20 μg/mL时对RAW264.7细 胞无明显毒性作用;金盏花苷E浓度依赖性地下调LPS诱导的iNOS和COX-2的表达（P<0.01 vs LPS组）;抑制LPS诱导的促炎 细胞因子TNF-α及IL-1β的释放,且1 0 μg/mL组抑制作用尤为显著（P<0.01 vs LPS组）;抑制LPS诱导的JAK1-stat3信号途径激 活及stat3的核转位;降低LPS诱发的ROS产生（P<0.01 vs LPS组）。结论金盏花苷E通过抑制ROS介导的JAK1-stat3信号途 径,抑制LPS诱导的炎症反应。     

普伐他汀钠对LPS诱导的中性粒细胞NE释放及活性的影响

目的 研究普伐他汀钠对细菌脂多糖( LPS)诱导的人外周血中性粒细胞弹性蛋白酶( NE)释放及活性的影响.方法 采用Ficoll密度梯度离心法分离培养人外周血中性粒细胞,瑞氏染色法鉴定中性粒细胞及胞内嗜天青颗粒,使用LPS刺激中性粒细胞脱颗粒,提取细胞上清液,应用比色法检测上清液中过氧化物酶( MPO)活性以确定合适的刺激时间和浓度后,给予中性粒细胞LPS刺激同时予以普伐他汀钠处理,使用ELISA法检测细胞培养上清液NE含量,比色法检测NE活性.结果 LPS刺激后中性粒细胞培养上清液中NE的含量和活性均明显增高.普伐他汀钠处理后的细胞培养上清液中NE明显降低(P＜0.05).结论 普伐他汀 钠能降低LPS刺激导致的中性粒细胞脱颗粒,降低NE释放量及其活性.     

心血管细胞保护分子机制研究的新进展

心血管系统细胞保护的概念是80年代早期逐步形成的.细胞保护奠基人Rober将其定义为:某些因子和药物(也称细胞保护剂)并不通过改变器官组织的血流量起作用,而是直接增强组织细胞对内环境紊乱(缺血、缺氧、中毒、酸碱失衡等)的耐受力或抵抗力而起保护作用.缺血-再灌注损伤现象的发现使人们认识到,单纯恢复血流不足以治疗心肌缺血,而需同时采取细胞保护措施防止缺血-再灌注损伤.因此,心血管系统的细胞保护问题更加受到重视.细胞受损伤时内源性的保护系统首先发挥强大的抗凋亡和抗氧化作用.了解其内在的保护机制,通过药物调动机体内在的保护分子的活性来保护心血管系统有很好的临床应用前景.本文旨在从分子角度探讨心血管系统内源性细胞保护的机制.     

普伐他汀抑制C-反应蛋白诱导的HUVEC细胞合成TNF-α和IL-6

目的:观察C-反应蛋白(CRP)刺激对人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)分泌功能的影响。方法:体外培养HUVECs,检测细胞对CRP诱导的反应以及普伐他汀干预效应。酶联免疫吸附试验检测培养液上清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)的水平。电泳漂流技术(EMSA)检测细胞核提取物中NF-κB与DNA的结合活性。结果:TNF-α和IL-6的水平随CRP刺激浓度的升高而增加,呈剂量依赖性(0-100 mg/L),在5 mg/L CRP时即可检测到TNF-α和IL-6表达,100 mg/L CRP时可见最大效应。50 mg/L CRP呈时间依赖性增加TNF-α和IL-6的表达(0-48 h),24 h达高峰。普伐他汀有效抑制CRP诱导的NF-κB激活和炎症因子表达。结论:CRP剂量依赖性激活血管内皮细胞的炎症因子表达,其中NF-κB途径被激活,参与致动脉粥样硬化作用;他汀类药物能有效抑制该途径,发挥抗炎及抗动脉粥样硬化作用。     

脂多糖激活p38在诱导肿瘤坏死因子α基因表达中的作用

目的探讨防治内毒素休克的新方法,研究脂多糖（ＬＰＳ）诱导肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）表达的分子机制。方法用蛋白激酶活性测定检测ＬＰＳ刺激引起的激酶活性变化;共聚焦激光扫描技术显示ｐ３８激活移位;用反转录聚合酶链反应和报告基因系统研究ＴＮＦα基因转录的分子机制。结果发现ＬＰＳ刺激ＲＡＷ细胞引起ｐ３８激活并由胞浆移位至胞核。ＬＰＳ刺激引起ＴＮＦαｍＲＮＡ表达增加,而且由ＬＰＳ引起的ＴＮＦα的转录活性可被ｐ３８特异性抑制剂所抑制。结论激活的ｐ３８通过磷酸化转录因子增加ＴＮＦα基因转录活性,这是中毒性休克时ＴＮＦα生成增加的一个重要机制。ｐ３８是ＬＰＳ诱导ＴＮＦα基因表达的重要调节物质。     

金黄色葡萄球菌诱导小肠上皮细胞炎性反应及凋亡作用的观察

目的观察研究小肠上皮细胞Caco-2细胞对金黄色葡萄球菌感染的反应。方法采用细胞内菌落技术法推算Caco-2细胞内吞金黄色葡萄球菌的能力,采用Realtime-PCR法检测Caco-2细胞NOD2基因在金黄色葡萄球菌感染时的表达情况,采用ELISA、流式细胞术等方法观察Caco-2细胞在金黄色葡萄球菌感染时细胞因子分泌水平,核转录因子(nuclear factorκB,NF-κB)活化水平和细胞凋亡发生率。结果 Caco-2细胞能够内吞金黄色葡萄球菌,金黄色葡萄球菌感染可引起Caco-2细胞内NOD2表达增高,NF-κB活化水平增高,分泌细胞因子水平升高,Caco-2细胞发生凋亡,且凋亡率随感染后时间延长增高。结论金黄色葡萄球菌能够激活Caco-2细胞的免疫反应,细胞内模式识别受体NOD2在识别细胞内细菌、信号传导、核转录因子激活中发挥关键作用。     

慢性疼痛中脊髓小胶质细胞激活机制的研究进展

 慢性疼痛中,神经元-脊髓小胶质细胞间的信号分子可以激活脊髓小胶质细胞,而激活的脊髓小胶质细胞可以释放多种与慢性疼痛有关的活性物质。实验研究表明,脊髓小胶质细胞表面受体的上调及细胞内激酶的激活在细胞的激活和慢性疼痛的发生和发展中起重要作用。     

异丙酚对脂多糖诱导人脐静脉内皮细胞内皮源型一氧化氮合酶基因启动子转录活性的影响

目的 探讨异丙酚对脂多糖(LPS)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)内皮源型一氧化氮合酶(heNOS)基因启动子转录活性的影响.方法 以基因重组技术构建heNOS基因启动子区(-1～-1600 bp)驱动的萤火虫荧光素酶报告基因载体pGL2-Basic,得到质粒peNOS-Luc.采用脂质体介导的细胞基因共转染技术将peNOS-Luc、空载体pGL2-Basic和?-半乳糖苷酶表达质粒pCMV-?共转染HUVEC,用LPS、LPS 异丙酚和LPS 转移生长因子?1(TGFb1)分别刺激转染后的HUVEC,检测并比较荧光素酶/?-半乳糖苷酶活性,以确定LPS、异丙酚和TGF?1对heNOS基因启动子转录活性的影响.结果 (1)酶切和测序结果均证实重组载体peNOS-Luc构建正确;(2)重组载体peNOS-Luc在HUVEC中有效表达;(3)与未加刺激组比较,LPS刺激组heNOS启动子的转录活性降低.与LPS刺激组比较,LPS 异丙酚和LPS TGF?1组heNOS启动子的转录活性增强.结论 异丙酚能明显增强heNOS基因启动子的转录活性,可初步证实异丙酚在转录水平通过上调heNOS基因启动子的转录活性而影响NO的生成和释放,这可能是异丙酚防治LPS诱导引起炎症反应的机制之一.     

Activation of p~(38) mitogen activated protein kinase induced by lipopolysaccharide and its role in TNF a gene expression

Mitogen--activatedproteinkinase(MAPKs)aremajormediatorsineukaryoticcellstotransductextracellularsignalsintocellularresponses['].Thereareatleast4subgroupsofMAPKsidentifiedinmammaliancells:extracellularsignal--regulatedkinase(ERK),c--JunN--terminalkinase(JNK)orstressactivatedproteinkinase(SAPK),ERKSorBMK1andp38['"].MAPKsareactivatedbyvariousstimulitomediatemanycellularprocessesorresponses,includingcellgrowth,death,cellcycle,inflammationandstressresponses,elc.[l.31.ActivationofMAPKs…