慢性粒细胞白血病smac和survivin基因表达及意义

目的 检测慢性粒细胞白血病(CML)病人smac和survivin mRNA的表达情况,以探讨其在CML病情进展及预后中的意义.方法 应用半定量RT-PCR技术检测71例CML病人和10名健康者上述基因的表达.结果 smac和survivin mRNA在CML病人的阳性表达率分别为90.1%、63.4%,均明显高于正常对照组(χ2=22.176、6.773,P＜0.01、0.05),二者在CML的加速期、急变期的表达水平明显高于慢性期(t=10.708～16.725,P＜0.01),且二者在CML病人的表达水平呈正相关(r=0.833,P＜0.01).结论 smac和survivin基因与CML的病情进展密切相关,是监测CML病情进展及判断预后的有价值的分子标记物.     

慢性粒细胞白血病病人Mcl-1和Bcr/Abl基因表达

目的 探讨慢性粒细胞白血病(CML)病人Mcl-1基因和Bcr/Ab1融合基因的表达水平及临床意义.方法 应用实时荧光定量PCR技术检测了41例CML病人(包括慢性期15例、加速期6例、急变期6例、伊马替尼治疗后遗传学完全缓解8例及非伊马替尼治疗的未缓解的CML病人6例)骨髓标本Mcl-1基因、Ber/Abl融合基因的表达水平,以10例正常人作为对照.结果 CML各组Mcl-1和Ber/Abl mRNA的表达水平差异均有显著性(X<'2>=19.12～36.08,P<0.05).伊马替尼治疗组与正常对照组Mcl-1 mRNA的表达明显低于其他各组(Z=2.547～3.254,P<0.05);加速期、急变期及非伊马替尼治疗组之间Mcl-1 mRNA的表达水平差异无显著性(Z=0.481～1.922,P>0.05),但均明显高于慢性期(Z=2.650～3.465,P<0.05).Bcr/AblmRNA在慢性期、加速期、急变期及非伊马替尼治疗组之间表达差异无显著性(Z=0.480～1.196,P>0.05).CML病人Mcl-1与Ber/AblmRNA的表达水平呈正相关(r=0.68,P<0.05).结论 Mcl-1和Ber/Abl与CML的病情密切相关,参与CML的发生和发展,是判断病情进展及预后的分子标记物.     

慢性粒细胞白血病的不同病期PTEN表达及其相关性研究

目的探讨抑癌基因PTEN在慢性粒细胞白血病（CML）病情进展及预后中的意义。方法应用半定量RT-PCR和免疫组化技术分别检测55例CML患者和16例慢性再生障碍性贫血（CAA）及10例正常对照者（正常对照组）骨髓单个核细胞（BMMNC）中PTEN的表达情况。CML患者中慢性粒细胞白血病慢性期（CML-CP）29例（慢性期组）,慢性粒细胞白血病加速期（CML-AP）9例（加速期组）,慢性粒细胞白血病急变期（CML-BC）17例（急变期组）。分析PTEN与外周血白细胞数及Bcr/bal融合基因的关系,追踪疾病的转归。结果 PTEN基因阳性表达在对照组CAA 82.33%与正常人90%,两者比较差异无统计学意义（P〉0.05）。55例CML患者PTEN阳性表达57.41%明显低于对照组,差异有统计学意义（P〈0.01）。PTEN表达在慢性期组、加速期组、急变期组均明显低于正常对照组（P〈0.05）。加速期及急变期的表达低于慢性期（P〈0.05）,在加速期和急变期的表达虽降低,但两者的差异无统计学意义（P〉0.05）。各期PTEN表达与Bcr/bal融合基因无相关性,与患者外周血白细胞数呈正相关性（r≈0.50）。结论 PTEN参与了CML的发生、发展,且与CML的急变有一定相关性,PTEN基因可以作为CML病情进展及判断预后的有价值的分子标志物。     

慢性粒细胞白血病患者血浆nm23-H1蛋白水平的检测

目的探讨分化抑制因子nm23-H1蛋白在慢性粒细胞白血病（CML）患者中的表达和临床意义。方法采用酶联免疫法检测72例慢性粒细胞白血病（CML）患者和36例健康对照组血浆中nm23-H1蛋白的含量。结果CML慢性期（CML-CP）血浆nm23-H1蛋白水平与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）;加速期（CML-AP）和急变期（CML-BP）明显高于对照组（P〈0.01）,CML-BP明显高于CML-AP组（P〈0.01）。结论提示在CML中,血浆nm23-H1蛋白表达水平的检测可能有助于CML的病情进展、临床分期及预后判断。     

X连锁凋亡抑制蛋白及其相关因子1在慢性粒细胞白血病中的表达研究

目的 观察X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)及XIAP相关因子1(XAF1)在慢性粒细胞白血病(CML)中的表达情况,评估其在CML诊断及预后分析中的应用价值.方法 选取CML患者42例,其中慢性期24例(CML慢性期组),进展期18例(CML进展期组,其中加速期7例,急变期11例).应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测患者骨髓细胞XIAP及XAF1 mRNA表达水平.对照组为非恶性血液病患者21例(非恶性血液病组)及急性白血病(AL)患者28例(AL组).结果 CML进展期组患者骨髓中XIAP mRNA表达水平高于CML慢性期组(P＜0.01)和非恶性血液病组(P＜0.01);而CML进展期患者骨髓中XAF1 mRNA表达水平低于CML慢性期(P＜0.05)和非恶性血液病组(P＜0.01);化疗后获得骨髓缓解的CML患者骨髓中XIAP mRNA的表达水平显著低于化疗前,而XAF1 mRNA的表达水平显著高于化疗前;XIAP mRNA及XAF1 mRNA表达水平之间呈负相关.结论 CML患者进展期XIAP及XAF1的联合检测及动态观察可作为CML临床辅助诊断、分期及预后判断的指标之一.     

儿童急性白血病survivin基因表达及临床意义

目的探讨儿童急性白血病（AL）survivin基因的表达及其临床意义。方法用逆转录多聚酶链式反应技术（RT—PCR），对42例AL患儿和13例完全缓解AL（AL—CR）患儿及15例非恶性疾病患儿骨髓进行survivin基因表达的检测。结果Survivin基因的表达在AL组明显高于对照组和完全缓解组（P〈0．01），复发组高于初发组（P〈0.01）；survivin基因在AL的高危组和标危组中的表达有显著性差异（P〈0．01）；化疗后达完全缓解的患者survivin表达水平与治疗前及治疗后均明显低于未能缓解者（P均〈0．05）。结论儿童AL的发生发展可能与survivin基因的过度表达密切相关，可作为化疗疗效的观察指标；survivin高表达者易复发，可作为估计预后的指标之一。     

血小板血管生成调节蛋白在慢性粒细胞白血病中的研究

目的：探讨血小板血管生成调节蛋白在慢性粒细胞白血病（CML）病程中的变化及其预后意义。方法：用ELSIA检测CML患者及正常对照组乏血小板血浆（PPP）和血小板提取液中血管生成调节蛋白血管内皮生长因子（VEGF）的浓度。结果：VEGF浓度在PPP和血小板提取液中均表现为CML组明显高于正常对照组（P〈0.05）;在CML组内则表现为急变期显著高于慢性期和加速期（P〈0.01）;VEGF水平在血小板提取液中明显高于PPP。结论：CML各期血小板提取液中VEGF水平较PPP内变化更敏感,且随病情发展而增高,其变化有助于监测CML的病情进展和预后判断。     

肺癌患者survivin基因及P-选择素表达及其相关性研究

目的：探讨survivin基因及P选择素的表达在肺癌发生、发展中的作用及其相互关系。方法：对38例肺癌和相应的癌旁组织，用RT—PCR技术检测肺癌组织及癌旁正常组织survivin的表达，用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白一过氧化物酶法（S—P法）检测P选择素表达。结果：38例肺癌组织中有24例（63．16％）survivin表达阳性，而38例癌旁组织均无survivin基因表达，两组比较，差异有极显著性（P〈0．01）。TNM分期Ⅲ期病例中有survivin mRNA表达阳性率94．44％（17／18）高于Ⅰ期十Ⅱ期病例的35％（7／20），差异有非常显著性（P〈0．01）；P选择素的表达与survivin呈正相关。结论：survivin基因及P选择素的表达可能在肺癌发生、发展及预后中发挥着重要作用。     

TGF-β1 mRNA在肺腺癌组织中的表达

目的 通过检测转化生长因子β1（TGF-β1）在肺腺癌中的表达水平,探讨其与肺腺癌分化程度、TNM分期及预后等的相关性。方法 应用TaqMan探针,GAPDH为内参照,建立实时荧光定量PCR反应体系,对TGF-β1 mRNA在肺腺癌中的表达进行检测。结果 肺腺癌组织中TGF-β1 mRNA表达水平显著高于癌周正常肺组织（t=10.46,P〈0.01）,TGF-β1的表达与淋巴结转移及TNM分期有关（t=2.94、2.39,P〈0.01、0.05）,并且随病人术后生存期的延长,TGF-β1表达水平有降低的趋势。结论 TGF-β1 mRNA高表达对肺腺癌的进展及转移起促进作用,可作为判断肺腺癌病人预后的指标。     

卵巢子宫内膜异位症组织中PTEN基因mRNA及蛋白表达的研究

目的探讨卵巢子宫内膜异位症组织中PTEN基因mRNA及蛋白的表达及其临床意义.方法应用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测卵巢子宫内膜异位症组织和正常卵巢组织中PTEN基因外显子1-9和5-9的mRNA表达水平,免疫组织化学方法检测其蛋白表达,同时结合病人的临床资料进行分析.结果卵巢子宫内膜异位症组织中PTEN外显子1-9、5-9 mRNA相对表达水平高于正常卵巢组织,差异有显著性（P〈0.01,P〈0.05）.卵巢子宫内膜异位症组织中PTEN mRNA表达水平与病人年龄、囊肿大小无关（P〉0.05）.与临床分期有关（P〈0.05）.卵巢子宫内膜异位症组织中Ⅰ～Ⅱ期有2例细胞核PTEN蛋白呈中等染色表达,与正常卵巢组织中PTEN蛋白的表达比较差异无显著性（P〉0.05）.结论 PTEN mRNA及蛋白表达水平的异常可能是卵巢子宫内膜异位症发生的早期事件.     

急性白血病病人白血病细胞Survivin基因的表达及其临床意义

目的观察Survivin基因在急性白血病（AL）病人白血病细胞中的表达,并分析其与预后关系。方法应用RT-PCR方法检测62例不同时期AL病人白血病细胞Survivin mRNA的表达情况,以10例健康人作为对照。结果62例AL病人白血病细胞Survivin mRNA阳性表达率为72．58％。ALL细胞Survivin mRNA阳性表达率（76．5％）与ANLL细胞（71．1％）比较差异无显著性,二者均高于正常对照组（x^2=6．01、7．02,P〈0．05）。初治和复发AL病人白血病细胞Survivin mRNA阳性表达率分别为78．95％、85．71％,明显高于对照组（x^2=．77、9．77,P〈0.05）。白血病细胞Survivin mRNA表达阴性者接受1个疗程化疗后骨髓缓解率（BMR）为77．78％,明显高于阳性表达者的31．03％（x^2=9,P〈0.05）。结论Survivin基因表达在白血病细胞的增殖分化和（或）抗凋亡过程中发挥了重要作用,可能是导致AL细胞对化疗药物不敏感的原因之一,Survivin基因可作为靶向白血病治疗的一个潜在靶点。     

沉默survivin对增加晚期宫颈癌基因放疗效果的实验研究

目的探讨survivin表达抑制与晚期宫颈癌放疗敏感性的关系。方法设计并构建靶向survivin的shRNA真核表达载体（psh-svv）,转染宫颈癌Hela细胞,用实时PCR法检测RNA干扰（RNA interference,RNAi）后survivin mRNA的表达,用Western blot检测survivin蛋白表达,观察survivin基因沉默后放射线对Hela细胞生长活性的作用,转染psh-svv对Hela细胞凋亡的影响,裸鼠移植瘤生长速度及对放射线敏感性的变化。结果测序结果证实载体构建成功。转染psh-svv的实验组survivin mRNA表达明显低于3个对照组,差异具有统计学意义（P〈0.05）。实验组survivin蛋白表达亦明显低于3个对照组,差异具有统计学意义（P〈0.05）。放疗后72h实验组细胞生长抑制率明显高于3个对照组,差异具有统计学意义（P〈0.05）。实验组caspase-3活性显著高于其他3组（P〈0.05）。survivin基因沉默后,裸鼠移植瘤生长速度减慢,survivin低表达的实验组小鼠对放射线敏感。结论 psh-svv通过RNAi有效降低宫颈癌Hela细胞survivin的表达,抑制Hela细胞增殖,诱导凋亡,增加Hela细胞对放射线的敏感性。     

survivin基因在人原发性肝癌组织中的表达及其意义

目的： 探讨survivin基因在人原发性肝癌发生发展中的作用及可能的机制。方法：应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测15例原发性肝癌患者的肝癌组织、癌旁组织及肝正常组survivin基因及相关基因c-myc、p53、STAT3和VEGF的mRNA表达水平，应用Western blotting法及免疫组织化学染色法检测上述组织中survivin基因的蛋白表达水平及其定位。结果： 肝癌组织及癌旁组织中survivin基因mRNA的表达量均显著高于正常肝组织（P<0.01）, 肝癌组织中survivin基因mRNA的表达量明显高于癌旁组织（P<0.01），肝癌及癌旁组织中c-myc、 STAT3、VEGF基因mRNA的表达量均显著高于正常肝组织（P<0.01），而p53基因mRNA的表达量显著低于正常肝组织（P<0.01）。肝癌组织及癌旁组织中survivin基因的蛋白表达水平均显著高于正常肝组织（P<0.01），且肝癌组织中survivin基因的表达水平显著高于癌旁组织（P<0.01）。结论:survivin基因的异常表达在肝癌的发生发展中起促进作用，可作为治疗的理想靶点。     

Real-time PCR定量血型糖蛋白C基因在儿童急性淋巴细胞白血病不同阶段外周血表达水平

目的探讨儿童急性淋巴细胞白血病不同阶段蛋白C（GYPC）基因的表达水平。方法选取我院2007年9月至2010年5月小儿血液病房患儿。应用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）的方法,检测初治患儿、缓解患儿、复发患儿及正常对照儿童GYPC基因的表达。结果初治患儿GYPC表达水平明显高于正常对照组（P〈0.01）和完全缓解组（P〈0.01）;完全缓解后GYPC表达水平与对照组差异无统计学意义（P〉0.05）,复发患儿GYPC表达水平不仅高于正常对照组（P〈0.01）和完全缓解组（P〈0.01）,也高于初治组（P〈0.01）。结论糖蛋白C的表达水平随儿童急性淋巴细胞白血病的病情发展而变化,GYPC可以作为监测病情、判断疗效、预测复发、评估预后的一个新指标;糖蛋白C高表达可能是患儿的不利因素,有此表达者疗效差,易复发。     

骨肉瘤组织中survivin与VEGF的表达及相关关系的研究

目的检测survivin与VEGF在骨肉瘤中的表达,探讨二者对骨肉瘤血管生成和转移的作用及其关系.方法采用原位杂交、免疫组织化学技术检测38例骨肉瘤组织survivin mRNA表达及VEGF、CD34蛋白表达,计数微血管密度(MVD)、,并与主要临床病理参数进行比较.结果骨肉瘤中survivin mRNA和VEGF表达率均为65.8%,二者表达呈正相关(r=0.546,P＜0.01);骨肉瘤MVD均值为71.5(28～152),高MVD组survivin表达率显著高于低MVD组(P＜0.01).骨肉瘤中survivin mRNA、VEGF表达及MVD与组织学分级无关,与组织学分型(WHO分型)和转移有关.结论survivin基因选择性高表达于骨肉瘤组织,通过抑制细胞凋亡,参与骨肉瘤的发生发展;其对骨肉瘤血管生成和转移的作用可能与VEGF存在密切相关;survivin可能是评价骨肉瘤预后的重要参考指标.     

SHP-1与c-kit基因在慢性髓系白血病中表达水平的研究

目的探讨造血细胞磷酸酶（SHP-1）基因、c-kit基因在慢性髓系白血病患者中的表达及其与白血病转化和预后的关系。方法用半定量逆转录-聚合酶链反应法检测SHP-1 mRNA、c-kit mRNA分别在慢性髓系白血病慢性期、急变期及正常对照组中的表达。结果慢性期和急变期SHP-1 mRNA的表达均低于正常对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）,慢性期和急变期比较差异无统计学意义（P〉0.05）。慢性期和急变期c-kit mRNA的表达均高于正常对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）,急变期c-kit mRNA的表达均高于慢性期,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 SHP-1基因与c-kit基因可作为判断慢性髓系白血病患者转归及预后的指标。     

非小细胞肺癌survivin和增殖细胞核抗原表达的意义

目的：检测非小细胞肺癌（NSCLC）组织中survivin蛋白和增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白的表达及探讨其临床病理学意义。方法：采用免疫组织化学SP法,分别检测43例NSCLC组织、15例正常支气管上皮组织中survivin和PCNA蛋白的表达。43例均随访或追观5年以上。结果：NSCLC的survivin阳性表达率（79.1%,34/43）明显高于正常支气管上皮组织阳性表达率（13.3%,2/15）(P＜0.01）;Ⅲ期survivin表达明显高于Ⅰ+Ⅱ期（P＜0.05）;Survivin++～+++组的生存期明显较survivin－～+组短;Survivin的表达与其它临床病理参数均无明显关系（P＞0.05）。NSCLC的PCNA增殖指数显著高于正常支气管黏膜上皮组织（P＜0.01）;增殖指数与肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期呈正相关（P＜0.01）,与生存期呈负相关（P＜0.01）。增殖指数与其它临床病理参数均无明显关系（P＞0.05）。Survivin蛋白++～+++组中,增殖指数明显高于survivin－～+组（P＜0.05）。结论：Survivin和PCNA蛋白过度表达与NSCLC的发展、预后有密切关系,可作为临床评估NSCLC的进展及判断其预后的重要指标之一。Survivin在NSCLC中表达上调,与细胞增殖关系密切,提示survivin对肺癌的发生发展起重要作用。     

Smac和Survivin基因在急性白血病中的表达及临床意义

目的 检测急性白血病(AL)患者Smac、Survivin基因mRNA的表达,以探讨其与AL的发生、发展、疗效及预后的关系.方法 采用RT-PCR技术检测74例AL患者Smac、Survivin基因mRNA的表达情况.10例健康人作为对照组.K562细胞株为阳性对照.结果 4组阳性率及Smac mRNA、Survivin mRNA表达水平比较均有统计学意义(P<0.01);初诊组、复发组高于对照组和完全缓解组(P<0.05);初诊组与复发组、对照组与完全缓解组之间则无统计学意义(P>0.05).治疗后,Smac、Survivin阴性表达者其完全缓解率明显高于阳性表达患者(P<0.05).2种基因mRNA表达水平呈正相关关系(r=0.828,P<0.01).结论 2基因的表达与AL发生、发展相关,是监测病情进展及判断预后的重要分子标志物;二者的表达与化疗药物的敏感性密切相关,可能是导致AL细胞对化疗药物不敏感的原因之一.     

Cyr61基因与慢性粒细胞白血病的相关性研究

目的探讨慢性粒细胞白血病（CML）患者骨髓单个核细胞(BMMNC)中富半胱氨酸61基因（Cyr61）的表达水平及其临床意义。方法应用半定量RT PCR和免疫组化技术分别检测38例CML患者和10例正常对照者（正常对照组）骨髓单个核细胞中Cyr61mRNA和蛋白水平的表达情况,CML患者中慢性期20例（慢性期组）,加速期11例（加速期组）,急变期7例（急变期组）。结果38例CML患者中,慢性期组、加速期组、急变期组Cyr61mRNA的表达明显高于正常对照组(P＜0.05)。Cyr61基因在加速期及急变期的表达高于慢性期(P<0．05),Cyr61基因在加速期和急变期的表达虽升高,但两者差异无统计学意义(P>0．05)。Cyr61蛋白在CML中的表达明显高于正常对照组,CML加速期和急变期中Cyr61蛋白的表达高于慢性期（P均<0．05）。结论Cyr61基因参与了CML的发生、发展过程,且与CML的急变有关,可作为预示CML急变的实验依据。     

乳癌组织COX-2、ER和PR蛋白表达及其意义

目的分析环氧化酶-2（COX-2）、雌激素受体（ER）和孕激素受体（PR）蛋白在乳癌组织中的表达及其与临床病理特征及生存率的关系。方法采用免疫组织化学和组织芯片技术,检测96例乳癌组织中COX-2、ER和PR蛋白的表达情况,同时检测25例乳腺腺病组织中COX-2蛋白的表达情况。结果乳癌组织中COX-2蛋白的阳性表达率明显高于乳腺腺病的阳性表达率（χ2=24.84,P〈0.01）。乳癌组织中COX-2蛋白的阳性表达率与淋巴结转移明显相关（χ2=7.85,P〈0.01）,与ER、PR蛋白阳性表达率相关（2χ=4.60、5.65,P〈0.05）。乳癌组织中ER与PR蛋白的阳性表达率明显相关（χ2=26.86,P〈0.01）,PR蛋白阳性表达率与病人生存率显著相关（OR=0.74,P〈0.05）。结论 COX-2蛋白表达与乳癌病人的预后有关,而COX-2、PR蛋白是预测病人预后的关键因子之一。