醋酸棉酚与米索前列醇对离体培养的大鼠黄体细胞和人蜕膜细胞的影响

醋酸棉酚和米索前列醇对体外培养大鼠黄体细胞和人蜕膜细胞都有明显的损伤作用，呈现量-效相关性。棉酚单用对黄体、蜕膜细胞的LD50分别为1．27±0．09μg／ml和3．06±0．23μg／mg；但与来索5μg／ml（在黄体细胞），10μg／ml（在人蜕膜细胞）合用时，LD50分别降至0．89±0．25μg／ml和1．88±026μg／ml；与单用棉酚相比，有显著性差异。单用米索对黄体、蜕膜细胞的LD50各为14．29±1．29μg／ml和24．37±4．49μg／ml；但与棉酚0．5μg／ml（在黄体细胞），1．0μg／ml（在蜕膜细胞）合用时，分别下降为8．79±2．18μg／ml和17.29±1．56μg／ml，与单用米索相比，均有统计学差异，显示两药合用的协同效应。     

天花粉蛋白对体外无血清培养的人早期绒毛细胞滋养层细胞hCG，孕酮分泌的影响

本研究以体外无血清培养的人早期绒毛细胞滋养层细胞和绒毛组织培养为模型，测定了天花粉蛋白对滋养层细胞ｈＣＧ、孕酮分泌的影响，发现体外无血清培养的细胞滋养层细胞分泌的ｈＣＧ在天花粉蛋白浓度为０．１μｇ／ｍｌ即下降５０％，而后下降缓慢，８μｇ／ｍｌ以上方降为零，而绒毛组织培养在天花粉蛋白浓度为０．１μｇ／ｍｌ时ｈＣＧ下降近９０％，而后下降缓慢，至８μｇ／ｍｌ以上降到零，说明体外培养的细胞滋养层细胞中有两个群体，其中一个对天花粉蛋白敏感，另一个不敏感，尽管在形态上很难区别。孕酮的反应则不同，在细胞滋养层细胞和绒毛组织培养中，随天花粉蛋白浓度升高，孕酮分泌均缓慢下降，未出现两阶段下降过程。     

天花粉蛋白对体外无血清培养的人早期绒毛细胞滋养层细胞hCG,孕…

本研究以体外无血清培养的人早期绒毛细胞滋养细胞和绒毛细胞培养的模型，测定了天花粉蛋白对滋养层细胞ｈＣＧ，孕酮分泌的影响，发现体外无血清培养的细胞滋养层细胞分泌的ｈＣＧ在天花粉蛋白浓度为０．１μｇ／ｍｌ即下降５０％，而后下降缓慢８μｇ／ｍｌ以上缓慢，至８μｇ／ｍｌ以上降到零，说明体外培养的细胞滋养层细胞中有两个群体，其中一个对天花粉蛋白敏感，另一个不敏感，尽管在形态上很难区别，孕酮的反应则不同，在细     

肿瘤坏死因子-α对大鼠黄体细胞超氧化物歧化酶和丙二醛的影响

目的　细胞因子在黄体功能的调控中发挥重要作用。肿瘤坏死因子 -α (TNF -α)可抑制离体黄体细胞孕酮分泌并诱导细胞凋亡 ,但其具体机制尚不清楚。本研究探讨TNF -α在黄体退化中的可能机制。方法　采用大鼠离体黄体细胞培养体系 ,使用黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸反应法分别研究了不同浓度的TNF-α对黄体细胞超氧化物歧化酶 (SOD)活性和丙二醛 (MDA)含量的影响。结果　本实验制备的黄体细胞存活率在 90 %以上。 1ng/mlTNF -α可使离体培养 4h的黄体细胞SOD活性由 4 0 1± 4 8降低到 30 4± 6 2NU/ml (P<0 0 5 ) ,同时使MDA含量由 6 7 2± 5 3增高到 79 3± 9 2nmol/ml (P <0 0 5 )。结论　TNF -α可能通过降低SOD活性并增加MDA含量 ,影响黄体细胞的功能 ,参与黄体退化     

炔诺酮肟对大鼠抗着床抗早孕作用机理的形态学研究

大鼠从妊娠第一天开始每日灌服炔诺酮肟4mg/kg,共3天。结果能引起早孕大鼠黄体细胞滑面内质网减少;脂滴大量积贮;抑制卵巢3β-羟基甾体脱氢酶活性,从而使卵巢孕酮生物合成受阻。药物还能引起早孕大鼠子宫蜕膜的病理改变,蜕膜细胞出现变性,坏死,宫腔内大量出血,白细胞浸润,胚胎发育不良,蜕膜细胞内糖原及碱性磷酸酶含量均下降。本文还讨论了药物引起卵巢孕酮生物合成受阻与蜕膜变化的关系。     

RU_（486）对大鼠早、中期妊娠影响的研究

应用光、电镜方法观察ＲＵ４８６对早期和中期妊娠大鼠脑垂体、卵巢、子宫、胎盘及肝脏的影响。妊娠大鼠分别在受孕第７天（ｄ７）和第１０天（ｄ１０）给药１．２５ｍｇ／只。中期妊娠大鼠给药后２４ｈ全部流产，蜕膜坏死；４８ｈ子宫内膜修复正常。黄体细胞内脂滴增多、退变。血清孕酮水平低于对照组。早期妊娠大鼠给药后４８ｈ，个别胚胎发育与对照组相似，其余胚胎和胎盘均解体，其中２例子宫已修复。黄体和脑垂体促性腺激素细胞的结构及血清孕酮水平与对照组比较无明显差异。提示：ＲＵ４８６对大鼠抗中期妊娠效果比抗早孕好。     

α抑制素片段,酪氨酸,催产素,前列腺素F2α和雌激素对大鼠黄体？…

近期研究提示，黄体萎缩与细胞凋亡有关，但影响细胞凋亡的因素还不清楚。我们以往的工作表明，抑制素α亚单位－Ｎ末端片段－１－３２显抑制大鼠黄体细胞孕酮分泌。本研究应用ＰＭＳＧ－ｈＣＧ诱导大鼠的假孕模型进一步观察Ｐ＾３３以及其他因素对黄体细胞凋亡的作用。     

12种小分子肽对大鼠离体黄体细胞孕酮生成的影响

用放射免疫分析法测定大鼠离体黄体细胞孕酮含量,观察了人工合成的12种小分子肽对大鼠黄体细胞的影响。结果表明,Gly-Tyr-NH_2和Gly-Ser-Lys 有抑制黄体细胞基础孕酮分泌作用,还抑制hCG 诱导的孕酮分泌;Lys-Tyr-NH_2,Thr-Ser-Lys,Gly-Tyr-Lys 抑制hCG 诱导的孕酮分泌;(Gly-Tyr)_2=Lys 则增强基础及hCG 诱导的孕酮分泌;其余6种小分子肽(Gly-Gly,Gly-D—Tyr,Tyr-D—Tyr,Thr-Ser-Tyr,Thr-Asn-Tyr-Thr-NH_2,Tyr-Tyr-His-Lys-Ser),对大鼠黄体细胞孕酮分泌没有影响。同时讨论了其构效关系及可能的作用机制。     

顶体蛋白酶抑制剂KF-950对大鼠精子的影响

本文采用体外杀精实验检查ＫＦ－９５０对大鼠精子活力的影响和明胶底物膜法测定 ＫＦ－９５０对精子顶体蛋白酶活性的抑制作用。结果表明,ＫＦ－９５０与大鼠精液作用 ２０ ｓｅｅ 及 １２０ ｓｅｅ,最低杀精浓度分别为 １． ５６±０． １３ ｍｇ／ｍｌ和 ０． ７３±０． ０７ ｍｇ／ｍｌ,其杀精能力 明显低于壬苯醇醚（Ｐ＜０．０１）;当ＫＦ－９５０浓度为１× １０－１２ｍｇ／ｍｌ时,平均晕轮阳性率 （％）及平均晕轮直径（μｍ）分别为８３．００±７．１０及１８．２７±１．９４（与对照组比较Ｐ＜ ０．０１）,完全抑制浓度为 １×１０－３ｍｇ／ｍｌ。抑制平均晕轮阳性率和平均晕轮直径的半数有效 浓度ＥＤ５０分别为４．１５×１０－７ｍｇ／ｍｌ和２．３４×１０-7 ｍｇ／ｍｌ。本实验证明ＫＦ－９５０对精子顶 体蛋白酶具有高效抑制作用,而杀精子作用较弱,是一种新型的顶体蛋白酶抑制剂。     

分离和孵育大鼠黄体细胞的方法

本文介绍了用胰蛋白酶分散大鼠黄体细胞和培养的方法。未成年雌性大鼠用PMSG和hCG诱导超排卵后取得的黄体,经0.025%的胰蛋白酶分散,可获得大(直径为14.2～28.5μm)、小(直径为7.1～12.3μm)二种黄体细胞。台盼兰排斥试验测得细胞活力为85～90%,经3～4小时孵育后基本保持不变。黄体细胞产生的孕酮量与hCG浓度、培养时间和细胞数明显相关;而且,cAMP能显著增加hCG刺激的孕酮产生。结果表明,用胰蛋白酶分散大鼠黄体细胞进行体外培养是一种简单而有用的方法。     

Decidual Renin Secretion is Modulated by Endothelial Cells

Because decidual renin may regulate uterine blood flow and decidual-endothelial cell proximity exists, we examined the modulation of decidual renin secretion by endothelial cells. Primary human decidual cell cultures were established. The effect of endothelial cells was studied by decidual-endothelial cocultures. Human umbilical endothelial cells were plated in half of the wells containing decidual cells and were then incubated for 24 h in serum-free media. The effect of endothelial cells was also studied by examining cAMP-mediated renin secretion using 10⁵ M forskolin under standardized conditions. We also examined the role of cell-to-cell contact by coculturing endothelial cells directly on decidual cultures and on cell inserts placed in decidual culture wells. The media were assayed for renin by radioimmunoassay (RIA) for angiotensin I (AI) after AI generation under standardized conditions. Statistical differences were analyzed by two-way analysis of variance (ANOVA) with randomized complete block design. Basal renin secretion, expressed as mean ± SEM was 10.3 ± 1.0 ng AI/ml/h. cAMP stimulation increased this to 15.5 ± 1.3 ng AI/ml/h, P < 0.02. Coculture with vascular endothelium increased renin secretion to 24.3 ± 2.4 ng AI/ml/h, P < 0.001. cAMP stimulation in cocultures increased renin secretion to 38.0 ± 4–4 ng AI/ml/h, P < 0.002, There was no effect on cell growth as examined by total protein concentrations by coculturing or by cAMP. There was no increase in renin secretion when endothelial cells were cocultured using cell well inserts. Our data suggest that decidual renin secretion is increased by the presence of endothelial cells in direct contact with decidual cells. This supports a concept that in vivo-decidual-endothelial interaction may modulate decidual renin secretion and thereby influence regulation of uterine blood flow.     

RU486对人绒毛膜滋养层、蜕膜细胞以及小鼠胚胎与子宫内膜“共培养”的影响

本文报道RU 486对离体人绒毛膜滋养层、蜕膜细胞的影响。并在小鼠胚胎与子宫内膜“共培养”模型上,观察不同浓度的RU 486对着床前、后胚胎及子宫内膜的作用。实验结果发现:当RU 486浓度为10～60μg/ml时,对绒毛滋养层细胞无直接影响;仅在浓度60μg/ml时,对蜕膜有轻度抑制作用。RU 486对小鼠胚胎及子宫内膜均有不同程度的影响,且随药物浓度的增加而作用增强。当浓度达10μg/ml时,几乎完全抑制胚胎的发育,并发生萎缩及退行性变化,同时子宫内膜也遭严重破坏。     

胰岛素样生长因子-Ⅰ对体外人滋养层细胞孕酮分泌的影响

目的:探讨胰岛素样生长因子-I(IGF-I)对人早孕绒毛滋养层细胞孕酮(P)的合成和调节 作用。方法:将胰蛋白酶和胶原酶联合消化人早孕绒毛滋养组织,Percoll密度梯度分离纯化后得 到的人早孕胎盘滋养层细胞进行原代培养。以终浓度为0.1μg/L、1μg/L、10μg/L、100μg/L　IGF-I分 别对其作用12h,以及100μg/L浓度IGF-I作用12h、24h、48h、72h时,放免法检测滋养细胞 分泌P 的含量,RT-PCR法检测低密度脂蛋白受体(LDLR)mRNA的表达。结果:滋养层细胞P 的 分泌量随着IGF-I的浓度升高而增加;同时100μg/L浓度的IGF-I作用于滋养层细胞12h 后,P 分泌开始增加,48h达到高峰,以后逐渐下降。半定量RT-PCR均显示LDLRmRNA阳性条带,且表 达规律与P一致。结论:滋养层细胞P的分泌具有对IGF-I的时间和浓度依赖性,并且IGF-I能 上调LDLRmRNA的表达,对促进滋养细胞P分泌的调节起重要作用。     

Th1型/Th2型细胞因子对人孕早期蜕膜的免疫调节作用

目的 :研究Th1型 /Th2型细胞因子对人孕早期蜕膜细胞活性及TGFβ1和PRL分泌的影响。方法 :蜕膜细胞活性采用MTT法进行检测 ,蜕膜组织分泌TGFβ1和PRL的活性分别采用ELISA法和RIA进行分析测定。结果 :Th1型细胞因子IFNγ低浓度时 ( 1～ 10ng/ml)对蜕膜细胞活性及PRL分泌有促进作用 (P <0 .0 5 ) ,高浓度时 ( 10 0～ 10 0 0ng/ml)则有抑制作用 (P <0 .0 1) ;IFNγ在一定剂量范围内 ( 10～ 10 0 0ng/ml)还可抑制TGFβ1的分泌 (P <0 .0 1)。而Th2型细胞因子IL 4在一定浓度范围内 ( 1～ 10ng/ml)可明显促进蜕膜的分泌活性 (P <0 .0 1)。结论 :Th1型 /Th2型细胞因子可能是通过影响蜕膜细胞活性及TGFβ1和PRL分泌而在早期妊娠中起重要的免疫调节作用     

复方米非司酮对人早孕绒毛和蜕膜组织结构和分泌功能的影响

目的 :探讨复方米非司酮的抗早孕作用及机理。方法 :采用光镜、电镜和放免方法观察复方米非司酮对人早孕绒毛蜕膜组织结构和分泌功能的影响。结果 :( 1 )服药 2 4h后 ,光镜观察发现 ,绒毛和蜕膜组织灶性、片状变性 ,复方米非司酮组改变尤甚。超微结构改变表现为绒毛合体滋养细胞表面微绒毛稀少 ,胞浆内细胞器退化 ,复方米非司酮组胞质内可见大量空泡 ;蜕膜颗粒细胞中的高电子密度物质减少 ,腺上皮细胞顶浆分泌突起少且小 ,溶酶体增多 ,出现大量空泡 ,蜕膜细胞病变较轻。 ( 2 )服药 2 4h,绒毛和 /或蜕膜组织中的h CG、PRL、E2 、P水平明显下降 ( P<0 .0 1或 P<0 .0 5) ,PGF2α明显增高 ( P<0 .0 1 ,P<0 .0 5) ;E2 / P比值增加 ( P<0 .0 1 ,P<0 .0 5)。结论 :复方米非司酮通过影响绒毛和蜕膜组织结构和分泌功能而终止早孕 ,双炔失碳酯和米非司酮在人类也有协同抗早孕作用 ,绒毛和蜕膜是其抗早孕时主要作用部位之一。     

蜕膜基质细胞培养液对滋养细胞增殖、凋亡及浸润的影响及对浸润作用机制的研究

目的:探讨早孕蜕膜基质细胞培养液(DSCM)对滋养细胞增殖、凋亡以及浸润能力的影响及对浸润功能的作用机制。方法:原代分离、培养并鉴定人早孕蜕膜基质细胞,收集并制备成不同浓度的DSCM,采用噻唑兰(MTT)、Annexin V-FITC、Transwell方法检测不同浓度的DSCM对滋养细胞增殖、凋亡、浸润能力的影响,采用RT-PCR及明胶酶谱法检测滋养细胞基质金属蛋白酶(MMPs)的改变。结果:得到纯度大于90%的蜕膜基质细胞。随着DSCM的浓度增高(5%DSCM,20%DSCM,50%DSCM,100%DSCM)细胞的吸光度值增高、凋亡率减少、浸润细胞数增多(P0.05)。不同浓度的DSCM组MMP-2及MMP-9 mRNA、蛋白的变化与对照组相比差异均有统计学意义(P0.05)。结论:早孕DSCM可以促进滋养细胞增殖,抑制凋亡,并通过上调滋养细胞对MMP-2与MMP-9的表达来促进其浸润功能。     

New light on early post-implantation pregnancy in the mouse: roles for insulin-like growth factor-II (IGF-II)?

Successful placental development and the associated changes to the decidual vasculature during early pregnancy are critical to pregnancy outcome. This study utilised immunohistochemistry to provide a photomicrographic account of trophoblast invasion, as well as the changes in the uterine vasculature in the decidua from days 5.5 to 10.5 of murine pregnancy. The pattern of trophoblast invasion during this time is particularly interesting because, unlike in humans, murine trophoblast giant cells (TGCs) do not invade the endometrium individually but remain in close contact with the expanding giant cell layer. Therefore, trophoblast cells are unlikely to play a direct role in remodelling the maternal vessels in early to mid pregnancy. Nevertheless, the decidual vessels appear to undergo extensive angiogenesis and remodelling to form a network of dilated vessels that presumably maximize placental blood supply. Importantly, the vessels closest to the conceptus lacked a smooth muscle layer throughout early pregnancy and therefore cannot strictly be described as spiral arterioles. TGCs may secrete molecules that can act to induce these vascular changes. Here we show that insulin-like growth factor-II (IGF-II) is expressed throughout early pregnancy in the entire conceptus including trophoblast cells, supporting its role in promoting early placental growth. In addition, the co-localisation of IGF-II and both IGF receptors in the developing blood vessels and/or adjacent stromal cells in the mesometrial, but not in the anti-mesometrial, decidua suggest that IGF-II, upon binding to one of these receptors, may play a role in both decidual angiogenesis and placental differentiation.     

蜕膜基质细胞条件培养液对滋养细胞浸润功能的影响

目的:探讨蜕膜基质细胞条件培养液(DSCM)对滋养细胞浸润力的影响。方法:体外培养人早孕正常蜕膜基质细胞,收集DSCM处理早孕滋养细胞系(B6Tert)。应用浸润实验分析B6Tert细胞浸润力的改变,采用RT-PCR与明胶酶谱技术检测B6Tert细胞中基质金属蛋白酶(MMPs)的表达变化。结果:DSCM浓度较低时(占细胞培养液5%),可促进B6Tert细胞的浸润力与该细胞MMP-2mRNA及pro-MMP-2的表达;反之,高浓度的DSCM(20%)则抑制滋养细胞的浸润力与MMP-2的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。DSCM不影响B6Tert细胞中MMP-9的表达。结论:早孕DSCM可能通过调节滋养细胞中MMP-2的表达影响滋养细胞的浸润能力。