产KPC肺炎克雷伯菌检测方法构建与耐药机制

目的 探讨产肺炎克雷伯型碳青霉烯酶(KPC)肺炎克雷伯菌检测方法以及肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制、可能的治疗药物.方法 选取K-B法证实的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌36株纳入本研究,使用改良Hodge试验、Carba NP试验对菌株进行验证,随后采用PCR扩增、产物琼脂糖凝胶电泳实验,并对电泳阳性条带进行基因测序鉴定.结果 K-B法药敏试验显示36株耐碳氢烯类肺炎克雷伯菌,随后行Hodge验证,33株(91.7%)是产KPC肺炎克雷伯菌,对碳氢烯类耐药而对替加环素及米诺环素仍然敏感.对Hodge试验阳性33株再行Carba NP试验确证,其中27株(87.9%)阳性,6株(12.1%)阴性;对Hodge试验阳性33株行PCR扩增及电泳实验,共有27株出现目标条带(340 bp)提示阳性,与Carba NP试验结果相一致.对出现目标条带的27株肺炎克雷伯菌再进行KPC-2耐药基因PCR扩增产物测序,均为KPC-2型耐药基因.结论 K-B法药敏试验加随后改良Hodge试验验证对于筛查、发现KPC肺炎克雷伯菌具有较高的符合度,为发现KPC肺炎克雷伯菌有效筛查方法.K-B法药敏试验证实对KPC肺炎克雷伯菌,替加环素等可能是有效治疗的药物之一.Hodge试验检测的KPC肺炎克雷伯菌,存在12.1%(6/33)的假阳性率.Carba NP 试验及PCR扩增检测一致性好,具有确证产KPC肺炎克雷伯菌作用.随后的测序研究结果表明检测出的KPC肺炎克雷伯菌均为KPC-2,该型是引起肺炎克雷伯菌对碳青酶烯酶耐药的主要机制.     

碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌耐药机制及分子流行病学研究

目的 分析耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌（CRKP）的耐药情况及耐药基因,为临床治疗提供依据。方法 收集并鉴定临床分离非重复CRKP 27株,采用VITEK-2 compact全自动微生物鉴定药敏分析仪鉴定和药敏试验,碳青霉烯酶抑制剂增强试验检测A类丝氨酸碳青霉烯酶和B类金属β内酰胺酶,聚合酶链反应（PCR）法和基因测序技术检测常见的耐药基因。使用肠杆菌科基因间重复一致序列PCR(ERIC-PCR)对菌株进行同源性分析。结果 27株肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类、头孢菌素类、喹诺酮类等抗生素的耐药率均>96%。碳青霉烯酶抑制剂增强试验显示,26株A类丝氨酸碳青霉烯酶阳性,1株B类金属β内酰胺酶阳性。PCR和基因测序结果显示,26株CRKP携带KPC-2基因,1株携带NDM-1基因。ERIC-PCR将27株CRKP分为8型,以Ⅰ型和Ⅱ型为主。结论 分离的CRKP对临床常用抗生素表现出高水平耐药,其耐药机制主要是该类细菌产KPC-2型碳青霉烯酶。     

多重耐药肺炎克雷伯菌耐药基因的初步定位研究

目的对临床分离的多重耐药肺炎克雷伯菌的耐药基因进行初步定位，为制定临床治疗策略提供理论基础。方法用法国Bio—Merieux公司vitek-60全自动细菌鉴定仪鉴定菌种，双纸片法检测产超广谱8-内酰胺酶，纸片法做药敏试验。用Qiagen plasmid midi kit试剂盒提取该菌质粒，并将质粒电转入感受态大肠杆菌中，用含Amp（50μg／m1）的（LB）选择培养基筛选转化子，然后提取转化子质粒，与肺炎克雷伯菌质粒同时用0．5％的琼脂糖进行电泳分析。肺炎克雷伯菌，电转前、电转后大肠杆菌做药敏试验。结果质粒电泳图谱显示，转化子DH5a所含质粒与肺炎克雷伯菌所含质粒相同，电转化取得成功；肺炎克雷伯菌对17种抗生素均耐药，感受态大肠杆菌对17种抗生素均敏感，转化子DH5n对头孢呋辛和氨苄西林耐药，对其余15种抗生素表现不同程度的敏感。结论本株肺炎克雷伯菌的质粒上可以确定有耐头孢呋辛和氨苄西林的基因，并且能在转化子DH5a中成功表达：头孢噻肟、头孢曲松、头孢哌酮、头孢吡肟、氨曲南的耐药基因可能位于质粒上，但未能完全表达；而环丙沙星、阿米卡星、庆大霉素的耐药基因比较复杂，初步判断不在质粒上；头孢西丁、美洛培南、亚胺培南则无法做出判断。     

区域性耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌耐药基因型的分析

目的:分析区域耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌(carbapenem resistant Klebsiella pneumoniae,CR-KPN)的耐药性及耐药基因型.方法:筛选黑龙江省医院2018年1月—2020年12月临床分离的菌株,通过BD PhoenixTM-100全自动细菌鉴定、药敏系统细菌鉴定和药敏试验,改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)表型筛查CR-KPN36株,分析CR-KPN的临床分布特点、耐药特性及耐药基因型.结果:医院分离的CR-KPN主要来源于神经外科、ICU、康复科等,除氨基糖苷类和四环素类抗生素有一定抑制作用外,一、二、三、四代头孢菌素和碳青霉素类抗生素等β-内酰胺类抗生素耐药率接近100％,主要携带blaKPC基因型(97.22％).结论:CR-KPN临床检出逐年增加,其耐药性强,临床抗感染难道大,需加强病原菌监测,并进行耐药基因检测,指导区域临床合理使用抗菌药物,做好院感防控.     

耐碳青霉烯类药物肺炎克雷伯菌的耐药机制

碳青霉烯类抗生素对β内酰胺酶及头孢菌素酶具有高度的稳定性,是抗菌谱最广、抗典型β内菌活性最强的非酰胺类抗生素。近年来随着其广泛使用,肠杆菌科对碳青霉烯类药物的耐药率不断上升,尤以耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌检出率显著增加,因此多重耐药菌的逐年增加对临床上抗菌药物的治疗带来极大困难与病程变迁。肺炎克雷伯菌抗生素耐药菌株的出现已成为一个严峻的问题,同样也引起临床医师的高度重视。     

产KPC酶肺炎克雷伯菌的感染分布特点及中西医药物结合对其的抑制效果

目的探讨产KPC酶肺炎克雷伯菌的临床感染分布特点及中西医结合的干预效果。方法收集临床多个科室标本,共筛查出产KPC酶肺炎克雷伯菌株523株,分析其临床分布情况及病区分布情况。将配置好的头孢三嗪、鱼腥草注射液、穿琥宁注射液分别单独或与西药配伍加入适当浓度的产KPC酶肺炎克雷伯菌落中,经动态比浊法测定内毒素含量。结果在临床分离出的523例产KPC酶肺炎克雷伯菌株中,来自于呼吸道标本所占的比率最高,其次为中段尿液、脓液及伤口分泌物、血液。在各标本中产ESBLs阳性率最高的为呼吸道标本,其次为脓液及伤口分泌物、血液、中段尿液。产KPC酶肺炎克雷伯菌的临床病区分布情况:呼吸科所占比率最高,其次为ICU、感染科、泌尿外科。产ESBLs情况也存在明显差异,ICU所占百分比最高,其次为肿瘤科、呼吸科、感染科。鱼腥草组、穿琥宁组及与西药配伍组内毒素产生的量均明显低于西药组(P0.01)。结论产KPC酶肺炎克雷伯菌的临床分布有一定特点,中药抗菌药物配伍西药对产KPC酶肺炎克雷伯菌内毒素的释放有明显的抑制作用。     

产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌研究进展

产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌自1998年被发现后,迅速在世界各地传播流行;其耐药机制主要与外膜蛋白缺失、产KPC酶有关;检测须经过表型筛选、菌株确证试验、基因检测等技术确定;替加环索联合多粘菌素B治疗产KPC肺炎克雷伯菌是常规方法;产KPC肺炎克雷伯菌传播速度快,须加强预防控制.     

耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌耐药基因及毒力基因分析研究

目的 通过全基因组测序技术（whole genome sequencing,WGS）检测耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌（carbapenemresistant Klebsiella pneumonia, CRKP）的耐药基因及毒力基因,了解本院CRKP的分布及耐药情况,为临床治疗和预防耐药菌的产生提供理论依据。方法 收集甘肃省肿瘤医院2019年6月至2021年6月临床分离的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌,用全自动细菌鉴定仪进行细菌鉴定和抗菌药物敏感试验,用改良碳青霉烯灭活试验（mCIM）确认所筛选出的菌株是否产碳青霉烯酶,通过全基因组测序分析研究CRKP菌株的耐药基因种类和分布情况以及毒力基因类型和毒力基因位点。结果 23株CRKP分离自4个不同的临床科室,标本主要来源于痰液和血液,药敏结果显示所有菌株对碳青霉烯类、头孢菌素类、青霉素类及含β-内酰胺酶抑制剂类抗菌药物均耐药,对环丙沙星、阿米卡星和复方新诺明部分耐药。基因组测序分析显示：23株CRKP中,17株为ST11型,6株为ST23型。CRKP的荚膜型（KL）均为KL64,一致性均在99.9%以上。23株CRKP均携带bla KPC-2,此外还有...     

产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的耐药性检测及变迁

目的探讨产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的流行及耐药情况,为临床合理使用抗生素提供依据。方法采用BD Phoenix 100全自动细菌鉴定药敏系统及纸片扩散法测定病原菌的耐药性,改良Hodge试验检测碳青霉烯酶和Etest MBL确认纸条法表型筛查金属-内酰胺酶。结果近3年临床肺炎克雷伯菌检出株数并无明显变化,但改良Hodge试验阳性株检出率逐年增加,金属-内酰胺酶阳性株检出率也逐年增加。耐碳青霉烯类菌株对大多数抗生素的耐药率较高且逐年上升,但对氨基糖甙类抗生素的敏感性尚可。结论产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的耐药情况日益严重,应加强院感的监测和预防。     

NICU分离碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌分子流行病学特征

目的 研究新生儿重症监护病房(NICU)中碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)流行特征及耐药机制.方法 收集某三甲医院NICU的CRKP 11株,采用自动化仪器法或纸片扩散法(K-B法)检测其对常用抗菌药物的耐药性,乙二胺四乙酸(EDTA)协同试验和3'-氨基苯硼酸(APB)协同试验进行碳青霉烯酶表型分析,PCR扩增...     

肺炎克雷伯菌突变株的分离和全转录组分析

目的 筛选空间环境诱变的肺炎克雷伯菌突变株及并进行全转录组分析.方法 利用Biolog生化反应板从搭载于神舟八号飞船的肺炎克雷伯菌中筛选突变株,然后采用高通量测序技术对突变株全转录组测序,原始测序数据经处理后进行基因表达注释和差异表达基因的基因本体功能及京都基因与基因组信号通路注释分析.结果 空间搭载的肺炎克雷伯菌突变株在糖类代谢上出现差异,且该菌株有232个基因表达上调,1 879个基因下调,其主要同细菌的膜蛋白、转运相关功能、糖类的运输相关.结论 获得一株空间环境诱导的肺炎克雷伯菌突变株且该菌株全转录组测序和注释清晰,为后续的功能研究奠定了基础.     

医院产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的检测及耐药性

目的:了解我院产超广谱β-内酰胺酶(extended spectrum β-lactamase,ESBLs)肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的检出率及其耐药特征,为临床合理使用抗生素提供依据。方法:对我院2003年1月～2005年12月住院病人分离的肺炎克雷伯菌122株、大肠埃希菌313株,采用NCCLs推荐的纸片扩散表型确证试验进行ESBLs检测,用K-B法做药敏试验。结果:435株肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌中检出产ESBLs菌139株,总检出率31.95%,其中肺炎克雷伯菌检出率33.61%、大肠埃希菌检出率31.31%;ESBLs检出率有逐年上升趋势;呼吸道标本ESBLs检出率最高,占59.71%;产ESBLs菌对抗生素的耐药率显著高于不产ESBLs菌(P<0.005),并对氨基糖苷类、喹诺酮类等抗生素呈多重耐药,对含β-内酰胺酶抑制剂的复合抗生素耐药率有增高趋势,均对亚胺培南敏感。结论:肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的ESBLs检出率逐年增加,应及时对ESBLs菌进行检测,以指导临床用药。亚胺培南可作为ESBLs菌治疗的首选药。     

肺炎克雷伯菌临床感染现状及耐药性分析

目的了解各种临床标本中肺炎克雷伯茵的分离情况及耐药情况,以便为临床选用抗肺炎克雷伯茵的药物提供依据。方法采用美国BD100细菌鉴定分析系统进行细菌鉴定,采用微量稀释法和KB法做药物敏感实验。结果肺炎克雷伯茵在各类临床标本中的分离率从高到低依次为胸腹水标本（分离率为69．9％）、其他标本（分离率为34．6％）、分泌物标本（分离率为22．2％）、尿液标本（分离率为19．1％）、痰液标本（分离率为13．2％）和血液标本（分离率为13．0％）;对头孢哌酮／舒巴坦、阿莫西林／克拉维酸和哌拉西林／他唑巴坦的耐药率分别为3．7％、5．2％和5．9％,时美罗培南和亚胺培南耐药率均为0。结论肺炎克雷伯茵耐药问题更为严重,应采取有效的控制措施。     

产超ESBL菌的耐药表型及四种检出方法比较

目的:探讨产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌耐药表型流行情况,比较4种ESBL检出方法.方法:首先筛选出可疑产ESBL菌,再用确证试验、双纸片协同试验、GNS-NT卡和Etest ESBL试条进行实验比较.根据GNS-NT卡的药敏结果统计耐药情况.结果:316株菌中118株可疑产ESBL;确证试验证实96株产ESBL,协同试验证实90株有协同现象;其中确证产ESBL的28株菌经GNS-NT卡和Etest ESBL试条测试,24株阳性.β-内酰胺类的氨曲南(ATN)、头孢噻肟(CTX)、头孢泊肟(CPO)、头孢三嗪(CRO)、头孢他啶(CTD)耐药率均较高,亚安培南(IMP)均敏感;非β-内酰胺类药物的耐药率也较高.结论:确证试验与双纸片协同试验的阳性符合率较低,GNS-NT卡和Etest ESBL试条的灵敏度不及前二者.ATN、CTX、CRO和CPO为检测ESBL较适底物,产ESBL菌对硝基呋喃类、喹诺酮类、氨基苷类及磺胺类药物敏感性均较差.     

ICU病区耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的耐药及同源性特点分析

目的：分析ICU病房耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（carbapenem?resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP）的耐药状况和同源性。方法：收集河南科技大学第一附属医院2018年3—9月肺炎克雷伯菌临床分离株171株。基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI?TOF MS）进行菌株鉴定,琼脂稀释和微量肉汤稀释法检测药物最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）值,多位点序列分型（MLST）进行同源性测定,mCIM和eCIM实验进行碳青霉烯酶初筛,β?内酰胺酶、血清荚膜分型基因进行PCR扩增后测序。结果：全院共检出CRKP 68株（39.8%,68/171）,其中ICU病区46株（67.6%,46/68）。46株CRKP对头孢他啶阿维巴坦、替加环素、多黏菌素、米诺环素的耐药率分别为0、0、4.3%、41.7%;菌株在美罗培南、亚胺培南、头孢他啶、氯霉素、磷霉素、氨曲南、环丙沙星MIC90>128;93.5%（43/46）CRKP为ST11型;60.9%（28/46）荚膜血清分型为K47,23.9%（11/46）为K64;46（100%）株均携带blaKPC?2、blaSHV和blaTEM,40株（86.96%）携带blaCTX?M,6株（13.04%）携带blaDHA。结论：该院流行于ICU病区的CRKP菌株以ST11型为主,大多数菌株同时携带blaKPC?2、blaSHV、blaTEM和blaCTX?M。细菌耐药程度高,感染控制部门应重视ICU病区的CRKP传播问题。     

肺炎克雷伯杆菌肺炎大鼠血清白介素-2、12和单核细胞趋化蛋白-1水平及干预研究

目的:观察幼龄SD大鼠肺炎克雷柏杆菌肺炎的临床表现、白介素(IL)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的水平及其干预后的变化。方法:将4~6周龄清洁级SD大鼠随机分为对照组、模型组和干预组,每组又分为3小组,每小组8只,其中模型组、干预组接种相同浓度、剂量的肺炎克雷伯杆菌菌液,对照组接种0.9%氯化钠注射液,接种成功24 h左右,干预组给予头孢哌酮钠舒巴坦钠治疗。各小组抽样行X线检查,并分别于第3、5、7天取血清检测IL-2、IL-12和MCP-1。结果:模型组血清MCP-1水平在接种后各时间点均高于对照组和干预组(P0.05~P0.01),干预组接种后第3天血清MCP-1水平明显高于对照组(P0.01)。对照组各时间点MCP-1差异均无统计学意义(P0.05),模型组大鼠在接种后第5天和第7天血清MCP-1水平均显著高于第3天(P0.01),干预组在接种后第5天和第7天血清MCP-1水平均明显低于第3天(P0.01)。模型组血清IL-2和IL-12水平在接种后第5天和第7天均高于对照组和干预组(P0.01),模型组和干预组接种后第3天血清IL-2和IL-12水平均显著高于对照组(P0.01)。模型组接种后第5天和第7天血清IL-2和IL-12水平均明显高于第3天(P0.01),而干预组第5天和第7天IL-2和IL-12水平均显著低于第3天(P0.01)。结论:幼龄SD大鼠肺炎克雷伯杆菌肺炎模型急性感染期IL-2、IL-12和MCP-1升高,说明这些细胞因子参与了肺炎克雷伯杆菌肺炎的病理生理过程,动态监测血清IL-2、IL-12和MCP-1水平可作为判断肺炎克雷伯杆菌肺炎病情轻重、转归的重要指标。     

A Five-year Surveillance of Carbapenemase-producing Klebsiella pneumoniae in a Pediatric Hospital in China Reveals Increased Predominance of NDM-1

Objective To characterize carbapenem(CPM)-non-susceptible Klebsiel a pneumoniae(K. pneumoniae) and carbape-nemase produced by these strains isolated from Beijing Children's Hospital based on a five-year surveillance. Methods The Minimal Inhibition Concentration values for 15 antibiotics were assessed using the Phonix100 compact system. PCR amplification and DNA sequencing were used to detect genes encoding carbapenemases. WHONET 5.6 was finally used for resistance analysis. Results In total, 179 strains of CPM-non-susceptible K. pneumoniae were isolated from January, 2010 to December, 2014. The rates of non-susceptible to imipenem and meropenem were 95.0% and 95.6%, respectively. In the 179 strains, 95(53.1%) strains carried the blaIMP gene, and IMP-4 and IMP-8 were detected in 92(96.8%) and 3(3.2%) IMP-producing isolates, respectively. 65(36.3%) strains carried the blaNDM-1 gene. 6(3.4%) strains carried the blaKPC gene, and KPC-2 were detected in 6 KPC-producing isolates. In addition, New Delhi-Metallo-1(NDM-1) producing isolates increased from 7.1% to 63.0% in five years and IMP-4 producing isolates decreased from 75.0% to 28.3%. Conclusion High frequencies of multiple resistances to antibiotics were observed in the CPM-non-susceptible K. pneumoniae strains isolated from Beijing Children's Hospital. The production of IMP-4 and NDM-1 metallo-β-lactamases appears to be an important mechanism for CPM-nonsusceptible in K. pneumoniae.     

238株肺炎克雷伯菌的临床分布和耐药分析

目的了解各种临床标本中肺炎克雷伯菌的临床分布特点和一般性耐药情况。方法收集2011年9月安徽省32家医院报送的肺炎克雷伯杆菌,药敏试验采用琼脂稀释法,结果依据CLSI 2010年推荐的标准进行判读。结果肺炎克雷伯菌主要来自痰标本,占76.05%;主要分布于ICU和呼吸内科,明显多于其他病房。药敏结果显示,肺炎克雷伯菌对2、3代头孢菌素表现出较高的耐药性,耐药率在28.2%~68.5%;对4代头孢菌素头孢吡肟比较敏感,耐药率为28.2%;对喹诺酮类的敏感率在70%左右;氨基糖苷类中的阿米卡星耐药率较低,为19.7%,而庆大霉素为70.6%;加酶抑制剂的抗菌药物比不加酶抑制剂的耐药率低很多;拉氧头孢、美罗培南和亚胺培南对该菌的敏感性最高。结论肺炎克雷伯菌临床分离株数多,耐药率较高,应加强临床使用抗菌药物的管理,预防和减少多重耐药菌株的产生。     

肺炎克雷伯菌在呼吸机相关性肺炎中的耐药性及多重耐药危险因素的研究

目的 探讨肺炎克雷伯菌（KP）在呼吸机相关性肺炎（VAP）中的耐药性及多重耐药的危险因素。方法 在VAP患者中分离210株非重复KP。采用微生物质谱检测系统和全自动微生物分析仪鉴定KP和检测药物敏感性。采用多因素logistic回归分析VAP患者感染多重耐药KP的危险因素。结果 多重耐药KP和耐药KP的构成比分别为35.2%和64.8%。左氧氟沙星、头孢他啶、复方新诺明、多粘菌素B、四环素在多重耐药KP组中的耐药率均明显高于耐药KP组（均P<0.01或0.05）。logistic回归分析显示,年龄≥65岁、呼吸机使用时间≥7 d、入住ICU时间≥14 d、使用抗菌药物类型≥2种、迟发型VAP、二次气管插管、白蛋白<30 g/L等的P值均<0.05或0.01。结论 KP在VAP中的耐药形势不容乐观,多重耐药KP更严峻。年龄≥65岁、呼吸机使用时间≥7 d、入住ICU时间≥14 d、使用抗菌药物类型≥2种、迟发型VAP、二次气管插管、白蛋白<30 g/L是VAP患者感染多重耐药KP的独立危险因素。     

医院产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的检测及耐药性

目的：了解我院产超广谱β-内酰胺酶（extended spectrum β-lactamase,ESBLs）肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的检出率及其耐药特征，为临床合理使用抗生素提供依据。方法：对我院2003年1月～2005年12月住院病人分离的肺炎克雷伯菌122株、大肠埃希菌313株，采用NCCLs推荐的纸片扩散表型确证试验进行ESBLs检测,用K—B法做药敏试验。结果：435株肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌中检出产ESBLs菌139株，总检出率31．95％，其中肺炎克雷伯菌检出率33．61％、大肠埃希菌检出率31．31％；ESBLs检出率有逐年上升趋势；呼吸道标本ESBLs检出率最高，占59．71％；产ESBLs菌对抗生素的耐药率显著高于不产ESBLs菌（P〈0．005），并对氨基糖苷类、喹诺酮类等抗生素呈多重耐药，对含β-内酰胺酶抑制剂的复合抗生素耐药率有增高趋势，均对亚胺培南敏感。结论：肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的ESBLs检出率逐年增加，应及时对ESBLs菌进行检测，以指导临床用药。亚胺培南可作为ESBLs菌治疗的首选药。