同型半胱氨酸对培养大鼠心肌细胞牛磺酸摄取及其影响机…

目的：观察同型半胱氨酸（ＨＣＹ）对培养大鼠心肌细胞牛磺酸摄取的影响及其影响机制。方法：应用（＾３Ｈ）－牛磺酸同位素检测技术，测定ＨＣＹ不同浓度或在ＨＣＹ作用下牛磺酸作用不同时间对牛磺酸摄取量的影响，以及应用蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）抑制剂Ｈ７和多粘菌素观察大鼠心肌细胞在ＨＣＹ作用下对牛磺酸摄取量的影响。     

牛磺酸对烧伤大鼠心肌细胞凋亡的影响及其机制

目的:观察牛磺酸（Tau）对烧伤后心肌细胞凋亡的影响并探讨其作用机制。方法:选健康Wistar大鼠50只，随机分为对照组、烧伤组（造成30%TBSAⅢ度烧伤）、烧伤+牛磺酸组（烫伤后即刻腹腔注射牛磺酸，200 mg/kg）、烧伤+牛磺酸(Tau)+SB202190组及烧伤+SB202190组（烫伤后立即注射SB202190，10 mg/kg）。末端标记（TUNEL）法检测凋亡细胞，放射免疫法测定TNFα含量，荧光分析法测定caspase-3活性及免疫组化分析心肌Fas、caspase-8、Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果:烧伤组心肌细胞凋亡指数（18.69±2.47）显著高于对照组（0.48±0.05）（P<0.01），心肌Fas、caspase-8、TNF-α和Bax蛋白水平及caspase-3活性也显著高于对照组，但Bcl-2蛋白表达显著低于对照组（P<0.01）。Tau组和Tau+SB202190组心肌细胞凋亡指数分别为3.15±0.41和1.63±0.31，显著低于烧伤组。心肌TNFα、Fas、caspase-8和Bax蛋白表达及caspase-3活性均不同程度低于烧伤组（P<0.05）,但Bcl-2蛋白表达则显著高于烧伤组（P<0.05）。结论:牛磺酸对烧伤后心肌细胞凋亡有较好的抑制作用，其机制可能是牛磺酸调控了部分凋亡相关基因的表达和减少TNF-α的生成。     

牛磺酸拮抗同型半胱氨酸诱导的线粒体呼吸链自由基生成和同型半胱氨酸抑制线粒体牛磺酸转运体

目的:观察同型半胱氨酸(Hcy)对心肌线粒体电子漏及自由基生成的影响,以及观察牛磺酸的拮抗效应。方法: 分离大鼠心肌线粒体,超声波破碎线粒体制备亚线粒体,纯化制备猪心肌线粒体琥珀酸细胞色素C还原酶(SCR)重组体。分别用Hcy和/或牛磺酸共同孵育心肌线粒体、亚线粒体、SCR;用化学发光法测定H₂O₂^- 及O₂^- 生成;并用滤膜抽滤法观察线粒体膜牛磺酸转运体的性质及Hcy对牛磺酸转运功能的影响。结果: Hcy呈浓度依赖性地刺激大鼠心肌线粒体、亚线粒体氧自由基生成及SCR电子漏增加,牛磺酸自身不影响心肌线粒体、亚线粒体及SCR氧自由基生成,但呈浓度依赖性地抑制Hcy诱导的线粒体、亚线粒体及呼吸链重组体氧自由基生成。线粒体膜上存在Na+依赖性的牛磺酸转运体,Hcy呈浓度依赖性地抑制牛磺酸转运体对牛磺酸的转运功能。结论: 牛磺酸抑制Hcy刺激的线粒体呼吸链电子漏增加及氧自由基生成。线粒体膜上存在Na+依赖性的牛磺酸转运体,Hcy抑制线粒体膜上牛磺酸转运体对牛磺酸的转运功能。     

螺旋藻对大鼠高同型半胱氨酸血症的影响

目的：研究螺旋藻(SP)对大鼠高同型半胱氨酸血症(hyper homocysteinemia,HHcy)的影响。方法：用高蛋氨酸饮食复制HHcy大鼠模型,给予叶酸或SP干预12周。以高压液相色谱法测定血浆Hcy浓度,硫代巴比妥酸反应比色法测定血浆丙二醛(MDA)浓度,黄嘌呤氧化酶法测定血浆超氧化物歧化酶(SOD),并采用链霉亲和素-过氧化物酶(S-P)免疫组化染色法检测动脉平滑肌增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PC- NA)的表达。结果：HHcy模型组血浆Hcy浓度、MDA水平、SOD活力及平滑肌PCNA阳性细胞率明显高于正常对照组,经叶酸及SP干预后,上述指标都比模型组降低。结论：螺旋藻在体内可减低血浆Hcy和MDA浓度,有效消除氧化自由基,降低动脉平滑肌增殖指数,保护HHcy血症损伤的内皮细胞。     

牛磺酸对大鼠在体缺血再灌注心肌线粒体呼吸酶系的影响

观察牛磺酸对大鼠缺血再灌注损伤心肌线粒体呼吸酶活力变化的影响及机理。结果表明：牛磺酸保护组的琉珀酸脱氢酶（ＳＤＨ）、细胞色素氧化酶（ＣＣＯ）、ＳＯＤ及ＧＳＨ·Ｐｘ活力均较缺血再灌注损伤非保护组有显著升高（Ｐ＜０．０１）,而ＭＤＡ含Ｒ则明显降低（Ｐ＜０．０１）。提小牛碘酸对缺血再灌注损伤心肌线粒体ＳＤＨ及ＣＣＯ活力有很好的保护作用,其机理可能是通过提高对氧自由基清除及抑制脂质过氧化作用而实现。     

同型半胱氨酸对培养内皮细胞损伤的研究

目的:本研究拟探讨同型半胱氨酸对培养人脐静脉内皮细胞的损伤效应,以揭示同型半胱氨酸致动脉粥样硬化的可能机制。方法:将人脐静脉内皮细胞暴露于不同浓度的同型半胱氨酸24h后,观察细胞形态并测定细胞的乳酸脱氢酶释放率、总蛋白含量、凋亡及脂质过氧化的程度。结果:(1)同型半胱氨酸不仅可诱导细胞凋亡而且在较高浓度时可致细胞坏死;(2)同型半胱氨酸有较强的促脂质过氧化的效应,并呈量效关系;(3)同型半胱氨酸的上述效应因加入LDL而增强,示同型半胱氨酸与LDL有协同作用。结论:同型半胱氨酸可能是通过氧化应激机制导致内皮细胞出现坏死,凋亡等损伤的改变。     

同型半胱氨酸对大鼠胚胎发育的毒性作用

目的 研究同型半胱氨酸(homocysteine，HCY)和同型半胱氨酸诱导基因(homocyste-induced gene，HCY-2)与心脏畸形的关系。方法大鼠妊娠8、9、10 3d尾静脉注射同型半胱氨酸，分别于第13、15、17、19d取材，用组织学和免疫组织化学ABC法观察心脏畸形和基因Hcy-2在心脏上的表达并进行图像定量分析。结果 HCY对大鼠胚胎心脏有明显致畸作用，主要为心脏偏位，心脏过小；室间隔缺损，心房缺失等；ABC法显示基因Hcy-2在给药组胚胎心脏中表达增强。结论 HCY对心脏发育是一种新的毒性因子；Hcy-2基因的过度表达与心脏畸形发生可能有一定关系。     

同型半胱氨酸对大鼠血管内皮依赖性舒张反应的影响

目的：观察同型半胱氨酸对内皮依赖性舒张反应的影响。方法：Wistar大鼠24只,随机分为两组。实验组腹腔内注射同型半胱氨酸溶液100 mg·kg^-1·d^-1;对照组注射等量生理盐水。第16周末,测血清同型半胱氨酸浓度、扫描电镜检查颈总动脉内皮细胞并测定离体内皮依赖性舒张功能。结果：实验组血清同型半胱氨酸显著高于对照组。扫描电镜观察,实验组内皮细胞表面收缩、凹凸不平、细胞间隙增宽,部分区域可见片状脱落;实验组的血管环对乙酰胆碱浓度依赖性舒张反应明显下降。结论：同型半胱氨酸对血管内皮细胞有损伤作用,进而降低内皮依赖性舒张功能。     

内皮素抑制大鼠心肌细胞牛磺酸转运

目的:观察内皮素(ET)对大鼠心肌细胞牛磺酸转运的影响。方法:在培养的乳鼠心肌细胞上,应用同位素标记的方法测定心肌细胞牛磺酸转运。结果:内皮素呈浓度依赖性(10^-10~10^-8mol/L)抑制心肌细胞牛磺酸转运(与对照组比较分别下降了13%,38%和71%,P＜0.01)。蛋白激酶C(PKC)的抑制剂H7,ET-A型受体阻断剂BQ123及用佛波脂(PMA)预处理均可拮抗ET的抑制作用,使牛磺酸转运较ET组分别增加221%,250%和282%(P＜0.01)。结论:ET通过其A型受体活化PKC抑制心肌细胞牛磺酸转运。     

钙离子与牛磺酸两者跨心肌细胞膜内流的相互影响

目的和方法：取新生ＳＤ大鼠心室肌制备培养搏动心肌细胞，采用放射性同位素４５Ｃａ２＋及３Ｈ－牛磺酸示踪技术，观察钙离子与牛磺酸跨心肌细胞膜内流的相互影响。结果：（１）牛磺酸内流在低胞外Ｃａ２＋浓度（［Ｃａ２＋］ｏ，０．５ｍｍｏｌ／Ｌ）和高［Ｃａ２＋］ｏ（４０ｍｍｏｌ／Ｌ）均比正常［Ｃａ２＋］ｏ（１５ｍｍｏｌ／Ｌ）和高［Ｃａ２＋］ｏ（４０ｍｍｏｌ／Ｌ）时增加，尤以低［Ｃａ２＋］。时明显；异搏定（１０μｍｏｌ／Ｌ）能促进牛磺酸的内流；（２）１０～２０ｍｍｏｌ／Ｌ牛磺酸对不同［Ｃａ２＋］。（０５、１５和４０ｍｍｏｌ／Ｌ）下的Ｃａ２＋内流均有抑制作用，而１ｍｍｏｌ／Ｌ牛磺酸只抑制高［Ｃａ２＋］ｏ时Ｃａ２＋内流，对低［Ｃａ２＋］ｏ和正常［Ｃａ２＋］ｏ时Ｃａ２＋内流无明显作用；１～２０ｍｍｏｌ／Ｌβ－丙氨酸对Ｃａ２＋内流无明显影响。结论：胞外Ｃａ２＋浓度的变化可直接影响牛磺酸内流，而牛磺酸能抑制Ｃａ２＋的内流，两者相互影响，从而发挥牛碘酸调节细胞内Ｃａ２＋浓度的作用     

过氧化氢对乳鼠心肌细胞内游离钙浓度的影响及牛磺酸的拮抗作用

目的:研究过氧化氢(H₂O₂)对心肌细胞i的影响,以及牛磺酸对H₂O₂诱导钙超载的拮抗作用。方法:采用SD大鼠乳鼠进行心肌细胞培养,实验分4组:①正常对照组;②H₂O₂组:加入终浓度为100μmol/L的H₂O₂;③H₂O₂＋牛磺酸(同时)组:牛磺酸30mmol/L与H₂O₂100μmol/L同时加入;④H₂O₂＋牛磺酸(先后)组:先加入终浓度为100μmol/L的H₂O₂,2min后再加20mmol/L的牛磺酸。以Fluo-3/AM荧光指示剂负载,应用激光共聚焦显微镜技术,分别于加入H₂O₂后即刻与15min,检测i变化。结果:对照组心肌细胞内荧光强度和荧光光密度值较低。H₂O₂加入后即刻,细胞内荧光光密度值开始增加,15min后细胞内荧光强度和荧光光密度值显著高于对照组(P＜0.05)。而H₂O₂＋牛磺酸(同时)组细胞内荧光光密度值显著低于H₂O₂组(P＜0.05vsH₂O₂组);H₂O₂＋牛磺酸(先后)组细胞内荧光光密度值显著低于H₂O₂组(P＜0.05vsH₂O₂组)。结论:H₂O₂可引起心肌细胞内钙超载;牛磺酸能显著减轻H₂O2诱导的心肌细胞内Ca²⁺超载。     

挤压伤大鼠血清对心肌细胞蛋白质合成的影响

目的：观察挤压伤大鼠血清对培养的心肌细胞蛋白质合成的作用。方法：培养1-3 d龄SD乳鼠心肌细胞，观察挤压伤大鼠血清和正常大鼠血清对心肌细胞表面积、蛋白质含量、[³H]-Leu掺入的影响。结果：挤压伤大鼠血清组心肌细胞表面积、蛋白质含量、[³H]-Leu掺入明显大于正常大鼠血清组，且效应呈浓度依赖性。结论：肢体挤压伤大鼠血清可使培养的心肌细胞蛋白质合成增加，引起细胞肥大.     

5-羟色胺对心肌细胞增殖及蛋白激酶C活性的影响

目的：观察5-羟色胺（5-HT）对新生大鼠心肌细胞增殖及蛋白激酶C（PKC）活性的影响，探讨5-HT在心肌肥大发病中的作用。方法：培养乳鼠心肌细胞,应用BCA法测定细胞总蛋白；流式细胞仪测定DNA含量；同位素底物掺入检测PKC活性。结果：5-HT在1 μmol·L^-1、10 μmol·L^-1和100 μmol·L^-1时均显著促进心肌细胞蛋白质和DNA合成，以10 μmol·L^-1剂量时作用最强。5-HT在1 μmol·L^-1和10 mol·L^-1剂量时可加强心肌细胞PKC活性，并促使PKC从胞浆移位到细胞膜，5-HT₂受体拮抗剂mianserin可逆转此作用。结论：5-HT可促进新生大鼠心肌细胞总蛋白和DNA合成，并通过心肌细胞5-HT₂受体激活PKC活性，促使PKC从胞浆移位到细胞膜，提示5-HT可能参与心肌肥大的发生发展过程.     

心肌缺血后处理对大鼠I/R心肌梗死范围及蛋白激酶Cα的影响

目的:探讨心肌缺血后处理(IPTC)对心肌缺血/再灌注(I/R)梗塞面积和PKCα表达的影响。方法:Evan’s蓝、TTC染色,观察心肌IPTC与缺血预处理(IPC)对大鼠I/R心肌梗死范围(IS)的影响,免疫组化技术观察心肌IPTC对心肌组织中PKCα的表达。结果:①IPTC组的梗死面积(IS)显著低于I/R组(P <0 . 0 1) ,心肌细胞膜PKCα表达明显多于I/R组(P <0 . 0 1) ;②IPTC组的IS、心肌细胞膜PKCα的表达与IPC组无显著差异(P >0 . 0 5 )。结论:心肌IPTC能减少大鼠心肌梗死范围,其机制可能与心肌细胞膜PKCα的表达有关。     

PKC和ERK在大鼠心肌缺氧预处理延迟保护机制中的作用

目的:探讨蛋白激酶C(PKC)和细胞外信号调节激酶(ERK)在大鼠缺氧预处理(APC)延迟保护机制中的作用及二者之间的相互关系。方法:建立培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧(A/R)损伤和APC延迟心肌保护模型,用PKC兴奋剂(PMA)模拟预处理延迟保护模型,分别应用PKC和ERK抑制剂干预模型,并在各组相当于预处理后10min取材检测ERK活性。以实验终点检测培养基中乳酸脱氢酶(LDH)活性、细胞存活率、心肌细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量作为心肌细胞损伤的指标。结果:预处理组心肌细胞存活率和SOD含量均显著高于A/R组(P＜0.05),培养液内LDH漏出和心肌细胞内MDA含量显著低于A/R组(P＜0.05),ERK活性显著高于A/R组(P＜0.05),应用PMA激活PKC可以模拟预处理的保护作用;ERK阻滞剂PD98059消除了缺氧和PMA的预处理保护作用,并抑制了预处理后的ERK活性的升高;PKC抑制剂多粘菌素B对APC引起的ERK激活及延迟保护作用无明显影响,但可抑制PMA诱导的保护现象。结论:ERK活化可能是APC延迟保护机制中的必须信号转导途径;PKC活化可以通过激活ERK启动缺氧预处理的延迟保护机制。