三氧化二砷对纤维肉瘤细胞放射增敏作用的研究

目的 研究和探讨三氧化二砷（As2O3）是否对纤维肉瘤细胞有放射增敏作用。方法以人纤维肉瘤细胞HTl080为实验对象，首先检测As2O3的单药毒性，确定IC10、IC50和IC90。放射增敏作用的实验分为空白对照组、单纯给药组、单纯照射组（包括1、2、4、6、8、10Gy剂量）、照射前加药组（于照射前24h加入设定浓度的As2O3，药物作用24h后进行照射）和照射后加药组（于照射后即刻加入设定浓度的As2O3，药物作用24h）。所有实验均重复3次。采用克隆形成分析法观察单纯照射和照射联合As2O3对细胞的杀伤作用。计算细胞的存活分数，用多靶单击模型进行拟合并做图。结果 HT1080细胞的IC10、IC50和IC90剂量分别为0．57、3．67和12．0μmol／L。无毒剂量的As2O3照射前给药增敏比（SER）为0．86（Do值比）、0．98（SF2值比），照射后给药SER为0．99（Do值比）、1．09（SF2值比）。IC50剂量的As2O3照射前给药SER为0．90（Do值比）、0．87（SF2值比），照射后给药SER为1．14（Do值比）、1．08（SF2值比）。IC90剂量的As2O3照射前给药和照射后给药的SER均为1．14（Do值比）、3．20（SF2值比），As2O3对低剂量照射的放射增敏作用好于高剂量照射（SERSF2〉SERDo）。结论 As2O3对HT1080纤维肉瘤细胞具有一定的放射增敏作用，为临床放疗和As2O3联合应用提供了实验依据。     

紫杉醇联合放射线照射对肺腺癌细胞放射增敏作用的研究

目的 探讨化疗药紫杉醇是否对肺腺癌A973细胞有放射增敏作用.方法 取指数生长期的人肺腺癌细胞A973,采用成克隆分析法检测紫杉醇毒性,确定IC10、IC50和IC90剂量作为药物浓度.分析照射前后紫杉醇IC10、IC50和IC90浓度下作用24 h,照射剂最分别为0、1、2、4、6、8、10 Gy时的细胞存活分数,并用多靶单击模型拟合细胞存活曲线.采用流式细胞术分析不同浓度紫杉醇作用0、2、4、6、10、18、24 h,A973细胞周期分布变化.结果 紫杉醇对A973细胞的IC10、IC50和IC90剂量分别为0.5、2.6和8.7 nmol/L.IC10剂量紫杉醇照前给药增敏比为0.97(D0值比)、1.01(D0值比)、1.00(SF2值比),照后给药为0.97、1.02、1.02;IC50剂量照前给药为1.06、129.00、2.61,照后给药为0.94、129.00、2.14;IC90剂量照前给药为1.00、120.00、2.09,照后给药为0.98、120.00、2.09.IC10剂量紫杉醇对A973细胞无明显的G2+M期阻滞作用,而IC50和IC90剂量紫杉醇分别于2和18 h将A973细胞阻滞在G2+M期.结论 紫杉醇对肺腺癌细胞A973产生明显的放射增敏作用,且照射前后给药均有相似的增敏作用,中高浓度剂量联合小剂量X线照射增敏效果最好.     

紫杉醇联合放射线照射对鼻咽癌细胞的放射增敏效应

目的探讨化疗药紫杉醇(PTX)联合放射线照射对鼻咽癌细胞的放射增敏作用。方法取指数生长期的CNE-I细胞,采用克隆形成分析法检测PTX的单药毒性,确定IC10、IC50和IC90剂量作为实验的药物浓度。分析照射前后PTX IC10、IC50和IC90浓度下作用24 h,照射剂量分别为0～10 Gy时对CNE-I细胞的放射增敏效应。采用流式细胞术分析不同浓度PTX作用0、2、6、12、18和24 h CNE-I细胞周期分布的变化。结果PTX对CNE-I细胞的IC10、IC50和IC90剂量分别为0.05、1.0和2.5 nmol/L。当小剂量照射前后,分别用0.05和1.0 nmoL/L PTX作用24 h,具有一定放射增敏作用。PTX浓度为2.5和10.0 nmol/L时,CNE-I细胞出现明显的G2/M期阻滞,高峰出现在18 h。结论在适当的结合序贯的基础上,PTX联合放射线照射对CNE-I细胞具有放射增敏效应,其增敏作用可能与PTX导致的细胞G2/M期阻滞相关。     

鹤草酚对人肺腺癌A549细胞株放射增敏作用的实验研究

[目的]探讨鹤草酚对人肺腺癌A549细胞株的放射增敏作用.[方法]MTT法测定0、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0和32.0μmol/L浓度鹤草酚对人肺腺癌A549细胞株的生长抑制率.实验分4组:常氧照射组、乏氧照射组、0.887 μmol/L鹤草酚+乏氧照射组和1.774μmol/L鹤草酚+乏氧照射组,测定各组存活分数(SF),计算细胞生存率,拟合细胞生存曲线并计算放射增敏比.[结果] MTT结果表明,鹤草酚对人肺腺癌A549细胞有生长抑制作用,不同浓度鹤草酚作用组间细胞抑制率有显著性差异(F=26.818,P=0.002).鹤草酚作用A549细胞的IC50为8.87μmol/L.0.887、1.774μmol/L鹤草酚联合乏氧照射组的D0、Dq和2Gy时的细胞存活分数(SF2)均小于单纯乏氧照射组.0.887μmol/L和1.774μmol/L鹤草酚联合乏氧照射组的放射增敏比(SER)分别为1.484和1.525.[结论]鹤草酚对人肺腺癌A549细胞株有抑制增殖作用,其常氧培养IC50值为8.87μmol/L.鹤草酚对乏氧培养的人肺腺癌A549细胞株有放射增敏作用,随着鹤草酚浓度的增加其放射增敏作用增强.     

吉非替尼对肝癌Bel7402细胞株放射增敏作用的实验研究

目的:观察不同浓度的吉非替尼(gefitinib)联合不同剂量放疗对人肝癌Bel7402细胞株的放射增敏作用。方法:采用MTT法测定浓度分别为0、1、2.5、5、10、20、40和80μmol/L Gefitinib对肝癌Bel7402细胞株的生长抑制率;克隆形成实验测定SF(存活分数),观察放射敏感性,计算细胞生存率,拟合生存曲线并计算放射增敏比,观察放射增敏作用。结果:MTT实验结果表明,Gefitinib单独作用于肝癌Bel7402细胞株具有对细胞生长抑制作用,其IC50(半数抑制浓度)为7.26μmol/L。不同浓度的Gefitinib与不同剂量照射人肝癌Bel7402细胞株,SF与单纯放射治疗相比其差异均有统计学意义,P<0.05。多靶单击模型,拟合生存曲线为人肝癌Bel7402细胞株R(放疗)+0.1×IC50Gefitinib、R+0.2×IC50Gefitinib生存分数其放射增敏比(SER)分别为1.237 5和1.345 6。结论:Ge-fitinib对肝癌Bel7402细胞株有抑制增殖作用,其IC50值为7.26μmol/L。Ge-fitinib对肝癌Bel7402细胞株有放射增敏作用,...     

艾迪注射液对肺癌细胞A549放射增敏作用的实验研究

目的研究艾迪注射液对人肺腺癌细A549放射增敏作用及机制。方法（1）MTT法测定药物对细胞的抑制作用,计算半数抑制浓度IC50。（2）应用集落形成法观察药物对细胞的放射增敏作用。（3）流式细胞仪分析药物对细胞周期分布、凋亡的影响。结果药物作用48小时后,细胞生长受到抑制,且细胞抑制率随药物浓度的升高而增加。IC50为16.04 mg/mL。加药照射组与单纯照射组比较,细胞存活率下降,药物有放射增敏作用,随药物作用时间的延长放射增敏作用增强。单纯照射组、加药24小时、48小时后照射组三组D0值依次为2.13 Gy、2.04 Gy、1.64 Gy,Dq值依次为2.88 Gy、1.68 Gy、1.51 Gy,加药24小时及48小时后照射组放射增敏比SERD0分别为1.04、1.3,SERDq分别为1.71、1.91。流式细胞仪检测药物作用后G2/M期细胞增加,细胞凋亡率升高,药物作用时间延长以上变化更显著。结论艾迪注射液对肺癌细胞A549有抑制作用及放射增敏作用,其放射增敏作用机制可能为抑制细胞亚致死损伤修复,阻滞细胞于G2/M期,诱导细胞凋亡。     

反义Snail转录因子诱导MG-63细胞凋亡增加顺铂化疗敏感性的研究

[目的]探讨反义Snail转录因子对人骨肉瘤细胞株MG-63顺铂化疗敏感性的影响。[方法]用脂质体转染法将高转移性骨肉瘤细胞株MG-63分别转染反义Snail质粒（pGenesil-snailAS）和空载体质粒（pGenesil）。MG-63组（对照组）、MG-63/pGenesil组和MG-63/pGenesil-snailAS组细胞分别与浓度为0、0.5、1、5、10、15、20μg/ml顺铂作用72h。MTT法测定各组细胞的存活率并计算IC50,FCM检测细胞凋亡,Westernblot检测各组细胞Snail蛋白表达。[结果]细胞稳定转染pGenesil-snailAS后,细胞内Snail蛋白表达明显被抑制。MG-63、MG-63/pGenesil和MG-63/pGenesil-snailAS组细胞的顺铂IC50分别为14.0±1.8、12.6±1.6和2.8±0.5μg/ml,MG-63/pGenesil-snailAS组细胞对顺铂作用的敏感性增加了5倍。顺铂对MG-63/pGenesil-snailAS组细胞所诱导的凋亡比MG-63组和MG-63/pGenesil组显著。[结论]反义Snail转录因子能诱导人骨肉瘤细胞株MG-63凋亡并抑制其生长,增加其对顺铂化疗敏感性。     

环氧化酶-2抑制剂对肺癌细胞的增殖抑制和放射增敏的实验研究

目的研究环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响及其对A549细胞的放射增敏作用.方法噻唑蓝(MTT)比色法检测塞来昔布对肺癌A549细胞存活的影响;流式细胞分析法(FCM)检测对A549细胞周期时相影响及凋亡的作用;体外培养克隆形成率的方法检测塞来昔布对A549细胞的放射增敏作用.结果塞来昔布对肺癌A549细胞有明显的增殖抑制作用,这种抑制作用有时间和剂量依赖性,50μmol/L处理24和72 h的抑制率分别为(4.27±1.33)%、(10.63±2.23)%,100μmol/L处理分别为(33.47±8.02)%、(61.97±7.32)%,主要是抑制增殖,使细胞聚集在G0/G1期,100μmol/L处理72 h还有细胞死亡.塞来昔布无凋亡诱导作用,也不增加放射诱导的凋亡.体外培养克隆存活曲线分析显示,100μmol/L塞来昔布处理24和72 h降低了各个照射剂量点的存活分数(72 h比24 h作用强),但在照射高剂量区更明显.对照、100μmol/L处理24、72 h在2 Gy剂量点的存活分数(SF2)分别为(0.53±0.06)、(0.52±0.11)和(0.46±0.05),处理24和72 h的放射增敏比为1.27和1.7(D0值比).结论塞来昔布对肺癌A549细胞有明显的增殖抑制作用,呈时间和剂量依赖性,使细胞聚集在G0/G1期,但无诱导凋亡作用.塞来昔布对肺癌A549细胞有放射增敏作用,在高照射剂量区增敏作用更为明显.     

半人工合成手性多西紫杉醇对肺腺癌细胞株A549的细胞毒性及放射增敏作用

目的：探讨半人工合成手性多西紫杉醇对人肺癌细胞株A549的细胞毒性及放射增敏作用。方法：半人工合成手性多西紫杉醇，测定其对A549细胞的生长抑制作用，观察其对A549细胞的形态学影响及其放射增敏作用和对动物荷瘤模型的作用。结果：不同浓度半人工合成紫杉醇对A549细胞均有抑制作用，可引起A549细胞G2／M期阻滞，抑制荷瘤小鼠模型肿瘤的生长，其中空白对照组、单纯药物组、单纯放射组和联合处理组的肿瘤体积分别为（7780±1050）mm^3、（4610±950）mm^3、（5540±1035）mm^3和（560±112．5）mm^3。各组间有明显差异。结论：半人工合成紫杉醇对A549细胞株具有明显的抑制作用，且与射线照射有协同作用。     

曲古霉素A对宫颈癌HeLa细胞的毒性及放射增敏作用

目的探讨曲古霉素A（TSA）对宫颈癌HeLa细胞的毒性及放射增敏作用。方法MTT法检测TSA处理宫颈癌HeLa细胞12、24、48、72 h的细胞毒性及TSA作用24 h的10%细胞抑制浓度（10％ inhibition concentration,IC10）和半数抑制率IC50对HeLa细胞不同分割放疗方式的增敏效果;克隆形成法分析IC10 的TSA对HeLa细胞放射增敏作用的影响,单击多靶模型拟合细胞存活曲线,计算放射增敏比（sensitive enhencement ratio,SER）。结果0.05~0.8 μmol/L TSA对HeLa细胞具有增殖抑制作用,且呈一定的时间－剂量依赖性,TSA作用24 h的IC10和IC50分别为0.0312和0.5865。0.6 μmol/L以上浓度及药物作用时间超过48 h的TSA对HeLa细胞的增殖抑制作用并无明显增加。IC10曲古霉素A的SER为1.6858,IC10的TSA对每次2.0 Gy、1.0 Gy（×2）、0.5 Gy（×4）分割放射组的SER分别为1.4496、1.6410、1.9554。结论TSA对宫颈癌HeLa细胞具有良好的细胞毒性及放射增敏作用,且对低剂量多次分割放疗的增敏作用更强。     

骨肉瘤MG-63细胞中Survivin的表达及其反义寡核苷酸对细胞增殖与凋亡的作用

目的 探讨Survivin在骨肉瘤细胞中的表达及Survivin反义寡核苷酸（ASODN）对骨肉瘤MG-63细胞增殖和凋亡的影响。方法 设计针对Survivin的ASODN和正义核苷酸（SODN）序列,制备脂质体-寡核苷酸复合物并转染MG-63细胞,分为空脂质体（Lip）组、脂质体介导的SODN（Lip-SODN）组和脂质体介导的ASODN（Lip-ASODN）组。采用免疫细胞染色法检测MG-63细胞中Survivin的表达情况,Western blotting检测各组转染48h后的Survivin蛋白水平,MTT法检测转染24、48和72h后MG-63细胞的增殖情况,流式细胞仪检测转染48h后MG-63细胞的凋亡情况。结果 Survivin主要表达于MG-63细胞的胞核。Lip-ASODN组的Survivin蛋白水平均低于Lip-SODN组和Lip组。不同浓度Survivin ASODN对MG-63细胞的增殖抑制程度不同,Lip-ASODN组的细胞增殖抑制率高于Lip组,且呈浓度依赖性;而Lip-SODN组的增殖抑制率与Lip组的差异无统计学意义（P＞0.05）。Lip-ASODN组的凋亡率为（88.47±0.79）％,高于Lip组的（10.01±0.90）％和Lip-SODN组的（4.12±0.25）％,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 靶向Survivin的ASODN可以显著抑制骨肉瘤MG-63细胞的增殖能力,并促进其凋亡。     

紫杉醇放射增敏作用的分子机制

背景与目的：紫杉醇作为一种放射增敏剂,能稳定微管系统,把细胞阻断在G2／M期从而改变肿瘤细胞的放射反应性。但其分子机制目前还未完全阐明,本文旨在研究紫杉醇的放射增敏作用及其分子机制。方法：克隆形成实验分析不同浓度紫杉醇联合不同剂量照射对KB细胞增殖抑制率的影响,多靶单击拟合模型方程测定各组细胞放射增敏比并评价增敏效果;流式细胞仪检测KB细胞经紫杉醇及射线共同作用后细胞周期分布变化;采用基因芯片技术筛选与紫杉醇放射增敏作用相关的差异表达基因;荧光定量PCR验证芯片提示细胞分裂相关基因PRCl、cvclin B2的变化。结果：紫杉醇与射线协同作用能明显抑制KB细胞增殖,20nmol／L药物协同射线作用时SERD。及SERD。分别为2．40±1．87、12．23±2．81。药物加照射处理后G1期细胞由48．32±2．40％下降为15．73±7．00％（P〈0．01）,G2／M期细胞由13．66±2．16％上升到52．51±5．02％（P〈0．01）。基因芯片结果显示的差异变化基因中共有176条与紫杉醇放射增敏作用相关,10条在调控细胞分裂过程中起作用,其中上调表达2条,下调表达8条。荧光定量PCR证实与细胞分裂相关的PRCl和Cyclin B2均下调表达,与芯片结果一致。结论：紫杉醇对KB细胞有明显的放射增敏作用,其机制可能是使细胞有丝分裂相关基因PRC1和Cyclin B2表达特异性下调．导致双极纺锤体形成受阻。细胞无法完成正常的分裂,从而使细胞增殖受到抑制并最终死亡。     

沉默HOXC10基因促进骨肉瘤MG-63细胞凋亡及其机制

目的:探讨沉默同源框C10（Homeobox C10,HOXC10）基因表达对骨肉瘤细胞MG-63细胞增殖和凋亡的影响,并初步探讨可能的作用机制。方法:采用脂质体转染法将特异性针对HOXC10基因的shRNA转入骨肉瘤MG-63细胞（HOXC10-shRNA组）,同时以转染Scramble-shRNA作为对照组（Scramble-shRNA组）,分别应用实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测HOXC10 mRNA及蛋白的表达水平。转染处理后,分别采用CCK-8法及FCM法检测骨肉瘤MG-63细胞的增殖抑制率及凋亡情况,采用蛋白质印迹法检测HOXC10、ATM和核因子-κB（nuclear factor kappa B,NF-κB)及凋亡相关蛋白Survivin和Caspase-3的表达水平。结果:HOXC10-shRNA转入MG-63细胞后,HOXC10 mRNA和蛋白的表达水平均明显下调（P均<0.05）。与Scramble-shRNA组细胞活力（0.95±0.12）%和凋亡率（4.35±0.52）%相比,HOXC10-shRNA组细胞活力（0.38±0.06）%明显下降,细胞凋亡率为（18.19±3.76）%明显升高（P均<0.05）;ATM/NF-κB信号通路中相关蛋白ATM、NF-κB及Survivin的表达水平均明显下调（P均<0.05）,而Caspase-3表达明显上调（P<0.05）。结论:沉默HOXC10基因表达后可抑制骨肉瘤MG-63细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与调控ATM/NF-κB信号通路的活化相关。     

拓扑替康不同时间给药对人鼻咽癌细胞放射增敏作用的实验研究

目的　探讨拓扑替康联合放射线照射在不同时间给药对人鼻咽癌细胞株ＣＮＥ-２的放射增敏作用。方法　取指数生长期的鼻咽癌细胞株ＣＮＥ-２,采用ＷＳＴ １法测定拓扑替康的ＩＣ₁₀和ＩＣ_５０值。实验分为空白对照组、单纯药物组、单纯照射组和照射＋药物组,其中照射＋药物组根据不同的给药时间再分为１５个组,分别为放疗前、后的２４、１２、８、４、２、１、０.５ｈ给药和放疗同时给药组,Ｘ线照射剂量为０、０.５、１、２、３、４、６、８、１０Ｇｙ。采用多靶单击数学模型拟合细胞存活曲线,得出Ｄ_０、Ｄ_ｑ、ＳＦ₂及放射增敏比ＳＥＲＤ０及ＳＥＲＤｑ。结果　以拓扑替康对鼻咽癌ＣＮＥ-２细胞系ＩＣ_１０（０.０１ｍｇ／ｍｌ）作为给药浓度,随着给药与照射时间的间隔不同,Ｄ_０、Ｄ_ｑ、ＳＦ_２越小,ＳＥＲＤ_０、ＳＥＲＤ_q则越大,放射增敏作用的最佳给药时间集中在照射前０.５ｈ至照射后１ｈ之间,照射同时给药放射增敏效果最佳（ＳＥＲＤ₀＝１.３６５,ＳＥＲＤ_q＝５３.５８）。结论　低剂量的拓扑替康联合Ｘ线照射需注意给药时间,以照射前０.５ｈ至照射后１ｈ为宜。     

吉西他滨抑制骨肉瘤细胞系MG-63增殖和诱导凋亡的实验研究

目的研究吉西他滨对骨肉瘤细胞系MG-63的增殖抑制和凋亡诱导作用。方法利用光镜检测吉西他滨作用后MG-63的形态学变化;MTT法检测吉西他滨对MG-63的增殖抑制;流式细胞仪AnnexinV-FITC法检测细胞凋亡,琼脂糖凝胶电泳检测DNA ladder。结果吉西他滨可明显地抑制MG-63细胞生长,各实验组24、48、72小时抑制率随时间的增加而增加,差异有统计学意义（P〈0.05）,0.1 mg/L及以上浓度的吉西他滨对MG-63骨肉瘤细胞的抑制率可达50%,0.1-100 mg/L的吉西他滨对MG-63的抑制率相似。吉西他滨可诱导MG-63细胞凋亡,在不同浓度吉西他滨（0.1,1.0,10.0,100 mg/L）作用48小时后,MG-63的凋亡率差异无统计学意义（P〉0.05）。并且经琼脂糖凝胶电泳可以显示DNA ladder。结论吉西他滨对骨肉瘤细胞系MG-63具有增殖抑制作用,并且各实验组24、48、72小时抑制率随时间的增加而增加;吉西他滨对骨肉瘤细胞系MG-63具有诱导凋亡作用;0.1-100 mg/L吉西他滨对MG-63的增殖抑制和诱导凋亡作用相似。     

TK/GCV系统联合顺铂对骨肉瘤MG-63细胞生长的抑制作用研究

目的 研究脂质体介导的包含TK基因的质粒pIRES-EGFP-tk在GCV作用下（TK/GCV系统）联合化疗药物顺铂对人骨肉瘤MG-63细胞生长的抑制作用。方法 构建重组质粒pIRES-EGFP-tk,制备和转化感受态大肠杆菌BL21及鉴定测序,培养和转染人骨肉瘤MG-63细胞株,流式细胞仪分析和荧光倒置显微镜下观察细胞生长状态,筛选稳定细胞系,MTT法检测GCV与不同浓度顺铂联合应用对骨肉瘤MG-63细胞株生长的抑制作用。结果 成功构建含TK基因cDNA片段的重组质粒pIRES-EGFP-tk,通过PCR、酶切电泳等方法鉴定质粒位点和大小均符合实验设计。将重组质粒pIRES-EGFP-tk转染入人骨肉瘤MG-63细胞株,获得稳定表达。荧光显微镜下观察MG-63 （tk＋）呈现绿色荧光。流式细胞仪检测转染率为67.7%。通过MTT法检测,当GCV浓度为10 μg/ml时,骨肉瘤MG-63 （tk＋）细胞株的生长受到抑制,同时测得顺铂的最低有效浓度为1 μg/ml。当顺铂与GCV （5 μg/ml）联合应用时,顺铂的有效浓度可降为0.25 μg/ml,并对MG-63 （tk＋）细胞株有明显的抑制作用。结论 TK/GCV系统联合顺铂可对人骨肉瘤MG-63细胞的生长产生抑制作用,并提高MG-63细胞对顺铂的敏感性,降低其有效剂量。可望为骨肉瘤的辅助治疗提供实验依据。     

miR-203a-3p靶向AKT2增强骨肉瘤细胞的放射敏感性

目的:研究miR-203a-3p对骨肉瘤MG-63细胞凋亡和放射敏感性的影响及潜在作用机制.方法:qRT-PCR检测AKT2 mRNA的表达水平及不同放射剂量(0、2、4、6、8 Gy)照射后MG-63细胞中miR-203a-3p的表达水平,克隆形成实验检测不同放射剂量处理后细胞存活分数,流式细胞术测定MG-63细胞凋...     

白花丹素对骨肉瘤MG-63细胞迁移的影响及其作用机制

目的 观察白花丹素对骨肉瘤细胞迁移的抑制作用并初步探讨其可能的机制.方法 以2.5 μmol/L、5μmol/L和10 μmol/L浓度白花丹素分别作用于骨肉瘤MG-63细胞,以含0.1％ DMSO完全培养基为对照组.作用24 h后,Transwell法观察骨肉瘤MG-63细胞迁移能力,Real-time PCR检测骨肉瘤MG-63细胞中Ezrin基因mRNA表达情况,Westem blot检测Ezrin蛋白和p-Ezrin的表达情况.结果 Transwell结果显示,作用24h后,各实验组下层小室细胞数明显减少,2.5 μmol/L组、5μmol/L组和10 μmol/L组的细胞迁移率分别为(69.9±4.5)％、(39.3±3.5)％和(26.2±4.1)％,呈浓度依赖性(P＜0.05);Real-time PCR结果显示,骨肉瘤MG-63细胞中Ezrin mRNA表达水平明显下降,呈浓度依赖性(P＜0.05).Western blot结果显示,Ezrin蛋白和p-Ezrin的表达量明显降低,呈浓度依赖性(P＜0.05).结论 白花丹素能够抑制骨肉瘤MG-63细胞迁移,其作用机制可能与抑制骨肉瘤MG-63细胞中Ezrin的表达及活化有关.     

RIPK4在骨肉瘤组织和细胞中的表达及其意义

目的研究RIPK4（Receptor-interacting protein kinase 4）基因在骨肉瘤组织及骨肉瘤细胞中的表达情况并探讨其表达的临床意义。方法 采用免疫组化染色法检测30例骨肉瘤及10例骨软骨瘤患者瘤组织中RIPK4表达情况,分析其表达与骨肉瘤临床病理特征的关系;RT-PCR检测正常成骨细胞、骨肉瘤MG-63及U-2OS细胞中RIPK4 mRNA表达情况,并比较其差异。结果 30例骨肉瘤中RIPK4阳性表达18例（60.0％）,10例骨软骨瘤中RIPK4阳性表达2例（20.0％）,差异有统计学意义（P＜0.05）。正常成骨细胞中RIPK4 mRNA为0.6500±0.2121,低于骨肉瘤MG-63细胞的1.6079±0.2661及U-2OS细胞的1.5000±0.1414,差异有统计学意义（P＜0.05）。RIPK4蛋白表达与临床分期及是否发生肺转移显著相关,差异有统计学意义（P＜0.05）,而与性别、年龄及病理分型等无关（P＞0.05）。结论 RIPK4 mRNA和蛋白在骨肉瘤组织及细胞中均有较强表达,RIPK4基因可能参与骨肉瘤的发生发展过程。     

miR-106a负调控PTEN促进骨肉瘤细胞增殖并抑制凋亡

目的:研究miR-106a在骨肉瘤组织和MG-63细胞中的表达水平及其对MG-63细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法:用荧光实时定量PCR法检测20对骨肉瘤和相邻正常组织及MG-63和成骨细胞hFOB 1.19中miR-106a的表达。用miR-106a mimics、miR-106a antagomir 及两者相应的对照物转染MG-63细胞,然后分别用CCK-8法检测四组细胞增殖活性和FCM法检测细胞凋亡率。miR-106a mimics和mimics control与野生型或突变型PTEN 3'-UTR 重组载体共转染后,应用荧光素酶基因报告系统检测miR-106a是否与PTEN基因3'-UTR 结合。利用Western blot技术检测PTEN蛋白在上述四组转染MG-63细胞和骨肉瘤标本中的表达水平。结果:与相邻正常组织（1.19±0.15）相比,肿瘤组织miR-106a的表达水平（2.60±0.86）显著升高;同时,miR-106a在MG-63中的表达水平（2.60±0.92）明显高于hFOB 1.19（1.19±0.39）,以上差异均有统计学意义（P＜0.05）。CCK-8和FCM检测结果显示,与mimics control组相比,miR-106a mimics组的增殖率明显增加,而细胞凋亡率下降;反之,miR-106a antagomir组与antagomir control组相比,增殖率前者低于后者,而凋亡率前者高于后者,上述差异均有统计学意义（P＜0.05）。荧光素酶报告实验显示,miR-106a mimics和wt PTEN 3'-UTR共转染组的荧光强度值明显低于mimics control和wt PTEN 3'-UTR组（P＜0.05）。Western blot发现,与对照组相比,miR-106a mimics组PTEN表达下调,而miR-106a antagomir表达上调;临床标本,肿瘤组织PTEN表达明显低于正常组织,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论:miR-106a在骨肉瘤组织及细胞中过表达,并靶向负调控PTEN表达,促进骨肉瘤细胞增殖并抑制其凋亡,从而发挥促癌作用。因此,miR-106a可为骨肉瘤的诊治提供新的潜在分子靶点。