单克隆抗体ELISA间接夹心法检测家鼠型HFRS疫区人和动物血清中特异性抗体

用McAb-ELISA间接夹心法和IFAT或酶标SPA染色法平行检测山西地区(家鼠型HFRS疫区)的人及动物血清中HFRS病毒特异性IgM和/或IgG抗体。结果ELISA检测174份HFRS病人血清的阳性率及抗体滴度均明显高于IFAT。检测295份无明确HFRS病史的健康人血清,ELISA的阳性率也高于IFAT。检测215份鼠类血清,102份兔血清及108份猪血清,ELISA的阳性检出率与IFAT或酶标SPA染色法基本相同。用阻断试验等证明本ELISA检出的确是HFRS病毒特异性抗体。对ELISA的某些试验条件作了讨论,并认为,McAb-ELISA在帮助临床早期诊断及血清流行病学调查等方面均有实用价值。     

应用抗人μ链McAb和APAAP法检测HFRS患者血清中IgM抗体

<正> 肾综合征出血热(HFRS)患者的早期特异性诊断多采用免疫荧光法检测血清中IgM抗体。最近有报道采用抗人μ链McAb荧光结合物检测患者血清IgM抗体。本文以HFRS病毒陈株感染Wish细胞作为抗原     

酶标记抗人IgM McAb及其初步鉴定应用

采用辣根过氧化物酶(HRP),以改良过碘酸钠法标记了国内三个单位制备的6种抗人IgM单克隆抗体(McAb),并对其进行了初步鉴定和应用,结果显示这些HRP标记抗体的效价高低不一。分析表明McAb与多克隆抗体一样,其标记前的效价高低是决定HRP标记后效价高低的关键因素。选择高效价的HRP-抗人IgM McAb用于ELISA间接夹心法中检测病人血清特异性IgM抗体,其特异性和敏感性与采用HRP-羊抗人μ链免疫血清检测结果基本相同。     

微斑免疫酶技术在检测肾综合征出血热病毒及其特异抗体中的应用

本文报道一种简便且快速的方法—微斑免疫酶技术(MPIPA),检测Vero-E6细胞培养的肾综合征出血热(HFRS)病毒及其特异抗体,并与免疫荧光技术(IFA),酶联免疫吸附技术(ELISA)进行比较。结果,本法用于检测HFRS患者血清IgG抗体和抗HFRS病毒单克隆抗体(McAb),其敏感性介于ELISA和IFA之间;用于检测Vero—E6细胞培养的病毒,阳性结果比IFA和细胞病变(CPE)出现早。MPIPA具有简单,快速、敏感性高、特异性好,结果易判定诸优点,便于基层医疗单位推广应用,适合于临床HFRS血清标本的检测和血清流行病学调查。     

一株人单克隆抗体在快速竞争抗HIV ELISA中的应用

建立了直接检测抗HIV抗体的ELISA筛选技术。第一代测定法主要是根据夹心法的原理,利用从细胞培养中纯化的病毒,但这样会出现假阳性和假阴性的结果。先前应用的夹心法需要高倍稀释的血清和两步程序,而且只能检出IgG抗体。为了尽早地在感染后测定IgM抗体,以检出抗HIV的免疫应答,因此;利用吸附在固相的重组HIV囊膜蛋白和酶标人单克隆抗体,建立了一种竞争ELISA法。该法既可检测IgM又能检测IgG抗体,而且不需要预先释稀血清,1小时内可得出结果。     

ELISA检测抗-HBs分子的抗独特型IgG和IgM

作者建立了检测抗HBs分子的抗独特型抗体——IgG和IgM的ELISA方法。用96孔聚乙烯板作为固相载体,包被兔抗人IgG或IgM;0.5％的明胶封闭后加待检血清,再加辣根过氧化物酶标记的羊抗HBs,最后加底物染色。该法简单敏感。检测前待检血清需经PEG处理,除去HBs/IgG和HBs/IgM。作者检测了HBsAg阳性的血     

细胞因子及特异性抗体的检测在肾综合征出血热诊断中的意义

探讨检测血清细胞因子及肾综合征出血热(HFRS) 病毒特异性抗体IgM和IgG的含量在HFRS发病机制及诊断中的意义.选择24例HFRS患者及30例健康人血清标本,采用生物素-亲和素-酶免疫技术检测IL-2、IL-6和TNF-α,ELISA方法检测血清HFRS病毒特异性抗体IgM和IgG,并对其进行统计学分析. 结果显示, ELISA法检测HFRS患者抗HFRS病毒IgM和IgG的阳性率分别为75.00 % 和50.00 %,健康对照组的抗体阳性率为零;HFRS患者血清IL-2、IL-6、TNF-α的含量分别为10.88±2.31pg/mL、256.46±102.51pg/mL和45.63±5.32pg/mL,高于健康对照组0.59±0.24pg/mL(P＜0.01)、53.8±19.21 pg/mL(P＜0.01)和5.81±3.58 pg/mL(P＜0.01). 结论 :HFRS患者血清IL-2、IL-6和TNF-α及血清特异性抗体IgM和IgG的含量较健康人明显升高,检测这些指标对该病发病机理、诊断及预后评价有一定意义.     

流式微球载体技术在检测肾综合征出血热患者血清特异性抗体和细胞因子中的应用

目的:建立流式微球载体技术(FMA)检测肾综合征出血热(HFRS)患者血清抗HFRS 病毒特异性抗体IgM和IgG及细胞因子含量的新方法.方法:选择28例临床确诊的HFRS患者及20例健康人血清标本,FMA定量检测抗HFRS 病毒IgM和IgG;定量检测细胞因子IL-6和TNF-α.检测结果与ELISA法进行比较.结果:FMA检测HFRS患者抗HFRS病毒IgM和IgG的阳性率分别为92.85%和71.43%,健康对照组的抗体阳性率(假阳性率)为0;HFRS患者血清IL-6和TNF-α的含量分别为(532.62±397.19) ng/L和(392.68±177.68) ng/L,明显高于健康对照组(38.77±20.32)ng/L (P<0.01)和(15.91±6.91) ng/L(P<0.01).ELISA法检测HFRS患者抗HFRS病毒IgM和IgG的阳性率分别为71.43% 和50.00%,健康对照组的抗体阳性率(假阳性率)为0;HFRS患者血清IL-6和TNF-α的含量分别为(256.46±102.51) ng/L和(45.63±5.32) ng/L,高于健康对照组(53.8±19.21) ng/L(P<0.01)和(5.81±3.58) ng/L(P<0.01).结论:建立了FMA法对HFRS患者的特异性抗体和IL-6和TNF-α的检测,其灵敏度明显优于ELISA法,为HFRS的临床诊断和病理机制研究提供了新的方法.     

一株人单克隆抗体在快速竞争抗HIV ELISA中的应用

建立了直接检测抗HIV抗体的ELISA筛选技术。第一代测定法主要是根据央心法的原理、利用从细胸培养中纯化的病毒．但这样会出现假阳性和（xia）阴性的结果。先前应用的央心法需要高倍稀释的血清和两步程序，而且只能检出IgG抗体。为了尽早地在感染后测定IgM抗体．以检出抗HIV的免疫应答，因此；利用吸附在固相的重组HIV囊膜蛋白和酶标人单克隆抗体，建立了一种竞争ELISA法。该法既可控测IgM又能检测IgG抗体，而且不需要预先释稀血清，1小时内可得出结果。     

肾综合征出血热(HFRS)病毒McAb在临床早期诊断中应用的研究

本研究用间接荧光抗体试验检测77例临床诊断为HFRS病人外周血白细胞中病毒抗原。阳性率为50.7％,在早期病例中(第2—5病日)阳性率为64.3％(27/42),并发现病日越早、病情越重,阳性率越高。在间接免疫荧光中应用了抗HFRS病毒MCAb 4B_9、4E_7、3H_4株。抗原阳性者与3种McAb表现为5种反应类型,不同McAb对抗原的检出率也不相同。将McAb组合可提高阳性检出率。在抗原阳性早期患者中,急性期血清特异性IgM抗体阳性率为96.3％。将HFRS抗原检测和急性期IgM测定联合应用,可提高HFRS早期诊断的阳性率和准确性。     

单克隆抗体ELISA间接夹心法检测HFRS病人血清IgM和IgG抗体的研究(简报)

肾综合征出血热(HFRS)早期临床症状不典型,因此在病人血清中检出特异性抗体对临床早期诊断和流行病学监测均有重要意义。间接免疫荧光法(IFAT)和免疫酶染色法虽已被广泛应用,但尚存在需用荧光显微镜或判定结果有一定主观性等不足之处。血凝抑制试验主要检出IgG抗体。本文采用抗HFRS病毒单克隆抗体(Mc Ab)和粗纯抗原建立了一种ELISA间接夹心法,以检测HFRS病人血清中IgM和IgG抗体,并与IFAT进行了比较。     

ELISA间接法检测肾综合征出血热患者血清中特异性抗体

以亲和层析法提取的HFRS 病毒结构蛋白为特异性抗原,建立了检测HFRS 病人血清中特异性IgM 抗体的ELISA 间接法。首先用方阵法找到抗原的最适反应浓度为25μg/ml,血清最低滴度为1∶1000。特异性反应表明,包被的病毒结构蛋白只能与     

检测血清甲胎蛋白的双位点一步法ELISA及其临床应用

<正> 应用两种针对不同抗原位点的单克隆抗体(MeAb)建立的双位点一步法ELISA,简称两点一步法,检测抗原物质,不仅操作简便、快速,而且还可以达到改善检测系统灵敏度、精确性及重复性的目的。 1981年Votila首先报道用二点一步法检测人血清甲胎蛋白(AFP)含量,证明了这一方法的优越性。1986年刘杲等报道了抗人AFP McAb的制备、双位点夹心ELISA的建立及在检测血清AFP中的初步应用。1987年周鸣、刘杲报道了检测血清AFP的两点一步法。我们应用两种抗AFP不同抗原位点的McAb,通过选择合适的抗体提纯方法,应用马来酰亚胺法制备辣根过氧化物酶(HRP)-Fab’结合物以及选用灵敏的四甲基联苯胺(TMB)底物等方面的工作,建立了适合于临床检测用的血清AFP两点一步ELISA测定法。     

MbAb-ELISA间接夹心法检测HFRS患者血清中血凝抑制抗体的研究

为了防治肾综合征出血热(HFRS)需要建立一种在试管内检测特异的保护性抗体的方法。本文采用抗HFRS病毒血凝素单克隆抗体(McAb)和粗制HFRS病毒血凝素抗原,建立了一种McAb-ELISA间接夹心法。经取代试验,抗体阻断试验都表明有高度特异性。以本法曾检测了63例临床诊断为HFRS患者血清中血凝抑制抗体,同时平行地与血凝抑制试验比     

检测可溶型TBAIL的ELISA的建立和初步应用

目的：建立检测可溶型TRAIL的ELISA，并评价其临床应用价值。方法：采用本室制备的鼠抗TRAIL的单抗(mAb)FMUl．1作为包被抗体，兔的抗TRAIL高效价多抗为夹心抗体，建立检测sTRAIL的ELISA，并测定了9例肾综合征出血热(HFRS)患者和40例银屑病患者血清sTRAIL的水平。结果：建立了由单抗和多抗组成的检测人sTRAIL的夹心ELISA，灵敏度为0．08μg／L。9例肾综合征出血热(HFRS)患者中有3例急性期患者血清sTRAIL水平升高，40例银屑病患者中8例升高。结论：成功地建立了一种可用于检测血清sTRAIL的双夹心ELISA，为判定某些相关疾病患者的病情疗效及预后提供有用的工具。     

酶联捕获法检测抗人巨细胞病毒-IgM抗体的实验分析

目的 建立检测人巨细胞病毒(HCMV)抗原特异性IgM抗体的酶联捕获技术。方法 应用酶联捕获法检测68例巨细胞病毒感染者血清中抗HCMV-IgM，并与常用的间接ELISA法进行比较。结果 酶联捕获法特异性及敏感性均高于间接ELISA法，且不受RF因子的影响。结论 酶联捕获法敏感性高、特异性强、简便、快速，重复性好，具有实际应用价值。     

抗兔μ链和抗兔γ链血清的制备及初步应用

用常规生化方法提取正常兔血清中的IgM,用吸附法制备抗兔μ链血清。免疫电泳证明所制备的抗兔μ链血清与兔全血清仅有一条沉淀线,与兔IgG、IgA没有交叉反应。与抗兔μ链结合的兔血清成份有抗体活性,对2-巯基乙醇敏感;分子排阻层析证明,分子量与入骨髓瘤IgM相同。同时制备了抗兔Υ链血清。应用这二种血清检测经福氏2a志贺氏免疫兔的血清抗体证明它们分别对IgM、IgG有特异性,可用于观察免疫后特异IgM、lgG抗体产生的动态规律。     

双单克隆抗体ELISA间接夹心法检测HFRS病毒抗原的实验研究

本文建立了检测HFRS病毒抗原的双McAb ELISA间接夹心法。用该法和IFAT分别观察感染细胞培养上清中或细胞中HFRS病毒抗原的动态变化,结果IFAT检出细胞内病毒抗原的高峰在感染后第8天,而FLISA检测感染上清中病毒抗原则在第14天才达高峰。另外,检测179份人工感染HFRS病毒的乳鼠脑、肺组织标本,结果ELISA和IFAT的阳性检出率分别为72.1％和68.2％,前者略高于后者(配对资料X~2检验,P<0.05)。买验结果表明,双McAb ELISA间接夹心法是一种特异、敏感、简便的方法,不仅可用于HFRS病原学研究中检测可溶性抗原,也适用于流行病学调查中检测大量鼠肺标本。     

检测可溶型TRAIL的ELISA的建立和初步应用

目的 :建立检测可溶型TRAIL的ELISA ,并评价其临床应用价值。方法 :采用本室制备的鼠抗TRAIL的单抗 (mAb)FMU1.1作为包被抗体 ,兔的抗TRAIL高效价多抗为夹心抗体 ,建立检测sTRAIL的ELISA ,并测定了 9例肾综合征出血热 (HFRS)患者和 4 0例银屑病患者血清sTRAIL的水平。结果 :建立了由单抗和多抗组成的检测人sTRAIL的夹心ELISA ,灵敏度为 0 .0 8μg/L。 9例肾综合征出血热 (HFRS)患者中有 3例急性期患者血清sTRAIL水平升高 ,4 0例银屑病患者中 8例升高。结论 :成功地建立了一种可用于检测血清sTRAIL的双夹心ELISA ,为判定某些相关疾病患者的病情、疗效及预后提供有用的工具     

猪PCV2 ORF2蛋白I-ELISA检测方法的建立及猪场血清抗体检测分析

目的用猪PCV2 ORF2蛋白建立ELISA检测方法 ,有效区分猪圆环病毒1型(PCV1)和猪圆环病毒2型(PCV2),并进行大规模化样本检测。方法以猪PCV2 ORF2蛋白作为包被抗原,以抗PCV2阳性血清为一抗,羊抗猪酶标物为二抗,通过预试验确定诱导温度、诱导时间、摇动转速、IPTG浓度以及反应板种类等参数,从而建立间接酶联免疫吸附方法(I-ELISA)以检测抗PCV2猪血清抗体滴度。结果采用本研究建立的ELISA方法测定山东省内4个猪场送检的316份猪血清,检出PCV2阳性率处于较高水平,表明猪群携带病毒比例很高。结论本试验建立的间接ELISA检测方法敏感度高、特异性强,可用于临床PCV2血清抗体的检测,为ELISA诊断试剂盒的研制开发奠定了基础,为建立规模化猪场PCV2感染的快速诊断方法提供了科学依据。