酶标单克隆抗体检测肾综合征出血热病毒抗原ELISA法的初步研究

本文用辣根过氧物酶标记了肾综合征出血热(HFRS)病毒单克隆抗体,建立了ELISA双单克隆抗体夹心法,对该法在HFRS病毒抗原检测及单克隆抗体特异性分析中的应用作了探讨。结果表明,本法具有良好的特异性和重复性。用本法对Vero—E_6细胞培养上清中的HFRS病毒抗原进行了检测。在正常Vero—E_6细胞感染HFRS病毒后,第8天即出现HFRS病毒3H_4抗原可疑阳性;至第14天可测出抗3H_4的HFRS病毒抗原,阳性率达5/9;第16—18天,阳性率达9/9。抗体特异性分析表明,在所用的8种单克隆抗体中,3H_4、3H_7、3D_(10)三种单克隆抗体具有相同或极为相近的抗体特异性。     

ELISA间接法检测肾综合征出血热患者血清中特异性抗体

以亲和层析法提取的HFRS 病毒结构蛋白为特异性抗原,建立了检测HFRS 病人血清中特异性IgM 抗体的ELISA 间接法。首先用方阵法找到抗原的最适反应浓度为25μg/ml,血清最低滴度为1∶1000。特异性反应表明,包被的病毒结构蛋白只能与     

肾病综合征出血热病毒IgM抗体的ELISA检测

<正> 应用反向间接血凝试验(RPHA)检测肾病综合征出血热(HFRS)患者血清中特异性抗原,可使70.0％(46/66)发病不到5天的患者获得临床确诊。应用反向间接血凝抑制试验(RPHI)检测HFRS患者血清中特异性总抗体可及早为临床诊断和治疗提供依据(待发表资料)。但RPHI试验及检测特异性IgG抗体的ELISA、IF试验均需检测双份血清作比较,仅有约80％的患者恢复期血清效价呈有诊断意义的4倍以上升高。为使更多的患者能够早期确诊,本文建立了ELISA-IgM试验,现将其在临床诊断中初步应用及与2ME-RPHI、IF-IgM试验比较结果报道如下。     

用抗体捕捉ELISA法检测肾综合征出血热患者唾液中特异性IgM抗体

用抗体捕捉ＥＬＩＳＡ法检测肾综合征出血热患者唾液中特异性ＩｇＭ抗体孙晓芬，崔桂兰（成都军区后勤部军事医学研究所，成都６１００６１）诊断肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）感染通常依靠测定血清中特异性ＩｇＧ、ＩｇＭ抗体。本实验采用ＩｇＭ抗体捕捉ＥＬＩＳＡ法...     

用单克隆抗独特型抗体检测肾综合征出血热(HFRS)病人外周血淋巴细胞表面特异抗原受体的临床意义

用抗独特型抗体(Ab_2)检测细胞表面抗原受体是将Ab_2作为探针用于免疫学检测而出现的新的研究方法。本文在制备了HFRS病毒抗独特型抗体的基础上应用单克隆抗独特型抗体(IB_1)作间接免疫荧光试验,检测了HFRS病人外周血淋巴细胞表面特异抗原受体。首先,采取病人外周肝素抗凝血用淋巴细胞分离液按常规方法分离淋巴细胞,将淋巴细胞用RPMl1640不完全培养液离心洗一次后弃上清,将沉降细胞重新悬浮后调至0.1ml并加入5％小牛血清,混匀,取约10～30μ1加在预置于离心细胞沉淀器的玻片上,800rpm离心5     

酶标固相免疫测定(ELISA)检测乙型肝炎e抗体

前文报道我们用双抗体夹心法EIA检测乙型肝炎e抗原(HBeAg)获得成功。在此基础上我们建立了检测乙型肝炎e抗体(抗HBe)的EIA法。所用试剂和操作与检测HBeAg的方法基本相同,只是在检测时于血清标本中加入一定浓度的HBeAg阳性血清(中和试剂),以中和标本中相应量的抗HBe。具体操作如下:(1)用抗HBe IgG包被经鞣酸处理的聚苯乙烯反应板。(2)在测定孔中加入血     

肾综合征出血热病毒(HFRSV)抗独特型抗体免疫调节初探

本文应用一株HFRSV抗独特型抗体(Ab_2)观察其对HFRSV感染BALB/c小鼠脾细胞体外增殖的影响,以及部分淋巴因子在其中的作用,旨在探讨抗独特型抗体对免疫应答的调节机理。从感染HFRSV小鼠脾细胞中分离制备单个核细胞悬液体外培养,加入不同剂量Ab_2,用~3H-TdR掺入法测定脾细胞增殖水平。结果Ab_2可明显抑制感染小鼠脾细胞在体外的增殖,并呈剂量依赖关系及具有独特型特异性。早期加入EL-4细胞上清或rHuIL-2可完全逆转此抑制作用,且具有剂量依赖和时间相关性。EL-4细胞上清含有IL-2和IL-6。对抗独特型抗体产生抑制作用的机制进行了讨论。     

流行性出血热IgM抗体检测(抗体捕捉ELISA法)

本文报道应用IgM-抗体捕捉酶联免疫吸附法(IgM antibody-capture ELISA,或称反向间接酶联免疫吸附法,Reverse indirect ELISA)检测流行性出血热(Epidemic hemorrhagic fever,EHF)患者血清特异性IgM抗体的结果。该方法能特异、敏感地测出EHF患者发病第2天的血清IgM抗体,阳性率为87.5(7/8),第4病日阳性率达95％(57/60),而病程第7天的38例患者血清全部阳性。15例非EHF发热病人及10例正常人血清无1例阳性,并经2-MB试验与加热试验证明了其特异性。另外,研究表明,对于类风湿因子(RF)干扰所致假阳性反应,本实验所采用的阴性抗原平行对照设计能成功地予以校正而排除。     

肾综合征出血热(HFRS)病毒McAb在临床早期诊断中应用的研究

本研究用间接荧光抗体试验检测77例临床诊断为HFRS病人外周血白细胞中病毒抗原。阳性率为50.7％,在早期病例中(第2—5病日)阳性率为64.3％(27/42),并发现病日越早、病情越重,阳性率越高。在间接免疫荧光中应用了抗HFRS病毒MCAb 4B_9、4E_7、3H_4株。抗原阳性者与3种McAb表现为5种反应类型,不同McAb对抗原的检出率也不相同。将McAb组合可提高阳性检出率。在抗原阳性早期患者中,急性期血清特异性IgM抗体阳性率为96.3％。将HFRS抗原检测和急性期IgM测定联合应用,可提高HFRS早期诊断的阳性率和准确性。     

微斑免疫酶技术在检测肾综合征出血热病毒及其特异抗体中的应用

本文报道一种简便且快速的方法—微斑免疫酶技术(MPIPA),检测Vero-E6细胞培养的肾综合征出血热(HFRS)病毒及其特异抗体,并与免疫荧光技术(IFA),酶联免疫吸附技术(ELISA)进行比较。结果,本法用于检测HFRS患者血清IgG抗体和抗HFRS病毒单克隆抗体(McAb),其敏感性介于ELISA和IFA之间;用于检测Vero—E6细胞培养的病毒,阳性结果比IFA和细胞病变(CPE)出现早。MPIPA具有简单,快速、敏感性高、特异性好,结果易判定诸优点,便于基层医疗单位推广应用,适合于临床HFRS血清标本的检测和血清流行病学调查。     

间接ELISA检测柯萨奇B组病毒抗体

用PEG处理的CoxB病毒抗原,建立了快速测定该组1～6型病毒抗体的ELISA法,其特异性与中和试验相同。用此法测定健康人330名,病毒性心肌炎患者122例,不明原因发热患者45例。结果显示:健康人群普遍存在低水平该组病毒抗体。CoxB病毒感染与病毒性心肌炎密切相关,也是原因不明发热的重要病因,因此该项检查对CoxB组病毒感染的病因诊断有重要意义。     

McAb ELISA间接夹心法检测HFRS病人血凝抑制抗体的研究

本文介绍一种采用抗HFRSV血凝素McAb和粗制血凝素抗原的ELISA间接夹心法。该法检测了33份临床诊断为HFRS病人血清中的血凝抑制抗体,并平行地与血凝抑制试验(HIT)进行了比较。结果表明,本法特异性好,敏感性高,简便快速,判定结果客观,在临床诊断,流行病学监测中,有实用价值,并有可能取代HIT.     

单克隆抗体ELISA间接夹心法检测HFRS病人血清IgM和IgG抗体的研究(简报)

肾综合征出血热(HFRS)早期临床症状不典型,因此在病人血清中检出特异性抗体对临床早期诊断和流行病学监测均有重要意义。间接免疫荧光法(IFAT)和免疫酶染色法虽已被广泛应用,但尚存在需用荧光显微镜或判定结果有一定主观性等不足之处。血凝抑制试验主要检出IgG抗体。本文采用抗HFRS病毒单克隆抗体(Mc Ab)和粗纯抗原建立了一种ELISA间接夹心法,以检测HFRS病人血清中IgM和IgG抗体,并与IFAT进行了比较。     

检测肾综合征出血热病毒抗体的自身血凝实验的改良

HFRS是一种烈性病毒性传染病,早期诊断及治疗对病人的预后尤为重要。然而目前常用的HFRS诊断方法如 ELISA,IFAT,尽管特异性和敏感性较好,但其技术要求和设备要求较高,很难普及到基层医疗单位。我们曾建立了检测HFRS病毒抗体的自身血凝实验方法（autologous erythcyte agglutination,AGEN)[1］,但该法比较费时,而且需在血凝板上进行。本文对此方法进行了改良,使血凝反应能在玻片上5 min内完成。现将方法和结果报道如下。     

检测肾综合征出血热病毒抗体的自身血凝试验的建立

目的 建立一种快速检测肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）虱血液中病毒抗体的自身血凝试验方法。方法 采用木瓜酶消化法制备红细胞糖蛋白单克隆抗体（ｍｃＡｂ）的Ｆ（ａｂ）２片段，用硫酸鱼精蛋白提取ＨＦＲＳ病毒抗原，并用戊二醛法将两种蛋白偶联关双价试剂，以ＨＦＲＳ虱阳性血清与人“Ｏ”型血红细胞模拟全血标本。进行红细胞凝集试验。结果 抗红细胞ｍｃＡｂＦ（ａｂ）２片段与ＨＦＲＳ病毒抗原蛋白发生有效偶联，可使ＨＦＲＳ     

双单克隆抗体ELISA间接夹心法检测HFRS病毒抗原的实验研究

本文建立了检测HFRS病毒抗原的双McAb ELISA间接夹心法。用该法和IFAT分别观察感染细胞培养上清中或细胞中HFRS病毒抗原的动态变化,结果IFAT检出细胞内病毒抗原的高峰在感染后第8天,而FLISA检测感染上清中病毒抗原则在第14天才达高峰。另外,检测179份人工感染HFRS病毒的乳鼠脑、肺组织标本,结果ELISA和IFAT的阳性检出率分别为72.1％和68.2％,前者略高于后者(配对资料X~2检验,P<0.05)。买验结果表明,双McAb ELISA间接夹心法是一种特异、敏感、简便的方法,不仅可用于HFRS病原学研究中检测可溶性抗原,也适用于流行病学调查中检测大量鼠肺标本。     

用间接ELISA法检测柯萨奇B组病毒特异性IgM抗体

用间接ＥＬＩＳＡ法检测柯萨奇Ｂ组病毒特异性ＩｇＭ抗体李晓眠，刘民，罗世春，马海伦，任中原（天津医学院微生物学教研室，天津３０００７０）特异性ＩｇＭ抗体的检测是早期诊断传染病的可靠方法之一。在病毒感染疾病中已广泛应用直接、间接和抗体捕捉ＥＬＩＳＡ法作早...