核因子-κB活化抑制对化疗药物诱导的P388白血病细胞凋亡的影响

目的　研究糖皮质激素对化疗药物诱导P388白血病细胞凋亡与核因子 κB(NF κB)活化的影响。方法　采用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术 (Tunel)、DNA电泳等方法检测不同剂量阿糖胞苷 (Ara C)、环磷酰胺 (Cy)和依托泊苷 (VP16 )诱导细胞凋亡的作用 ;采用电泳迁移率变动分析(EMSA)检测细胞NF κB活化水平。结果　①Ara C、Cy和VP16均能诱导P388白血病细胞凋亡和NF κB活化 ;② 1 0 μmol/L地塞米松 (DXM)增强Ara C、Cy和VP16诱导的细胞凋亡作用 ,细胞凋亡率分别从 48 3%± 2 6 % ,2 1 4%± 6 0 % ,38 1%± 3 8%增加至 6 9 6 %± 7 7% ,35 6 %± 6 0 % ,71 9%±9 9%。凋亡增加率分别为 44 %、89%和 6 6 % ;同时 1 0 μmol/LDXM能显著抑制Ara C、Cy和VP16诱导的NF κB活化 ,抑制率分别为 90 %、71%和 6 8%。结论　化疗药物诱导P388白血病细胞凋亡的同时活化NF κB ,糖皮质激素可通过抑制NF κB活化 ,增强化疗药物诱导白血病细胞凋亡的作用     

核转录因子-κB与肝星状细胞凋亡

核转录因子-κB(nuclearfactor kappa B,NF-κB)是一个重要的转录调控因子,存在于多种组织的多种细胞中,参与许多病理、生理过程的基因调控,并在细胞的抗凋亡过程中起着至关重要的作用.     

核因子-κB在脓毒症大鼠肾细胞凋亡中的作用

目的研究脓毒症时核因子-κB(NF-κB)在肾细胞凋亡信号转导中的作用,探讨脓毒症时肾功能降低的机制。方法将30只大鼠随机分为5组,其中6只作为对照组,另外24只采用盲肠结扎穿孔术(CLP)复制脓毒症模型,以术后2 h、3 h、4 h、5 h时限分为4组作为实验组。各组均测定肾脏组织NF-κB蛋白及肾细胞凋亡的情况,同时测定肾功能的变化。结果CLP术后肾组织NF-κB蛋白表达升高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01);4 h组NF-κB的含量达高峰,3 h组相对较弱。CLP术后肾细胞凋亡数目与肾组织NF-κB蛋白表达相反。CLP术后血清尿素氮及肌酐增加,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论CLP所致的脓毒症过程中,NF-κB蛋白表达升高,其活性增强可抑制肾细胞凋亡。     

核转录因子-κB抑制剂对儿童急性淋巴细胞白血病细胞生长调控和凋亡的影响及意义

目的探讨核转录因子-κB（NF-κB）抑制剂对儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）细胞生长和凋亡的影响及意义。方法分组：对照组、对甲苯磺酰-L-苯丙氨酸甲基甲酮（TPCK）组、地塞米松（Dex）组、TPCK＋Dex组。MTT比色分析法测定细胞生长抑制率,流式细胞术测定细胞凋亡率。结果TPCK和Dex均可引起ALL细胞生长抑制和凋亡,其生长抑制率和凋亡率与对照组比较,差异均有统计学意义（P均〈0.01）。TPCK＋Dex组的生长抑制率和凋亡率显著高于两者单独使用时,差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。结论NF-κB可能通过抑制细胞凋亡和促进细胞增殖参与儿童ALL的发病。抑制NF-κB信号传导途径可能在儿童ALL治疗中有重大价值。     

THP-1细胞中核因子-κB信号通路的活化状态及其抑制剂pathenolide对细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨急性单核细胞白血病THP-1细胞株中核因子-κB(NF-κB)信号通路的活化状态及其抑制剂pathenolide(PN)对细胞增殖、凋亡的影响.方法:THP-1细胞置于37℃、体积分数为5%CO2培养箱中培养.①收集处于对数增殖期的细胞,采用RT-PCR方法检测THP-1细胞中P65、IkBα mRNA的表达.②用细胞裂解液分别提取THP-1的细胞质和细胞核蛋白,采用Western Blotting法检测细胞质及细胞核中P65、IkBα蛋白的表达.③将处于对数增殖期的THP-1细胞分成10组[(空白对照孔、阴性对照孔及各实验孔(1、2、4、6、8、10、15、20 μmol/L PN)],按12h、24h 2个检测点计算细胞增殖抑制率及增殖半数抑制浓度(IC50)的范围.④将处于对数增殖期的THP-1细胞分为3组(空白对照、PBS对照和6 μmol/L PN处理组),按第0天至第6天设计,绘制细胞增殖曲线.⑤取处于对数增殖期的THP-1细胞,分5组(分别以0、2、4、6和8 μmol/L的PN处理)培养,24 h后收获细胞,分别检测细胞周期和细胞早期凋亡率.结果:①RT-PCR结果示THP-1细胞中有P65、IkBα mRNA的表达,Western blot-ting结果示细胞质中均有P65、IkBα蛋白的表达,细胞核中有P65蛋白的表达.②PN对THP-1有抑制作用,其抑制率在一定范围内存在着剂量-效应关系,测定范围内最大抑制率可达(69.56±2.52)%;PN作用12h、24h的IC50分别为8-10 μmol/L、6～8 μmol/L.③以6μmol/L的PN处理后,THP-1细胞增殖曲线明显下降.④在2-6 μmol/L范围内,随PN浓度增高,G0/G1期细胞构成增高;在2～8 μmol/L范围内,S期细胞随PN浓度的增加而减少.0、2、4、6及8 μmoL/L PN组细胞早期凋亡率分别为(3.84 ±1.50)%、(4.67 ±1.97)%、(12.67 ±2.13)%、(17.72 ±2.78)%和(23.62 ±3.36)%,差异有统计学意义(F=36.280,P<0.001).结论:THP-1细胞中有NF-κB通路的持续激活,PN对THP-1细胞有抑制增殖和促进凋亡的作用.     

白血病细胞中NF-κB的活化状态及其对细胞凋亡的影响

目的探讨白血病细胞株中核转录因子NF-κB的活化状态及其对白血病细胞凋亡的影响。方法流式细胞术检测白血病细胞及对照组细胞PBMC凋亡率;双荧光素酶报告基因检测各组细胞NF-κB相对活性;NF-κB抑制剂PDTC作用12h后检测各组白血病细胞NF-κB相对活性及细胞凋亡率的变化。此外,qPCR及Western Blot分别检测各组细胞凋亡相关蛋白Bax及Bcl-2的mRNA及蛋白水平的改变。结果与PBMC比较,各组白血病细胞凋亡率明显下降(P<0.05);双荧光素酶报告基因结果显示各组白血病细胞的NF-κB活性显著高于PBMC(P<0.05);PDTC作用后各组白血病细胞NF-κB活性明显下降,细胞凋亡率明显升高(P<0.05);同时,各组白血病细胞Bax的mRNA及蛋白表达水平均明显增高(P<0.05),而Bcl-2的表达水平明显降低(P<0.05)。结论白血病细胞中存在NF-κB的持续性激活,其激活可导致白血病细胞凋亡受阻。     

核因子-κB在TNF-α诱导HL-60细胞凋亡中的作用

目的　了解白血病细胞系 HL- 60中 ,肿瘤坏死因子 - α( TNF- α)诱导的核因子 - κB( NF- κB)活化与细胞凋亡之间的关系。方法　采用脂质体基因转染技术 ,将突变的核因子抑制蛋白 ( IκBα)质粒 ( p CMV4- IκBαS32 / 36 A)转染 HL-60细胞 ,于 48h后测其瞬时表达效应。用间接免疫荧光和 Western blot技术检测转染组和非转染组 HL- 60细胞的 NF-κB活化状态 ,同时用流式细胞术和 MTT法分别检测 TNF- α对两组 HL- 60细胞的凋亡诱导及生长抑制效应。结果　TNF- α可诱导非转染组 HL- 60细胞的 NF- κB活化 ,不能诱导转染组细胞的 NF- κB活化 ,即突变型 IκBα可特异性抑制HL- 60细胞的 NF- κB活化。结论　用突变型 IκBα特异性抑制 HL- 60细胞的 NF- κB活化 ,能明显增加其对 TNF- α的敏感性     

地塞米松对柔红霉素诱导K562细胞核因子kappa B活化及凋亡的影响

目的探讨地塞米松（DXM）对柔红霉素（DNR）诱导K562细胞核因子kappaB（NF—κB）活化及凋亡的影响。方法采用免疫组化二步法检测K562细胞的NF—κB活化,用流式细胞检测术检测K562细胞的凋亡率。结果DNR同时具有诱导K562细胞凋亡和NF—κB活化的作用;DXM50μg／L能显著抑制DNR诱导的K562细胞的NF—κB活化和增强DNR诱导的K562细胞凋亡,NF—κB活化抑制率为20．17％（P〈0．01）,细胞凋亡增强率为25．44％（P〈0．01）。结论DNR诱导K562细胞凋亡的同时激活NF—κB p65活化;DXM通过抑制NF—κB活化,增强其诱导K562细胞凋亡的作用。     

原代白血病细胞survivin基因表达与化疗药物诱导凋亡敏感性关系

目的：探讨原代白血病细胞survivin基因表达与化疗药物诱导凋亡的敏感性关系。方法：RT—PCR方法检测初发ANLL细胞suntivin mRNA的表达。DNA片段原位末端标记(TUNEL)方法检测不同化疗药物体外诱导的白血病细胞凋亡。结果：原代ANLL细胞与HHT、AcLa、Ara—C孵育15h后，survivin mRNA阳性表达的ANLL细胞凋亡率低于阴性表达者。联用HHT Ara—C或AcLa Ara—C体外处理原代ANLL细胞15h后．survivin mRNA阳性表达的ANLL细胞凋亡率亦低于阴性表达者。且survivin mRNA阴性的ANLL患者骨髓缓解(BMR)率高于survivin mRNA阳性者((2／2)对(3／11))。结论：sunrvivin基因阳性表达的ANLL细胞对化疗药物诱导凋亡不敏感。     

实验性重症急性胰腺炎肺损伤中核因子-κB活化与细胞凋亡关系的研究

目的 探讨核因子-κB(NF-κB)激活及细胞凋亡在大鼠重症急性胰腺炎(SAP)肺组织损伤中的作用.方法 SD大鼠随机分为对照组、SAP组、PDTC预处理组.建立各组模型后取肺组织行光镜下病理观察,免疫组织化学法观察NF-κB的表达,TUNEL法观察细胞凋亡情况.结果 对照组细胞结构基本正常,仅极少量NF-κB活化,且只有少量肺泡间质细胞和肺泡上皮细胞凋亡.SAP组中NF-κ B表达及细胞凋亡指数均明显升高,并呈动态变化,6h达高峰,NF-κB表达及凋亡细胞主要见于中性粒细胞、单核/巨噬细胞、支气管黏膜上皮细胞、肺泡上皮细胞.PDTC预处理组病理改变减轻,NF-κB表达及细胞凋亡指数均明显下降,但仍高于对照组.结论 SAP时肺组织NF-κB活化并通过诱导细胞凋亡参与肺损伤.PDTC可能通过抑制NF-κB活性及细胞凋亡减轻重症急性胰腺炎并发肺损伤.     

同型半胱氨酸对血管内皮细胞凋亡和核因子-κB活化的影响

目的:观察同型半胱氨酸(Hcy)对人脐静脉内皮细胞株ECV-304细胞凋亡及核因子-κB (NF-κB)活化的影响,以探讨Hcy致动脉粥样硬化的可能机制。方法:将不同浓度的Hcy与ECV-304细胞体外共培养不同时间,PI单染法检测细胞凋亡,免疫组织化学染色法检测细胞内Bcl-2的表达及NF-κB的细胞内定位,流式细胞术检测细胞核NF-κB的表达。结果:Hcy可诱导细胞凋亡,凋亡指数随Hcy浓度增大和作用时间的延长而逐渐升高;10.0 mmol/L Hcy作用24 h后Bcl-2表达阳性细胞的均数显著低于1.0、5.0 mmol/L组和对照组(P < 0.01);随Hcy浓度的升高,NF-κB由细胞质转位至细胞核,5 mmol/L Hcy作用0.5、1、2 h,NF-κB的核内表达率分别为(16.76±2.55)%、(12.91±1.38)%、(14.15±1.74)%。结论:Hcy可下调抗凋亡基因Bcl-2的表达而诱导细胞凋亡,且存在剂量效应关系。Hcy可活化NF-κB,且呈现剂量依赖性。     

反式激活蛋白-NEMO结合域抑制核因子-κB活化在胆红素诱导大鼠海马神经元凋亡中的作用

目的明确核因子-κB（NF-κB）活化在胆红素诱导大鼠海马神经元凋亡中的作用,及反式激活蛋白-NEMO 结合域
（TAT-NBD）对胆红素神经毒性的干预作用。方法原代培养海马神经元分为对照组、胆红素组、TAT-NBD早期干预组、持续干
预组及晚期干预组。免疫细胞化学法检测NF-κB p65蛋白表达,改良MTT法、Annexin V-FITC/PI双染法及TUNEL法检测细胞
相对存活率及凋亡率,ELISA法检测原代培养基上清IL-1β水平。结果胆红素组海马神经元NF-κB p65 蛋白平均光密度值
（MOD）明显高于对照组（P<0.01）,6、24 h达高峰。TAT-NBD早期干预组细胞相对存活率为（80.784±9.767）%低于对照组（P<
0.01）、高于胆红素组（P<0.01）,细胞凋亡率为（14.100±2.252）%（Annexin V-FITC/PI双染法）、（12.883±1.629）%（TUNEL法）高
于对照组（P<0.01）、低于胆红素组（P<0.01）,IL-1β水平为15.348±0.812 pg/ml低于胆红素组（P<0.05）。TAT-NBD持续干预及晚
期干预组细胞存活率、凋亡率、IL-1β水平与胆红素组无显著性差异（P>0.05）。结论NF-κB双向调控胆红素诱导的海马神经元
凋亡。TAT-NBD抑制NF-κB早期高峰有神经保护作用,有可能用于胆红素脑损伤的预防。
     

FK228对TNFα诱导人肝癌细胞HepG2 凋亡及核因子κB活化的影响

目的 研究FK228对TNFα诱导的人肝癌细胞HepG2凋亡及核转录因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)活化的影响.方法 培养HepG2细胞分别用TNFα刺激和FK228+TNFα共同作用,western blot分析细胞核中NF-κBp65及其细胞浆中抑制因子I κBα的表达;用流式细胞技术测定细胞凋亡.结果 组蛋白去乙酰化酶抑制剂FK228(4～32 ng/mL)能抑制TNFα诱导的NF-κBp65的核转移,减少胞浆中IκBα的降解,且增强TNFα诱导的细胞凋亡.结论 FK228减少胞浆中IκBα降解、抑制NF-κB的活化可能是诱导HepG2细胞凋亡、发挥抗肿瘤作用的重要机制.     

肾脏缺血预适应对核因子-κB活性及细胞凋亡的影响

目的通过建立大鼠肾脏急性缺血/再灌注（I/R）及缺血预适应（I/P＋I/R）模型,初步研究不同的缺血方式后肾脏核因子-κB（NF-κB）活性及二聚体亚单位的构成,探讨其减轻肾脏肾小管细胞凋亡的机制。方法 30只雄性SD大鼠摘除右肾、分离出左肾动脉后随机均分为3组（n=10）：A组为假手术组（Sham组）,只分离左肾动脉,暴露术野60 m in后直接缝合,24 h后取肾;B组为缺血/再灌注组（I/R组）,持续夹闭左肾动脉45m in,恢复血供24 h后取肾;C组为缺血预适应＋缺血/再灌注组（I/P＋I/R组）,左肾动脉夹闭2 m in,松开5 m in,重复3个循环,余同I/R组。分别用生化学方法检测血肌酐值的变化,组织病理学评价肾小管损伤程度评分,凝胶电泳迟滞分析检测肾组织NF-κB/DNA结合活性,超迟滞分析检测NF-κB亚单位的构成,Tunel法检测肾小管上皮细胞的凋亡。结果血清学检查及肾小管损伤评分提示,I/R组肾脏组织病理改变明显,损伤程度重,与Sham组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;与I/R组比较,I/P＋I/R组损伤程度则明显减轻,差异有统计学意义（P〈0.05）。凝胶电泳迟滞分析检测肾组织NF-κB/DNA结合活性I/P＋I/R组明显高于Sham组,差异有统计学意义（P〈0.05）;超迟滞分析检测NF-κB亚单位含有p65、p50;差异有统计学意义（P〈0.05）。结论肾脏缺血预适应可通过抑制NF-κB转录活性,减轻肾小管上皮细胞凋亡,从而发挥损伤保护效应。     

核因子-κB与肺纤维化

核因子-κB（Nnuculear factor-κB，NF-κB）系1986年从B细胞核抽提物中找到的转录因子，能与免疫球蛋白κ轻链基因增强子B序列GGGACTTTCC特异性结合，并能促进κ轻链基因表达。现已证明NF-κB是一种具有转录激活功能的蛋白质，它能与多种基因启动子或增强子部位κB位点发生特异性结合并促进其转录，是细胞中一个重要的二聚化合物转录因子，能结合DNA的蛋白因子家族。参与许多前炎症介质分子转录水平的调控，包括细胞因子、粘附分子、趋化因子、炎症因子、氧化应激相关酶等，从而促进器官的纤维化。     

与A20结合的核因子-κB抑制蛋白1的研究进展

与A20结合的核因子κB抑制蛋白1（A20 binding inhibitor of NF-κB activation ,ABIN1）是近年来研究发现的一个新泛素结合蛋白。最初的研究表明,ABIN1通过结合锌指结构蛋白A20在NF-κB信号通路中发挥重要的调节作用。目前发现,ABIN1在过表达的条件下能抑制肿瘤坏死因子、白细胞介素1、脂多糖、表皮生长因子等诱导的NF-κB的活性,从而发挥抗炎和免疫调节作用。因此,以ABIN1为新靶点调节NF-κB活性的研究日益受到关注。本文就ABIN1蛋白结构、功能及其研究进展做一综述。     

核转录因子-κB介导的细胞凋亡在良恶性胰腺组织表达的实验研究

目的:检测核转录因子-κB(NF-κB)与细胞凋亡在良恶性胰腺组织中的表达,试图揭示NF-κB介导的抗凋亡机制在胰腺良恶性疾病发生中的作用. 方法:70份标本中胰腺癌30份、慢性胰腺炎20份,正常胰腺组织20份.标本中25份来自手术切除的新鲜标本,45份来自石蜡切片,免疫组化法检测其细胞NF-κB的表达,采用原位标记法检测细胞凋亡. 结果:胰腺癌标本的NF-κB p65蛋白表达在胰腺细胞的细胞核或细胞质,阳性细胞数明显高于对照组(P﹤0.05);凋亡细胞数增加,阳性细胞数明显高于对照组(P﹤0.05 ).慢性胰腺炎的NF-κB p65蛋白表达阳性细胞数明显低于对照组(P﹤0.05 ),而凋亡细胞增加,其中的阳性细胞数明显高于对照组(P﹤0.05). 结论:NF-κB在胰腺肿瘤组织中的异常激活,抑制细胞凋亡,可能与适应癌组织旺盛增殖需求有关.NF-κB在慢性胰腺炎组织中活性减弱导致细胞凋亡状态增强,可能是慢性胰腺炎腺泡细胞萎缩的重要原因之一.     

核因子-κB与败血症

核因子-κB(NF-κB)是近期发现并研究较多的一种重要的转录因子,能与免疫、细胞生长和炎症反应相关的许多细胞因子、粘附分子基因的启动子/增强子部位的κB位点发生特异性结合,启动和调节这些基因的转录,在这些因子基因的转录调控中发挥一定作用,在机体的免疫应答、炎症反应及细胞的生长调控等方面发挥重要作用,成为相关疾病治疗的新靶点,越来越受人们的关注.     

FK228对TNFα诱导人肝癌细胞HepG2凋亡及核因子κB活化的影响

目的研究FK228对TNFα诱导的人肝癌细胞HepG2凋亡及核转录因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)活化的影响。方法培养HepG2细胞分别用TNFα刺激和FK228 TNFα共同作用,westernblot分析细胞核中NF-κBp65及其细胞浆中抑制因子IκBα的表达;用流式细胞技术测定细胞凋亡。结果组蛋白去乙酰化酶抑制剂FK228(4～32ng/mL)能抑制TNFα诱导的NF-κBp65的核转移,减少胞浆中IκBα的降解,且增强TNFα诱导的细胞凋亡。结论FK228减少胞浆中IκBα降解、抑制NF-κB的活化可能是诱导HepG2细胞凋亡、发挥抗肿瘤作用的重要机制。