胃癌相关抗原表位模拟短肽的筛选

目的：筛选能模拟胃癌相关抗原表位的功能短肽。方法：利用离子交换层析，对抗胃癌相关抗原单克隆抗体(mAb)进行纯化，并以此mAb为靶标，将其包被于ELISA板上，以噬菌体随机12肽库对其进行3轮亲和筛选。结果：从噬菌体随机12肽库中，筛选到12个噬菌体阳性克隆：结论：获得了具有模拟胃癌相关抗原表位的阳性噬菌体克隆，且有共同的基序。     

用噬菌体展示技术筛选日本血吸虫免疫原的模拟短肽

目的　从噬菌体随机 12肽库免疫筛选出大鼠对血吸虫天然抗性的模拟靶表位 ,探讨其抗日本血吸虫的免疫保护效果。方法　用粗提大鼠血清IgG作固相配体筛选噬菌体 12肽库 ,按吸附 洗脱 扩增的淘洗过程进行 3轮筛选 ;随机挑取噬菌体克隆用ELISA检测其特异性 ,并对其中的 2个克隆进行测序 ;用混合噬菌体克隆免疫小鼠 3次 ,分别在 0、1、3周进行 ,第 5周每鼠经腹部感染 4 0± 1条日本血吸虫尾蚴 ,4 5d后剖杀冲虫 ,计虫数及肝卵数。结果　经 3轮筛选 ,特异性结合噬菌体富集增加了 2 0 0多倍 ,随机挑取 2 0个噬菌体克隆经ELISA鉴定 ,有 19个克隆能与大鼠血清呈特异性反应。自动测序仪测序的 2个克隆的序列与GenBank的已知序列无同源性。与对照组相比 ,混合噬菌体克隆免疫小鼠的减虫率为 33.6 % ,减卵率为 5 9.8%。结论　利用噬菌体展示技术可获得天然抗血吸虫抗性的短肽 ,这些短肽分子能诱导一定程度的保护性免疫     

从噬菌体随机肽库筛选CD137结合肽

目的应用噬菌体随机七肽库筛选与人CD137特异结合的肽序列。方法以重组人CD137作为筛选分子，对噬菌体展示随机七肽库进行亲和淘选。经过5轮淘选后，共随机挑选23个噬菌斑并对其进行了扩增和测序，据此推导随机多肽的氨基酸序列。经夹心ELISA进一步鉴定噬菌体克隆与CD137的结合力。^3H-TdR法检测了噬菌体展示多肽对抗CD137Ab刺激的人外周血淋巴细胞增殖反应影响。结果5轮淘选所得的噬菌体回收率逐步提高，显示淘选过程对随机肽库有一定的富集效果。通过对阳性克隆的测序和序列比较分析，得到RPTQGAF、RPTQVAL、RPTQVAF的相似序列和与CD137L具有同源SRS序列的SRSRVRY、HRRPSRS肽序列，ELISA结果显示这5个克隆都有良好的与CD137的结合力。RPTQGAF、RPTQVAL、RPTQVAF和SRSRVRY4个噬菌体展示肽均能在体外抑制抗CD137Ab刺激的淋巴细胞增殖反应。结论通过对噬菌体随机肽库的淘选，得到与CD137结合的相关多肽，为进一步研究CD137与配体结合的特异性位点及其拮抗性多肽药物设计提供了实验依据和结构基础。     

利用噬菌体随机肽库筛选IL-5结合的相关多肽

目的：采用噬菌体随机肽库筛选人IL-5，以获得能高亲和力结合IL-5的相关多肽。方法：以重组人IL-5作为筛选分子，应用M13噬菌体PⅢ呈现随机7肽库进行筛选。经过三轮淘筛后，经夹心ELISA、竞争ELISA法进一步鉴定噬菌体克隆与IL-5的亲和力，对阳性克隆进行了扩增和DNA测序，据此推导结合随机多肽的氨基酸序列。结果：经鉴定得到9个阳性噬菌体克隆能与IL-5呈高亲和力结合。通过测序和序列比较分析，发现CX1-2AS为相对保守的结合表位。结论：研究表明通过噬菌体肽库能够筛选到IL-5结合的相关多肽，为进一步研究IL-5结合表位及抑制剂奠定了基础。     

利用噬菌体肽库筛选与人CD59特异性结合的短肽

目的:筛选并鉴定与人CD59分子特异结合的短肽,为设计具有拮抗CD59肿瘤逃逸活性的短肽封条奠定基础。方法:以高表达人CD59的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)为靶细胞,采用竞争结合试验,对噬菌体随机12肽库进行5轮亲和筛选。用ELISA筛选噬菌体阳性克隆并对其进行DNA序列分析。结果:随机挑选的16个克隆中,有8个与人CD59的结合力高。测序后,得到3个高度同源的氨基酸序列。DNAstar分析显示,3个序列均与已公布的(PubMed)人CD2的氨基酸序列有一定的同源性。结论:获得的序列H×A××××××P××为设计肿瘤逃逸相关的CD59活性位点的短肽封条提供了技术基础。     

单纯疱疹病毒囊膜糖蛋白模拟短肽的筛选

目的 获得可替代单纯疱疹病毒（HSV）囊膜糖蛋白行为该病毒亚单位疫苗免疫原的小片段短肽。方法 将1株具有强动物保护活性的抗HSV糖蛋白C型共同性单克隆抗体（mAb)1A12生物素化后，淘筛噬菌体随机12肽库，经4轮筛选后进行ELISA检测。随机挑取14个克隆DNA测序，得到保守序列（Motif)为－SG（L）RHII－,并进行了ELISA阻断实验。结果 携有此短肽的噬菌体可与mAb1A12特异结合，并可部分阻断抗体与HSV囊膜抗原的反应。结论所筛选到的保守序列可模拟mAb1A12针对的抗原表位，可能是HSV的替代抗原。这一研究方法有望使短肽替代庞大的糖蛋白长氨基酸序列，为研制更有效及更广谱的基因工程疫苗提供依据，也使研制基于抗原表位水平的特异诊断试剂成为可能。     

噬菌体展示法筛选抗入PTA1单克隆抗体结合肽

目的 从噬菌体展示文库中筛选能与抗人PTA1单克隆抗体（mAbs)特异性结合的短肽。方法 采用protein-A亲和层析法纯化系列抗人PTA1mAbs,通过流式细胞术检测筛选出能够阻断PTA1-Fc融合蛋白与其天然配体结合的mAb,经过三轮亲和筛选,从噬菌体随机12肽库中筛选可特异必结合mAb的重组噬菌体阳性克隆,进而对这些克隆的短肽序列进行测定和分析,结果 确定了能够阻断PTA1-Fc融合蛋白与其天然配体结合的mAb为LeoA1,得到了13个具有特异性结合LeoA1的重组噬菌体阳性克隆,序列测定结果发现,这些可结合LeoA1的短肽,有较保守而集中的模式序列,即WPXHHX序列,结论 这些具有保守模式序列的短肽,有可能模拟PTA1分子的功能表位,成为其天然配体拮抗剂的候选肽段,此外,PTA1分子与其配体结合的功能表位的确定,也为今后寻找天然配体和进一步深入研究PTA1分子的结构和功能提供了实验依据。     

VEGF受体结合抑制肽的筛选及其特性鉴定

目的　筛选能抑制VEGF与血管内皮细胞表面受体结合的VEGF模拟短肽 ,探讨小分子短肽作为血管内皮细胞生长抑制剂、肿瘤疫苗的可行性。方法　以抗 VEGF单克隆抗体分别对噬菌体随机 7肽、12肽库进行筛选。通过硝酸纤维膜斑点印迹法进行阳性克隆鉴定。用噬菌体克隆免疫小鼠检验这种短肽可否模拟VEGF的抗原决定簇诱发机体产生能与VEGF结合的抗体 ,研究小鼠抗血清、噬菌体表达的 7肽和 12肽以及人工合成 7肽对人脐静脉血管内皮细胞 (HUVEC)生长的抑制作用。结果　对肽库进行 3轮筛选后 ,噬菌体克隆具有良好的富集效果。硝酸纤维膜斑点印迹法证实阳性率达到 10 0 % ,测序结果显示噬菌体上的短肽有共同序列 :GWYYDAL、VASAVFYSALVE。这两种噬菌体短肽免疫小鼠能激发产生高效价的抗 VEGF抗体。噬菌体表达的 7肽和 12肽对HUVEC的生长有明显的抑制作用。由短肽GWYYDAL阳性克隆免疫的抗血清对VEGF诱导的内皮细胞生长起抑制作用 ,人工合成的 7肽 (GWYYDAL)呈剂量依赖性阻拮VEGF促HUVEC增殖作用。结论　从噬菌体肽库中筛选到的噬菌体短肽GWYYDAL、VASAVFYSALVE模拟了VEGF的抗原表位 ,为研究VEGF受体结合抑制肽和设计肿瘤疫苗奠定了实验基础。     

EB病毒潜伏膜蛋白1羧基端活化区域2蛋白特异性结合短肽的筛选

目的 利用噬菌体12肽库筛选能与EB病毒潜伏膜蛋白1(LMPl)羧基端活化区域(CTAR)2蛋白特异性结合的短肽.方法 用纯化的CTAR2蛋白筛选噬菌体12肽库.通过夹心ELISA方法分析噬菌体克隆与CTAR2蛋白的亲和力.利用硝酸纤维膜斑点印迹法进行阳性克隆鉴定,并对阳性克隆进行测序及序列分析.结果 CTAR2蛋白对噬菌体12肽库进行3轮筛选,第3轮的产率是第1轮的143倍[(3.0×10-6)/(2.1×10-8)],噬菌体克隆得到较好的富集.ELISA方法提示筛选出来的噬菌体克隆能与CTAR2蛋白高效结合.硝酸纤维膜斑点印迹法证实阳性率达到100％.测序结果显示噬菌体上的短肽有共同序列:GLKHHSPGLLLY.结论 筛选出与CTAR2蛋白特异性结合的短肽序列GLKHHSPGLLLY,为研究LMP1致瘤机制和开发拮抗LMP1蛋白的小分子短肽类药物提供实验依据.     

Decreased expression of receptor tyrosine kinase of EphB1 protein in renal cell carcinomas

Receptors tyrosine kinase of Eph superfamily plays an important role in human cancers. We previously found that EphB1 subtype is down-regulated in gastric cancer, colorectal cancer and ovary serous carcinoma. Fore the more, the decreased expression of EphB1 is related to invasion and metastasis in cancers. Although EphB1 has been revealed as an important receptor in cancers, our understanding of its roles in renal cell carcinoma (RCC) is limited. In the present study, using specific anit-EphB1 polyclonal antibody and immunohistochemistry, we evaluated EphB1 protein expression levels in RCC specimens surgically resected from 82 patients (including 62 conventional clear-cell RCC, 10 papillary, and 10 chromophobic RCC cases). We found EphB1 protein is positively expressed in the epithelium of renal tubules. Decreased expression of EphB1 was found in all RCC carcinomas compared with expression in the normal epithelium of renal tubules. EphB1 protein moderately expressed in chromophobic RCC, weakly expressed in clear-cell RCC and negatively expressed in papillary RCC. Our results indicate that EphB1 may be involved in carcinogenesis of RCC, the molecular mechanisms of down-regulation of EphB1 including genetic and epigenetic alterations and the dedicated roles of EphB1 in occurrence and progress of RCC need to be explicated in next step.     

单纯疱疹病毒糖蛋白模拟位的研究

目的 为了充分认识单纯疱疹病毒（HSV）糖蛋白的抗原表位，寻找HSV多组分疫苗和新型基因工程疫苗更有效的小片段短肽作为该病毒疫苗的备选免疫原。方法 利用有动物保护活性的抗HSV糖蛋白C（gC)单克隆抗体（McAb)1A12淘筛噬菌体随机12肽库，经4轮筛选后进行ELISA检测，随机挑取14个阳性克隆进行序列测定，序列比较后得到保守序列，做ELISA阻断实验进一步鉴定筛选结果并与相关天然蛋白HSV gC进行序列比较。结果 获得保守序列－SG（L）RHII－和其侧翼辅助序列－AK－、－VW－，其与天然相关蛋白HSV gC114-116位氨基酸十分相似。携有此短肽的噬菌体可以与McAb特异结合，并可部分阻断抗体与HSV囊膜抗原的反应。结论 所筛选到的保守序列可模拟McAb针对的抗原表位，可能是HSV的替代抗原。这一研究方法有望使短肽替代庞大的糖蛋白全长氨基酸序列，为研制更有效及更广谱的基因工程疫苗提供依据，也使研制基于抗原表位水平的特异诊断试剂成为可能。     

噬菌体展示法筛选抗人 PTA1单克隆抗体结合肽

目的从噬菌体展示文库中筛选能与抗人PTA1单克隆抗体(mAbs)特异性结合的短肽。方法采用protein-A亲和层析法纯化系列抗人PTA1mAbs,通过流式细胞术检测筛选出能够阻断PTA1-Fc融合蛋白与其天然配体结合的mAb,经过三轮亲和筛选,从噬菌体随机12肽库中筛选可特异性结合mAb的重组噬菌体阳性克隆,进而对这些克隆的短肽序列进行测定和分析。结果确定了能够阻断PTA1-Fc融合蛋白与其天然配体结合的mAb为LeoA1,得到了13个具有特异性结合LeoA1的重组噬菌体阳性克隆,序列测定结果发现,这些可结合LeoA1的短肽,有较保守而集中的模式序列,即WPXHHX序列。结论这些具有保守模式序列的短肽,有可能模拟PTA1分子的功能表位,成为其天然配体拮抗剂的候选肽段。此外,PTA1分子与其配体结合的功能表位的确定,也为今后寻找天然配体和进一步深入研究PTA1分子的结构和功能提供了实验依据。     

从随机肽库中筛选抗入ANG抗体的模拟小肽

目的从随机噬菌体十二肽库中寻找抗重组人 ANG抗体的模拟肽。方法以重组人 ANG为目标分子 ,对随机十二肽库进行亲合筛选 ,用噬菌体 EL ISA及竞争抑制实验鉴定阳性克隆的结合性和特异性。结果经过 3轮亲和筛选 ,噬菌体的回收率从 2 .0× 10 - 4 %增加到 9.3× 10 - 2 % ,阳性克隆得到富集 ;EL ISA和竞争抑制实验证明 :有 9个噬菌体克隆与靶分子有较强的结合活性 ,其中 6个阳性噬菌体克隆能特异性地抑制抗人重组 ANG单抗与 ANG的结合。结论该小肽可能是抗人ANG抗体的模拟小肽 ,可作为 ANG的拮抗剂     

应用噬菌体肽文库筛选mAb F3特异性结合肽

目的 应用噬菌体展示肽文库筛选可与汉坦病毒囊膜蛋白中和性单抗（mAb） F3特异性结合的配体肽。方法 以F3mAb为筛选配基，对噬菌体展示和随机12肽文加进行3轮生物亲和淘选；用夹心ELISA和竞争ELISA鉴定筛选克隆的结合特性，并进一步对阳性克隆进行序列测定和分析。结果 通过3轮生物淘选，能被抗体捕获的噬菌体克隆为21／22，ELISA测定显示，筛选到的噬菌体短肽能与F3mAb特异性结合。序列分析表明，7个阳性克隆氨基酸序列相同，均为－MHGPTKNQMWHT；同源性分析显示，该序列与HTNV／SEOV M蛋白G2区第750－759位氨基酸有较高的同源性。结论 本研究为基于表位水平的HFRSV特异性分子多肽疫苗的设计提供了重要的依据。     

Cell‐autonomous role of EphB2 and EphB3 receptors in the thymic epithelial cell organization

The role of EphB2 and EphB3 in the organization of thymic epithelial cells has been studied in EphB‐deficient fetal thymus lobes grafted under the kidney capsule of WT mice. The deficient lobes, as compared with WT ones, showed altered distribution of medullary areas, shortening of medullary epithelial cell processes and presence of K5^?K8^? areas. EphB2 and EphB3 expressed on thymic epithelial cells play an autonomous role in their organization. The relevance of Eph/ephrinB forward and reverse signals for this process was evaluated in grafted fetal thymus lobes from mice expressing a truncated EphB2 receptor capable of activating reverse, but not forward, signaling. These deficient lobes showed important alterations of the thymic epithelial organization as compared with the grafted WT lobes, but a less severe phenotype than the grafted EphB2‐deficient thymus lobes, which confirms the relevance of EphB2 forward signal for the thymic epithelial organization but, also, a role of the reverse signaling in determining the final epithelial phenotype.     

从噬菌体随机环七肽库筛选可模拟C1qR的C1q结合肽

为获得能结合C1q并模拟C1q受体 (C1qR )配体结合位点的短肽 ,以C1q为钓饵蛋白筛选噬菌体环七肽库 ,采用C1q结合ELISA、U937细胞配体结合抑制试验、多聚IgG (AIgG )竞争抑制试验鉴定阳性克隆 ,再进行单链DNA测序和分析。结果经 3轮筛选后 ,随机挑选 2 3个噬菌体克隆进行ELISA鉴定 ,10个克隆与C1q有较强的结合 ;利用U937细胞配体结合抑制试验 ,得到了 7个阳性克隆 ;从其展示肽DNA测序结果推导氨基酸序列 ,获得 7个短肽序列 :QTPFQLW、NPFNWTS、SPFXLTS、FLTWLDP、FSTFLYP、GPMWWSY和NPFXLIL。     

模拟HIV-1 gp41 CHR表位短肽的筛选及研究

目的 利用针对HIV-1跨膜蛋白gp41CHR序列合成肽C34的单克隆抗体1G1筛选噬菌体12肽库，旨在找寻模拟C34肽表位的序列，同时探索该短肽成为HIV-1gp41NHR与CHR结合抑制物的可能性。方法 以1G1为钓饵蛋白对噬菌体12肽库进行亲和筛选，以双夹心ELISA鉴定阳性克隆。结果 经3轮筛选后，随机挑选17个噬菌体克隆，其中6个克隆与1G1显示出较强的结合活性，上述6个阳性克隆经DNA测序，氨基酸序列相同；HYEFWAWNWEAN，其明显的疏水性质类似于G34N末端，特异性鉴定显示这些克隆均能够与HIV-1gp41N多肽结合，结论 该噬菌体克隆展示肽可模拟HIV-1gp41CHR多肽表位，并可与N多肽结合。