亚砷酸钠对人皮肤角质形成细胞内过氧化氢酶的影响

目的 探讨亚砷酸钠（NaAsO2）作用于体外培养的人皮肤角质形成细胞（HaCaT）后,细胞内过氧化氢酶（CAT）的活力、mRNA和蛋白表达的变化.方法 对生长至80%融合的HaCaT细胞株,分别加入0.0、2.5、5.0、10.0和20.0 μmol/L的NaAsO2作用24 h.用紫外速率直接法测定细胞内CAT的活力;用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测CAT的mRNA表达水平;用免疫印迹（Western blot）方法检测CAT蛋白表达水平.结果 5.0 μmol/L以上的NaAsO2可明显降低CAT的活力,且呈剂量-反应关系,差异有统计学意义（P＜0.05）;RT-PCR电泳结果可见,5.0 μmol/L以上的NaAsO2作用于细胞后CAT/β-actin吸光度比值与对照组比较明显下降,差异有统计学意义（P＜0.05）;Western blot检测结果与RT-PCR电泳结果一致.结论 NaAsO2可降低HaCaT内CAT基因的mRNA及蛋白表达水平并抑制细胞内CAT活力.     

长期低剂量亚砷酸钠染毒对人支气管上皮细胞和人角质形成细胞增殖的影响

目的探讨1.0μmol/L亚砷酸钠慢性染毒对人支气管上皮细胞(HBE)和人角质形成细胞(Ha Ca T)体外增殖的改变及其调控机制。方法以体外培养的HBE和HaCaT细胞恶性转化模型为研究对象,应用MTT法检测细胞增殖情况,采用流式细胞仪检测细胞周期改变,利用Western blot检测细胞周期相关蛋白cyclin E、cyclin D1、cylin A蛋白的表达。结果染砷组HBE细胞36代和43代、HaCaT细胞28代和35代相对增殖率均高于传代对照组(P<0.01和P<0.05);细胞周期G1期细胞比例下降(P<0.05),S期细胞比例上升(P<0.05);此外,细胞周期相关蛋白cyclin E表达升高(P<0.05),并在晚期持续性高表达。结论低剂量亚砷酸钠可通过上调HBE和Ha Ca T细胞中cyclin E的表达从而使细胞从G1期逃逸至S期,加速细胞增殖,最终导致细胞发生恶性转化。     

亚砷酸钠对生长发育影响的分子遗传机制研究

目的　利用基因芯片技术研究亚砷酸钠对生长发育相关基因表达的影响 ,探讨砷的分子遗传学机制。方法　将正常肝细胞cDNA克隆库的基因点在芯片上 (每个克隆是什么基因尚未知 ) ,然后与暴露于不同亚砷酸钠浓度肝细胞中得到的cDNA第一链杂交 ,对表达有差异的克隆进行基因测序 ,明确是什么基因 ,最后筛选出与生长发育相关的基因。结果　两个染毒组人甲状腺激素结合蛋白基因 (p5 5 )的表达水平分别是对照组的 2 .2 1和 2 .93倍 ,说明亚砷酸钠增强了 p5 5基因的表达。两个染毒组与对照组基因表达水平相比 ,胎盘催乳素基因 (PL)分别是 0 .13和 0 .2 7,同源框基因(HOXA10 )分别是 0 .2 2和 0 .35 ,表明亚砷酸钠抑制PL基因和HOXA10基因的表达。结论　亚砷酸钠对生长发育相关基因表达有影响 ,初步揭示了砷对生长发育影响的分子遗传学机制。     

HPV感染对角质形成细胞周期相关因子的影响

人乳头瘤病毒（HPV）是一种肿瘤病毒，可以引起被感染细胞的显著增殖甚至恶性转化。近年来的报道认为，HPV感染后上皮的增生性病与细胞周期的变化密切相关，而细胞周期改变又与细胞周期相关因子的变化有密切关联。本文就HPV感染对角质形成细胞周期相关因子的影响和意义作了综述。     

HPV感染对角质形成细胞周期相关因子的影响

人乳头瘤病毒(HPV)是一种肿瘤病毒,可以引起被感染细胞的显著增殖甚至恶性转化。近年来的报道认为,HPV感染后上皮的增生性病变与细胞周期的变化密切相关,而细胞周期改变又与细胞周期相关因子的变化有密切关联。本文就HPV感染对角质形成细胞周期相关因子的影响和意义作了综述。     

亚砷酸钠对人胚肺成纤维细胞增殖活性及细胞周期的影响

目的 探讨亚砷酸钠对人胚肺成纤维细胞(HELF)增殖活性及细胞周期的影响.方法 将体外培养的HELF细胞分别暴露于浓度为0(对照)、20、40、60 μmol/L的亚砷酸钠培养基24、48和72 h.采用噻唑蓝(MTr)法检测细胞活力,采用流式细胞仪检测细胞周期分布.结果 与对照组相比,各浓度亚砷酸钠染毒24、48、72 h后细胞抑制率均升高,差异有统计学意义(P＜0.05);HELF细胞抑制率与亚砷酸钠浓度及作用时长均呈正相关(P＜0.05).HELF细胞G2+M期的比例仅在染毒24、48 h时均与亚砷酸钠染毒浓度呈正相关(P＜0.05).HELF细胞S期比例在染毒48 h时与亚砷酸钠染毒浓度呈负相关(P＜0.05).结论 亚砷酸钠染毒可降低HELF细胞的增殖活性,并能够选择性地将细胞阻滞在合成末期及分裂期(G2+M期).     

亚砷酸钠对HaCaT细胞增殖周期及ROS生成影响

目的 探讨亚砷酸钠(NaAsO₂)对人皮肤角质形成细胞(HaCaT)增殖、细胞周期及活性氧(ROS)生成影响。方法 以0、25、50μmol/L NaAsO₂作用于HaCaT细胞6 h后,以Alamar Blue还原法检测细胞增殖水平;以流式细胞仪检测细胞周期及ROS水平。结果 25、50μmol/L NaAsO₂组细胞增殖水平分别为(93.5±1.18)%、(82.9±2.64)%,明显低于对照组(100±0.51)%(P<0.05);G2/M期细胞数分别为(19.15±0.29)%、(18.12±1.35)%,明显高于对照组(15.24±0.04)%(P<0.05);ROS水平分别为(128.61±6.23)%、(152.92±7.25)%,明显高于对照组(100.00±3.45)%(P<0.05)。结论 NaAsO₂作用可引起HaCaT细胞ROS含量增高,同时G2/M期细胞数增多,但G2/M期细胞比例增高并不是由细胞增殖作用所引起。     

芬太尼对MCF-7细胞增殖和细胞周期影响研究

目的　探讨芬太尼对MCF -7细胞增殖和细胞周期的影响及其机制。方法　MCF -7细胞在不同浓度芬太尼、纳洛酮和两药联合干预后 ,采用MTT法检测细胞增殖活性 ;流式细胞术检测细胞周期 ;免疫细胞化学染色SP法检测p5 3、p2 1/WAF1的表达。结果　芬太尼浓度≥ 0 1μmol/L时 ,细胞增殖活性较对照组显著下降 (P <0 0 5 ) ,其效应与时间和浓度均呈正相关 (P <0 0 1) ,72h半数抑制浓度 (IC50 )为 0 81± 0 0 2 μmol/L。随着芬太尼浓度增加 ,G0 /G1期比例逐渐增加 ,(S +G2 /M )期比例逐渐减少。芬太尼组浓度≥ 0 1μmol/L时 ,细胞增殖活性较对照组显著下降 (P <0 0 5 ) ,较纳洛酮和芬太尼联合给药组差异无显著性。给予芬太尼 10 μmol/L后胞核内p5 3、p2 1/WAF1AOD显著增加 (P <0 0 5 )。结论　芬太尼浓度和时间依赖性抑制MCF -7细胞增殖 ,主要是将细胞阻滞在G1期 ;其机制可能是上调野生型p5 3和p2 1/WAF1的表达。     

亚砷酸钠单次染毒大鼠后唾液及血液总砷含量变化比较

目的比较亚砷酸钠单次染毒后大鼠血液及唾液中总砷含量随时间变化情况。方法健康清洁级SD大鼠21只,适应性饲养一周后一次性灌服亚砷酸钠20mg/kg。于给药前(0 h)和给药后1～2、4～5、7～8、11～12、17～18和23～24 h时间段分别收集血液和唾液,利用原子荧光分光光度计(AFS-230)检测血砷含量,电感耦合-等离子体质谱(ICP-MS)测定唾液砷含量。结果大鼠摄入亚砷酸钠后,其血液中砷含量急剧上升,在1～2小时便达到峰值,随后下降,但在第7～8小时又出现第二个峰值。唾液中砷含量上升趋势较血砷缓慢,在第7～8小时达到峰值,随后逐渐下降。唾液砷与血砷随时间变化趋势基本一致,且两者之间存在明显的正相关性,r=0.678(P<0.01)。结论砷在唾液中的代谢及排泄速率与血液相比较为缓慢,但总体趋势基本一致,表明唾液砷也能够反映机体砷暴露水平。     

三羟异黄酮对人乳腺癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的 观察三羟异黄酮对体外培养的人乳腺癌细胞MDA—MB—435S细胞存活率、细胞周期和凋亡的影响。方法 用噻唑蓝(MTT)法观察三羟异黄酮对MDA—MB—435S细胞生长的影响；流式细胞仪观察三羟异黄酮处理人乳腺癌细胞后细胞周期改变的剂量效应和时间效应；吖啶橙／溴乙锭染色法在荧光显微镜下观察三羟异黄酮对MDA—MB—435S细胞的凋亡作用。结果 随剂量增大和作用时间延长，三羟异黄酮对细胞增殖的抑制作用逐渐增强。同时可以阻滞细胞周期于G2—M期，而且随剂量的增大，作用时间的延长，阻滞作用也增强。经吖啶橙染色法于荧光显微镜下可见，随三羟异黄酮剂量增大，细胞凋亡也逐渐明显。结论 三羟异黄酮可抑制人乳腺癌细胞的增殖，其作用机制可能包括诱导细胞凋亡和G2—M期阻滞。     

亚砷酸钠对HaCat细胞活力及磷酸化蛋白激酶B表达的影响

为探讨亚砷酸钠(NaAsO2)对人角质形成细胞(HaCat)活力及蛋白激酶B(PKB/Akt)磷酸化活化的影响,本研究以Alamar Blue还原法检测NaAsO2(0,5,10,25,50,100μmol/L)作用于HaCat细胞6 h后细胞的活力水平;并以Western blot法检测NaAsO2(0,25,50μmol/L)作用于HaCat细胞6 h后细胞中磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)的蛋白表达情况。结果表明,NaAsO2作用6 h,Alamar Blue还原率随NaAsO2染毒剂量的升高而显著下降,具有显著的剂量-效应关系;NaAsO2染毒组细胞内p-Akt表达水平与对照组相比均显著提高,提示砷性肿瘤的发生可能与p-Akt蛋白表达水平增高有关。     

亚砷酸钠对Chang肝细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨亚砷酸钠对正常人Chang肝细胞体外增殖及凋亡的影响.方法 采用0(对照)～100 μmol/L亚砷酸钠分别处理细胞24、48、72、96 h.采用MTT比色法检测细胞活力;采用流式细胞术检测染毒48 h时的细胞凋亡率.结果 仅0.2μmol/L亚砷酸钠染毒24 h的细胞活力略高于对照组,但差异无统计学意义;且随着亚砷酸钠染毒浓度的升高和染毒时间的延长,Chang肝细胞存活率均呈下降趋势,并具有剂量-效应和时间-效应关系.与对照组相比较,5～100 μmol/L亚砷酸钠染毒组Chang肝细胞凋亡率均显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05);且随着亚砷酸钠染毒浓度的升高,Chang肝细胞的凋亡率呈显著升高趋势,并具有剂量-效应关系.结论 亚砷酸钠有明显的细胞毒性,能抑制Chang肝细胞的增殖,这可能与其诱导细胞凋亡有关.     

miR-218对胃癌细胞增殖及周期影响的研究

目的 探讨miR-218对胃癌细胞增殖及细胞周期的影响.方法 将miR-218 mimics转染胃癌细胞株SGC-7901和MGC-803细胞,以无关序列(Scramble mimics)作为阴性对照.采用qRT-PCR技术验证miR-218 mimics转染细胞中miR-218的表达水平;通过细胞计数法及MTS[3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧甲酯基)-2-(4-磺苯基)-2氢-四唑,内盐]法观察miR-218过表达对胃癌细胞增殖的影响;采用流式细胞术观察miR-218过表达对胃癌细胞周期的影响.结果 转染miR-218 mimics胃癌细胞中miR-218的表达量较对照细胞显著升高.过表达miR-218的胃癌癌细胞增殖速度明显减慢(P＜0.05).通过流式细胞术分析细胞周期发现,过表达miR-218的胃癌细胞阻滞于G1期.结论 miR-218能抑制胃癌细胞生长增殖,阻止胃癌细胞周期进程,它可能在胃癌的发生发展中发挥重要作用.     

miR-214对HepG2细胞增殖及细胞周期影响

目的 探讨miR-214对HepG2细胞增殖及细胞周期的影响。方法 Realtime-PCR法检测肝癌细胞株SMMC-7721、HepG2、SK-Hep-1、Huh 7、Hep3B及正常肝细胞L-02中miR-214表达量,并利用脂质体转染miR-214 NC及miR-214 mimics,采用Realtime-PCR法检测转染效果;采用MTT法、流式细胞术分别检测miR-214对肝癌细胞活力、凋亡及细胞周期影响;蛋白印迹（WB）检测miR-214对肝癌细胞中细胞周期蛋白D1（cyclinD1）,细胞周期蛋白依赖性激酶4（CDK4）,生存素（survivin）及增值细胞核抗原（PCNA）表达影响。结果 miR-214在肝癌细胞SMMC-7721、SK-Hep-1、Huh 7、Hep3B、HepG2中表达量[分别为（1.25±0.10）、（1.43±0.10）、（0.95±0.09）、（0.98±0.01）、（0.82±0.08）]明显低于正常肝细胞L-02（2.52±0.23）,其中HepG2中miR-214表达量最低。miR-214 mimics组HepG2细胞中miR-214表达量（2.38±0.23）明显高于miR-214 NC组（0.83±0.08）,miR-214 mimics组HepG2细胞活力（0.37±0.03）明显低于miR-214 NC组（0.78±0.07）;与miR-214 NC组比较,miR-214 mimics组HepG2细胞凋亡率明显升高,细胞周期阻滞于G1期,cyclinD1、CDK4、survivin及PCNA表达量下调,差异均有统计学意义（P<0.01）。结论 上调miR-214表达可抑制肝癌细胞增殖,其机制可能与调控细胞周期相关蛋白表达水平有关。     

丙戊酸钠抑制肿瘤细胞增殖及阻滞肿瘤细胞周期的作用

目的 探讨不同浓度丙戊酸钠对人消化系统肝癌SMMOL/LC-7721细胞株及胰腺癌PaTu8988细胞株细胞增殖和细胞周期的影响.方法 将肝癌SMMOL/LC-7721细胞株及胰腺癌PaTu8988细胞株分别接种于培养板,常规培养于DMEM培养基中,分别用丙戊酸钠干预48 h,根据丙戊酸钠的浓度分为0.2 mmol/L组、1.0 mmol/L组和5.0 mmol/L组；另设对照组,其DMEM培养基中加入等量的二甲亚砜.使用酶联免疫检测仪测定吸光度值,计算抑制率；流式细胞仪检测细胞周期.结果 5.0 mmol/L组肝癌SMMOL/LC-7721细胞株和胰腺癌PaTu8988细胞株吸光度值均明显低于对照组和0.2 mmol/L组(0.569±0.059比0.706±0.033和0.760±0.020,2.068±0.178比2.793±0.144和2.663±0.078),差异有统计学意义(P＜0.05)；1.0 mmol/L组胰腺癌PaTu8988细胞株吸光度值(2.432±0.084)明显低于对照组和0.2 mmol/L组,差异有统计学意义(P＜0.05).随丙戊酸钠浓度升高,肿瘤细胞抑制率逐渐增强,5.0 mmol/L组肝癌SMMOL/LC-7721细胞株和胰腺癌PaTu8988细胞株细胞抑制率分别为23.5％和25.9％.与对照组比较,0.2、1.0、5.0 mmol/L组随丙戊酸钠浓度升高,肝癌SMMOL/LC-7721细胞株G1期细胞比例逐渐增多[(49.25±1.63)％、(65.26±2.34)％、(83.13±1.78)％比(49.22±4.35)％],S期细胞比例逐渐减少[(26.84±2.30)％、(17.76±3.90)％、(3.38±0.65)％比(29.21±2.35)％],细胞周期发生G1期阻滞,差异有统计学意义(P＜0.05).与对照组和0.2 mmol/L组比较,1.0、5.0 mmol/L组胰腺癌PaTu8988细胞株的G2期细胞比例明显增多[(26.80±1.50)％、(36.58±3.78)％比(12.00±4.62)％、(16.54±2.26)％],细胞周期发生G2期阻滞,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 丙戊酸钠可显著抑制肝癌SMMOL/LC-7721细胞株及胰腺癌PaTu8988细胞株的细胞增殖,诱导细胞周期阻滞,为临床有前景的抗肿瘤药物.     

亚砷酸钠对大鼠肝星状细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨亚砷酸钠对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)增殖与凋亡的影响。方法取处于对数生长期的HSC-T6细胞,调整细胞密度为4×10~4/ml,分别暴露于含终浓度为0(对照)、5、15、25μmol/L亚砷酸钠的DMEM高糖培养基24、48、72 h。采用MTT比色法检测细胞增殖活性;采用流式细胞术检测细胞早期凋亡率。结果随染毒剂量和时间增加,5μmol/L组的细胞增殖活性高于对照组,差异有统计学意义(P0.05),25μmol/L组的细胞增殖活性低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。HSC-T6细胞形态由染毒前的椭圆形和不规则形转变为染毒后的索条形,有纤维化倾向。随着染毒时间延长,染毒剂量升高,HSC-T6细胞早期凋亡率随之增高,差异有统计学意义(P0.05),具有剂量-效应和时间-效应关系。结论低剂量亚砷酸钠暴露促进肝星状细胞增殖,高剂量亚砷酸钠暴露抑制肝星状细胞增殖,会改变细胞形态,促进细胞凋亡,具有明显的细胞毒性。     

亚砷酸钠对SV-HUC-1细胞NRF2通路影响

目的 探讨亚砷酸钠（NaAsO₂）对人膀胱上皮细胞系SV-HUC-1细胞内核因子相关因子2（NRF2）活性的影响。方法 时间效应实验以4 μmol/L NaAsO₂分别处理SV-HUC-1细胞0（对照）、4、8、16、24 h;剂量效应实验设对照组和NaAsO₂处理组（1、2、4、8、10 μmol/L）;Western blot免疫印迹试验检测NRF2通路相关蛋白（NRF2、NQO1和HO1）表达水平。结果 4 μmol/L NaAsO₂处理SV-HUC-1细胞4、8、16、24 h后,与对照组（0.68±0.03）比较,细胞内NRF2蛋白表达水平明显升高,16 h处理组NRF2蛋白表达最高（1.17±0.10）,差异有统计学意义（P<0.05）;随着染砷剂量增加,NRF2、NQO1和HO1蛋白表达水平增强,与对照组NRF2（0.86±0.05）、NQO1（0.68±0.02）、HO1（0.09±0.01）比较,4和8 μmol/L NaAsO₂处理组细胞内NRF2、NQO1、HO1蛋白表达水平分别为（1.12±0.01）和（1.16±0.11）、（0.93±0.01）和（1.15±0.19）、（1.28±0.01）和（1.30±0.02）,均明显升高,差异均有统计学意义（均P< 0.05）。结论 NaAsO₂急性暴露能够活化NRF2通路,引起膀胱上皮细胞适应性抗氧化反应增强。     

亚砷酸钠对小胶质细胞增殖活力和NO分泌的影响

分别用浓度0、1、2、4、8、10、20μmol/L的亚砷酸钠(Na As O2)处理小鼠小胶质细胞(BV-2),24 h后四甲基偶氮唑(MTT)法检测细胞增殖活力,硝酸还原酶法检测培养液中NO含量。结果显示,BV-2细胞染毒24 h后,所有砷处理组的细胞增殖活力均显著降低,差异有统计学意义(P0.05)。各砷处理组的细胞培养液中NO含量均显著低于对照组,P0.01。提示砷可对小胶质细胞产生毒性作用。