正弦波电磁场对鼠骨骺干细胞分化的生物学影响

目的 研究50Hz正弦波电磁场对大鼠骨骺干细胞分化的生物学影响。方法 取生长良好的第4代骨骺干细胞，随机分为实验组和对照组，实验组采用50Hz正弦波电磁场间断刺激。分别绘制2组细胞生长曲线，MTT法测定细胞增殖活性，流式细胞仪检测细胞凋亡情况，Western Blot法检测细胞甲状旁腺激素相关蛋白（PTHrp）的表达，并进行定量分析。结果 曝磁早期细胞增殖活性的改变不明显，正弦波电磁场刺激4d和6d能明显促进细胞的增殖，2组OD值比较，差异有统计学意义（P〈0.05）。与对照组比较，实验组骨骺干细胞的早期凋亡率、晚期凋亡率和总凋亡率均明显降低（P〈0．05）．PTHrp蛋白的表达增强。结论 适当参数的工频正弦波电磁场能促进骨骺干细胞PTHrp蛋白的表达，从而调节其增殖能力，增强分化稳定性，抑制细胞凋亡。     

流式细胞仪观察脉冲电磁场干预骨髓间充质干细胞的生长

背景：应用流式细胞仪检测细胞表型、存活或凋亡细胞计数及细胞周期,较形态学观察、DNA电泳等检测方法更具优势。目的：采用流式细胞仪分选检测特定脉冲电磁场干预对大鼠骨髓间充质干细胞生长周期及其增殖效率的影响。方法：使用振荡频率1kHz,磁感应强度0.05mT、功率密度5mW/cm^2的脉冲电磁场照射大鼠骨髓间充质干细胞,以未经磁场干预的细胞为对照。采用流式细胞仪检测未经磁场干预细胞表面抗原CD29、CD31、CD44、CD45和CD105表达率;于传第3代后第3,6,9,12天测定不同干预细胞增殖率及生长周期。结果与结论：未经磁场干预的第3代大鼠骨髓间充质干细胞表面抗原CD29、CD44和CD45为阳性表达,CD31和CD105为阴性表达,较未经磁场干预的第2代细胞更纯化（P〈0.05）;经磁场干预后第3代细胞存活率及细胞周期S期百分比较未经磁场干预的第3代细胞高（P〈0.05）。流式细胞仪检测证实特定频率和场强的脉冲电磁场能在一定程度上促进骨髓间充质干细胞的生长与增殖。     

脉冲磁场与前软骨干细胞向成熟软骨细胞的增殖与分化:与Ihh/PTHrP信号通路活性有关吗?

背景:前期研究证实脉冲电磁场对前软骨干细胞增殖具有促进作用,但其作用机制不明确.目的:进一步探讨脉冲电磁场对前软骨干细胞增殖分化的影响,并观察其对前软骨干细胞Ihh/PTHrP信号通路活性的影响.方法:采用免疫磁珠分选法获取并纯化SD大鼠前软骨干细胞,使用频率为50 MHz,电场强度为1 mT的脉冲电磁场进行干预,0.5 h,次,2次/d,干预2,4,6 d后收集细胞,以不给予磁场刺激的为空白对照.通过RT-PCR法检测细胞Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的基因表达水平,再通过Western-blot法测定各组细胞印度刺猬蛋白、甲状旁腺激素相关肽蛋白的表达水平.结果与结论:RT.PCR结果显示,Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的表达随磁场刺激时间延长而增高,且经磁场刺激前软骨干细胞的聚集蛋白聚糖明显高于空白对照组(P<0.05,P<0.01). Western-blot结果显示,印度豪猪蛋白及甲状旁腺激素相关肽蛋白表达均随磁场刺激时间的延长增加,不同时间磁场刺激组印度刺猬蛋白表达高于空白对照组(P<0.01);甲状旁腺激素相关肽的表达量也随之上升,但当磁场刺激4,6 d后的甲状旁腺激素相关肽蛋白表达与空白对照组差异有显著性意义(P<0.05,P<0.01).提示强度为1 mT,频率为50 MHz的脉冲电磁场能促进前软骨干细胞向成熟软骨细胞增殖分化,其作用机制可能与改变Ihh/PTHrP信号通路活性有关.     

恒磁场对人脐血间充质干细胞增殖及细胞周期的影响

目的：观察不同强度恒磁场辐射对人脐血间充质干细胞增殖水平及细胞周期的影响。方法：实验于2005-08／2005-10在中南大学湘雅医学院组织胚胎学教研室完成。①用密度梯度离心法分离人脐血间充质干细胞。②经贴壁筛选法筛选，对生长良好的第3代人脐血间充质干细胞进行恒磁场辐射（强度分别为0．05，0．1，0．5和1．0mT），连续刺激5d，8h／d。③用四甲基偶氮唑盐法、流式细胞仪法测定细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡情况。结果：（90．05mT组细胞增殖显著高于对照组（0．198&;#177;0．011，0．162&;#177;0．007，P〈0．05）；细胞周期静止期／DNA合成前期比例显著降低（66．3&;#177;0．1，75．8&;#177;0．3，P〈0．05）；DNA合成期和DNA合成后期／分裂期比例显著增加（14．9&;#177;0．3比9．1&;#177;0．1，18．8&;#177;0．2比15．1&;#177;0．1，P〈0．05）。（2）0．1mT组细胞增殖和细胞周期与对照组相比无明显差异。（3）0．5mT组和1．0mT组细胞增殖均显著低于对熙组，细胞周期静止期／DNA合成前期比例显著增加，DNA合成期和DNA合成后期／分裂期比例显著降低（P〈0．05）。④各组均未发现DNA倍体异常细胞。结论：恒磁场对人脐血间充质干细胞增殖的影响与磁感应强度有关，0．05mT的磁场促进间充质干细胞的增殖，0．1mT的磁场对间充质干细胞无明显影响，0．5mT和1．0mT的磁场抑制间充质干细胞的增殖。     

工频磁场对不同细胞密度人骨肉瘤细胞MG-63体外增殖的影响

目的研究工频磁场对不同细胞密度人骨肉瘤细胞MG-63体外增殖的影响，为揭示磁场所致生物学效应的作用机制提供实验依据。方法在某一细胞密度下（0．90×10^4个／m1），用不同磁感应强度（1mT、2mT、3mT、4mT）的工频磁场对MG-63细胞进行体外辐射，然后改变细胞密度进行重复实验（细胞接种密度分别为0．95×10^4个／ml、1．00×10^4个／ml、1．10×10^4个／ml和1．50×10^4个／m1）。完成磁场辐射处理后，采用四唑盐比色法（MTT法）检测细胞增殖水平。结果磁场对MG-63细胞的增殖有明显的诱导效应，不同细胞密度所对应的磁效应明显不同，其中2mT磁刺激组的增值诱导效应最显著。结论工频磁场对MG-63细胞体外增殖的影响不仅与磁场强度有关，也与细胞密度密切相关。     

异丙酚对体外培养大鼠神经干细胞增殖的影响

目的：研究静脉麻醉药异丙酚对大鼠神经干细胞的体外增殖的影响。方法：从孕14.5d的胎鼠前脑分离培养神经干细胞;采用逆转录-聚合酶联反应（RT-PCR）检测GABAA受体亚基的表达情况;用不同浓度（0~0.05mM）的异丙酚处理大鼠神经干细胞,BrdU标记及非放射性细胞增殖（MTS）法检测细胞增殖能力变化,原位末端标记（TUNEL）法检测细胞凋亡情况,蛋白印迹技术检测凋亡执行蛋白多聚ADP核糖聚合酶（PARP）的活化切割情况与细胞周期调控激酶Chk1与Chk2的磷酸化情况。结果：大鼠神经干细胞也表达部分GABAA受体亚基;异丙酚处理抑制大鼠神经干细胞增殖,但不影响细胞凋亡;异丙酚增强Chk1在317位丝氨酸的磷酸化,不影响345丝氨酸磷酸化,也不影响Chk2在68位苏氨酸的磷酸化。结论：异丙酚抑制体外培养的大鼠神经干细胞增殖,可能部分通过激活Chk1在317位丝氨酸磷酸化发挥作用。     

工频电磁场对骨髓间充质干细胞增殖、分化及其胞浆内钙离子浓度的影响

目的：研究工频电磁场刺激对骨髓间充质干细胞（MSC）的增殖与分化以及胞浆内钙离子浓度的影响。方法体外培养SD大鼠骨髓间充质干细胞，取第4代细胞，应用工频电磁场进行干预。用四甲基偶氮唑蓝比色法检测其增殖活性，采用碱性磷酸酶（ALP）检测试剂盒检测ALP活性。应用Fura．2／AM对细胞进行染色，用细胞内双波长钙荧光系统测定细胞胞浆内游离钙离子的浓度。结果50Hz、1．1mT的电磁场对骨髓间充质干细胞具有明显的促增殖作用（P〈0、05），使其ALP活性增高（P〈0．05）。无论是放置在含诱导剂还是不含诱导剂培养基中的细胞，其胞浆内的钙离子浓度在电磁场刺激下都有不同程度的增高。结论50Hz、1.1mT的电磁场可促进MSC增殖，使其向成骨细胞分化。胞浆内钙离子浓度增加可能在细胞的增殖与分化过程中起着重要作用。     

流式细胞仪观察脉冲电磁场干预骨髓间充质干细胞的生长

背景:应用流式细胞仪检测细胞表型、存活或凋亡细胞计数及细胞周期,较形态学观察、DNA电泳等检测方法更具优势。目的:采用流式细胞仪分选检测特定脉冲电磁场干预对大鼠骨髓间充质干细胞生长周期及其增殖效率的影响。方法:使用振荡频率1kHz,磁感应强度0.05mT、功率密度5mW/cm2的脉冲电磁场照射大鼠骨髓间充质干细胞,以未经磁场干预的细胞为对照。采用流式细胞仪检测未经磁场干预细胞表面抗原CD29、CD31、CD44、CD45和CD105表达率;于传第3代后第3,6,9,12天测定不同干预细胞增殖率及生长周期。结果与结论:未经磁场干预的第3代大鼠骨髓间充质干细胞表面抗原CD29、CD44和CD45为阳性表达,CD31和CD105为阴性表达,较未经磁场干预的第2代细胞更纯化(P<0.05);经磁场干预后第3代细胞存活率及细胞周期S期百分比较未经磁场干预的第3代细胞高(P<0.05)。流式细胞仪检测证实特定频率和场强的脉冲电磁场能在一定程度上促进骨髓间充质干细胞的生长与增殖。     

恒磁场对人脐血间充质干细胞增殖及细胞周期的影响

目的:观察不同强度恒磁场辐射对人脐血间充质干细胞增殖水平及细胞周期的影响。方法:实验于2005-08/2005-10在中南大学湘雅医学院组织胚胎学教研室完成。①用密度梯度离心法分离人脐血间充质干细胞。②经贴壁筛选法筛选,对生长良好的第3代人脐血间充质干细胞进行恒磁场辐射(强度分别为0.05,0.1,0.5和1.0mT),连续刺激5d,8h/d。③用四甲基偶氮唑盐法、流式细胞仪法测定细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡情况。结果:①0.05mT组细胞增殖显著高于对照组(0.198±0.011,0.162±0.007,P<0.05);细胞周期静止期/DNA合成前期比例显著降低(66.3±0.1,75.8±0.3,P<0.05);DNA合成期和DNA合成后期/分裂期比例显著增加(14.9±0.3比9.1±0.1,18.8±0.2比15.1±0.1,P<0.05)。②0.1mT组细胞增殖和细胞周期与对照组相比无明显差异。③0.5mT组和1.0mT组细胞增殖均显著低于对照组,细胞周期静止期/DNA合成前期比例显著增加,DNA合成期和DNA合成后期/分裂期比例显著降低(P<0.05)。④各组均未发现DNA倍体异常细胞。结论:恒磁场对人脐血间充质干细胞增殖的影响与磁感应强度有关,0.05mT的磁场促进间充质干细胞的增殖,0.1mT的磁场对间充质干细胞无明显影响,0.5mT和1.0mT的磁场抑制间充质干细胞的增殖。     

高频脉冲电磁场对骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化的影响

背景：采用低频脉冲电磁场干预骨髓间充质干细胞增殖分化的研究很多,但采用高频（〉300MHz）脉冲电磁场干预的研究国内未见报道。目的：观察〉300MHz高频脉冲电磁场照射能否促进骨髓间充质干细胞增殖,并向成骨分化。方法：分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,取第3代细胞随机分为4组：成骨诱导组、成骨诱导＋电磁照射组、电磁场照射组、空白对照组。观察各组骨髓间充质干细胞培养过程中细胞形态、数量、总蛋白量等方面变化。结果与结论：与未经高频脉冲电磁场照射组相比,经高频脉冲电磁场照射后,骨髓间充质干细胞胞体稍有增多,但分化方面区别微弱。电磁场照射组细胞增殖速度、总蛋白含量均低于较空白对照组（P〈0.05）。但电磁照射组细胞凋亡率较空白对照组增加（P〈0.05）。说明高频脉冲电磁场促进骨髓间充质干细胞的成骨分化趋势不明显,可抑制其增殖,促进其凋亡。     

脉冲电磁场对小鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响

背景:脉冲电磁场作为一种非侵入性疗法治疗骨不连及其他的骨科疾病已被证实有确切的临床疗效。但由于认识的局限性,骨髓间充质干细胞在脉冲电磁场治疗骨折中的作用未被充分重视。目的:观察小鼠骨髓间充质干细胞在50Hz、正弦波形、不同强度、不同作用时间脉冲电磁场干预下的增殖情况,以及其细胞周期变化,以寻求最佳干预窗口。设计:单一样本、区组设计,观察对比体外细胞培养实验。单位:华中科技大学同济医学院附属普爱医院骨科。材料:选用BALB/C小鼠20只,鼠龄4～5周,体质量18～22g,雌雄不拘,由同济医学院实验动物中心提供。此动物实验符合动物伦理学要求。脉冲电磁场发生器(海军工程大学电机系设计与制造)。方法:实验于2005-02/12在华中科技大学同济医学院附属普爱医院骨外科实验室完成。用密度梯度离心法分离小鼠骨髓间充质干细胞,再用贴壁筛选法筛选,对生长良好的第3代的小鼠骨髓间充质干细胞分别给予50Hz、强度分别为4,3,2,1mT的正弦波形脉冲电磁场,2次/d,每次30min,间隔12h,以不加电磁场干预的干细胞为对照组。主要观察指标:在照射第24,48,72h后采用MTT法测定骨髓间充质干细胞增殖水平;采用流式细胞仪分析细胞周期,以增殖指数(prolifera-tionindex,PI)表示脉冲电磁场对小鼠骨髓间充质干细胞分裂增殖的影响。结果:脉冲电磁场对小鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响:脉冲电磁场照射24,48h后各干预组与对照组比较,差异无显著性意义(P>0.05)。脉冲电磁场照射72h后各干预组骨髓间充质干细胞增殖数目多于对照组,差异有显著性意义(P<0.05～0.01),其中以1mT强度照射最为明显(P<0.01)。脉冲电磁场对小鼠骨髓间充质干细胞细胞周期的影响:在检测的所有细胞样本中均未发现有DNA倍体异常的细胞(diploid:100%)。骨髓间充质干细胞经过72h的强度为1,2,3,4mT的脉冲电磁场干预后PI值高于对照组,差异有显著性意义(P<0.05～0.01),其中以1mT最为明显(P<0.01)。结论:50Hz、正弦波形、强度为1mT的脉冲电磁场照射72h能明显促进体外小鼠骨髓间充质干细胞增殖,是最佳干预窗口。     

50 Hz电磁场对小鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的　探讨小鼠骨髓间充质干细胞经脉冲电磁场辐射不同时间后其细胞增殖水平的变化。方法　用密度梯度离心法分离小鼠骨髓间充质干细胞 ,再经贴壁筛选法筛选 ,对生长良好的第 3代小鼠骨髓间充质干细胞进行不同时间的脉冲电磁场辐射 (频率 50Hz、正弦波形、不同强度 ) ,用MTT法、流式细胞仪法测定细胞生长增殖水平及细胞周期变化。结果　小鼠骨髓间充质干细胞经脉冲电磁场辐射 3d(每天 2次 ,每次 3 0min)后 ,各实验组细胞增殖水平均有明显提高 ,差异有显著性意义 (P <0 .0 5)。采用流式细胞仪测定细胞周期 ,发现各实验组 (S G2 /M )期细胞数量较对照组均有不同程度的增长 ,差异有显著性意义 (P <0 .0 5)。各组均未发现DNA倍体异常细胞。结论　小鼠骨髓间充质干细胞经频率为 50Hz、正弦波形、强度分别为 4mT ,3mT ,2mT ,1mT的脉冲电磁场辐射 3d(每天 2次 ,每次 3 0min ,间隔 12h)后 ,能明显促进该细胞体外培养的增殖水平     

脉冲电磁场对去卵巢大鼠Runt相关转录因子2表达的影响

目的 观察脉冲电磁场(PEMFs)对去卵巢大鼠骨细胞Runt相关转录因子2(Runx2)表达的影响,并探讨PEMFs治疗骨质疏松可能的作用机制。 方法 将60只Sprague Dawley（SD）雌性大鼠按随机数字表法分成假手术对照组（Sham组）、去卵巢组（OVX组）、去卵巢+阿伦磷酸钠药物治疗组（ALN组）、去卵巢+脉冲电磁场治疗组（PEMFs组）,每组15只大鼠,按文献方法,Sham组切除双侧卵巢周围脂肪组织,其余各组大鼠切除双侧卵巢制成骨质疏松模型。手术结束后第30天,ALN组大鼠开始给予阿伦磷酸钠灌胃,PEMFs治疗组大鼠予以PEMFs治疗,Sham组和OVX组不干预。各组动物均于干预30d后采用腹腔注射戊巴比妥钠处死,取股骨行骨密度检测;采用Western bloting检测Runx2蛋白表达量;采用q-PCR检测Runx2 mRNA表达量。 结果 干预30d后,PEMFs组的骨密度值、Runx2蛋白表达水平和Runx2 mRNA表达水平较OVX组均有明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）;但PEMFs组的骨密度值、Runx2蛋白表达水平和Runx2 mRNA表达水平与ALN组比较,组间差异均无统计学意义(P>0.05)。 结论 PEMFs可上调去卵巢SD雌性大鼠的Runx2蛋白和mRNA表达水平,可能是PEMFs治疗骨质疏松的机制之一。     

大蒜素对LM-8细胞Bcl-2及Bax表达的影响

背景:有研究证实,大蒜素对LM-8细胞增殖及凋亡有影响.目的:观察大蒜素干预C3H小鼠骨肉瘤细胞株LM-8细胞Bcl-2、Bax凋亡蛋白的表达,以及LM-8细胞的形态学变化与Bcl-2及Bax变化的关系.设计:随机分组,非盲法,细胞水平体外实验.单位:实验于2006-09/2007-05在华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室完成.材料:实验所用C3H小鼠LM-8骨肉瘤细胞株购自解放军第四军医大学实验动物中心.大蒜素为武汉汇海公司产品,是从大蒜球茎中分离出的硫化物.Cell Counting Kit-8试剂购于上海同仁化学研究所,Bcl-2和Bax抗体及SP试剂盒购于福州迈新生物技术开发公司.方法:以含体积分数为0.1新生牛血清的1640完全培养基,培养LM-8细胞,制作细胞爬片.SP免疫细胞组织化学技术检测细胞爬片中Bcl-2和Bax蛋白表达;倒置显微镜下观察5.0,10.0和15.0 mg/L质量浓度大蒜素作用前后LM-8细胞形态变化;将LM-8细胞调整至7.5×107L-1接种于96孔板,用1.0,5.0,10.0和15.0 mg/L质量浓度的大蒜素处理细胞,设立不加任何处理因素的对照组及不含细胞和药物的培养基空白组,孵育24,48,72 h后取出培养板,加入CCK-8测定吸光度值,计算LM-8细胞生长抑制率:以5.0,10.0和15.0 mg/L质量浓度大蒜素干预LM-8细胞24,48,72 h,消化离心收集细胞,以流式细胞仪分析细胞凋亡率的变化.主要观察指标:LM-8细胞中Bcl-2和Bax蛋白表达;LM-8细胞形态及增殖、凋亡情况.结果:①Bcl-2和Bax蛋白表达:大蒜素可以降低Bcl-2表达,增强Bax表达,经15.0mg/L大蒜素作用72h,Bcl-2和Bax蛋白表达阳性率及Bcl-2/Bax表达与对照组比较,差异有显著性意义(P＜0.01).②LM-8细胞的形态:经不同质量浓度大蒜素干预后均出现明显凋亡表现.③LM-8细胞的增殖:大蒜素能明显抑制LM-8细胞的增殖,当大蒜素浓度从1.0 mg/L增加到15.0 mg/L,LM-8细胞72 h时生长抑制率由(23.87±3.26)%增至(58.32±5.38)%,在72 h其药物半数抑制率浓度是11.09 mg/L.④LM-8细胞的凋亡:5.0,10.0和15.0 mg/L质量浓度的大蒜素作用72 h后可诱导LM-8细胞凋亡,且呈浓度依赖性(P＜0.05).结论:①大蒜素可抑制LM-8细胞增殖,该效应与大蒜素的浓度和时间有关.②大蒜素可诱导LM-8细胞凋亡,作用呈浓度依赖性.③大蒜素抑制LM-8细胞增殖和诱导LM-8细胞凋亡的机制可能与下调Bcl-2的表达和上调Bax的表达有关.     

恒定磁场中大鼠成骨细胞的增殖和功能活性

背景:磁场对成骨细胞生物学的影响存在一定的分歧。目的:探讨不同强度恒定磁场作用不同时间后成骨细胞增殖和功能活性的改变。方法:用体外培养的SD大鼠成骨细胞第3～5代分别在0,5,22,86,135mT恒定磁场下培养,观察8,12,24h后细胞增殖和凋亡变化及细胞上清液中骨钙素及Ⅰ型前胶原C端前肽的表达。结果与结论:磁场作用8,12h后,5,22,86,135mT磁场培养的细胞增殖指数均高于对照组(P<0.05),作用24h时,仅5mT组高于对照组(P<0.05)。而0,5,22,86,135mT恒定磁场下培养8,12,24h的凋亡百分数差异无显著性意义。磁场作用8h后,22,86,135mT组骨钙素分泌量均高于对照组(P<0.05);作用24h后,135mT组骨钙素分泌量则明显低于对照组(P<0.05);而磁场作用8,12h后,22,86mT组Ⅰ型前胶原C端前肽分泌量明显高于对照组(P<0.05),作用24h后,135mT组Ⅰ型前胶原C端前肽分泌量则明显低于对照组(P<0.05)。表明低强度磁场、短时间作用可促进成骨细胞的增殖及成骨物质的分泌,而高强度磁场或磁场暴露时间过长则抑制成骨细胞增殖及成骨物质的分泌。     

恒定磁场中大鼠成骨细胞的增殖和功能活性

背景：磁场对成骨细胞生物学的影响存在一定的分歧。目的：探讨不同强度恒定磁场作用不同时间后成骨细胞增殖和功能活性的改变。方法：用体外培养的SD大鼠成骨细胞第3～5代分别在0,5,22,86,135mT恒定磁场下培养,观察8,12,24h后细胞增殖和凋亡变化及细胞上清液中骨钙素及Ⅰ型前胶原C端前肽的表达。结果与结论：磁场作用8,12h后,5,22,86,135mT磁场培养的细胞增殖指数均高于对照组（P〈0.05）,作用24h时,仅5mT组高于对照组（P〈0.05）。而0,5,22,86,135mT恒定磁场下培养8,12,24h的凋亡百分数差异无显著性意义。磁场作用8h后,22,86,135mT组骨钙素分泌量均高于对照组（P〈0.05）;作用24h后,135mT组骨钙素分泌量则明显低于对照组（P〈0.05）;而磁场作用8,12h后,22,86mT组Ⅰ型前胶原C端前肽分泌量明显高于对照组（P〈0.05）,作用24h后,135mT组Ⅰ型前胶原C端前肽分泌量则明显低于对照组（P〈0.05）。表明低强度磁场、短时间作用可促进成骨细胞的增殖及成骨物质的分泌,而高强度磁场或磁场暴露时间过长则抑制成骨细胞增殖及成骨物质的分泌。     

脉冲电磁场诱导人骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的研究

目的 观察脉冲电磁场(PEMFs)对人骨髓间充质干细胞(hMSCs)向成骨细胞分化的影响。方法 分离并培养hMSCs，取第3代细胞，分为对照组与处理组，处理组细胞接受频率12Hz、场强1．1mT的PEMFs刺激，每日8h；对照组细胞不接受PEMFs刺激。应用透射电镜观察2组细胞超微结构，采用碱性磷酸酶染色、骨钙素免疫组织化学染色、四环素荧光标记等方法进行观测。结果 细胞培养5～6d即可传代，经PEMFs连续刺激3d后，hMSCs细胞形态发生变化，3周后聚集成细胞钙化结节。透射电镜下观察显示：细胞比较成熟，内质网扩张，其碱性磷酸酶染色、骨钙素免疫组织化学染色和四环素荧光标记均为阳性。结论 hMSCs经特定频率和场强的PEMFs体外刺激后，可向成骨细胞分化，符合成骨细胞的形态学和生物学特性，为体外构建组织工程化骨提供自体种子细胞。     

硼替佐米对急性单核细胞白血病细胞株SHI-1诱导凋亡作用及其对Bcl2112、Bcl-2和Bax基因表达影响

本研究探讨蛋白酶抑制剂硼替佐米对急性单核细胞白血病细胞株SHI-1增殖和凋亡的影响及Bcl2112、Bcl-2和Bax基因在其中的作用。用MTT比色法观察硼替佐米对SHI-1细胞的生长抑制作用，用Annexin—V标记、线粒体跨膜电位（△ψm）和DNA凝胶电泳分析细胞凋亡，用RT—PCR方法检测0、6，12和24小时Bcl2112、Bcl-2和Bax基因表达。结果表明，硼替佐米呈时间和剂量依赖性抑制SHI-1细胞生长，24小时和48小时半数抑制浓度分别为54．13nmol／L和5．45nmol／L；硼替佐米能够诱导SHI-1细胞凋亡，在6小时Annexin-V阳性细胞就开始增高并呈时间依赖性，ACm减低，形态学可见明显细胞核凝聚、固缩和碎裂，DNA凝胶电泳显示DNA片段化；RT-PCR显示，Bcl2112表达增高，Bcl-2表达减低，但Bax表达无明显改变。结论：硼替佐米抑制SHI-1细胞增殖，并可能通过上调Bcl2112基因和下调Bcl-2基因，使线粒体膜电位下降而促使SHI-1细胞发生凋亡。     

不同强度静磁场对成骨细胞细胞骨架改建的影响

背景:静磁场对成骨细胞增殖活性、细胞因子分泌及碱性磷酸酶表达等功能活性影响的机制尚不清楚。目的:观察不同强度静磁场加载对成骨细胞骨架改建和细胞骨架蛋白表达的影响。方法:取新生24h内SD大鼠颅骨进行成骨细胞的培养和鉴定。采用静磁场加载装置对体外培养的成骨细胞进行0,8,50,160mT的静磁场加载,分别于静磁场加载24,48,72h应用BODYPY-Phaloidin进行成骨细胞骨架染色,激光扫描共聚焦显微镜和图像处理软件ImageJ测定细胞骨架蛋白的荧光强度。结果与结论:8,50,160mT静磁场加载24,48,72h,荧光标记的成骨细胞骨架蛋白向细胞核周围集中,荧光强度增强(P<0.05),其中经50mT静磁场加载的成骨细胞骨架蛋白的荧光最强。说明一定强度的静磁场可以影响成骨细胞骨架的改建和重组。