细胞凋亡信号调节激酶1在脊髓缺血再灌注损伤中的作用

目的：探讨细胞凋亡信号调节激酶1（apoptosis signal-regulating kinase1,ASK1）在脊髓缺血再灌注损伤中的作用及机制。方法：20只新西兰大白兔随机分成4组,每组5只,分别为对照组（A组）、缺血30min/再灌注15min组（B组）、缺血30min/再灌注1h组（C组）、缺血30min/再灌注24h组（D组）,脊髓缺血再灌注损伤模型应用腹主动脉阻断法制作。光镜及电镜观察各组脊髓组织病理变化,Westernblot检测脊髓组织中ASK1的蛋白表达及活化情况,免疫共沉淀分析ASK1与14-3-3蛋白间相互作用,免疫组织化学染色观察活化ASK1（pASK1）及14-3-3蛋白在细胞内的定位表达。结果：光镜检查B组的脊髓组织形态学与A组比较无明显改变,C组及D组脊髓间质明显出血,神经细胞肿胀;电镜检查C组及D组神经细胞出现细胞核浓缩、染色质聚边、脱髓鞘改变等早期凋亡征象;Westernblot蛋白电泳显示B组ASK1无明显活化,C组及D组ASK1显著活化;免疫共沉淀分析提示ASK1与14-3-3蛋白在C组及D组发生蛋白分离;免疫组织化学染色显示缺血再灌注时pASK1与14-3-3蛋白均在细胞浆内表达。结论：ASK1介导的凋亡信号转导途径参与脊髓缺血再灌注的损伤过程,14-3-3蛋白与ASK1蛋白的分离可能是导致ASK1活化的机制之一。     

缺血再灌注预处理对血浆MDA、SOD及脊髓AQP4 mRNA的表达影响

目的 探讨腹主动脉缺血预处理对再灌注不同时问血浆丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及脊髓组织中水通道蛋白4(AQP4) mRNA表达的影响.方法 将54只体质量189 ～ 207 g雌雄不拘的SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)和缺血预处理组(IPC组)3组.采用肾下腹主动脉阻断法,建立脊髓缺血再灌注模型;Sham组6只,手术开始步骤同其他两组,但不作肾下腹主动脉阻断即缝合伤口;I/R组24只,直视下采用动脉夹夹闭腹主动脉段左肾动脉分支起始处下方5 mm处(即肾动脉后型),仅阻断腹主动脉60 min后开放灌注;而IPC组24只,先阻断腹主动脉5min,开放5 min,再阻断60 min后开放灌注.再灌注后12h、1、2、5、10天分别进行神经功能评分,同时观察大鼠血浆MDA、SOD指标的水平,以及预处理对脊髓AQP4 mRNA表达的影响.结果 54只大鼠术后全部存活,I/R组行为学评分降低(P＜0.01),IPC组的神经功能评分在再灌注5天内均高于I/R组(P＜0.01),随着再灌注时间的延长行为学评分逐渐增加.I/R组血浆SOD水平仅在再灌注1天时较Sham组显著下降,随时间延长SOD水平逐渐升高与Sham组无差异,血浆各时间点MDA水平比Sham组低(P ＜0.05);IPC组SOD、MDA水平与Sham组比较没有差异.I/R组再灌注2天时AQP4mRNA表达显著增高(P＜0.01),之后降低至与Sham组无差异;IPC组在再灌注1天时即出现AQP4 mRNA表达明显升高(P＜0.05),之后表达逐渐降低,第5天时与Sham组无差异.IPC AQP4mRNA峰值明显低于I/R组(P＜0.01).结论 大鼠腹主动脉缺血再灌注的预处理IPC可能通过减轻由缺血再灌注造成的全身氧化应激反应和下调AQP4mRNA的表达,进而保护脊髓组织.     

七氟醚预处理对大鼠脊髓缺血再灌注损伤的影响及自噬在其中的作用

目的 评价七氟醚预处理对大鼠脊髓缺血再灌注损伤的影响及自噬在其中的作用.方法 成年雄性SD大鼠45只,体重420～450 g,采用随机数字表法分为5组(n=9):对照组(Con组)、脊髓缺血再灌注组(I/R组)、七氟醚预处理组(Sevo组)、特异性自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤组(3-MA组)和3-MA+七氟醚预处理组(3-MA+ Sevo组).I/R组胸主动脉球囊阻断+体循环低血压制备大鼠脊髓缺血再灌注模型,Sevo组于缺血前24h时吸入3.4％七氟醚2h,3-MA组和3-MA+ Sevo组分别于再灌注即刻和吸入七氟醚前15 min时鞘内注射20出3-MA(10 mmol/L).于再灌注24h时采用神经功能缺陷评分(NDS评分)法评价大鼠神经功能,随后处死取脊髓,Western blot法检测LC3B、Beclin 1、Bcl-2蛋白的表达水平.结果 与Con组比较,I/R组脊髓LC3B、Beclin 1蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调,NDS评分升高(P＜0.05);与I/R组比较,Sevo组、3-MA组和3-MA+ Sevo组脊髓LC3B、Beclin 1蛋白表达下调,Bcl-2蛋白表达上调,NDS评分降低(P＜0.05);Sevo组、3-MA组和3-MA+ Sevo组各指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 七氟醚预处理可减轻大鼠脊髓缺血再灌注损伤,其机制可能与上调Bcl-2,抑制自噬溶酶体途径,减轻自噬有关.     

肝脏及肢体缺血预处理抗大鼠肝缺血再灌注损伤的实验研究

目的研究肝脏缺血预处理(经典缺血预处理IPC)的第一保护窗(FW)与肢体缺血预处理(远端缺血预处理RPC)的第二保护窗(SW)及两者联合应用对大鼠肝脏缺血再灌注(I/R)损伤的保护作用及可能机制。方法大鼠随机分成5组:I/R组不行预处理;IPC组以肝缺血5 min行预处理;RPC组以双后肢缺血5 min,反复3次行预处理;RPC+IPC组先行RPC,24 h后行IPC作预处理;S组仅行开腹,不行其他处理。3个预处理组及I/R组均行肝缺血1 h再灌注3 h。取血用于血清谷丙转氨酶(ALT)与血清谷草转氨酶(AST)检测。切取肝组织用于测定肿瘤坏死因子α(TNF-α)和热休克蛋白70(HSP70)的表达、湿干比(W/D)及观察显微、超微结构的变化。结果与I/R组比较,IPC组,RPC组及RPC+IPC组ALT,AST,W/D及TNF-α阳性表达均明显降低(P0.01),HSP70表达量明显增加(P0.01),肝脏的显微及超微结构损伤减轻;IPC,RPC,RPC+IPC组3组间各项指标差异无统计学意义(P0.05)。结论IPC的FW,RPC的SW及两者联合应用对大鼠肝脏I/R损伤均有明显的保护作用,三者在保护强度上无明显差异。其机制可能与抑制TNF-α的产生、诱导保护性蛋白HSP70的表达、减轻肝脏水肿、改善肝组织微循环有关。     

c-Jun氨基末端激酶在瑞芬太尼预处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用

目的 评价c-Jun氨基末端激酶(JNK)在瑞芬太尼预处理(RPC)减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用.方法 成年雄性SD大鼠126只,体重300-350 g,随机分为5组:缺血再灌注组(I/R组)(n=38)、缺血预处理组(IPC组)(m=38)、RPC组(n=38)、SP+IPC组(n=6)和SP+RPC组(n=6).采用结扎左冠状动脉30 min再灌注120 min的方法制备心肌缺血再灌注模型.IPC组在缺血前30min行IPC:缺血5 min,再灌注5 min,重复3次;RPC组在缺血前30 min 行RPC:静脉输注瑞芬太尼6 ug·kg-1·min-1 5 min,停止5 min,重复3次;SP+RPC组和SP+IPC组分别于RPC或IPC前5 min腹腔注射JNK选择性阻滞剂SP600125 6 mg/kg.I/R组、IPC组和RPC组于缺血前即刻、缺血5.30 min和再灌注5、30、60 min时随机处死5只大鼠,测定左心室磷酸化JNK(p-JNK)的表达.于再灌注末处死其余大鼠,取心肌,计算左心室(LV)与右心室(RV)体积之和(LV+RV)、梗死区(IS)面积占缺血危险区(AAR)面积的百分比(IS/AAR).结果 与I/R组相比,IPC组和RPC组IS/AAR降低(P＜0.01),SP+PRC组和SP+IPC组IS/AAR差异无统计学意义(P＞0.05);缺血前即刻IPC组心肌p-JNK表达增加,缺血5min时RPC组和IPC组心肌p-JNK表达均降低,再灌注期间RPC组和IPC组心肌p-JNK表达均增加(P＜0.01).结论 JNK参与了瑞芬太尼预处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤.     

七氟烷预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤时细胞凋亡的影响

目的 探讨七氟烷预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤时细胞凋亡的影响.方法 成年雄性SD大鼠64只,体重270～350 g,随机分为4组(n=16):假手术组(S组)仅穿线不结扎,心肌缺血再灌注组(I/R组)阻断左冠状动脉前降支缺血30 min,恢复灌注2 h制备心肌缺血再灌注损伤模型,七氟烷组(Sevo组)吸入2.5%七氟烷30 min,七氟烷预处理+心肌缺血再灌注组(SR组)吸入2.5%七氟烷30 min,15 min后制备模型.于再灌注2 h时随机取4只大鼠处死取左心室,采用氯化三苯四唑染色法测定心肌梗死范围,随机取4只大鼠处死取左心室,采用TUNEL法检测凋亡心肌细胞,计算凋亡指数,于缺血前即刻和再灌注2 h时分别随机取4只大鼠处死取左心室,采用Western blot法测定Bcl-2及caspase-3的蛋白表达水平.结果 与S组相比,再灌注2 h时I/R组和SR组心肌梗死范围增大,心肌细胞凋亡指数升高,caspase-3蛋白表达上调,Sevo组Bcl-2蛋白表达上调,I/R组Bcl-2蛋白表达下调,Sevo组和SR组缺血前即刻Bcl-2蛋白表达上凋(P＜0.05);与I/R组相比,再灌注2 h时SR组心肌梗死范围缩小、心肌细胞凋亡指数降低,Sevo组和SR组Bcl-2蛋白表达上调,SR组caspase-3蛋白表达下调(P＜0.05);与缺血前即刻相比,I/R组和SR组再灌注2 h时Bcl-2蛋白表达下调,caspase-3蛋白表达上调(P＜0.05).结论 七氟烷预处理可通过抑制细胞凋亡减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤.     

缺血预处理对大鼠皮瓣缺血再灌注后Bcl-2和Bax基因表达的影响

目的探讨缺血预处理（IPC）对大鼠皮瓣缺血再灌注（I／R）后凋亡相关蛋白表达的影响及其对皮瓣缺血再灌注损伤保护作用机制。方法采用Wistar大鼠为实验动物，制备右下腹岛状皮瓣I／R模型。90只大鼠随机分为对照组、I／R组和IPC组。采用SABC法观察IPC对大鼠皮瓣缺血再灌注后Bcl-2、Bax蛋白表达规律。结果SABC法观察显示Bcl-2在缺血再灌注后4h有少量表达，24h达峰值，7d时明显减少。IPC组再灌注后4h表达较弱，3d达峰值，7d时明显减弱。IPC组与I／R组比较，Bcl-2在I／R后3d差异有统计学意义（P〈0．01）。Bax基因在I／R后4h表达，3d时达峰值，7d时仍有较高水平表达；IPC组各时间点Bax基因呈低表达，与I／R组比较，3d和7d时差异最显著（P〈0．01）。结论IPC诱导Bcl-2基因表达增加和抑制Bax基因表达可能是IPC诱导抗凋亡、产生皮瓣保护机制的原因之一。     

异丙酚对大鼠小肠缺血再灌注时粘膜上皮细胞凋亡的影响

目的 探讨异丙酚对大鼠小肠缺血再灌注时粘膜上皮细胞凋亡的影响及其机制.方法 健康Wistar大鼠24只,随机分为3组(n=8):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)和异丙酚+缺血再灌注组(P+I/R组).夹闭肠系膜上动脉,缺血1 h,再灌注2 h,制备小肠缺血再灌注损伤模型.S组和I/R组缺血前10 min开始经股静脉持续输注生理盐水10 ml·kg-1·h-1,P+I/R组静脉注射异丙酚10 mg/kg,以后持续输注异丙酚10 mg·kg-1·h-1.取空肠组织3 cm,常规制备全层石蜡切片,行HE染色,光镜下观察小肠组织病理学;免疫组化法检测Bcl-2、Bax蛋白的表达;TUNEL法检测小肠粘膜上皮细胞凋亡,计数凋亡细胞及总细胞,计算小肠粘膜上皮细胞凋亡指数.结果 与S组比较,I/R组和P+I/R组Bcl-2和Bax蛋白表达上调,Bcl-2/Bax增加,小肠组织损伤程度增强,小肠粘膜上皮细胞凋亡指数增高(P＜0.01或0.05);与I/R组比较,P+I/R组Bcl-2蛋白表达上调,Bax蛋白表达下调,小肠组织损伤程度减轻,小肠粘膜上皮细胞凋亡指数降低(P＜0.01).结论 异丙酚可减轻大鼠小肠缺血再灌注损伤时粘膜上皮细胞凋亡,其机制与上调Bcl-2基因的表达和下调Bax基因的表达有关.     

上调miRNA-133a表达对心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的 观察上调miRNA-133a表达是否可改善缺血再灌注损伤后心肌损害及心脏功能.方法 建立活体大鼠心肌缺血再灌注损伤模型.将实验动物随机分为5组:(1)空白对照组(Sham组);(2)缺血再灌注损伤组(I/R组);(3)缺血再灌注损伤+miRNA-133a模拟物agomiR-133a组(I/R+ agomiR-133a组);(4)缺血再灌注损伤+阴性对照序列组(I/R+ scramble组);(5)缺血再灌注损伤组+生理盐水组(I/R+ NS组).于再灌注24h分别使用实时定量聚合酶链反应(Real-TimePCR)法检查心肌内miRNA-133a表达水平;经胸超声心动检查大鼠心脏功能;2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色检测心肌梗死以及TdT介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)检测心肌细胞凋亡.结果 I/R+ agomiR-133a组心肌内miRNA表达水平显著高于I/R组(P＜0.01).上调miRNA-133a表达水平可显著减少再灌注后心肌梗死面积[(37.0±3.1)％比(58.0±4.4)％,P＜0.01],抑制心肌细胞凋亡(38.4±6.0比15.7±5.2,P＜0.01),并改善心脏功能[LVEF:(64.8 ±2.9)％比(52.8±4.0)％,LVFS:(31.1±1.2)％比(25.2±0.8)％,P＜0.01].NS与scramble对再灌注后心肌损伤及心脏功能无显著影响.结论 上调心肌内miRNA-133a表达水平可显著减轻缺血再灌注损伤24h后心肌损害,并改善心脏功能.     

磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B通过上调内皮型一氧化氮合酶参与远端缺血后处理的脑保护作用

目的 探讨内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)及磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(phosphoinositide-3 kinase/protein kinase B,PI3K/Akt)通路在远端缺血后处理(remote ischemic postconditioning,RIPoC)减少大鼠全脑缺血/再灌注(ischemia/repeffusion,I/R)损伤中的作用.方法 成年雄性SD大鼠100只,体重为200 g～250 g,按随机数字表法随机分为5组(每组20只):假手术组(S组)、缺血/冉灌注组(I/R组)、缺血/冉灌注+远端缺血后处理组(I/R+RIPoC组)、左旋硝基精氨酸甲酯( L-NAME)+缺血/再灌注+远端缺血后处理组(L-NAME+I/R+RIPoC组),以及LY294002+缺血/再灌注+远端缺血后处理组(LY+I/R+RIPoC组).采用四动脉阻断法建立大鼠全脑I/R模型.S组不制备全脑I/R模型；I/R+RIPoC组、L-NAME+I/R+RIPoC组及LY+I/R+RIPoC组于再灌注开始行双侧股动脉缺血15 min,再灌注15 min,共3个循环.L-NAME+I/R+RIPoC组于脑缺血前10 min腹腔注射非选择性一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)抑制剂L-NAME,LY+I/R+RIPoC组于脑缺血前10 min侧脑室注射PI3K特异性抑制剂LY294002.脑再灌注48 h时行海马CA1区DNA原位末端缺口标记技术(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)阳性细胞计数,测定海马CA1区抗磷酸化的eNOS抗体(p-eNOS)、eNOS、p-Akt及Akt的蛋白水平,再灌注4d时行Morris水迷宫实验,再灌注7d时计算海马CA1区神经元密度.结果 与S组比较,I/R组、I/R+RIPoC组、L-NAME+I/R+RIPoC组及LY+I/R+RIPoC组再灌注时海马CA1区凋亡细胞[(0.8±0.8)、(84.7±6.8)、(52.8±7.8)、(74.3±9.0)、(79.5±7.3)个/mm]增加(P＜0.01),行为学损伤增加(P＜0.01),神经元密度[(193±7)、(10±7)、(91±11)、(38±7)、(26±7)个/mm]降低(P＜0.01).与I/R组比较,I/R+RIPoC组再灌注时凋亡细胞减少(P＜0.01),行为学损伤减少(P＜0.01),神经元密度增加(P＜0.01).与I/R+RIPoC组比较,L-NAME+I/R+RIPoC组及LY+I/R+RIPoC组再灌注时凋亡细胞增加(P＜0.01),行为学损伤增加(P＜0.01),神经元密度降低(P＜0.01).L-NAME能够抑制RIPoC后p-eNOS( 0.48±0.03、0.23 ±0.04)和eNOS (0.91±0.07、0.64±0.06)的升高(P＜0.01),LY294002不仅能抑制RIPoC后p-Akt (0.74±0.06、0.44±0.04)的升高(P＜0.01),而且能抑制RIPoC后p-eNOS( 0.48±0.03、0.23±0.04)和eNOS( 0.91±0.07、0.63±0.06)的升高(P＜0.01).结论 RIPoC能够减轻大鼠全脑I/R损伤,其作用机制与PI3K/Akt途径介导的eNOS激活和上调有关.     

肢体远隔缺血后处理联合吗啡后处理增强对心肌缺血/再灌注损伤的保护作用

目的 评估联合应用肢体远隔缺血后处理(remote ischemic postconditioning,RIP)和吗啡后处理能否获得增强的心肌保护作用. 方法 采用大鼠在体心肌缺血/再灌注损伤(ischemia/reperfusion injury,I/RI)模型,采用随机数字表法将60只大鼠分为6组(每组10只):空白对照组(Sham组)、缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)组(I/R组)、缺血预处理(ischemic preconditioning,IPC)组(IPC组)、肢体RIP组(RIP组)、吗啡后处理组(M组)以及联合应用肢体RIP和吗啡后处理组(M+RIP组).实验中连续监测心律失常情况,计算缺血期和再灌注早期的心律失常评分,检测血清肌酸激酶同工酶(creatine kinase MB,CK-MB)和心脏肌钙蛋白Ⅰ(cardiac troponin Ⅰ,cTnⅠ)浓度,并采用伊文蓝和氯化三苯基四氮唑(triphenyltetrazolium chloride,TTC)双重染色法测定心肌梗死面积. 结果 I/R组、IPC组、RIP组、M组和M+RIP组的心肌梗死面积分别是(56.0±9.1)％、(23.9±5.5)％、(40.4±11.1)％、(47.7±9.3)％和(27.2±6.7)％.与I/R组比较,M+RIP组再灌注早期心律失常发生率和心律失常评分、血清CK-MB和cTnⅠ浓度以及心肌梗死面积均明显降低(P＜0.05);这些参数在IPC组和M+RIP组之间差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 在大鼠在体心肌I/RI模型,联合应用肢体RIP和吗啡后处理可获得增强的心肌保护作用,其心肌保护作用类似于IPC.     

Protective effect of ischemic preconditioning against intermittent warm-ischemia-induced liver injury

BACKGROUND: Although ischemic preconditioning (IPC) has been reported to protect the liver from injury when subjected to continuous hepatic ischemia, whether IPC protects rat livers against ischemia-reperfusion (I/R) injury after intermittent ischemia has not been elucidated. MATERIALS AND METHODS: Five groups of Wistar rats were subjected to intermittent hepatic ischemia (I) comprising 15-min ischemia and 5-min reperfusion three times with or without prior IPC (10-min ischemia and 10-min reperfusion), 45-min continuous ischemia (C) with or without IPC, and sham operation. Serum transaminase and lactic acid levels, hepatic tissue energy charges, and hepatic blood perfusion were measured after reperfusion. Plasma tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha) levels were determined after reperfusion for 120 min. Histological and apoptotic findings were evaluated after reperfusion for 180 min. RESULTS: IPC significantly reduced serum transaminase levels after continuous and intermittent ischemia (IPC + C, 1107 vs C, 2684 IU/l; IPC + I, 708 vs I, 1859 IU/l). After hepatic ischemia without IPC, apoptosis and necrosis with increased plasma TNF-alpha levels were observed. IPC protected livers from injury by interfering with the increase in plasma TNF-alpha (IPC + I, 27.6 vs I, 64.8 pg/ml; IPC + C, 21.6 vs C, 49.3 pg/ml). This resulted in the attenuation of hepatic necrosis after continuous ischemia and significantly reduced necrosis and apoptosis after intermittent ischemia. CONCLUSIONS: IPC exerts a greater protective effect against hepatic I/R injury after intermittent hepatic ischemia than after continuous hepatic ischemia.     

缺血预处理和缺血后处理对大鼠心肌缺血再灌注时炎性反应影响的比较

目的 比较缺血预处理和缺血后处理对大鼠心肌缺血再灌注时炎性反应的影响.方法 雄性SD大鼠40只,体重290～320 g,随机分为4组(n=10),缺血再灌注组(I/R组)、缺血预处理组(IPC组)和缺血后处理组(IPOC组)采用结扎左冠状动脉前降支30 min进行再灌注的方法制备心肌缺血再灌注模型,假手术组(S组)仅在左冠状动脉前降支下穿线.监测再灌注期间HR和MAP,并计算HR和MAP的乘积(心肌氧耗指数,RPP).分别于再灌注30和180 min时采集静脉血样,测定血清TNF-α、IL-6、高迁移率组蛋白1(HMGB1)和心肌肌钙蛋白I(cTnI)的浓度.采集完血样,取心肌组织,测定心肌梗死体积.结果 与S组比较,I/R组MAP和RPP降低,血清cTnI和炎性细胞因子浓度升高,心肌梗死体积增大(P＜0.05);与I/R组比较,IPC组MAP升高,IPOC组MAP和RPP均升高,两组血清cTnI和炎性细胞因子浓度降低,心肌梗死体积缩小(P＜0.05);与IPC组比较,IPOC组血清炎性细胞因子浓度升高,心肌梗死体积增大(P＜0.05).结论缺血预处理减轻大鼠心肌缺血再灌注时炎性反应的作用强于缺血后处理,从而使心肌保护效应较好.     

Biochemical and morphological evaluation of ischemia-reperfusion injury in rat small bowel modulated by ischemic preconditioning

The objective of this study was to evaluate the effect of ischemic preconditioning upon lesions produced by ischemia-reperfusion of the small intestine. Thirty EPM-1 Wistar rats were randomly distributed into three groups: ischemic preconditioning (IPC; n = 12), ischemia-reperfusion (I/R; n = 12), and control (C; n = 6). Laparotomy permitted isolation of the mesenteric artery for clamping. The animals were heparinized and hydrated. IPC was induced by: 10 minutes of ischemia followed by 10 minutes of reperfusion and then 50 minutes ischemia followed by another 30 minutes reperfusion. Group I/R was submitted to the same protocol except for the 20 minutes of preconditioning. Group C animals underwent only laparotomy for 100 minutes. After reperfusion small intestine fragments were examined histologically. Blood samples were obtained to measure LDH and lactate prior to euthanasia. Lactate values were significantly lower in the IPC as compared to I/R group, 39 versus 67 mg/dL, respectively (P < or =.05). However, neither IPC (grade 3) lesions of the mucosa versus I/R (grade 4) nor LDH values (PCI = 680, I/R = 873 U/L) were statistically different. Thus No morphological evidence of protection was observed following ischemic preconditioning.     

不同预处理对肝硬化兔缺血再灌注肝组织HSP70及ET-1表达的影响

目的:探讨两种预处理方式,即经典缺血预处理(IPC)与肢体缺血预处理(LIPC),对肝硬化兔肝缺血再灌注(I/R)损伤的保护作用及可能的作用机制。方法:皮下注射CCl4-橄榄油溶液制备兔肝硬化模型,随后将模型兔随机分为假手术组,肝I/R组(I/R组),IPC+肝I/R组(IPC组),LIPC+肝I/R组(LIPC组),每组7只。肝I/R模型制作方法:阻断入肝血流30 min,再灌注2 h;IPC诱导方法:在行肝I/R处理前阻断入肝血流10 min,开放10 min;LIPC诱导方法:在行肝I/R处理前24 h,采用止血带捆扎兔单侧后肢5 min,再开放5 min,重复3次。各组于再灌注2 h后切取肝组织,行组织形态学观察,用ELISA法测定内皮素1(ET-1)含量及Western blot法检测热休克蛋白(HSP70)的表达。结果:与假手术组比较,其余各组在肝硬化病变的基础上均出现不同程度的变性、水肿和炎性细胞浸润,但IPC组与LIPC组明显轻于I/R组,而LIPC组及IPC组间病变程度无明显差异;与假手术组比较,其余各组肝组织ET-1含量和HSP70的表达均明显增加(均P<0.05),但IPC组与LIPC组肝组织ET-1含量低于I/R组,HSP70的表达高于I/R组(均P<0.05),而上述2项指标在LIPC及IPC组间均无统计学差异(均P>0.05)。结论:LIPC和IPC均能对肝硬化肝I/R损伤有保护作用,且保护强度相似,其机制可能均与抑制ET-1的释放及增加HSP70的表达有关;LIPC具有无创性,可能具有更大的临床应用前景。     

不同时限缺血预处理对硬化肝脏保护作用的实验研究

目的: 探讨缺血预处理对硬化肝脏缺血再灌注的作用,并寻找一种有效缺血预处理的时间窗和理想方案. 方法: 将64只雄性、肝硬化SD大鼠随机分为八组,每组八只:假手术组(SO组);缺血再灌注组(I/R组);缺血预处理1、2、3、4、5和6组(IPC1、IPC2、IPC3、IPC4、IPC5和IPC6).以肝组织ATP、ADP、AMP及EC(用高效液相色谱法测定),血清ALT、AST、LDH(用全自动生化仪测定)和肝脏胆汁分泌量来评价肝功能. 结果: 再灌注末,IPC3组、IPC4组、IPC5组ATP含量均明显高于I/R组(P分别为0.01、0.07和0.000);同样,测定EC时发现,IPC3组、IPC4组和IPC5组均明显高于I/R组(P=0.000).与I/R组比较,IPC4组和IPC5组的血清ALT差异有显著性(P分别为0.013和0.000);其血清LDH差异亦有显著性(P=0.023,P=0.000),而血清AST却只有IPC5组显著低于I/R组(P=0.001).IPC3组、IPC4组和IPC5组肝脏的胆汁分泌量明显高于I/R组(P=0.028,P=0.023,P=0.008). 结论: 5~10min予一次或两次缺血预处理,能启动IPC对肝硬化大鼠肝脏I/R损伤的保护作用;10 min的缺血预处理,对肝硬化大鼠肝脏I/R损伤的保护作用最强.     

钙预处理对未成熟心肌的保护作用

目的 观察钙预处理对未成熟心肌的影响.方法 采用Langendorff离体灌注模型,分为3组,缺血再灌组(I/R):离体心脏灌注10 win、工作心15 min后停灌45 min恢复灌注15 min,转为工作心模型30 min;心脏缺血预处理组(IPC):离体灌注10 min转为工作心15 min,反复2次缺血5min/再灌5min,停灌45min后恢复灌注15min,转为工作心模型30min;钙预处理组(CP):离体心脏灌注10 min、工作心15 min后,反复3次45 s无钙KH液灌流/5 min KH液灌流,停灌45 min后恢复灌注15 min,转为工作心模型30 min.以血流动力学指标、生化指标和心肌超微结构作为观察指标.结果 IPC与CP组比较,血流动力学指标、生化指标和心肌超微结构等方面均无明显差异;CP、IPC与I/R组比较,左心室功能恢复、三磷酸腺苷含量(ATP)(11.53±1.85、13.40±1.96比4.27±0.83,P＜0.01)、超氧化物歧化酶(SOD)活性(230.47±11.72、236.28±12.69比124.17±6.20,P＜0.01)、心肌线粒体Ca2+ATP酶活性(17.86±1.39、16.38±1.27比6.78 ±0.64,P＜0.01)和心肌线粒体合成ATP的能力(104.29±9.60、102.43±9.53比50.83±4.75,P＜0.01)明显增强,在心肌含水量(75.32±1.25、73.29±1.26比84.23±2.03,P＜0.01)、丙二醛含量(1.32±0.12、1.23±0.11比2.61±0.37,P＜0.01)、肌酸激酶(53.17±5.32、57.47±5.62比123.65±9.63,P＜0.01)和乳酸脱氢酶漏出率(32.16±3.23、34.48±3.43比85.43±5.93,P＜0.01)、心肌细胞内(2.54 ±0.32、2.17±0.22比4.48±0.74,P＜0.01)和心肌线粒体Ca2+含量(35.91±4.01、36.85±3.97比68.29±6.90,P＜0.01)明显减少;CP、IPC组心肌超微结构损伤较I/R组明显减轻.结论 钙预处理对未成熟心肌具有明显保护作用

Abstract：

Objective To investigate the protective effects of Ca2+ preconditioning on isolated immature myocardium.Methods Isolated working rabbit heart model was used,and 18 rabbits were randomly divided into 3 groups:ischemic/reperfusion (I/R) group receiving 45 min ischemia followed by 45 min reperfusion;myocardial ischemic preconditioning (IPC) group receiving 5 min ischemia and 5 min reperfusion 2 times before 45 min ischemia followed by 45 min reperfusion;Ca2 + preconditioning (CP)group receiving no-Ca2 + preconditioning before 45 min ischemia followed by 45 min reperfusion.The hemodynamics,biochemistry and myocardial ultrastructure were tested.Results The hemodynamics,biochemistry and myocardial ultrastructure had no significant diferrence between CP group and IPC group.As compared with I/R group,in CP and IPC groups,the left ventricular function recovery,adenosine triphosphate content (ATP) (11.53 ± 1.85,13.40 ± 1.96 vs 4.27 ±0.83,P＜0.01),superoxide dismutase (SOD)activity (230.47± 11.72,236.28 ± 12.69 vs 124.17 ±6.20,P＜0.01),Ca2+-ATPase activity of mitothondia ( 104.29 ± 9.60,102.43 ± 9.53 vs 50.83 ± 4.75,P＜0.01 ) and synthesized ATP activity of mitochondria ( 104.29 ±9.60,102.43 ±9.53 vs 50.83 ±4.75 ,P ＜0.01 ) were improved,and myocardial water content ( 75.32 ± 1.25,73.29 ± 1.26 vs 84.23 ± 2.03 ,P＜0.01 ),malondialdehyde content ( 1.32 ± 0.12,1.23 ± 0.11 vs 2.61 ± 0.37 ,P＜0.01 ),the dehydrogenase (32.16 ± 3.23,34.48 ± 3.43 vs 85.43 ± 5.93,P ＜0.01 ) and creatine kinase leakage (53.17 ±5.32,57.47±5.62 vs 123.65 ±9.63 ,P ＜0.01 ),myocardial cell Ca2+ content (2.54 ±0.32,2.17 ±0.22 vs 4.48 ±0.74 ,P ＜0.01 ) and mitochondrial Ca2+ content(35.91 ±4.01,36.85 ±3.97 vs 68.29 ±6.90,P ＜0.01 ) were reduced.The ultra.structure injury was milder in CP group and ICP group than in I/R group.Conclusion CP has signifcantly protective effects on immature myocardium.     

缺血预处理对大鼠胰腺移植缺血/再灌注损伤的保护机制

目的探讨缺血预处理对大鼠胰腺移植缺血/再灌注损伤的保护机制。方法建立SD大鼠糖尿病模型。取糖尿病大鼠24只,随机分为缺血/再灌注组(I/R组,n=6)和缺血预处理组(IPC组,n=18),IPC组又平均分为3个亚组:IPC1组(阻断脾血管5min,再灌注5min)、IPC2组[(阻断脾血管5min,再灌注5min)×2次]和IPC3组[(阻断脾血管5min,再灌注5min)×3次]。另取健康SD大鼠6只作为对照组,仅打开腹腔,不做胰腺移植;I/R组和IPC组大鼠均行同种胰腺移植。检测各组胰腺移植再灌注后2h后移植胰组织中超氧化物歧化酶(SOD)和髓过氧化物酶(MPO)的活性;用原位末端脱氧核糖核酸转移标记(TUNEL)法观察移植胰组织的细胞凋亡情况;WesternBlot法检测移植胰组织Bcl-2和Bax基因表达情况。结果IPC各组与I/R组相比较,前者移植胰组织中SOD活性明显升高,MPO活性明显降低,细胞凋亡指数明显降低,Bcl-2表达明显升高,Bax表达明显降低,各项检测指标比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。IPC各组中又以IPC2组的各项检测指标差异更为显著(P<0.05)。结论缺血预处理可以减少移植胰缺血/再灌注后的细胞凋亡,IPC2组的效果更为突出。其机制可能与缺血预处理减轻嗜中性粒细胞(PMNs)粘附与聚集、减少氧自由基、上调Bcl-2基因和下调Bax基因的表达有关。