Toosendanin increases free-Ca^2＋ concentration in NG108-15 cells via L-type Ca^2＋ channels

To examine if toosendanin (TSN) affects intracellular free-Ca2 concentration ([Ca2~]i) in neuroblastomaxglioma hybrid cells (NG108-15 cells). METHODS: The [Ca2~]i was determined by laser-scanning confocal microscopic imaging technique in which Fluo-3 was used as Ca2~ indicator. RESULTS: TSN induced an increase in resting[Ca2 ]i and in high K~-evoked Ca2~ transient in differentiated NG108-15 cells. The TSN-induced increase in [Ca2 ]i was dose-dependent and disappeared in CdC12-, nifedipine-containing or Ca2~-free solution, and appeared after washing out the Ca2~ channel blockers or adding Ca2~. CONCLUSION: TSN increased [Ca2~]i in differentiated NG108-15 cells. The [Ca2 ]i enhancement was due to the influx of extracellular Ca2 and related to L-type Ca2 channels.     

Toosendanin induced continuous increase in Ca^2＋ current in NG108-15 cells

Toosendanin (TSN), a triterpenoid derivative from Chinese traditional medicine, is a selective presynaptic blocker and an effective antibotulismic agent. Recently, its apoptosis-initiated effect and cytotoxicity in several human cancer cell lines were observed. Since a transient increase in intracellular Ca^2 concentration ([Ca^2 ]i) triggers and facilitates transmitter     

高效液相色谱法测定大鼠脑和NG108-15细胞内胍丁胺含量(英文)

目的　建立测定大鼠不同脑区和NG10 8 15细胞内源性胍丁胺含量的方法。方法　用高效液相色谱荧光检测法测定大鼠不同脑区 (包括皮层、海马、丘脑、纹状体和小脑 )及NG10 8 15细胞内胍丁胺含量。结果　正常大鼠不同脑区胍丁胺的含量范围为 0 .8～ 1.71μg·g- 1湿脑组织 ;NG10 8 15细胞内含量为 0 .0 4 4mg·g- 1蛋白。结论　此法适于常规测定动物脑组织及培养细胞内的胍丁胺含量。     

冈田酸诱导NG108-15细胞tau蛋白过度磷酸化过程中PTEN蛋白水平的变化

目的探讨冈田酸(OA)诱导NG108-15细胞tau蛋白过度磷酸化过程中PTEN蛋白水平的变化。方法20 nmol.L-1OA孵育NG108-15细胞不同时间(0,3,6,12,18,24,36,48 h),倒置显微镜观察细胞形态的变化,免疫印迹法观测各时间点Ser396位点磷酸化tau蛋白及PTEN蛋白水平的变化。结果NG108-15细胞随OA孵育时间的延长逐渐出现细胞胞体变圆,突起回缩,悬浮生长。细胞Ser396位点磷酸化tau蛋白水平于OA作用6 h后显著升高,18 h达高峰,之后逐渐下降,但48 h仍高于基础水平;PTEN蛋白水平于3 h开始上升,18h达高峰,之后逐渐下降,12、18、24 h 3个时间点PTEN蛋白水平显著高于基础水平,36、48 h时间点PTEN蛋白水平与基础值比较差异无显著性。结论OA诱导NG108-15细胞AD样发生中,PTEN蛋白水平可能升高。     

左旋硝基精氨酸甲酯和地佐环平和硝苯地平对吗啡致NG108-15细胞内钙浓度变化的影响

目的　探讨一氧化氮合酶抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯 (L NAME)、N 甲基 D 天冬氨酸 (NMDA)受体拮抗剂地佐环平 (MK 80 1)和钙通道阻滞剂硝苯地平对吗啡作用的影响是否与细胞 [Ca2 + ]i 有关。方法　体外培养NG10 8 15细胞 ,用荧光指示剂Fura2 AM负载 ,荧光分光光度计动态测定细胞 [Ca2 + ]i。结果　吗啡、MK 80 110 μmol·L- 1、硝苯地平 1,2和3μmol·L- 1急性处理能降低由NMDA刺激 (模拟兴奋性刺激 )所致的细胞 [Ca2 + ]i 升高。MK 80 110μmol·L- 1和硝苯地平 3μmol·L- 1与吗啡合用均能完全对抗NMDA的作用。吗啡处理细胞 4 8h后 ,再用纳洛酮处理 ,细胞 [Ca2 + ]i 可增加约 39% ,L NAME ,MK 80 1和硝苯地平与吗啡合用均能降低纳洛酮引起的细胞 [Ca2 + ]i 的升高。结论　MK 80 1,L NAME和硝苯地平对吗啡调节的作用均与胞内Ca2 + 浓度的变化密切相关     

含二苯乙烯苷大鼠血清对NG108-15痴呆模型细胞的影响

目的:观察含二苯乙烯苷(TSG)血清对NG108-15痴呆模型细胞的影响。方法:分别用TSG(0.3g·kg-1)、阳性对照药石杉碱甲(0.02mg·kg-1)等灌胃大鼠10d后分离相应的含药血清,以β淀粉样蛋白(Aβ)25-35诱导NG108-15细胞成为痴呆细胞后用相应的含药血清培养,观察NG108-15细胞的生长状态、存活率、突起率及突起平均长度,并与模型组比较。结果:无论在增殖相或分化相中,TSG组细胞生长状态均良好;在增殖相细胞中,TSG组、模型组存活率分别为89.1%、64.6%(P<0.01);在分化相细胞中,TSG组存活率为74.3%,细胞突起率为(50.83±6.66)%,突起平均长度为(21.52±5.19)μm,模型组分别为59.2%、(41.42±7.23)%、(15.59±4.54)μm(P<0.05或P<0.01),TSG组各指标与石杉碱甲组相近。结论:含TSG大鼠血清对Aβ25-35诱导的NG108-15痴呆模型细胞损伤具有保护作用。     

Ca~(2+)/钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ信息通路在DPDPE长时程作用的NG108-15细胞中的作用

目的　观察阿片类依赖时Ca2 + /钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ (CaMKⅡ )信息通路的变化 ,以及Ca2 + /CaMKⅡ信息通路与cAMP水平之间的关系。方法　以NG10 8 15细胞作为体外的细胞模型 ,分别采用竞争性蛋白结合法及放射免疫法、PDE法、γ 3 2 P参入法以及RT PCR测定cAMP水平、钙调蛋白 (CaM)活性、CaMKⅡ活性和mDOR的mRNA表达水平的变化。结果　DPDPE长时程作用NG10 8 15细胞 ,cAMP水平升高 ,形成阿片依赖 ;细胞CaM活性和CaMKⅡ活性也升高 ,该升高可被CaM拮抗剂W 7所抑制 ,而CaMKⅡ活性的升高可被CaMKⅡ特异性抑制剂KN 6 2所抑制。W 7或KN 6 2可抑制阿片依赖导致的细胞cAMP水平的升高。阿片依赖时 ,加入纳洛酮诱发戒断 ,CaM活性、CaMKⅡ活性进一步增高。而在阿片依赖时 ,δ阿片受体的mRNA表达水平无明显变化。结论　Ca2 + /钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ信息通路可通过调节cAMP水平参与阿片依赖的机制。     

二苯乙烯苷对冈田酸致NG108-15细胞Tau蛋白磷酸化的影响

目的:观察二苯乙烯苷(TSG)对冈田酸(OA)诱导致NG108-15细胞Tau蛋白磷酸化的影响,探讨该化合物抗阿尔茨海默病(AD)的可能机制。方法:以OA诱导NG108-15细胞复制AD细胞模型,采用MTT法检测经TSG低、中、高剂量(50、100、200μmol/L)预处理后的细胞存活率,采用吖啶橙/溴乙锭双染色法检测细胞凋亡情况,采用Western blotting法和逆转录-聚合酶链反应法检测细胞周期蛋白依赖性激酶5(CDK5)、糖原合成酶激酶3β(GSK3β)蛋白及其mRNA以及Tau、磷酸化Tau(p-Tau)蛋白的表达情况,采用免疫荧光法检测CDK5、GSK3β、Tau蛋白的分布情况。结果:正常对照组细胞形态正常,未见或少见CDK5、GSK3β、Tau蛋白分布。模型组可见固缩或圆珠状的早期凋亡细胞,且CDK5、GSK3β、Tau蛋白分布明显增多,其细胞存活率显著降低,CDK5、GSK3β蛋白及其mRNA的相对表达量以及p-Tau与Tau相对表达量的比值(p-Tau/Tau)均显著升高(P<0.05或P<0.01)。经TSG预处理后,各给药组早期凋亡细胞和CDK5、GSK3β、Tau蛋白分布均有所减少,其细胞存活率均显著升高,中、高剂量组细胞CDK5蛋白、p-Tau/Tau以及各剂量组细胞CDK5 m RNA、GSK3β蛋白及其mRNA的相对表达量均显著降低(P<0.05)。结论:TSG对AD模型细胞具有一定的保护作用,这种作用与其提高细胞存活率,下调磷酸激酶CDK5、GSK3β的蛋白表达和基因转录水平,抑制Tau蛋白的磷酸化有关。     

不同的阿片受体激动剂对环腺苷—磷酸第二信使系统的作用(英文)

目的:研究吗啡(Mor)、美沙酮(Met)、丁丙诺啡(Bup)、二氢埃托啡(DHE)和埃托啡(Eto)躯体依赖性差别的机制,方法:用NG108-15细胞模型,观察不同的阿片受体激动剂对cAMP第二信使系统的作用,结果:细胞分别暴露于Mor,Met,Bup各10 μmol·L~(-1)和DHE,Eto各10 nmol·L~(-1),24 h或72 h后,用纳洛酮10 μmol·L_(-1)催促,Mor组cAMP水平明显反跳性升高,其他各组cAMP反跳水平虽有一定程度的升高,但幅度较Mor组低得多.用Met,Bup,DHE和Eto替代处理Mor预处理48 h的NG108-15细胞,可使Nal催促的cAMP反跳水平明显降低,结论:Mor,Met,Bup,DHE和Eto对cAMP第二信使系统的作用明显不同,这与它们的躯体依赖性有关。     

(Sp)-8-氯腺苷-3',5'-环磷酸辛酯对人白血病HL-60细胞的诱导分化作用

(Sp)-8-氯腺苷-3',5'-环磷酸辛酯(Sp-octyl8-chloroadenosine3',5'-cyclophosphate,OCC)对人白血病HL-60细胞有生长抑制和分化诱导作用,该作用与OCC浓度和处理时间呈正相关,为不可逆性。流式细胞光度术发现,OCC阻断HL-60细胞周期于G1期。参入实验证实,OCC对HL-60细胞DNA合成有显著抑制作用,但不影响RNA和蛋白质合成。OCC能直接激活HL-60细胞浆中提取的蛋白激酶A(PKA),并抑制它与cAMP的结合。经OCC处理的HL-60细胞浆中PKA活性明显升高,说明OCC能与cAMP竞争PKA的结合并激活PKA。     

咖啡因对LY294002诱导的小脑颗粒神经元凋亡的拮抗作用(英文)

目的:研究咖啡因对磷酸肌醇-3-激酶抑制剂诱导的小脑颗粒神经元凋亡的作用及机制。方法:神经元体外培养,凝胶电泳,SAPK/JNK分析盒测定JNK活性。结果:LY294002浓度依赖性地触发小脑颗粒神经元凋亡,但咖啡因具有浓度依赖性的保护作用。此作用不受ryanodine-敏感性钙释放阻断剂、L-型钙通道阻断剂和NMDA受体阻断剂的影响。而且,RP-cAMP,H89和KN62均不能抑制咖啡因的保护作用。c-Jun的磷酸化是LY294002诱导神经原凋亡所必需,咖啡因可直接抑制JNK的活性,降低神经元内磷酸化c-Jun的含量。结论:咖啡因通过直接抑制JNK活性而抑制小脑颗粒神经元的凋亡。     

多巴胺和谷氨酸在纹状体脑片的相互作用:受体机制介导的CCDPKⅡ,PKA和LDH活性变化(英文)

目的:研究DA和Glu及其受体激动剂/拮抗剂对大鼠纹状体脑片Ca~(2 )/CaM依赖性蛋白激酶Ⅱ(CCDPKⅡ)、cAMP依赖性蛋白激酶(PKA)活性及乳酸脱氢酶(LDH)释放的影响,以探讨纹状体DA和Glu两个神经递质系统的相互作用。方法:用~(32)P掺入法测定大鼠纹状体脑片CCDPKⅡ和PKA活性,用比色法测定LDH的释放。结果:(1)NMDA受体拮抗剂MK-801能拮抗DA、D_1激动剂SKF 38393和D_2激动剂LY 171555对CCDPKⅡ活性的抑制作用。D_1拮抗剂SCH 23390和D_2拮抗剂spiperone均能拮抗Glu诱导的CCDPKⅡ活性降低。(2)DA和SKF 38393显著增加纹状体脑片PKA活性,MK-801可降低这种作用。(3)DA和Glu增加LDH的释放并与浓度成正比。MK-801拮抗DA诱导的LDH释放增加;spiperone能显著减少Glu诱导的纹状体神经元LDH释放。结论:DA和Glu的相互作用对调节纹状体神经元CCDPKⅡ和PKA活性及细胞功能是非常重要的。