三氧化二砷和肼苯哒嗪体外诱导雌激素受体α表达强弱的比较

目的 本文拟比较三氧化二砷和肼苯哒嗪两种去甲基化药物在最佳有效浓度时,诱导MDA-MB-231细胞株雌激素受体重新表达作用的差异.方法 以雌激素受体高甲基化失活的人乳腺细胞系MDA-MB-231细胞系为研究对象,经2.0 μmol/L As2O3和10μmol/L肼苯哒嗪处理后,采用免疫组织化学技术检测ER-α受体的表达.结果 经2.0 μmol/L As2O3与10μmol/L肼苯哒嗪处理的MDA-MB-231细胞ER-α受体的表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 两种去甲基化药物在各自最佳去甲基化作用浓度时,对于高甲基化失活的雌激素受体ER-α基因去甲基化作用差异无统计学意义.     

CDH1基因启动子甲基化与宫颈癌临床病理特征的关系

目的:检测Cadlherin 1(CDH1)基因启动子区CpG岛甲基化状态,并分析CDH1基因甲基化率与临床病理特征的关系.方法:运用甲基化特异性PCR(MSP)检测95例宫颈癌标本及对照组40例正常宫颈组织的CDH1基因启动子甲基化状态,荧光定量PCR检测高危型HPV DNA.分析CDH1基因甲基化状态与不同临床病理特征之间的联系.结果:宫颈癌组CDH1基因甲基化率明显高于正常对照组(分别为49.5%,12.5%,P<0.01).宫颈癌CDH1基因甲基化检测和高危型HPV DNA检测结果有较好的一致性(Kappa=0.332,P<0.001).鳞癌组甲基化率较腺癌组高(分别为66.2%,7.4%,P<0.01).CDH1甲基化阳性率随肿块增大及FIGO分期升高而增高(P<0.05).不同年龄、肿瘤浸润深度及有无淋巴结转移和CDH1基因甲基化未见明显关系(P>0.05).结论:宫颈癌CDH1基因启动子甲基化与高危型HPV具有良好的一致性.CDH1基因启动子高甲基化为频发事件,并与不同宫颈癌病理类型相关,可作为宫颈癌诊断及分型的生物学标志物.     

CDH11甲基化在宫颈癌中的表达及临床意义

目的:探讨钙黏附蛋白11（cadherin-11,CDH11)甲基化在宫颈癌中的表达及临床意义。方法:应用甲基化特异性聚合酶链反应检测 CDH11 基因在 3株宫颈癌细胞系、1 株人表皮永生化细胞株、30 例宫颈癌组织、17 例正常宫颈组织中的甲基化状态。统计患者临床资料,分析甲基化同临床病理特征之间的联系。结果:CDH11 在3 株宫颈癌细胞系中,均出现不同程度甲基化;在1 株人表皮永生化细胞株中未检测到甲基化。CDH11 在宫颈癌组织中的甲基化率为 56.7%（17/30）,显著高于正常宫颈组织23.5%（4/17）,差异具有统计学意义（P＜0.05）。CDH11 基因甲基化在不同分期的宫颈癌组织中检出率无统计学意义（P＞0.05）;在不同年龄段、是否有淋巴结转移以及分化级别上,CDH11 基因的甲基化率差异无统计学意义（P＞0.05）。结论:宫颈癌组织中CDH11 基因甲基化水平高于正常宫颈组织,差异有统计学意义。CDH11 基因甲基化可能是宫颈癌独特的基因甲基化谱成员之一,可以成为宫颈癌早期诊断的新的标志物。     

纤维连接蛋白—paxillin通路对人胃癌细胞系AGS体外侵袭力的影响

目的 研究纤维连接蛋白激活paxillin后对人胃癌细胞侵袭力的影响,探讨抑制paxillin影响胃癌细胞侵袭力的机制。方法 以递增浓度的纤维连接蛋白刺激人胃癌细胞株AGS,以免疫沉淀和蛋白质印迹法检测胃癌细胞内paxillin第118位酪氨酸（tyr-118）磷酸化的变化,同时以改良Boyden小室法检测细胞侵袭力变化。设计合成paxillin siRNA并进行效果比较,观察siRNA抑制纤维连接蛋白促胃癌细胞内paxillin tyr-118磷酸化及细胞侵袭力的改变。结果 纤维连接蛋白能促进AGS细胞 paxillin tyr-118磷酸化的增强和胃癌细胞侵袭力（P<0.05）,并在一定范围内具有剂量依赖性。siRNA干预后,胃癌细胞内paxillin tyr-118磷酸化及细胞侵袭力均有显著降低（P<0.05）。结论 纤维连接蛋白可有效增强胃癌细胞的侵袭力,paxillin tyr-118磷酸化在此过程中起关键作用,使用paxillin siRNA可以抑制纤维连接蛋白促人胃癌细胞侵袭的作用。     

宫颈癌APC基因启动子甲基化与其临床病理特征的关系

背景与目的：腺瘤性结肠息肉病（adenomatous polyposis coli,APC@基因是Wnt信号传导通路中重要的抑癌基因,其启动子区CpG岛高甲基化引起的基因失活可导致Wnt信号传导通路异常,与多种肿瘤有关。APC基因启动子甲基化与宫颈癌的关系研究较少。本研究检测宫颈癌标本中APC基因启动子甲基化状态,并分析其与临床病理特征及高危型人乳头瘤病毒（HPV@感染的关系,探讨APC基因启动子甲基化与宫颈癌的关系。方法：运用甲基化特异性PCR（MSP@检测95例宫颈癌标本及对照组20例正常宫颈组织的APC基因启动子甲基化状态,并分析APC基因甲基化状态与不同临床病理特征及高危型HPV感染之间的联系。结果：宫颈癌组APC基因甲基化率明显高于正常对照组（分别为56.8%,10%,P〈0.01@。宫颈癌APC基因甲基化检测和高危型HPV DNA检测结果有较好的一致性（Kappa=0.348,P〈0.001@。腺癌组甲基化率较鳞癌组高（分别为74.1%,50.0%,P〈0.05@。APC甲基化阳性率随肿块增大及淋巴结转移而增高（P〈0.05@。不同年龄、FIGO临床分期、WHO病理分级、肿瘤侵犯深度和APC基因甲基化未见明显关系（P〉0.05@。结论：宫颈癌APC基因启动子甲基化与高危型HPV具有良好的一致性。APC基因启动子高甲基化为频发事件,并与不同宫颈癌病理类型相关,可作为宫颈癌诊断及分型的生物学标志物。     

辣椒素联合DDP对宫颈癌HeLa229细胞增殖及侵袭力的影响

目的 探讨辣椒素联合DDP对宫颈癌HeLa229细胞增殖、耐药和侵袭力的影响.方法 将HeLa229细胞分为对照组、辣椒素组、DDP组和联合用药组,MTT法检测72 h后细胞的增殖情况及辣椒紊联合应用不同浓度DDP对宫颈癌细胞增殖的影响.Boyden chamber体外侵袭实验检测辣椒素及联合DDP后细胞体外侵袭力的变化.结果 MTT实验表明,辣椒素与DDP联合应用可明显抑制HeLa229细胞的增殖.与单独使用辣椒素或DDP组相比,细胞存活率显著降低;对照组和辣椒素组细胞的存活率均随着DDP浓度的增加而下降,但在同一浓度,辣椒素与DDP联合应用可明显提高HeLa229细胞对化疗药物的敏感性.体外侵袭实验结果表明,与单独使用辣椒素或DDP组相比,辣椒素与DDP联合应用使穿越Matrigel胶的细胞数明显减少.结论 辣椒素与DDP联合应用,可以抑制宫颈癌细胞的增殖和体外侵袭力,增强宫颈癌细胞对化疗药物的敏感性,因此辣椒素有望成为宫颈癌治疗中的辅助用药.     

人宫颈癌组织CDH1和PAX1基因甲基化研究

目的:检测上皮型钙黏附素(E-cadherin,CDH1)基因和配对盒基因家族PAX1基因在宫颈癌组织及人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)感染的正常宫颈组织、宫颈炎组织、宫颈上皮内瘤样病变(cervical intraepithelial neoplasia, CIN)Ⅰ组织、CIN Ⅱ～Ⅲ组织和宫颈癌组织中的甲基化情况,评估是否可将其作为临床诊断的分子标志物.方法:应用甲基化特异性聚合酶链反应法(methylation specific PCR, MSP)对HPV感染的正常宫颈组织、宫颈炎组织、CINⅠ组织、CIN Ⅱ～Ⅲ组织以及宫颈癌组织中的CDH1和PAX1基因进行甲基化检测.结果:HPV感染的正常宫颈组织、宫颈炎组织和CINⅠ组织中未检出CDH1基因甲基化;CINⅡ～Ⅲ组织中检出CDH1基因甲基化2例(13.3%),宫颈癌组织中检出CDH1基因甲基化9例(22.5%),与HPV感染的正常宫颈组织比较差异均有统计学意义(P＜0.05).HPV感染的正常宫颈组织和宫颈炎组织中未检出PAX1基因甲基化,CINⅠ、CINⅡ～Ⅲ和宫颈癌组织的PAX1基因甲基化阳性率分别为13.3%、46.7%和87.5%,CINⅡ～Ⅲ组织与CINⅠ和宫颈癌组织比较差异均有统计学意义(P＜0.05).CINⅠ组织、CINⅡ～Ⅲ组织和宫颈癌组织的CDH1和PAX1基因甲基化总阳性率分别为13.3%、60.0%和97.5%.结论:CDH1和PAX1基因甲基化,尤其是PAX1基因甲基化对于宫颈癌临床诊断具有潜在价值.     

甲基化修饰对人宫颈癌细胞系中FHIT基因的调控

 目的 探讨FHIT在子宫颈癌发生中的作用及FHIT基因失活的机制。方法 培养宫颈癌细胞C-33A、HeLa、CasKi、SiHa及人脐静脉血管内皮细胞ECV-304,进行5-aza-dC干预前后FHIT基因在5株细胞中的甲基化分析,并通过逆转录聚合酶链式反应和免疫荧光化学染色方法检测5-aza-dC干预前后FHIT基因在5株细胞中的表达。结果 4种宫颈癌细胞均存在FHIT基因的甲基化,正常对照细胞ECV-304在5-aza-dC干预前后均未见明显FHIT基因扩增产物。4株宫颈癌细胞在5-aza-dC化学干预前均未见明显FHIT的荧光着色,而干预后的细胞胞浆中可见FHIT的表达强度明显增强,尤其在10^-6 M及2×10^-6 M干预浓度下的表达最强（P〈0.05）;干预48h、72h后FHIT的表达与干预24h的类似。ECV-304细胞在5-aza-dC化学干预前后的胞浆均可见到FHIT的阳性表达,其表达强度之间无明显差异（P〉0.05）。结论 FHIT基因的甲基化在宫颈癌中是频发事件,甲基化可能是FHIT基因沉默及宫颈癌发生的重要机制。     

RASSF1A基因在宫颈癌中的甲基化检测及

目的　探讨宫颈癌组织中RASSF1A(Ras association domain family1A)抑癌基因启动子甲基化状态及临床意义以及与高危型HPVs感染的关系。方法　甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)方法检测39例宫颈鳞癌及12例正常宫颈组织中RASSF1A基因甲基化状态。聚合酶链反应(PCR)方法检测宫颈癌组织中HPV16、18型的感染状况。结果　39 例宫颈癌组织中有11 例可见异常甲基化(28.2%);12例正常宫颈组织均未见甲基化;宫颈癌组HPV感染率为69.2%;RASSF1A基因甲基化在淋巴结转移组(75.0%)高于淋巴结未转移组(9.1 %),P<0.05。RASSF1A甲基化在患者年龄、肿瘤大小、病理组织学分级、临床分期和HPVs感染组之间差异无统计学意义, P>0.05。结论　RASSF1A基因启动子区5′CpG岛的高甲基化是导致RASSF1A基因失活的重要机制,可能参与宫颈癌的发生过程。     

槲皮素对人乳腺癌细胞MDA-MB-435S增殖及侵袭力的影响

 目的 探讨槲皮素对人乳腺癌细胞MDA-MB-435S 增殖及侵袭能力的影响。 方法 人乳腺癌细胞MDA-MB-435S以12.5、25、50、100、200μM 终浓度的槲皮素处理后,台盼蓝拒染法检测细胞的增殖状况、流式细胞术法检测细胞的凋亡率、Boyden小室法检测细胞的侵袭能力。 结果 人乳腺癌细胞MDA-M-435S经槲皮素处理后,其体外增殖及侵袭能力明显下降的同时凋亡率明显上升,且与药物的剂量呈正相关,当槲皮素终浓度达到200μM时,MDA-MB-435S细胞的生长及侵袭能力几乎完全受到抑制。 结论 槲皮素在体外剂量依赖性的抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-435S的增殖及侵袭能力并能诱导其凋亡,为槲皮素用于乳腺癌的预防和治疗提供了部分依据。     

miR-198靶向MAPK1调控宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡和侵袭

目的 探究miR-198对宫颈癌细胞增殖、凋亡和侵袭的作用及其机制。方法 用miR-198 mimic转染HeLa细胞,qRT-PCR检测miR-198和丝裂原活化蛋白激酶1 （Mitogen-activated protein kinase1, MAPK1）的mRNA水平;荧光素酶实验检测miR-198和MAPK1的靶向关系;用pcDNA3.0-MAPK1（pc-MAPK1）和miR-198 mimic转染细胞,CCK-8检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell法检测细胞侵袭能力,Western blot检测蛋白的表达。结果 miR-198 mimic转染细胞后,miR-198表达水平明显升高,MAPK1 mRNA表达水平明显降低;荧光素酶报告实验表明miR-198序列上存在MAPK1结合位点;miR-198过表达能显著降低宫颈癌细胞增殖倍数、诱导细胞凋亡,同时还能明显降低HeLa细胞侵袭能力;此外,miR-198 mimic能显著抑制MAPK1下游基因核糖体S6激酶2（Ribosomal S6 kinase 2, RSK2）、c-Myc和c-fos的蛋白表达;pc-MAPK1能明显减弱miR-198 mimic对HeLa细胞增殖、凋亡、侵袭及对MAPK1下游蛋白表达的调控作用。结论 miR-198过表达能通过靶向MAPK1抑制宫颈癌细胞的增殖和侵袭能力并诱导细胞凋亡。     

肿瘤相关巨噬细胞促进宫颈癌侵袭转移的机制研究

 目的 研究肿瘤相关巨噬细胞（tumor-associated macrophages, TAMs）对宫颈癌侵袭转移的影响及分子机制。方法 免疫组织化学法检测宫颈病变组织TAMs的浸润情况。对人单核巨噬细胞系THP1进行体外诱导分化，使其转化为M2型TAMs。取TAMs上清液刺激宫颈癌细胞SiHa和C33a。划痕法、Transwell法分别检测TAMs对宫颈癌细胞系迁移和侵袭能力的影响。Western blot检测刺激后宫颈癌细胞上皮间质转化进程及MMP-9的表达。结果 TAMs浸润数目与宫颈病变进展呈正相关。TAMs上清液刺激后，SiHa和C33a细胞出现间质样改变，而且迁移和侵袭能力显著增强（均P<0.5）。TAMs可下调E-Cadherin的表达，上调N-Cadherin、Vimentin及MMP-9的表达。结论 TAMs浸润与宫颈上皮恶性转化和进展密切相关，TAMs可能通过上调MMP-9的表达促进宫颈癌细胞侵袭转移。     

Beclin1 Overexpression Inhibitis Proliferation,Invasion and Migration of CaSki Cervical Cancer Cells

The influence of the autophagy-related gene Beclin1 on proliferation, invasion and metastasis of the cervicalcancer CaSki cells and its possible mechanism in vitro were here targeted. After the overexpression vectorpcDNA3.1-Beclin1 and RNA interference vector pSUPER-Beclin1 were transfected into CaSki cells in vitro, stableexpression cell lines demonstration Beclin1 expression was upregulated, and VEGF and MMP-9 expression weredecreased, leading to cell arrest in the G0/G1 phase of the cell cycle. MTT assays further revealed proliferationof cells was significantly inhibited in Beclin1-overexpressing transfectant cells, with invasion and metastasisalso being inhibited in Transwell chamber assays. The present results suggest that Beclin1 inhibits invasionand metastasis of cervical cancer CaSki cells in vitro. Mechanisms probably involve Beclin1 inhibition of cellproliferation, and decreased expression of VEGF and MMP-9 proteins.     

(-)-Epigallocatechin-3-Gallate Induces Apoptosis and Inhibits Invasion and Migration of Human Cervical Cancer Cells

Invasion and metastasis are the major causes of cancer-related death. Pharmacological or therapeuticinterventions such as chemoprevention of the progression stages of neoplastic development could result insubstantial reduction in the incidence of cancer mortality. (-)-Epigallocatechin-3-gallate (EGCG), a promisingchemopreventive agent, has attracted extensive interest for cancer therapy utilizing its antioxidant, antiproliferativeand inhibitory effects on angiogenesis and tumor cell invasion. In this study, we assessed theinfluence of EGCG on the proliferative potential of HeLa cells by cell viability assay and authenticated theresults by nuclear morphological examination, DNA laddering assay and cell cycle analysis. Further we analyzedthe anti-invasive properties of EGCG by wound migration assay and gene expression of MMP-9 and TIMP-1in HeLa cells. Our results indicated that EGCG induced growth inhibition of HeLa cells in a dose- and timedependentmanner. It was observed that cell death mediated by EGCG was through apoptosis. Interestingly,EGCG effectively inhibited invasion and migration of HeLa cells and modulated the expression of related genes(MMP-9 and TIMP-1) . These results indicate that EGCG may effectively suppress promotion and progressionstages of cervical cancer development.     

LPS对宫颈癌细胞HMGB1主动释放及侵袭转移能力的影响

目的探讨脂多糖（LPS）对宫颈癌细胞HMGB1主动释放及侵袭迁移能力的影响。 方法 高糖培养液培养三种细胞系：宫颈癌HeLa细胞系、宫颈癌C33A细胞系和正常宫颈上皮HUCEC细胞系,加LPS前后分别做Western blot检测HMGB1在宫颈癌细胞系（HeLa 和C33A）及正常宫颈上皮HUCEC细胞系细胞内外的表达情况。LPS刺激前后行小室细胞侵袭实验分析检测宫颈癌细胞株的侵袭迁移能力。 结果 100 ng/ml LPS刺激后,三种细胞内HMGB1总蛋白较刺激前均减少,而上清液HMGB1表达增加（P＜0.05）;HeLa及C33A宫颈癌细胞侵袭迁移能力明显增强（P＜0.05）。 结论LPS能刺激宫颈癌细胞HMGB1主动释放从而增强其侵袭迁移能力。     

siRNA干扰Mig-7基因对人胃癌MKN45细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）抑制迁移诱导基因7（Mig-7）基因表达,对人胃癌MKN45细胞侵袭和迁移的影响及可能机制。方法 化学合成靶向Mig-7基因的siRNA,脂质体法转染MKN45细胞,分别用real-time PCR和Western blot法验证其沉默效率;MTT法检测细胞的增殖情况;Transwell小室方法检测细胞侵袭及迁移能力;Western blot法检测基质金属蛋白酶2（MMP-2）和MMP-9蛋白表达。结果 化学合成siRNA转染胃癌MKN45细胞后,Mig-7的mRNA 水平下降（80±2.91）%,蛋白表达水平下降（89.1±2.67）%;沉默Mig-7基因后,各组细胞体外生长速度差异无统计学意义（P>0.05）,但侵袭和迁移能力下降,MMP-2蛋白表达水平下降,与阴性转染组和对照组相比差异有统计学意义（P=0.000）。而各组MMP-9蛋白表达水平差异无统计学意义（P>0.05）。结论 下调人胃癌MKN45细胞中Mig-7的表达,可能通过下调MMP-2蛋白表达从而抑制细胞的侵袭和迁移能力。     

马齿苋脑苷A对人宫颈癌HeLa细胞凋亡和侵袭转移的影响

目的 观察马齿苋脑苷脂类新化合物马齿苋脑苷A（portulacerebroside A,PCA）对人宫颈癌HeLa细胞凋亡和侵袭转移的影响。方法 不同浓度PCA作用HeLa细胞不同时间后,采用MTT法观察药物对细胞活力的影响,流式细胞仪检测凋亡率,划痕试验观察细胞迁移百分率,基质胶法测定细胞黏附百分率,Transwell试验检测侵袭细胞数。结果 PCA显著抑制HeLa细胞活力,增加细胞凋亡率,降低细胞迁移百分率和黏附百分率,减少侵袭细胞数。结论 PCA显著诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡和抑制其侵袭迁移,提示其潜在抗宫颈癌作用。     

Effect of miR27a on Proliferation and Invasion in Colonic Cancer Cells

The aim of this study was to detect the expression of miR196a, miR146a, miR27a and miR200a in patientswith colon cancer, and investigate the effect of miR27a expression on proliferation and invasion in colonic cancercells. RT-PCR was employed to detect the expression levels in colon cancers. Then, colon cancer cells werecultured and transfected with 100 nM of miR27a mimics (80 nmol/L) or 80 nM miR27a inhibitors (80 nmol/L) in24-well plates. Proliferation and invasion of colonic cancer cells were then determined by CCK-8 and Transwellassays, respectively. Our data showed miR27a to be high-expressed in patients with colon cancer. In addition,proliferation and invasion in the miR27a mimic group were significantly higher than in the control group andnegative group (P<0.05), while, proliferation and invasion in the miR27a inhibitor group were obviously lowered(P<0.05). In conclusion, high expression of miR27a may play an important role in enhancing proliferation andinvasion of colon cancer cells.     

塞来昔布对宫颈癌细胞的化疗增敏作用

目的探讨特异性环氧化酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布对顺铂诱导宫颈癌Hela细胞增殖与凋亡的作用及机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）,测定塞来昔布对顺铂诱导Hela细胞增殖活性的作用;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot检测Hela细胞中Bcl-2、Bax蛋白的表达情况。结果 5、10μmol/L的塞来昔布分别与顺铂联合应用,可增强顺铂对Hela细胞增殖抑制作用。塞来昔布（5μmol/L）能促进顺铂诱导Hela细胞的凋亡。塞来昔布作用于Hela细胞后,Bcl-2蛋白表达水平下调、Bax蛋白表达水平上调呈浓度依赖关系。结论塞来昔布能促进顺铂对Hela细胞增殖抑制和诱导凋亡作用,起化疗增敏作用,可能与其下调Bcl-2蛋白表达水平、上调Bax蛋白表达水平有关。     

人次级淋巴组织趋化因子对宫颈癌Siha细胞侵袭能力的影响

目的 研究人次级淋巴组织趋化因子(SLC)对Siha细胞侵袭能力的影响。 方法 从人脾脏cDNA扩增出SLC,构建真核表达载体,转染宫颈癌细胞株Siha。Transwell检测肿瘤细胞侵袭能力,利用NF-κB特异性启动子荧光素酶报告系统检测肿瘤细胞内NF-κB的活化。 结果 经PCR、酶切、测序及ELISA证实,SLC真核表达载体构建表达成功。SLC转染 Siha细胞,肿瘤侵袭能力增强约(2.34±0.14)倍,且肿瘤细胞内NF-κB的活化增强约(3.98±0.194)倍。 结论 SLC作为趋化因子,其作用已不局限于趋化作用,还可诱导肿瘤细胞NF-κB的活化,促进肿瘤细胞侵袭,有着多重作用。