氡诱发小鼠肺损伤与P53和Bcl-2、Bax蛋白表达的研究

目的 建立氡染毒小鼠肺损伤模型,观察不同剂量组小鼠肺组织损伤情况,分析氡对P53、Bcl-2、Bax在肺组织中表达的影响。方法 建立氡染毒小鼠模型,使染毒累积剂量分别达到30工作水平月(WLM)和60WLM;采用TUNEL法检测小鼠肺组织细胞凋亡程度;采用免疫组化SP法及Westernblot法,检测各组肺组织P53、Bcl-2、Bax蛋白表达情况。结果 与正常对照组相比,氡染毒30和60WLM小鼠肺细胞凋亡指数均明显增加(t=18.11、-10.30,P<0.05);氡染毒30WLM组P53蛋白明显增加(t=-11.08,P<0.05);60WLM组P53蛋白和Bax蛋白表达明显增加(t=-7.00、-2.52,P<0.05),Bcl-2蛋白表达明显下降(t=4.36,P<0.05);氡染毒30和60WLM与对照组相比,Bcl-2、Bax比值均明显下降(t=2.78、4.07,P<0.05)。结论 氡染毒可使小鼠肺损伤,出现肺细胞凋亡,P53、Bcl-2、Bax途径可能参与了肺细胞的凋亡调节。     

单细胞凝胶电泳用于放射工作者DNA损伤评价的研究

目的 评价不同级别医院放射工作人员的DNA损伤情况,探讨不同工种、工龄与DNA损伤程度之间的关系。方法 用碱性单细胞凝胶电泳技术检测放射组和对照组外周血淋巴细胞的DNA单链断裂水平。CASP软件分析彗星图像,主要观察彗星尾部DNA百分含量(TDNA%)、彗星尾长(TL)、尾矩(TM)和Olive尾矩(OTM)等指标。 结果 放射组的TDNA%,TL、TM、OTM明显高于对照组(F=3.93, P<0.01),不同工种、工龄间均有统计学差异(F=1.83, P<0.05),不同级别医院之间放射工作者上述指标也差异存在统计学意义(F=1.91,P<0.05)。结论 所观察医院的放射工作者外周血淋巴细胞DNA均存在不同程度的损伤,高级别医院略好于低级别医院,而且DNA损伤程度与放射工龄和工种有一定的相关性。     

氡及其子体暴露小鼠肺组织p53基因表达及突变研究

目的 观察氡及其子体暴露对小鼠肺组织P53蛋白表达及基因突变的影响。方法 建立氡染毒小鼠模型,使染毒累积剂量分别为30和60工作水平月(WLM);采用TUNEL法,检测小鼠肺组织细胞凋亡程度;采用免疫组化S-P法、Western-blot法及实时荧光定量PCR法,检测各组肺组织P53蛋白表达情况;采用PCR-SSCP法检测p53基因的突变情况。结果 与正常对照组相比,氡染毒30和60 WLM小鼠肺细胞凋亡指数均明显增加(t=18.11、-10.30,P<0.05);氡染毒30和60 WLM组P53蛋白亦明显增加(t=-11.08、-7.00,P<0.05)。但整个实验未观察到p53基因突变。结论 p53与氡染毒诱发小鼠肺损伤密切相关。     

抗放利对电离辐射诱导人外周血淋巴细胞遗传损伤的保护作用

目的 探讨2,2-二甲基四氢噻唑盐酸盐（抗放利）对辐射诱导人外周血淋巴细胞遗传损伤的防护作用。方法 采集健康人外周血,分为健康对照组、单纯照射组和抗放利防护组。照射剂量为2 Gy。抗放利防护组分0.2、0.5、1、2 mmol/L 4个浓度组,于照前30 min给药。通过染色体畸变分析、微核及单细胞凝胶电泳检测,观察抗放利对辐射致人外周血淋巴细胞遗传损伤的防护作用。结果 各浓度抗放利防护组与单纯照射组比较,染色体畸变率（t=5.34~25.48,P<0.05）、微核细胞率（t=5.18~29.44,P<0.05）与微核率（t=4.67~12.04,P<0.05）、彗星细胞尾长（t=16.18~19.64,P<0.05）、 尾矩（t=11.79~13.01,P<0.05）和Olive尾矩（t=12.44~14.88,P<0.05）、 尾部DNA含量（t=12.05~17.30,P<0.05）均明显降低。两个高浓度防护组（1、2 mmol/L）分别与两个低浓度防护组（0.2、0.5 mmol/L）比较,Olive尾矩明显降低（t=5.67~16.56,P<0.05）。2 mmol/L防护组与其余各防护组相比,微核率和微核细胞率明显降低（t=4.23~5.57,P<0.05）。结论 抗放利对辐射诱导人外周血淋巴细胞遗传损伤具有防护作用。     

60Co γ射线诱发小鼠外周血网织红细胞微核率的研究

目的 通过观察不同剂量⁶⁰Co γ射线照射后小鼠外周血网织红细胞微核率的变化,为使外周血网织红细胞微核成为探索快速高通量的生物剂量计提供科学依据。方法 ⁶⁰Co γ射线照射ICR小鼠,按不同照射剂量分为0、0.5、1、2、4和8 Gy组,眼球取血,流式细胞术(FCM)检测和显微镜观察小鼠外周血网织红细胞微核率的变化。结果 流式细胞术检测网织红细胞微核率随剂量增加逐渐增加,2 Gy达峰值,之后随剂量的增加而减少;显微镜观察的网织红细胞微核率变化趋势与流式细胞术检测结果基本一致。照射剂量在0~2 Gy剂量范围内,小鼠的外周血网织红细胞微核率的剂量-效应关系满足直线模型(R²=0.9063),并且2 Gy照射组与0 Gy组相比差异有统计学意义(t=-2.856,P<0.05)。结论 流式细胞术检测外周血网织红细胞微核率,在一定剂量范围内可成为早期快速、高通量的辐射损伤生物剂量计。     

曲酸的抗氧化作用与辐射损伤防护效应的关系

目的 探究曲酸的抗氧化作用与辐射防护效应的关系。方法 将C57小鼠按随机数字表法随机分为健康对照组、模型照射组、曲酸低浓度组及高浓度组。健康对照组不做任何处理,其他组在照前27 h分别皮下单次给予无菌蒸馏水、75及300 mg/kg的曲酸,经4 Gy ⁶⁰Co γ射线单次全身照射,并于照后第3、4、7天处死小鼠,分别测定小鼠血清及肝肾组织中的总超氧化物歧化酶（T-SOD）活力、丙二醛（MDA）含量、股骨骨髓细胞DNA含量及骨髓细胞微核率,并体外测定曲酸对DPPH·自由基的清除作用。结果 曲酸300 mg/kg给药组小鼠血清及肝肾组织中总SOD活力、骨髓细胞DNA含量明显高于模型照射组（F=22.63、7.29、67.58、57.32,P<0.05）,而其血清及肝肾组织中MDA含量、骨髓细胞微核率明显低于模型照射组（F=26.22、27.06、4.51、14.28,P<0.05）,体外检测显示曲酸对DPPH·自由基具有明显的清除作用,曲酸、丁基羟基甲苯（BHT）清除DPPH·自由基的IC₅₀值分别为（4.55±0.26）和（1.83±0.10）mg/ml,其浓度同为20 mg/ml时DPPH·自由基清除率分别为（82.38±3.51）%和（96.41±0.45）%。结论 曲酸可清除体内自由基,保护小鼠遗传物质免受射线损伤,从而实现其抗辐射作用。     

不同剂量水平椎体IMRT对比格犬椎体骨细胞的损伤作用

目的 通过比较不同剂量水平椎体适形调强放疗(IMRT)对成年比格犬椎体骨细胞的损伤作用,初步探讨一次全椎体IMRT的安全剂量范围。方法 选取纯种比格犬30只按随机数字表法平均分为5组,以全椎体IMRT的治疗方式分别对5组比格犬胸9~10椎体给予0、40、50、60和70 Gy剂量的照射,于照后3个月处死,取相同部位的胸9~10节段椎体骨进行HE染色、电镜观察后,免疫组织化学法定量检测椎体中血管内皮细胞生长因子(VEGF)蛋白的表达,TUNEL法定量检测椎体骨中凋亡骨细胞。结果 HE染色结果提示随着IMRT剂量的增大,比格犬椎体骨空骨陷窝率增加明显(F=2.57,P<0.05),骨小梁断裂程度增加,但面积未见明显下降(P> 0.05);电镜结果提示40 Gy IMRT组部分骨细胞出现凋亡,而50 Gy及以上剂量IMRT组绝大多数骨细胞凋亡。TUNEL表达结果提示40 Gy IMRT组骨细胞凋亡率低于50 Gy及以上剂量组骨细胞凋亡率(F=3.52,P<0.05),50 Gy及以上剂量组骨细胞凋亡率差异无统计学意义(P>0.05)。50 Gy以上组的VEGF蛋白表达高于40 Gy组(F=3.64,P<0.05),但50、60、70 Gy组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 50 Gy可作为临床选择治疗总剂量界限的参考标准。     

rhIL-11和rhG-CSF对中子照射致小鼠骨髓损伤的治疗作用

目的 探讨rhIL-11和rhG-CSF对中子照射致小鼠骨髓损伤的治疗作用。方法 将BALB/c小鼠130只用随机数字表法分为对照组(30只)、照射组(40只)、rhIL-11治疗组(30只)、rhIL-11+rhG-CSF治疗组(30只),用3.0 Gy中子照射,并于照射后给予600 μg·kg^－1·d^－1 的rhIL-11和50 μg·kg^－1·d^－1的rhG-CSF,1次/d,共3 d;用血细胞自动分析仪、HE染色、AgNOR染色、流式细胞术、免疫组织化学染色和图像分析等,检测小鼠外周血细胞、骨髓病理形态变化、有核细胞计数、AgNOR含量、凋亡与坏死率和Bax蛋白含量的变化。结果 照射组和rhIL-11治疗组于照射后6 h～3 d,小鼠外周血白细胞、骨髓有核细胞计数和AgNOR含量进行性下降,Bax蛋白于造血细胞胞质内呈阳性至强阳性表达,含量进行性增加(F=0.003,P＜0.01);照射后6 h,照射组小鼠造血细胞凋亡与坏死率增加,以坏死为显著;照射后3 d,rhIL-11+rhG-CSF治疗组小鼠的骨髓有核细胞计数和AgNOR含量均增加(F=0.037、0.026,P＜0.05),Bax蛋白含量减少(F=0.018,P＜0.05);rhIL-11治疗组各指标较照射组差异无统计学意义。结论 3.0 Gy中子照射可使小鼠骨髓造血功能严重受损,rhIL-11和rhG-CSF对照射后小鼠的造血功能恢复有一定改善作用,联合使用效果优于单独使用。     

氡染毒小鼠肺及支气管中JNK/SAPK表达的研究

目的 研究氡吸入染毒小鼠肺及支气管组织中JNK/SAPK信号通路的表达变化。方法 采用SR-NIM02型氡室对小鼠进行吸入染毒0.02、30和60工作水平月(WLM)),染毒结束后24h内处死;提取小鼠肺及支气管组织总RNA,利用Real-Time PCR定量分析JNK mRNA的表达水平;分别利用Western blot和免疫组织化学技术检测肺及支气管组织中JNK蛋白表达及其磷酸化水平。结果 Real-time PCR检测结果显示,染毒30与60WLM组的JNK mRNA水平分别是对照组的3.56倍和2.96倍(单因素方差分析,F=8.00,P<0.05);Western blot结果显示,染毒30和60WLM组的JNK蛋白相对表达量分别为对照组的1.21和1.35倍(单因素方差分析,F=5.76,P<0.05),JNK蛋白磷酸化水平分别为对照组的2.34和2.81倍(单因素方差分析,F=6.83,P<0.05);免疫组化结果显示,染毒后小鼠肺组织中JNK与胞核中磷酸化JNK蛋白表达增强。结论 氡吸入染毒后可激活细胞内的JNK/SAPK信号通路,使其表达增强,并且磷酸化激活进入胞核,进而引起组织细胞的一系列反应。     

CT多次扫描对机体损伤效应的实验研究

目的 研究CT多次扫描对小鼠外周血淋巴细胞和骨髓细胞的影响,探索CT扫描对机体的损伤效应机制。方法 BALB/c小鼠60只,按随机数字表法,分为对照组、1、2、4、6和8次CT扫描组共6组,每组10只。对照组不扫描,扫描组用64排螺旋CT以骨盆模式对小鼠进行全身扫描,采用热释光技术检测小鼠局部吸收剂量。采用流式细胞术,在照后1 h检测小鼠外周血淋巴细胞和骨髓细胞DNA损伤形成的γ-H2AX焦点,在照后24 h检测细胞凋亡、自噬、细胞周期和外周血CD4+、CD8+水平变化。结果 6组小鼠相应的辐射剂量分别约为0、63.09、124.14、174.48、232.99和504.72 mGy。扫描2次以上的小鼠外周血淋巴细胞和扫描4次以上的骨髓细胞中,γ-H2AX 均显著增加（P<0.05）,4次以上扫描使外周血淋巴细胞凋亡增加（P<0.05）,但使骨髓细胞凋亡降低（P<0.05）,体现出淋巴细胞更为敏感而骨髓细胞成分复杂且具有不同的辐射敏感性及反应时相性。CT扫描对外周血淋巴细胞自噬水平无影响,但单次扫描使骨髓细胞自噬增加（F=81.104,P<0.05）。扫描8次后骨髓细胞G₀/G₁期和G₂/M百分率增加（χ²=11.29、28.57,P<0.05）。外周血CD4+、CD8+细胞亚群百分率在CT扫描后下降（P<0.05）,但CD4+/CD8+比值未见明显变化。结论 CT多次扫描对造血系统和免疫系统产生了损伤效应,机体进而启动凋亡、自噬和细胞周期阻滞来维持基因组稳定性,而机体的免疫平衡未受影响。     

氡染毒小鼠骨髓细胞差异表达cDNA文库的构建和初步鉴定

目的 构建氡染毒小鼠骨髓细胞差异表达基因的cDNA文库。方法 采用HD-3型多功能氡室对雄性BALB/c小鼠动态吸入染毒,建立实验动物模型。按照实验动物吸入氡及其子体的累积剂量分为实验组(105 WLM)和对照组(室内本底浓度,1 WLM)。取骨髓细胞提取总RNA,采用SMART和抑制性消减杂交技术,构建正、反向消减cDNA文库,消减cDNA片段插入pMD18-T载体转化大肠杆菌,以含差异表达cDNA片段的菌液为模板进行巢式PCR扩增。结果 获得了完整无降解的总RNA,得到高效率的消减cDNA文库;克隆了244个有插入片段和长度在100～1100bp之间的单克隆。结论 成功构建了氡暴露小鼠骨髓细胞差异表达的正、反向cDNA消减文库。     

人参皂苷Rh2对小鼠X射线辐射损伤的防护作用

目的 旨在探讨人参皂苷Rh2对X射线辐射损伤所致遗传毒性和免疫损伤的保护作用。方法 小鼠接受4 Gy X射线全身照射后,灌胃给予5、10和20 mg/kg剂量的人参皂苷Rh2,24 h后以碱性彗星电泳方法观察小鼠外周血淋巴细胞DNA损伤程度,以吖啶橙荧光染色法观察小鼠骨髓微核形成情况,以MTT法测定刀豆球蛋白和脂多糖诱导的脾淋巴细胞转化率。结果 人参皂苷Rh2剂量依赖性地抑制了X射线所致小鼠外周血DNA损伤和骨髓微核形成,对辐射所致脾淋巴细胞转化能力下降也有明显的防护作用。结论 人参皂苷Rh2对X射线所致遗传损伤和辐射防护均有明显保护作用,有望成为辐射防护药物。     

低剂量照射对小鼠骨髓移植造血功能的影响

目的探讨低剂量照射促进小鼠骨髓移植后受体造血功能的重建。方法通过对小鼠体外骨髓细胞进行不同剂量的照射，用^3H-TdR掺入法确定产生最佳刺激增殖效应的照射剂量。在骨髓移植前，对供体小鼠骨髓细胞给予最佳刺激剂量的照射，然后将被照射的骨髓细胞输入受体小鼠内，最后动态监测受体小鼠的外周血细胞和骨髓单个核细胞数量。结果在离体情况下，经6和8cGy低剂量照射的小鼠骨髓细胞增殖能力明显增强。用低剂量照射的骨髓细胞进行骨髓移植后，受体小鼠骨髓单个核细胞数和外周血细胞计数普遍高于相应的对照组。结论低剂量照射可能促进小鼠骨髓移植后受体造血功能的重建。     

氡慢性染毒致大鼠癌前病变的发生及肺组织 RAGE和S100A6蛋白的表达

目的 观察氡慢性染毒致大鼠肺组织的病理改变,以及晚期糖基化终产物受体(RAGE)和钙结合蛋白A6(A6, S100A6)蛋白的表达。方法 Wistar雄性健康大鼠整体暴露于多功能生态氡室,染毒时间约27个月,染毒结束后观察健康对照组和染毒组大鼠肺组织的病理改变,同时提取大鼠肺组织总蛋白,检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)、RAGE和S100A6的表达情况。结果 在饲养及染毒过程中,健康对照组和染毒组大鼠各死亡2只,病理切片显示为心衰水肿表现,为自然死亡。存活大鼠病理切片显示肺组织呈充血水肿,炎性反应细胞浸润及肺气肿表现,其中1只大鼠出现肺泡上皮细胞的严重增生性改变,为癌前病变的一种形式。以β-actin为内参,肺组织蛋白表达检测显示,染毒组大鼠PCNA呈高表达(对照组0.0067±0.009,染氡组0.174±0.091),肺组织呈增生性改变,RAGE和S100A6蛋白在染毒组大鼠也呈现高表达(RAGE对照组0.0041±0.006,染氡组0.4372±0.291;S100A6对照组0.069±0.055,染氡组0.493±0.049),其高表达可能与肺组织的癌前病变有关。结论 氡慢性染毒可致大鼠肺组织发生癌前病变,并且诱发RAGE和S100A6蛋白的高表达。     

重离子和X射线照射对小鼠骨髓细胞周期分布的影响

目的 研究重离子和X射线全身照射小鼠对骨髓细胞周期分布的影响，为面向生物学对象的重离子治疗提供基础数据。方法用X射线和重离子照射BALB／c小鼠后，24h后制得骨髓细胞，采用PI染色用流式细胞仪测骨髓细胞周期变化。结果照射24h后，X射线照射的各组骨髓细胞周期分布与对照组差异没有统计学意义；重离子照射组与对照组相比，出现G1／G0期和G1／M期阻滞，与相同剂量X射线照射组相比亦出现G1／G0期和G2／M期阻滞。结论 相同剂量的重离子照射较X射线对骨髓细胞的损伤更严重，引发不同的生物学效应。     

吸入氡致大鼠肺蛋白质组表达变化的分析

目的 从蛋白质组学角度分析氡染毒后大鼠肺组织蛋白质表达谱的变化。方法 雄性Wistar大鼠氡吸入染毒累积剂量分别达100、200、400工作水平月(WLM)后,取大鼠肺组织,裂解提取其总蛋白;双向电泳(2-DE)分离总蛋白,ImageMaster 2D Platinum软件分析差异表达蛋白,切取差异蛋白点,胶内酶解并进行质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定。结果 正常对照组和氡染毒组大鼠肺组织的2-DE图谱有明显差异,差异表达点中与氡染毒呈剂量变化关系的点有14个表达上调,9个表达下调,质谱鉴定出其中的15个差异蛋白点。结论 氡染毒组大鼠肺组织的蛋白表达谱发生了一定的差异性,氡吸入致靶器官肺损伤可能与多种蛋白相关。     

氡及其子体对大鼠免疫器官的影响

目的　通过大鼠吸入氡及其子体后免疫器官的变化 ,初步探讨氡及其子体对免疫系统的影响。方法　雄性SD大鼠吸入氡及其子体的累积剂量分别达 6 6 ,111和 174工作水平月(WLM)后 ,收集支气管肺灌洗液 (bronchoalveolarlavagefluids,BALF) ,观察BALF中细胞计数和分类的变化。采用单细胞凝胶电泳 (Singlecellgelelectrophoresis,SCGE)技术 ,检测胸腺和脾脏细胞DNA链断裂情况。同时了解大鼠脾脏指数的改变。使用RT PCR方法检测BALF细胞中IL 6mRNA的表达情况。结果　大鼠吸入氡及其子体后 ,各暴露组BALF中淋巴细胞比例与对照组相比明显减少 ,而粒细胞增多 (P <0 0 5 )。大鼠暴露达 174WLM后胸腺和脾脏细胞DNA链断裂的迁移长度显著增加。111和 174WLM暴露组的脾脏指数与对照组相比明显降低。 174WLM暴露组BALF细胞中IL 6mRNA的相对表达量显著高于对照组 (P <0 0 1) ,6 6和 111WLM暴露组与对照组相比差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论　在本实验暴露剂量下 ,氡及其子体可改变BALF中淋巴细胞和粒细胞的比例 ,导致胸腺和脾脏细胞DNA的断裂损伤 ,从而影响免疫器官的结构和功能。