10%福尔马林与中性福尔马林的比较

传统上我们都采用 1 0 %福尔马林固定组织。福尔马林系甲醛液的俗称 ,是由甲醛 ( Formaldeny de HCHO)气体饱和于水而成。一般市售的福尔马林含甲醛 37%～40 %。配法 :取 40 %甲醛液 1 0 ml与蒸馏水90 ml混合 ,即得 4%甲醛 ,亦即 1 0 %福尔马林。由于福尔马林久存则氧化产生甲酸 ,呈酸性 ,固定标本不适宜 ,特别是需长期固定的组织更不适合 ,故我们主张采用中性福尔马林固定组织标本。其配法如下 :40 %甲醛 1 0 0 ml酸性磷酸钠 (或无水磷酸二氢钾 ) 4.0 g磷酸氢二钠 6 .5 g蒸馏水 90 0 ml因中性福尔马林中加入了磷酸缓冲液 ,不易被氧化 ,能…     

肠系膜疏松结缔组织铺片制作改良法

观察疏松结缔组织铺片是组织学实验教学的重要内容。但标本常存在较多不足 ,比如 :两种纤维对此不够鲜明 ,各种细胞成分较难区分 ,铺片厚薄不均等。本文经过反复实验 ,建立了一种简便可行的新方法。具有特异性强、效果稳定、能够显示组织的多种成分的特点。1　材料和方法1.1　取材 :健康成年大鼠 1只 ,体重 2 0 0～ 2 5 0 g,腹腔注射新配制的 0 .5 %台盼蓝生理盐水液 ,每次 5 ml,隔日一次 ,共注射 3次。于末次注射的次日 ,断头处死 ,将肠系膜于根部连同肠管剪下 ,用大头针固定肠管于蜡盘上 ,使肠系膜展平。蒸馏水洗去血液 ,Bouin氏固定液固…     

实验动物肝组织制片和胶原纤维染色方法的改进

在组织制片中 ,实验动物免疫损伤性肝纤维模型组织切片难度较大 ,因此我们改变了组织固定、脱水、透明、浸蜡和切片与Ｈ、Ｅ染色 ,提高了制片质量。特别是根据实验病理组织形态变化的要求 ,进行二种特殊对比染色 ,所选用和改进的显示胶原纤维的Ｓｉｒｉｕｓｒｅｄ(天狼星红 ) [1] 和Ｍａｓｓｏｎ三色染色法[2 ] ,已得到了较好的染色效果。1　材料和方法1 1　肝组织采用 1 5 %　中性甲醛固定液 ,得到了较好的固定效果。解剖后的动物大鼠肝脏标本切开 3～ 5块 ,置固定液中 5小时后 ,取材 0 2～ 0 .3ｃｍ厚度 ,再固定 5～ 1 0小时可得到充分…     

人体标本保存液的实验观察

人体标本经防腐固定处理后 ,为避免水分蒸发、霉烂等变化 ,常浸泡于 5%福尔马林中进行湿保存。甲醛的防腐效果虽好 ,但对人体的刺激强烈 ,甲醛易挥发污染环境。因此 ,用一种无刺激性保存液取代甲醛溶液 ,长期以来为解剖学界所普遍关注。我们根据本地区气候环境特点 ,设计了由新配方配制的防腐保存液 ,经实验观察与应用效果良好。1　材料和方法1.1　保存液的配制( 1) 5%福尔马林人体保存液 :由 5份甲醛与 95份水配制。 ( 2 )新配方人体保存液配方为甲醛 1%、95%工业用酒精 15%、苯甲酸 0 5%、硝酸钾 2 %、甘油 2 % ;配制方法是先将苯甲酸溶…     

酒精、硝酸钾、苯甲酸混合液保存教学标本20年的观察体会

传统的解剖教学标本保存液是 2 %甲醛溶液。因此液保存的教学标本易干燥、变色 ,有较强的刺激味 ,严重影响教学效果。为解决这一问题 ,作者从 1 979年起 ,将 2 %甲醛水溶液改为酒精、硝酸钾、苯甲酸混合液保存解剖教学标本。跟踪观察 2 0年效果较好 ,现将观察体会介绍如下 :1　材料和方法　我们将保存液分为两组 :对照液为 2 %甲醛水溶液 ;实验液为 1 5 %酒精、1 .5 %硝酸钾、0 .1 5 %苯甲酸混合水溶液。2　结果2 .1　两组液体的比较　对照液呈棕黄色、刺激性气味大 ,对皮肤粘膜有损害 ;实验液无色透明、无刺激性气味 ,对皮肤粘膜无损害。2 …     

改良神经髓鞘的依来铬氰R染色法

为研究周围神经髓鞘被覆状态 ,我们经常要进行髓鞘染色 ,在实践中 ,我们摸索了一种便捷、有效、经济的染色方法 ,介绍如下。一、材料和方法1.取材、固定、切片 :取大鼠正常坐骨神经组织 ,4%甲醛生理盐水固定。石蜡切片 6～ 10 μｍ厚 ,6 0℃左右烘箱烘 3～4ｄ。2 .试剂配制 :(1)依来铬氰Ｒ液 :依来铬氰Ｒ 0 .2ｇ ,蒸馏水 96ｍｌ,10 %铁明矾液 4ｍｌ,浓硫酸 0 .5ｍｌ。 (2 )苦味酸丽春红Ｓ液 :1%丽春红Ｓ水溶液 10ｍｌ,苦味酸饱和水溶液 86ｍｌ,1%醋酸水 4ｍｌ。3.染色程序 :(1)石蜡切片 ,常规脱蜡水洗 ,吸干或烘干切片。 (2 )依来铬氰Ｒ液染…     

超声波快速石蜡切片在病理活检中的应用

我们将超声波技术运用于小的活检标本 ,如内窥镜、宫腔、宫颈、声带等 ,并且在仪器操作说明书的基础上作了改进 ,改进后的制片质量和效果优于改进前的切片 ,与传统石蜡切片质量相差无异 ,完全符合病理诊断要求。一、材料与方法1.材料 :取自本院 2 0 0 1年 11月至 12月窥镜室、妇产科、耳鼻咽喉科、内科等科室的活检标本 65例。其中改进前 12例 ,改进后 5 3例。快速固定液配制方法 :95 %乙醇 85 0ｍｌ,40 %甲醛 10 0ｍｌ,冰乙酸 5 0ｍｌ。试剂均为北京化工厂产品。2 .仪器 :上海震康科技公司生产的ＰＨＴ 40 0病理样品超声波快速处理仪 ,双超…     

显示三磷酸腺苷酶和乙酰胆碱酯酶的结合染色技术

三磷酸腺苷酶 (ATPase)和 Ach E是研究中常用的两种酶 ,将两种酶同时显示在一张切片上 ,收到良好效果 ,特介绍如下。材料和方法 :取新鲜的动物肌组织 ,平铺于滤纸上 ,在冰冻切片机上 ,进行纵行切片 ,厚度 10～ 30μm。也可用 4%中性甲醛固定保存在 0～ 4℃的冰箱内 ,时间不宜过长 ,2 4～48小时内 ,仍可收到良好效果。 ATPace显色 :将切片放在下列的孵育液内。孵育液为 :0 .1巴比妥钠 2 0 m l,0 .18M氯化钙 10 m l,双蒸馏水 30 ml,ATP钠盐 15 2 mg,用 0 .1M Na OH调至 9.4,再加蒸馏水至 10 0 m l,每配一次可使用 1周左右。在孵育液内 …     

一种显示网状纤维的方法

网状纤维是一种嗜银纤维 ,如用一般的银浸染 ,纤维难于分辨 ,而采用碳酸铵银法染色网状纤维的结构则显示得异常清晰。因而 ,碳酸铵银法是一种较理想的显示网状纤维的方法 ,现将该方法介绍如下 :1 .用岑克液或 1 0 %福尔马林固定脾、肝标本。 2 .切片脱蜡后蒸馏水洗数次。 3.将切片放入 0 .3%高锰酸钾内 5 min。 4.切片经水洗后入 5 %草酸漂白 ,至切片上的组织呈现为白色为止。 5 .蒸馏水洗数次后 ,置切片于碳酸铵银内 ( 5 0℃ ) 30 min。铵银液配方 :1 0 %硝酸银 1 0 ml,磷酸钾饱和液 1 0 ml,上述二液混合后产生沉淀 ,倾去上层液体 ,将沉淀…     

疏松结缔组织铺片染色新法

疏松结缔组织铺片的染色是组织学技术中的难点。常规方法存在着较多的不足 ,如 :两种纤维对比不够鲜明 ,各种细胞成分较难区分 ,铺片厚薄不均等。本文经过反复实验 ,能够显示组织的多种成分 ,特异性强 ,效果稳定 ,是为一种适用于教学和科研的简便可行的新方法。1　材料和方法1.1　动物的处理和取材　健康成年大鼠一只 ,体重2 0 0～ 2 50 g,腹腔注射新配制的 0 .5%台盼蓝生理盐水液 ,每次 5ml,隔日一次 ,共注射 3次。于末次注射的次日 ,断头处死 ,将肠系膜于根部连同肠管剪下 ,用大头针固定肠管于蜡盘上 ,并使肠系膜展平绷紧。用蒸馏水洗去血…     

介绍一种标本的保色固定液

在病理学的工作和研究中 ,典型病理标本的保存具有重要价值。目前标本的保存、陈列所用的甲醛固定液 ,长期放置会发生聚合反应 ,产生多聚甲醛的白色沉淀物 ,使固定液变浑浊 ,并且标本会失去原色。标本的保存问题是多年来我们一直探讨的问题 ,为此 ,通过对比观察 ,配制了一种较理想的标本保色固定液 ,现介绍如下。1　材料与方法1.1　材料　病变典型、具有保留价值的教学标本。1.2　溶液配制　Ⅰ液 :10 %中性缓冲福尔马林液 (甲醛 10 0ｍｌ,Ｎａ2 ＨＰＯ46 5 ｇ ,Ｎａ2 ＨＰＯ44ｇ ,蒸馏水 890ｍｌ) ;Ⅱ液 :甲醇 10ｍｌ。将Ⅰ液和Ⅱ液混合 ,…     

疏松结缔组织铺片染色法的经验

疏松结缔组织在人体分布广泛 ,它的主要成分有三种纤维及多种细胞。我们对以往传统的方法进行改良 ,使一张铺片呈现蓝、紫、红三种颜色 ,能较好地观察两种纤维 ,两种细胞。我们选用健康成年兔子进行静脉注射 ,可以制取大批教学片 ,染色方法简便 ,效果令人满意。1　材料与方法动物与试剂 :动物选用健康雄性兔子一只 (2公斤重 )。试剂 :①注射液　 1%台盼蓝生理盐水溶液　②固定液　10 %福尔马林　③染液及分色液　Ｖｅｒｈｏｅｆｆ铁苏木精液 [苏木精 1克 ,无水酒精 2 0毫升 ,苏木精溶解后 ,再加入下液 :10 %三氯化铁水溶液 8毫升 ,Ｌｕｇｏ…     

长沙地区人体标本改良保存液的实验观察

人体解剖学教学、科研所用的尸体标本经防腐固定处理后 ,常浸泡于 5 %福尔马林中进行湿保存。甲醛的防腐效果虽好 ,但对人体的刺激太强了 ,直接危害着师生的身心健康 ,因此 ,用一种无刺激性保存液取代甲醛溶液 ,长期以来为解剖学界所普遍关注 ,并取得了一些进展。我们根据本地区气候环境特点 ,设计了一组防腐保存液配方 ,经实验应用 ,效果良好。1　材料与方法1 1　保存液配制　 ( 1 )原保存液 ;( 2 )改良保存液 :福尔马林 1 % ,95 %的工业用酒精 1 5 % ,苯甲酸 0 5 % ,硝酸钾 2 % ,甘油 2 % ,注意先将苯甲酸溶于酒精后 ,再倒入水溶液中。1…     

高尔基方法浸染大块神经组织的体会

高尔基法已有100余年的历史,但至今其染色结果仍不很稳定,较难掌握。由于高尔基法在显示完整的神经元和神经元间联系上具有独特的优点,目前常被采用。所以近年来,改进之法不断增加,而且有应用于电镜观察的方法问世。高尔基法显示细胞形态和细胞间联系存在问题之一,就是大块材料的浸染不能得到满意的结果。但大块浸染对研究中枢神经系统又是不可缺少的。近年来,我们在浸染大块神经组织方面进行了改进,获得满意的结果,现将我们的经验和体会总结如下。我们常做的材料的大小为厚度5-6mm,长和宽皆为30-35 mm。1.动物-常用10-20天小兔,7-9天小白鼠及成年猫。2.固定方法-用磷酸缓冲液配制1%多聚甲醛,1.25%戊二醛为固定液或用0.25%戊二醛固定液,进行灌流固定,两种固定液均可得到较好的效果。判定灌流     

OR-VB显示脂质和弹力纤维的组合染色法及其应用

在实验动物脂质代谢模型的建立中 ,分别对组织的脂质代谢和纤维进行染色与组合对照染色。本实验选用改进的ＯｉｌｒｅｄＯ乙醇饱和液 ,能较好的显示脂质成分 ,Ｖｉｃｔｏｒｉａｂｌｕｅ改造染色液 ,能显示冰冻切片组织中的弹力纤维。经过二种试剂组合染色后 ,能够同时显示血管组织内的脂质和管壁弹力纤维成分 ,色彩鲜艳 ,是较为理想的组合染色方法。1　材料和方法1 1　材料选用　材料来源于本学校实验动物中心的兔脂质代谢模型组织 ,经过 1 5 %中性甲醛固定液 ,能够使组织得到充分的固定[1] ,再进行冰冻切片和染色。1 2　试剂配制　 (1 )…     

一张玻片上分别显示HID-AB-PAS及HP的染色法

目前ＨＩＤ ＡＢ ＰＡＳ及幽门螺杆菌 (ＨＰ)特染已作为胃镜病理切片的常规诊断内容 ,前者可检测上皮黏液性质 ,后者便于查找ＨＰ。我们尝试在同一张切片上进行两种特染 ,取得良好效果 ,现报道如下。1　材料与方法1 1　材料　取自我科 2 0 0 0年 5月～ 2 0 0 1年 4月胃镜病理活检标本 2 6 0 5例 ,10 %中性福尔马林液固定、脱水、透明、浸蜡、包埋 ,切片厚 4～ 5 μｍ ,其中15 4 3例用 2张玻片分别做ＨＩＤ ＡＢ ＰＡＳ及ＨＰ特染 ,10 6 2例在一张玻片上分别做上述两种特染。1 2　试剂配制　ＨＩＤ为高铁二胺 ,ＡＢ液为 ｐＨ 2 5的阿尔辛蓝…     

大鼠胃窦肌间神经丛铺片方法的建立

尽管肠肌间神经丛铺片术 [1 .2 ]早已成熟 ,但至今未见胃窦肌间神经丛铺片成功的报告。我们经过反复试验 ,成功地建立了胃窦肌间神经丛铺片方法 ,为胃肌间神经丛研究提供了十分有利的条件。现将方法介绍如下 :1　取材与固定　　大鼠禁食 12小时 ,用 3%的戊巴比妥钠 30 - 5 0 m g/ kg腹腔注射 ,3- 5分钟进入麻醉状态 ,其后剖开左侧胸腔 ,暴露心脏 ,在心尖部剪一小口 ,用 16号灌注针沿切口、左心室插入至升主动脉根部 ,止血镊固定针头 ,用 2 5 0 - 30 0 m l生理盐水(37℃ )冲洗 ,直至右心耳切口处流出清亮液为止 ,立即用 4%多聚甲醛 (PFA) -…     

细胞色素氧化酶的DAB法与Nadi反应的比较

过去常用经典的 Nadi反应显示细胞色素氧化酶以定位线立体的存在部位 ,现在广泛使用 DAB法。我们对这两种方法进行了比较。方法如下 :取 Wistar大鼠的心、肝、肾组织 ,用液氮骤冷 ,恒冷箱切片 (厚 7μm) ,进行以下实验 :Nadi反应 :切片入孵育液 ( N-苯基 -对 -苯二胺 3mg、1 -羟基 - 2 -萘酸 3mg溶于二甲基亚砜 0 .1 ml,0 .0 5 M的磷酸缓冲液 p H7.21 0 ml,混匀后过滤 )室温 30 min。入 Lugol碘液 2 min,入 5 %硫代硫酸钠 4min,入 1 %醋酸钴 6 0 min,蒸馏水洗 ,甘油明胶封固。DAB法 :切片入孵育液 ( 0 .0 5 M磷酸缓冲液 p H7.2 1 0 ml…     

骨骼肌m-ATPase染色改良法

我们在实验中发现 ,用常规的钙钴法很少能保存骨骼肌中 ATP酶的活性 ,且 ATP酶对固定非常敏度 ;而使用未固定的材料骨骼肌中常出现人工假象。固定液的张力很重要 ,而蔗糖是把张力提高到足够水平的最适当添加物。我们将原 ATP酶钙钴法作了如下改进 :1.固定 :将新鲜骨骼肌组织用双面刀片切成约 1 mm厚的薄片 ,入固定液中固定1 0 min,4℃。固定液配制 :多聚甲醛 4g;二甲砷酸钠 3.0 8g;氯化钙 0 .75 g;蔗糖 1 1 .5 g;双蒸水加至 1 0 0 ml,调节 p H值为 7.2。2 .OCT包埋 ,- 2 0℃恒冷箱切片( 8μm) ,室温下自然干燥 30 min。3.切片预处理 1…     

Evans蓝血管显影法在脊髓损伤研究中的应用

为了观察脊髓损伤缺血区的血管变化,本研究就灵敏有效的血管显影方法进行了探索。由于Evans蓝可与血浆白蛋白结合,而且血管内皮细胞上有血浆白蛋白受体,所以Evans蓝可能用于显示血管,并具有不同于常用方法的独特优点。我们尝试了Evans蓝液的不同配方及在染液静脉灌注前或灌注后固定的两种固定方法。Evans蓝液的不同配方为单纯Evans蓝、Evans蓝加明胶以及Evans蓝加明胶及铬明矾。我们观察到每一种配方都有其优缺点,而且能彼此互补。有的方法可进行免疫组化双标染色。由于许多物质与脊髓血管的病理变化有关,大多可用免疫组化染色予以显示,故此对脊髓损伤研究非常重要。