地衣芽孢杆lw-72合成纤溶酶的摇瓶发酵工艺优化

通过单因素试验和正交试验确定地农芽孢杆菌lw-72摇瓶发酵合成纤溶酶的最佳条件,最佳培养基组成为:玉米粉0.5%、黄豆饼粉2.0%、Na_2HPO_4 0.4%、NaH_2PO_4 0.2%、CaCl_2·2H_2O 0.01%、KCI 0.01%;培养摹初始pH为7.0;最佳培养条件:装液量30 ml/250 ml摇瓶,接种量10%,发酵时间为72 h.在该条件下发酵液中纤溶酶酶活力为622 u/ml,是初始发酵培养基的3.4倍.     

豆豉纤溶酶产生菌发酵条件研究

对从豆豉中筛选到的一株纤溶酶产生菌--枯草芽孢杆菌HGD107进行发酵产酶条件研究.在最适发酵条件下,该菌株产豆豉纤溶酶酶活达到尿激酶3643u/ml发酵液.     

枯草芽孢杆菌纤溶酶的生物分析方法及其在猕猴体内的药动学研究

目的：研究猕猴单次静脉滴注注射用枯草芽孢杆菌纤溶酶（BSFE）的药动学。方法：6只猕猴静脉滴注BSFE2.5mg/kg,采用ELISA法测定动物的血药浓度,实验数据用DAS2.0药动程序拟合并计算药动参数。结果：6只猕猴静脉滴注2.5mg/kg的BSFE,浓度-时间数据经药代动力学参数计算,表明药物消除符合二房室模型。6只猕猴的达峰时间（tmax）均为0.5h,峰浓度（Cmax）均值为（592.3±150.9）μg/L;平均消除t1/2β为（5.78±1.19）h;平均清除率（CL）为（4.42±1.19）L.h^-1.kg^-1;药时AUC0-24.5h均值为（557.1±211.1）μg.L^-1.h。结论：本试验所建立的双抗体夹心ELISA法,灵敏度高、特异性强、操作简便,适于BFSE的药代动力学研究。     

纤溶酶产生菌株BS-26的发酵工艺优化

目的对纤溶酶产生菌株BS-26发酵工艺进行优化。方法通过单因素试验和正交试验,确定了摇瓶发酵的最佳条件。结果该菌株产纤溶酶最佳的发酵条件为:3%糊精、1%酵母粉、0.02%CaCl2、0.07%MgSO4,初始pH7.0,接种量为6%,装液量为70/250(mL/mL),摇床温度37℃,转速180 r/min,发酵时间60 h,在该条件下产酶酶活可达593.03 U/mL,是原发酵培养条件下产酶活力的4.5倍。结论此发酵条件可以很好地提高纤溶酶的活力,为发酵规模的扩大奠定了基础。     

一株产纤溶酶菌株BS-26的分离和鉴定

目的对纤溶酶产生菌株进行筛选和鉴定。方法采用LB-纤维蛋白平板初筛和摇瓶发酵复筛的方法进行筛选;通过对菌株形态和生理生化特征以及16S rDNA进行鉴定。结果从土壤中分离得到5株纤溶酶高产菌株,其中菌株BS-26活性最高。其形态和生理生化特征与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)很相近。将所测得的16SrDNA序列用BLAST软件与GenBank数据库进行相似性分析,并用Neighbor-Joining法构建系统发育树。BS-26菌株与Bacillus subtilis的相似性达到99.63%。结论BS-26菌株鉴定为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。     

假蕈状芽孢杆菌纤溶酶基因的克隆与表达

将来自假蕈状芽孢杆菌的纤溶酶基因克隆至表达载体pGEX-4T-2中,并在大肠杆菌中表达.SDS-PAGE结果显示胞内含有表达条带,表达产物的相对分子量大小为9.8×104,比预计的分子量(9.O×104)稍大.酪蛋白平板法测定结果显示,以1.0 mmol/L IPTG 26℃和30℃诱导5 h,重组菌胞内蚩白有活性.     

海洋假单胞菌纤溶酶的体外溶栓实验研究

目的确证血纤维蛋白溶酶的体外溶栓作用。方法用血纤维蛋白平板法、体外血块溶解实验研究该酶的纤溶特点及对血块的溶解作用。结果可直接水解血纤维蛋白 ,溶栓活性同蝮蛇抗栓酶类似 ,但对红细胞形态没有影响。结论血纤维蛋白溶酶是一种直接纤溶酶 ,有较强的纤溶活性     

产纤维素酶的枯草芽孢杆菌C－11发酵培养基的响应面法优化

为了提高枯草芽孢杆菌C－11的纤维素酶活力,利用Plankett－Burman（PB）设计法和响应面分析法对其培养基进行优化。采用 PB设计实验确定小麦秸秆粉、豆饼粉、蛋白胨为主要影响因子,运用最陡爬坡试验逼近以上三因素的最大响应区域,并通过 Box－Behnken（ BB）设计和响应面分析优化其浓度。优化后培养基组分如下：小麦秸秆粉5．868g? L －1、蛋白胨10．98g? L －1、K2HP046．0g? L －1,KH2P043．0g? L －1,MnSO4? H2O 0．2g? L －1,MgSO4?7H2O 1．0g? L－1,豆饼粉6．913g? L －1、酵母粉0．4g? L －1。理论酶活为：1．958U? mL －1,验证实测值为：1．994U?mL －1,相对误差为1．84％,比基础条件酶活提高了24．65％。     

豆豉纤溶酶生产工艺研究

以筛选得的纤溶酶产生菌——枯草芽孢杆菌HGD107进行15L发酵罐生产豆豉纤溶酶，产物经离心、D392型树脂脱色、盐析、超滤等操作纯化，制得冻干豆豉纤溶酶产品，其比活力为530．6u／mg，纯化倍数11，活性回收率65．7％。     

纤溶酶皮试液的优化配制

内科临床常用纤溶酶治疗脑梗死、血栓闭塞性脉管炎、高凝血症等疾病。纤溶酶是一种从蝮蛇蛇毒中提取的蛋白水解酶,因其是一种蛋白酶制剂,有一定抗原性,所以根据药物说明书的要求临床使用前必须做皮试,现将一种简易配制皮试液的方法介绍如下。     

海洋链霉菌发酵纤溶酶的分离纯化和酶学性质研究

目的 从筛选的1株海洋链霉菌MY0504发酵液中,分离得到1种新型纤溶酶并对其部分酶学性质进行初步研究。方法 采用高速离心、盐析、Sephadex G-75 凝胶过滤层析对纤溶酶进行分离纯化;采用纤维蛋白平板法测定纤溶活性, SDS－PAGE 电泳测定分子量,小鼠急毒实验检测安全性,并考察温度、pH、金属离子和抑制剂对酶活性的影响。结果 从发酵液提取纤溶酶的纯化倍数为7.15倍,酶活力回收率为32%,其分子量约为14kD,安全无毒。该酶在47℃以下稳定,适宜pH为7.0~9.0,最适pH值为8.0,Cu₂₊对该纤溶酶抑制作用显著,Ca₂₊有一定的促进作用。Aprotinin 强烈抑制纤溶酶活性,PMSF(苯甲基磺酰氟)可以完全抑制该纤溶酶活性,初步推测该酶是1种丝氨酸蛋白酶。结论 从海洋链霉菌MY0504发酵液中获得1种小分子量纤溶酶,为开发新的溶栓剂提供了新的选择和理论依据。     

蚯蚓纤溶酶的抗肿瘤作用

目的　观察蚯蚓纤溶酶 (EFE)对体外人癌细胞株及体内人癌裸鼠移植性肿瘤生长的影响 ,对该药进行临床前抗肿瘤药效学评价。方法　采用MTT法观察蚯蚓纤溶酶对体外人癌细胞的生长抑制作用 ;用人胃癌BGC82 3和人乳腺癌B37裸鼠移植性肿瘤模型对蚯蚓纤溶酶进行体内抗肿瘤药效学观察。结果　蚯蚓纤溶酶在体外对人癌细胞的生长无抑制作用 ;灌胃给予蚯蚓纤溶酶 2 0 0～ 10 0 0mg·kg-1,可明显抑制人胃癌BGC82 3和人乳腺癌B37裸鼠移植性肿瘤的生长。结论　蚯蚓纤溶酶具有抗肿瘤作用。     

一种新型海洋纤溶酶体外抗凝与溶栓作用研究

目的对本实验室制备的一种相对低分子质量新型海洋纤溶酶的体外抗凝和溶栓作用进行初步评价,为进一步的动物实验研究打下基础。方法以pH7.4的生理盐水作阴性对照,以蚓激酶作阳性对照,在体外研究新型海洋纤溶酶对Wistar大鼠和家兔新鲜血液的抗凝集和血栓溶解作用。结果该新型海洋动物纤溶酶具有显著的血栓溶解作用,并具有一定的抗凝血效果,从血栓中释放的血细胞形态较使用蚓激酶优。结论该新型海洋纤溶酶具有潜在的应用价值。     

蚯蚓纤溶酶的分离纯化研究

目的从赤子爱胜蚓(Eisenia Foelide)中分离纯化出一种相对分子质量(Mr)较小的纤维蛋白溶解组分———蚯蚓纤溶酶(EFE),为其注射剂的研制开发打下基础。方法采用盐析、透析、凝胶过滤色谱、离子交换色谱等方法分离纯化EFE,用SDS-PAGE对纯化的活性组分进行Mr测定,用酶谱分析方法初步探讨蚯蚓中存在的其它纤溶酶活性组分。结果分离纯化得到了EFE单一组分,经SDS-PAGE EFE呈单一条带,Mr约为25 000。经酶谱分析发现纤溶酶活性组分Mr分布在25 000~50 000之间。结论反复使用色谱技术可分离纯化EFE,并得到单一组分。     

白唇竹叶青蛇(Trimeresurus albolabris)毒降纤酶的分离纯化以及性质

目的从白唇竹叶青蛇(T.albolabris)毒中分离纯化无出血作用的降纤活性组分,探讨其理化性质及部分生物功能。方法用DEAE-SephadexA-25,SephadexG-100和CM-SephadexC-50三步色谱法进行分离纯化。SDS-PAGE和HPLC鉴定其纯度和相对分子质量,平板法测定其降纤活性。结果从白唇竹叶青蛇毒中分离纯化获得单一的降纤组分,能迅速水解纤维蛋白原或纤维蛋白原Aα链,缓慢水解Bβ链,而对γ链无作用,SDS-PAGE鉴定其相对分子质量为56000。EDTA能抑制其纤维蛋白原水解活性,而PMSF、β-巯基乙醇对其活性无影响,提示该组分为单链α金属蛋白酶。结论从白唇竹叶青蛇毒中分离纯化得到1种无出血作用且降纤活性强的新蛇毒降纤酶。     

Antioxidation,angiotensin converting enzyme inhibition activity,nattokinase, and antihypertension of Bacillus subtilis (natto)-fermented pigeon pea

Because of the high incidence of cardiovascular diseases in Asian countries, traditional fermented foods from Asia have been increasingly investigated for antiatherosclerotic effects. This study investigated the production of nattokinase, a serine fibrinolytic enzyme, in pigeon pea by Bacillus subtilis fermentation. B. subtilis 14714, B. subtilis 14715, B. subtilis 14716, and B. subtilis 14718 were employed to produce nattokinase. The highest nattokinase activity in pigeon pea was obtained using B. subtilis 14715 fermentation for 32 hours. In addition, the levels of antioxidants (phenolics and flavonoids) and angiotensin converting enzyme inhibitory activity were increased in B. subtilis 14715-fermented pigeon pea, compared with those in nonfermented pigeon pea. In an animal model, we found that both water extracts of pigeon pea (100 mg/kg body weight) and water extracts of B. subtilis-fermented pigeon pea (100 mg/kg body weight) significantly improved systolic blood pressure (21 mmHg) and diastolic blood pressure (30 mmHg) in spontaneously hypertensive rats. These results suggest that Bacillus-fermented pigeon pea has benefits for cardiovascular health and can be developed as a new dietary supplement or functional food that prevents hypertension.